免疫固定电泳ppt
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYDRAGEL ＩＭMＵNOＦＩXATＩＯN)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β-球蛋白与γ-球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:１。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2.电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散。
3.使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ＥLP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇＧ)、α(IgＡ)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果、四．方法学溯源自１930年由Ｔiseｌius发现了移界电泳(moｖing bｏundaｒy eｅｃtrｏpｈoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe ｅlecｒrｏｐhoresis)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键、通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:SEＢIA ＨYDＲASYＳ(ＰN1210)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:１０ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0-30０V(可选至30０0V)电流0－500mＡ功率０－１00W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDＲＡGＥL 1 IF试剂盒ＨYＤＲAGEＬ２IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAＧEL 9 IF试剂盒（1）商标:SEBIA（2）包装规格:1０测试／20测试/40测试/90测试（3）货号:PN43０1/ PＮ43０2/ PN４３0４/PN43０92．脱色液(1) 商标:SEBIA(2) 包装规格:Paｃｋfｏr 10×10０ｍl(3) 货号:PＮ454０(4) 成分:柠檬酸3。
免疫球蛋白固定电泳
免疫球蛋白固定电泳免疫球蛋白固定电泳（immunofixation electrophoresis）是一种常用的实验技术，用于检测和定量离子免疫球蛋白（immunoglobulin）的异常。
通过结合免疫电泳和固定电泳的原理，这一技术能够快速、准确地检测血浆、尿液等生物样本中的免疫球蛋白，并确定其类型和数量。
在临床诊断和疾病监测中，免疫球蛋白固定电泳起到了不可或缺的作用。
1. 免疫球蛋白：是由淋巴细胞分泌的一种免疫蛋白质，主要作用是为机体提供免疫防御功能。
免疫球蛋白分为五个不同的类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，每种类别又由多个亚类组成。
它们在免疫系统中发挥着重要的作用，对维持机体免疫平衡起到了至关重要的作用。
2. 免疫球蛋白固定电泳的原理：在免疫球蛋白固定电泳中，首先将样本进行凝胶电泳，然后使用抗人免疫球蛋白抗血清进行固定。
通过电泳和抗血清的结合，可以将免疫球蛋白分离出来，并确定其类型和相对浓度。
这一技术通过检测免疫球蛋白的异常，可以帮助医生快速、准确地诊断和监测某些疾病，如多发性骨髓瘤和其他免疫性疾病。
3. 多发性骨髓瘤的诊断：多发性骨髓瘤是一种恶性克隆性浆细胞病，其特征为异常增生的浆细胞在骨髓中大量增多，产生大量免疫球蛋白。
免疫球蛋白固定电泳可以帮助确定特定类别的免疫球蛋白的过度产生或缺乏，从而帮助医生进行多发性骨髓瘤的诊断和监测。
4. 免疫球蛋白固定电泳的临床应用：除了多发性骨髓瘤外，免疫球蛋白固定电泳还可以用于其他免疫性疾病的诊断和监测，如淀粉样变性、炎症性肠病、系统性红斑狼疮等。
通过检测免疫球蛋白的异常，医生可以更好地判断疾病的类型、程度和预后，并制定相应的治疗方案。
总结回顾：免疫球蛋白固定电泳是一种广泛应用于临床诊断和疾病监测的实验技术。
通过结合免疫电泳和固定电泳原理，免疫球蛋白固定电泳能够快速、准确地检测和定量离子免疫球蛋白的异常。
通过免疫球蛋白固定电泳的检测，医生可以更好地诊断和监测多发性骨髓瘤和其他免疫性疾病，为患者提供更加精确和个性化的治疗方案。
免疫电泳技术课件
（2）激光滤板：能选择性地透过紫外线可 见波长的光域，以激发荧光色素。激发滤 光片有两种，UG为紫外光滤片，只允许波 长275－400nm的紫外光通过，最大透光度 在365nm。BG为蓝紫外光滤片，只允许波长 325－500nm的蓝紫外光通过，最大透光度一组阻挡滤光片 又称吸收滤光片或抑制滤光片，其作用是阻断激发 光而使发射的荧光透过，使标本在暗的背景上呈现 荧光易于观察，也使眼睛免受强激发光刺激。吸收 滤光片的透光范围为410－650nm，代号有OG（橙 黄色）和GG（淡绿黄色）两种。
以此可作细微的蛋白质组分分析。根据各蛋白 所处的电泳位臵，将沉淀弧的位臵、形态与已知标 准抗原、抗体生成的沉淀弧进行比较，可分析待测 样品中所含成分的种类及性质、例如，多发性骨髓 瘤患者血清在免疫电泳后，可观察到异常的M蛋白 沉淀弧，而其他类型的免疫球蛋白形成的沉淀弧可 明显细、短于对照沉淀弧（图7－4）。
４.藻红蛋白（R-RE）是红藻和绿藻中一类被称为 藻蛋白（phycoblliprotein）家族中的一员，与 光合作用有关。其分子量为240000。其最强吸收 光波长为565nm，最大发射光波长为578nm。它在 488nm处的光吸收率为565nm处（最大的）的75％。 因此R-RE可以有效地与FITC一起用于双色免疫荧 光染色，因为它们可以共用488nm激发光。
第七章 免疫电泳技术
对流免疫电泳 （counter immunoelectrophoresis,CIEP）,原 理是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免 疫扩散技术，其在pH8.4以上的缓冲液中，大部分 蛋白质抗原成分带负电，在电场中向正极移动；而 作为抗体的IgG因其分子量大，暴露的极性基因较少， 解离也少，在电场中亦向正极缓慢移动，但电渗引 向负极移动的液流速度超过了lgG向正极的移动，带 动抗体移向负极,在抗原抗体最适比处形成乳白色沉 淀线，这就是电渗所致的IgG呈反向负极倒退。
免疫电泳技术精品PPT课件
用途：定量抗原 优点：快 缺点：影响因素多，不常用
三）免疫电泳
（immunoelectrophoresis，IEP）
即：电泳后进行双相琼脂扩散 实验
用途：定性实验，主要用于纯 化抗原和抗体成分的分析及正 常和异常免疫球蛋白的识别和 鉴定。
四）免疫固定电泳
（immunofixation electrophoresis）
即：区带电泳+沉淀反应
用途：常用于M蛋白的鉴定与分型
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
免疫电泳技术
Immunoelectrophoresis technique
一、基本原理 二、类型 一）对流免疫电泳
（counter immunoelectrophoresis，CIEP）
即双扩+电泳技术 用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
二）火箭免resis，RIE）
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End 演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
免疫固定电泳分型
免疫固定电泳分型免疫固定电泳分型是一种用于分析蛋白质的分离技术，它基于免疫学原理，通过电泳的方式对蛋白质进行分型。
在免疫固定电泳分型中，主要利用了抗体和特定抗原之间的特异性结合来实现蛋白质的分离和检测。
免疫固定电泳分型的步骤主要包括样品制备、凝胶电泳、固定和染色等。
首先，需要将待分析的样品经过处理和制备，使其适合进行电泳分离。
然后，将样品注入到凝胶中，并施加电场使蛋白质在凝胶中进行分离。
在分离过程中，蛋白质会根据其分子量和电荷等特性在凝胶中分离成不同的带状条带。
在固定步骤中，需要将蛋白质固定在凝胶上，以便下一步的染色和检测。
通常使用的固定剂有乙醛和二甲基亚硫酸钠等。
其中，乙醛固定可以使蛋白质与凝胶交联，而二甲基亚硫酸钠固定则是通过与蛋白质中的氨基酸残基发生反应来实现。
完成固定后，需要对凝胶进行染色以可视化蛋白质分离的结果。
染色方法可以根据需要选择，常见的染色方法有银染色、共染色和荧光染色等。
其中，银染色是一种常用的染色方法，它能够使蛋白质在凝胶上呈现出黑色或棕色的带状条带。
免疫固定电泳分型可以应用于多个领域，特别是在生物医学研究和临床诊断中具有重要意义。
例如，通过对人体血清中的蛋白质进行免疫固定电泳分型，可以帮助鉴定疾病相关的蛋白质异常。
此外，在研究蛋白质结构和功能等方面也可以应用免疫固定电泳分型技术。
免疫固定电泳分型是一种常用的蛋白质分离和检测技术。
它通过利用抗体和特定抗原之间的结合来实现对蛋白质的分型。
该技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景，为疾病的诊断和治疗提供了重要的帮助。
希望通过本文的介绍，读者能够对免疫固定电泳分型有更深入的理解。
医学检验·检查项目：血清免疫固定电泳(IF)_课件模板
肝炎后综合征、肝炎双重感染、丁型病毒 性肝炎、乙肝、原发性肝内硬化综合征、 新生儿肝炎综合征、暴发性肝炎样综合征、 丙型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、病毒 性肝炎、新生儿肝炎、甲型肝炎、浓缩胆 汁综合征、缺血性肝炎、妊娠合并病毒性 肝炎。
谢谢！
相关检查： 土拉伦斯杆菌凝集试验、唾液溶菌酶、间 接免疫荧光试验、免疫抑制酸性蛋白、 ECT检查、唾液白蛋白。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
相关症状： 免疫力下降、HIV感染、正常免疫球蛋白 减少、血清免疫球蛋白可升高、免疫缺陷、 免疫功能障碍。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
单克隆属性。 2、本周氏蛋白和游离轻链病：本周
氏蛋白是没有与免疫球蛋白分子中重链结 合的单克隆κ或λ轻链。免 疫固定电泳来确定本周氏蛋白的存在形式。 轻链病是指仅产生κ或λ单 克隆轻链，在尿中称为本周氏蛋白的疾病， 轻链病包括10％－
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
15％的单克隆免疫球蛋白病，它多出现在 IgG骨髓瘤（60％）和IgA骨髓瘤（16％） 病中。
3、重链病：是以免疫球蛋白重链部 分存在的单克隆蛋白为特征。
4、多克隆免疫球蛋白病：主要为γ 蛋白区宽的条带，多见于炎症或感染和胶 原病。5、肾病变的来源分析：尿免疫蛋 白电泳可
医学检验·各论 血清免疫固定电泳（IF）
内容课件模板
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
免疫固定电泳技术的原理
免疫固定电泳技术的原理免疫固定电泳技术是一种重要的实验室方法，用于分离和检测特定抗原或抗体。
它结合了免疫学和电泳技术，可以高效、准确地检测样品中的特定分子。
免疫固定电泳技术的原理是通过抗原与抗体的特异性结合来实现分离和检测。
首先，将待测样品中的抗原与相应的抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
然后，将复合物在电泳胶上进行电泳分离。
根据复合物的电荷、大小和形状的不同，它们会在电场作用下在胶上移动到不同的位置。
最后，通过染色或其他检测方法，可以可视化并定量检测到复合物的位置和数量。
免疫固定电泳技术的步骤包括：样品制备、电泳胶制备、免疫反应、电泳分离和检测。
首先，需要从样品中提取出待测的抗原，并将其纯化或标记。
然后，制备电泳胶，通常使用聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。
接下来，在电泳胶上制作孔穴，用于加载样品。
然后，将待测样品与相应的抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
复合物具有不同的电荷和大小，因此在电场作用下会移动到不同的位置。
最后，可以使用染色剂、放射性标记或其他检测方法来可视化和定量分析复合物的位置和数量。
免疫固定电泳技术具有许多优点。
首先，它可以高效、准确地检测特定的抗原或抗体，具有很高的灵敏度和特异性。
其次，该技术无需特殊设备，成本较低且操作简便。
此外，免疫固定电泳技术还可以同时检测多个样品，提高实验效率。
因此，它被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
尽管免疫固定电泳技术具有许多优点，但也存在一些限制。
首先，该技术对抗原和抗体的特异性要求较高，因此选择合适的抗体对和标记方法至关重要。
其次，样品的复杂性和纯度可能会影响免疫反应的效果。
此外，电泳分离的效果也可能受到电场强度、电泳时间和胶的性质等因素的影响。
因此，在使用免疫固定电泳技术时，需要仔细优化实验条件，确保结果的准确性和可重复性。
免疫固定电泳技术是一种重要的实验室方法，可以高效、准确地检测特定抗原或抗体。
它的原理是通过抗原与抗体的特异性结合来实现分离和检测。
电泳技术(共21张PPT)
优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部位自由，重现性好，可测定P或多肽的等电点。
蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B 根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。
机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。
第4页，共21页。
2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。
3 点样
分1 电离泳胶：：带小电孔粒径点子，在p圆H电8场.点中向（着与量其本少身电）荷相、反的点电极条移动状的过（程。一般），点中间（未知样品）、 点一边（已知样品） 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）
凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶） 4 操作要点
pH梯度支持介质的制备
聚焦电泳 检测 两性电解质载体的除去
第20页，共21页。
电泳技术思考题
1名词解释
电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、区带电泳、 相对迁移率、不连续凝胶电泳
2 影响泳动度的主要因素有哪些？
3 区带电泳的操作步骤一般有哪些？
4 如何制备聚丙烯酰胺凝胶？
CH2(NH2)COOH → (样品胶、浓缩胶pH6.7~6.8） →
CH2(NH2)COO－（0.1％～1.0％）泳动速度最慢（慢离子） 蛋白质（P）泳动速度介于快慢离子之间 电泳时， Cl －超过P走在最前面，其后形成一个离子浓度较
低的低电导区→较高电位梯度→P和慢离子加速移动→P 压缩成层
Aa：茚三酮、靛红
干法、湿法 分类：垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳；
1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。
westernblot详解PPT课件
蛋白质Marker
➢主要目的是确定靶蛋白的分子量大小； 使用预染的Marker还可以实时检测电泳 分离情况，并可以转移到膜上。
Fermentas
Prestained protein ladders Unstained protein ladders
第29页/共53页
上样缓冲液 Loading buffer
第6页/共53页
第7页/共53页
一 配分离胶
准备物品： 玻璃板 洗衣粉 灌胶架 移液枪 两个烧杯（ 1 ml 200ul 20ul） 30%Acrylamide 1M （4度冰箱）， Tris-HCL 溶液（ PH=8.8）， ddH2O 10%AP （-20冰箱） ， TEMD（4度 ） ，SDS（常温） 1 清洗玻璃板： 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸洗衣粉轻轻擦 洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用ddH2O冲洗干净后立在 通风处或烘箱中 2 配制分离胶： 玻璃板对齐后放入夹中加紧，注意使两玻璃板对齐。然后垂直卡 在架子上准备灌胶。 先配制分离胶。配方如下：
1.将200mg组织块剪碎，置于1ml裂解液中（
5ml离心管）。
2.匀浆器进行匀浆，注意冰上操作，匀浆后置于
冰上。
3.10，000g ,4℃,10min,（5ml管）离心
4.取上清至1.5ml管，12，000g ,4℃,60min,
离心
5.取上清至新1.5ml管,-80℃储存
第22页/共53页
3·1·2 蛋白样品浓度的测定方法
第18页/共53页
3·1 固定
①用ddH2O水冲洗一下玻璃板，将其放入电 泳槽中。注意，小玻璃板面向内，大玻璃板 面向外。
②向电泳槽中加入1x电泳液
• 5X电泳液缓冲液 ③Tr拔is（掉M梳W子1，2注1.1意4动）作轻柔。
免疫固定电泳名词解释
免疫固定电泳名词解释
免疫固定电泳是一种在生物学和生物化学研究中常用的实验技术。
它是一种将抗体与特定抗原结合并通过电泳分离的方法。
在这
个过程中，待测样品中的蛋白质混合物首先通过凝胶电泳进行分离，然后将凝胶上的蛋白质转移到固体载体上。
接下来，将含有抗体的
溶液加入到固定的蛋白质上，抗体会与其特异性结合。
最后，通过
电泳或其他方法对未结合的抗体进行去除，然后观察固定的抗原-抗
体复合物在固定载体上的位置和数量。
这种技术通常用于检测特定
蛋白质或抗原在复杂混合物中的存在和浓度，也可用于研究蛋白质
相互作用和免疫分析等方面的研究。
从技术角度来看，免疫固定电泳是一种结合了免疫学和电泳技
术的方法，它允许研究人员对复杂的蛋白质混合物进行定量和定性
分析。
这种方法的优势在于其对特定蛋白质的高灵敏度和特异性，
使其成为生物医学研究中不可或缺的工具之一。
总的来说，免疫固定电泳是一种重要的实验技术，它在生物医
学研究和临床诊断中发挥着重要作用，对于深入理解蛋白质结构和
功能、疾病诊断和治疗等方面具有重要意义。
免疫电泳详细教程培训ppt课件
免疫电泳详细教程
14
7.2当今的免疫沉淀
n 免疫沉淀现在更多的被用作一种分析方法。利用 该技术，细胞大家族里面的某些特定抗原能够被 检测出来。
n 另外，单克隆抗体的抗原特异性也可以用免疫沉 淀的方法来测得。利用现代免疫技术，不需要考 虑抗原表位与抗体互补位间的平衡，而这在传统 方法里是相当重要的。抗体通常被加到过量的抗 原中。另外单克隆抗体也可以用此方法。因为抗 体被交联到了一个固定相上，如琼脂糖凝胶，免 疫沉淀复合物可以通过简单的离心而分离，然后 便可以对其进行分析。
免疫电泳详细教程
7.1.4.1简单免疫电泳
n 简单免疫电泳只追求单纯的定性分析。它 尤其适用于在复杂样品中同时检测多种抗 原。对抗原的分离是基于其电荷的差异， 因此该技术提供了更好的解决方法。因为 抗原在免疫电泳的过程中扩散占用了较大 的空间，所以它的灵敏性不是太高。
免疫电泳详细教程
2
n 将抗原溶液加入到加样槽中，在电流作用 下电泳分离过程就开始了。根据分子所带 净电荷的不同，分子量大小的差异，在琼 脂糖凝胶中进行电泳时分子的迁移速率和 方向也不同，这样电泳就会将不同抗原分 子在琼脂糖凝胶中分离成若干区带。然后 与电泳方向平行挖一小槽，加入抗血清( 含抗体)，通过免疫扩散，抗体与已经分 离的抗原在琼脂糖凝胶中双向扩散，二者 特异性结合在比例合适处形成弧形沉淀线。
免疫电泳详细教程
7
免疫电泳详细教程
8
免疫电泳详细教程
9
n 利用胶中连续的抗体浓度，峰的最大高度是和提 供的抗原的浓度呈比例的。根据已知浓度的各种 标准抗原，交叉免疫电泳可以定性和定量的分析 抗原。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYＤRＡＧＥL IMMUＮＯFIXAＴION)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β—球蛋白与γ—球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:1。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2。
电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散、３。
使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ELP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇG)、α(ＩｇA)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别、该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tｉｓｅlius发现了移界电泳(moviｎg bounｄａry ｅectrophoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe eｌecrｒophoresiｓ)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:ＳＥBIA HＹＤRASYＳ(PＮ12１0)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:10ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0—30０V(可选至３０00V)电流0—500mＡ功率0-１00Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．HＹDＲＡGEＬ1 IF试剂盒HＹDＲAＧＥL 2IF试剂盒HYDRＡGEL 4IF试剂盒HYＤＲAGＥL 9 ＩＦ试剂盒（1）商标:ＳＥBIA（2）包装规格:10测试/2０测试／40测试/90测试（3）货号:ＰN４301/ＰN４３0２／PN4３04/ＰN４３０９2．脱色液(1) 商标:SＥＢIA(2)包装规格:Ｐａcｋfｏr １０×100ml(3) 货号:PＮ4５40(４) 成分:柠檬酸3、洗涤液（1）商标:ＳEBＩA（2）包装规格:Paｃk foｒ10×80ｍl（3）货号:ＰＮ4541（4）成分:叠氮钠4.稀释剂（1）商标:SEＢIA（2）包装规格:Paｃｋfｏr1×５ml（3）货号:PN458７（二）配套品:ＩＦ试剂抗体(1) 商标:SEBIA(2 ) 包装规格:Pａcｋfor 5×1mｌ(３)PＮ4３15七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清，丫(IgG)、a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
方法学溯源自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
仪器型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约 18 个样本 / 小时所需样本量： 10ul检验时间：约 55 分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V)电流 0－ 500mA功率 0— 100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF式剂盒HYDRAGEL 2 IF式剂盒HYDRAGEL 4 IF式剂盒HYDRAGEL 9 IF式剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液(1)商标：SEBIA(2)包装规格：Pack for 10 x 100ml(3)货号：PN4540(4)成分：柠檬酸3 •洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10 x 80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4 .稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1 x 5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体(1) 商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5 x 1ml(3) PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3） PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
免疫固定电泳技术的原理及应用
免疫固定电泳技术的原理及应用一、免疫固定电泳技术的原理免疫固定电泳技术是一种结合了免疫学和电泳技术的分析方法，可用于检测和分离复杂样品中的特定抗原或抗体。
其原理基于抗原与特异性抗体之间的非共价结合，通过电泳实现抗原或抗体的分离与检测。
1. 抗原-抗体相互作用原理抗体是由机体免疫系统产生的一类特异性蛋白质，能与抗原进行高度特异性的结合。
抗原是引起抗体产生的分子，可以是细菌、病毒、细胞表面的标记物或药物等。
当抗原与相应的抗体结合时，会形成特异性的抗原-抗体复合物。
这种复合物的形成是由于抗体分子与抗原分子之间的非共价相互作用，包括疏水作用、电荷相互作用、氢键等。
2. 电泳原理电泳是利用电场作用下带电粒子在溶液中移动的原理，根据粒子的电荷大小和大小、形状的不同使其分离的技术。
在免疫固定电泳中，通过施加电场，可以将抗原或抗体在电泳介质中分离或定位。
电泳涉及的基本概念包括电场力、迁移率和电动力。
•电场力（F）：由电场作用于带电粒子产生的力，决定了粒子在电场中的运动方向和速度。
•迁移率（μ）：粒子在电场中移动的快慢，取决于粒子的电荷大小、形状和电泳介质特性等。
•电动力（FE）：电场力和溶液阻力之间的平衡关系，注定了粒子在电泳中的运动速度。
二、免疫固定电泳技术的应用免疫固定电泳技术由于其灵敏度高、特异性强等优点，在医学和生物学领域有着广泛的应用。
1. 免疫疾病的诊断免疫固定电泳技术可用于检测患者血清中的特定抗体或抗原，来进行免疫疾病的诊断。
例如，通过检测血液中的抗体可以判断某种疾病的存在与否，而检测抗原则可以用于检测病原体的感染情况。
2. 蛋白质分析和研究免疫固定电泳技术可以用于蛋白质的分析和研究。
通过在电泳过程中添加特定抗体，可以将目标蛋白质与抗体结合，从而实现对蛋白质的准确定位和分离。
3. 免疫荧光分析免疫固定电泳技术可以与荧光标记的抗体结合，形成荧光标记的抗原-抗体复合物，利用荧光检测技术来进行分析和检测。
医学免疫学检验-免疫学电泳技术PPT课件
15
（immunoelectrophoresis，IEP）
即：电泳后进行双相琼脂扩散 实验
用途：定性实验，主要用于纯 化抗原和抗体成分的分析及正 常和异常免疫球蛋白的识别和 鉴定。
第一课件网网站
2020年10月2日
9
2020年10月2日
10
2020年10月2日
11
2020年10月2日
12
四）免疫固定电泳
（immunofixation electrophoresis）
即：区带电泳+沉淀反应
用途：常用于M蛋白的鉴定与分型
2020年10月2日
13
2020年10月2日
14
演讲完毕，谢谢观看！
Thank you for reading! In order to facilitate learning and use, the content of this document can be modified, adjusted and printed at will after downloading. Welcome to download!
免疫电泳技术
Immunoelectrophoresis technique
第一课件网网站
2020年10月2日
1
一、基本原理 二、类型 一）对流免疫电泳
（counter immunoelectrophoresis，CIEP）
即双扩+电泳技术 用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
2020年10月2日
2
2020年10月2日
3
2020年10月2日
免疫固定电泳操作规程精编WORD版
免疫固定电泳操作规程精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3） PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
II.电泳的影响因素
1. 颗粒（蛋白）本身特性：两性、大小、形状 2.载体性质 ：最常用的载体是琼脂和琼脂糖凝胶 3.电场强度 4.溶液PH值及离子强度——缓冲液的作用
二、免疫电泳技术的相关概念
（一）免疫电泳技术的定义
琼脂电泳与免疫扩散沉淀技术相结合的一门技术。(K)
1．电泳优点
（1）将蛋白电泳分开 （2）加快反应速度
2．沉淀反应
免疫电泳
分析
immunoelectrophoresis
（二）电泳的基本原理及其影响因素
I．基本原理
电泳（electrophoresis）:带电颗粒在电场中 通过液体介质的移动，称为电泳。
最适电泳缓冲液0.05M，PH8.6 巴比妥缓冲液
5.电渗（主要与载体特性有关） 电渗定义 电渗方向与电泳方向的关系
J 电泳迁移率：指在同一电场条件下，各种带电
粒子在单位时间内移动的距离。 6.电源
三、介绍几种经典的免疫电泳技术
1.免疫电泳
定 义：区带电泳 + 免疫双扩散(K)
基本原理：在电场作用下，将标本于琼脂凝胶中
3.火箭免疫电泳
定义：加速度的单向扩散（J）
含有抗体的琼指
测定样本
标准曲线
火箭免疫电泳示意图
基本原理：琼脂凝胶中的抗体
不发生移动(K)，样品孔中的 抗原向正极泳动，随抗原含量 的逐渐减少，抗原泳动的基底 区越来越窄，抗原抗体分子复 合物形成的沉淀线逐渐变窄， 形成一个状如火箭的不溶性免 疫复合物沉淀峰。
火箭电泳操作时应注意以下几点：
l．电渗小 2．电泳终点时间较难掌握 3．开启小电流后再加样，否则形 成宽底峰 4．IgG电泳应先将其甲酰化，使只 带负电荷
技术评价：
PH 8.6时，分析蛋白质抗原带 有负电荷
免球测定应先甲酰化，以增加 其净负电荷量
应用：
大多数蛋白质均可用这一方法 进行测定，但目前已被敏感度高， 特异性好的ELISA等方法代替。
检测的敏感度。 (1) 染色 (2) 光密度测定法 (3) 放射性自显影
免疫电泳技术
四川大学华西医院临床免疫室
武永康
本课内容
一、免疫电泳技术的发展 二、免疫电泳技术的相关概念 三、介绍几种经典的免疫电泳技术（重点） 四、凝胶免疫电泳技术要点 五、免疫增殖性疾病及免疫检测
免疫电泳技术
一、免疫电泳技术的发展
1953年Grabar和Williams将凝胶扩散置于 直流电场中，让电流来加速抗原与抗体的扩散 并规定其运动方向，并与免疫沉淀反应相结合， 从而加快了沉淀反应的速度，建立了免疫电泳 技术，之后又衍生出对流免疫电泳、火箭电泳、 及免疫固定电泳等新方法。
免疫电泳
据沉淀线的数量、位置和形状，与已知的正常人沉淀线比较，
即可对样品中所含成分及其性质进行分析、鉴定。(K)
免疫电泳操作步骤：
技术评价：
结果复杂(经验判断) 可不生成沉淀线（浓度太高或太 低），或沉淀线重合
结查分析（K）
（1）Ig量及单克隆性与沉淀线致密度 关系
（2）Ig量与抗体槽距离之间的关系： 抗原抗体最适比关系
5.免疫固定电泳(K)
（immunofixation electrophoresis。IFE）
（IgA 型MM）
基本原理：
将抗血清直接加于电泳后 蛋白质区带表面，抗原与 对应抗体直接发生沉淀反 应，未结合的游离抗原或 抗体洗去，则出现被结合 而固定的某种蛋白。
海伦娜免疫固定仪
应用：
免疫固定电泳最常用于M蛋白的鉴定。
鉴定方法：先将患者血清在琼脂上等作区带电 泳，之后，加抗血清，依次加抗IgG、抗IgA、 抗IgM、抗K轻链和抗L轻链。必要时还可加抗 Fab、抗Fc等特殊抗血清，作用后，洗涤，染色 后分析固定的M蛋白成分。
该方法可用于各种蛋白水平的定性检测。
四、凝胶免疫电泳的技术要点
1．电泳载体的选择 与电泳要求的具体条件如摩擦力，电渗、及电
应用：
血清蛋白的分析，如多发性骨 髓瘤、 r 球蛋白缺乏症
2. 对流免疫电泳 定义：定向加速度的免疫双扩散技术（K）
电渗：指在电场中液体对于一个固定介质的相对移动。
对流免疫抗原带负电荷向正极泳动；而 抗体Ig由于分子量大，暴露的 极性基团较少，在离子琼脂中 泳动缓慢，同时受电渗作用的 影响向负极泳动 在抗原抗体相 遇的最适比例处形成乳白色沉 淀线。
泳物质分子量大小等决定。 2．凝胶打孔及处理
用打孔器在凝胶板上打孔后，要用琼脂溶液封 底，以免样品渗漏。
3．加样
加样时琼脂板应先通上微弱电流，以免样品过 多自由扩散。
4．选择抗原与抗体比例
适当比例抗原抗体反应生成大的免疫复合物， 选择抗原和抗体的比例尽量减少前后带现象的发 生。
5．检测方法 如果沉淀线理想，通过肉眼观察即可定性。 在一些定量测定中，往往辅助以下方法来提高
进行区带电泳，电泳结束后，于琼脂 板旁挖一长形槽，加入相应抗血清， 抗体呈直线扩散，电泳分离后的各种 抗原呈放射状扩散，反应生成弧状沉 淀线。
将蛋白质抗原在琼脂平板上进行 电泳，使不同的抗原彼此分离。
撤去电压，在与电泳方向平行 的琼脂打槽并加入相应抗体进 行双向免疫分散。
分离成区带的各种抗原成分与相 应抗体在琼脂中扩散后相遇，在 二者比例合适处形成弧形沉淀线。
－
火箭免疫电泳操作步骤：
制备含抗体的琼脂板(K)→打孔→ 加样→电泳→出现火箭形沉淀线→ 洗涤、染色、分析结果
火箭免疫电泳的定量测定
“ 峰高——浓度标准”曲线：以不同稀
释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗 原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉 淀峰长度即可计算出待测抗原的含量。
唯一的定量方法（K）
对流免疫电泳操作步骤：
Ab
Ag
制琼脂板→打孔→加样 →电泳
出现沉淀线→洗涤、染 色、分析结果
技术评价：
高电渗为特点，但电渗过强会使蛋白质向阴极移
动（K）
对流免疫电泳简便、快速、敏感度较高 抗原、抗体比例要求严格 抗原或抗体PI相近或迁移率非常接近，不宜做对 流免疫电泳
应用：
可用于乙肝病人血清鉴定；甲 胎蛋白的测定，但近年多以ELISA 替代。