天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)产品技术要求senmeixikema
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)
适用范围：用于体外定量检测人血清中天门冬氨酸氨基转移酶的活性。
1.1规格
a) 试剂1：2×50ml，试剂2：2×10ml；
b) 试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml；
c) 试剂1：2×90ml，试剂2：2×18ml；
d) 试剂1：2×400ml，试剂2：2×80ml；
e) 试剂1：3×80ml，试剂2：3×16ml；
f) 试剂1：4×50ml，试剂2：4×25ml；
g) 试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml；
h) 试剂1：6×50ml，试剂2：6×55.5ml；
i) 试剂1：6×66ml，试剂2：6×16.5ml；
j) 试剂1：8×50ml，试剂2：2×40ml；
k) 试剂1：8×60ml，试剂2：2×48ml；
l) 试剂1：12×20ml，试剂2：12×4ml；
m) 试剂1：4×50ml，试剂2：4×10ml；
n) 试剂1：1×50ml，试剂2：1×10ml；
o) 试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。
1.2 组成
试剂主要组分见表1：
表1 试剂主要组分
2.1 外观
外包装完整无破损，标签清晰；试剂1应为无色或淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。
2.2 净含量
应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白
2.3.1 试剂空白吸光度
在340nm处测定试剂空白吸光度，应≥1.0。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率
试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.004。
2.4 分析灵敏度
测定浓度为150U/L的样品，吸光度变化率（△A/min）应不低于0.015。
2.5 线性
2.5.1在[5，500]U/L范围内，线性回归的相关系数应不低于0.990；
2.5.2测试浓度[50，500]U/L的样品，相对偏差应不超过±10%；测试浓度[5，50)U/L的样品，绝对偏差应不超过±5U/L。
2.6 重复性
2.6.1 批内重复性
变异系数(CV)应不超过5%。
2.6.2 批间差
对同一份样品进行重复测定，相对极差(R)应不超过10%。
2.7 准确度
回收率应在90%～110% 范围内。
2.8 稳定性
原包装试剂在2℃～8℃条件下有效期为18个月，取到效期后6个月内的试剂盒检测，应符合本技术要求2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。
转氨酶试验
血清转氨酶测定 上海市第二人民医院朱福英综述 【摘要】血清转氨酶包括天冬氨酸转氨酶（AST，曾称为谷草转氨酶SGOT）和丙氨酸氨基转移酶（ALT，曾称为谷丙转氨酶SGPT）。是最常用的检测肝细胞坏死的血清特异性酶类试验。本文就近年来有关转氨酶的基本概念，正常值范围及临床意义的进展做一综述。 【关键词】肝功能试验；转氨酶 转氨酶试验仍是现今最常用的检测肝细胞坏死的血清特异性酶类试验，是临床判断有无肝损害、评估肝病严重程度，不同肝病的鉴别诊断以及判断治疗效果和预后的重要检验指标。常用转氨酶试验主要包括血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）。本文对于近年来转氨酶正常值范围的界定，转氨酶及其比值在各类肝脏疾病的临床意义做一综述解析，从而有助临床医生对于转氨酶试验的合理应用和正确解释。 一、血清转氨酶概述 转氨酶（曾称为氨基转移酶）试验是最常用的检测肝细胞坏死的血清特异性酶类试验。包括，天冬氨酸转氨酶（AST，曾称为谷草转氨酶SGOT）和丙氨酸氨基转移酶（ALT，曾称为谷丙转氨酶SGPT）。其分别催化天冬氨酸和丙氨酸上的氨基转化生成酮戊二酸上的酮基AST：天门冬氨酸+ a-酮戊二酸= 草酰乙酸+ 谷氨酸ALT：丙氨酸+ a-酮戊二酸= 丙酮酸+ 谷氨酸。人体内，ALT广泛存在于各组织细胞内，以肝细胞含量最多，其次为心肌，脑和肾组织。因而，ALT的升高，并非肝病所特有的，当骨骼肌肉损伤时，也可测得血清ALT水平轻度升高。可同时检测AST以及肌酸激酶，从而确定ALT的升高是否来源于肝脏损伤[1]。 AST广泛分布于人体各组织间。如，心脏、骨骼肌、肾、脑以及肝脏。肝细胞中的AST存在于细胞胞浆与线粒体内。胞浆和线粒体中的AST为免疫原性不同的同工酶，其中线粒体型AST活性占肝脏AST总活性80％左右，而正常人血清中可检出的AST 为胞浆型。 任一时刻检测转氨酶的血清活性，反应该酶从组织内释放入血循环与其在血循环中被清除的相对速率。临床实验室，检测转氨酶水平的各方法均参考国际临床化学家联合会（IFCC）一级文献的参考方法（PRMP）。以计量酶催化反应所得产物-丙酮酸和草酰
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法) 简介： Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，草酰乙酸与NADH 经LDH 催化生成NAD +，上述方法实际为AST 速率法，其反应公式如下：在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂比色法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT 催化反应立即启动，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， -20℃保存1个月有效，用于AST/GOT 的检测。 ② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个 月有效，用于AST/GOT 的检测。 ③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT 含量。 2、 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避 免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。 编号 名称 TE0135 100T TE0135 200T Storage ALT 检测液(R) 成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光 Tris 缓冲液 100mM L-天门冬氨酸 240mM 酮戊二酸 12mM NADH 0.22mM LDH 2500U/L 防腐剂 15mM 使用说明书 1份 加入物 空白管 测定管 AST 检测液(R)(μl) 900 900
e10-1天冬氨酸蛋白酶与金属蛋白酶
e10-1 天冬氨酸蛋白酶与金属蛋白酶 天冬氨酸蛋白酶的催化机制一般可分为以下几步： 1. 水和多肽底物进入两重对称的活性中心。 2.两个Asp残基的羧基具有不同的pKa。pKa高的Asp残基（Asp32）上的羧基作为广义碱从水分子中抽取一个质子，随之产生的OH-亲核进攻肽键上的羰基碳，形成氧负离子。氧负离子再转而亲核进攻活性中心pKa低的Asp215残基上的羧基，从中夺取质子，于是pKa 低的Asp残基充当广义酸，为氧负离子提供质子，形成四面体状中间物。 3. Asp32和Asp215相互之间进行酸碱反应，质子从Asp32传到Asp215。
4. Asp32和Asp215的酸碱催化导致四面体中间物的拆分，产物得以释放。最后Asp32和Asp215再次进行质子交换，从而使得它们各自回到催化前的状态。 属于金属蛋白酶的有：嗜热菌蛋白酶（thermolysin）、羧肽酶A（carboxypeptidsase A，CPA）和B，这里以CPA为例简要说明它们的催化机理。 CPA 主要催化肽链C-端为芳香族氨基酸或侧链较大的脂肪族氨基酸残基的水解。它属于使用Zn2+进行催化的水解酶家族的一员，属于这一家族的水解酶还有血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme）、胶原酶（collagenase）和某些细胞外基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）。 图e10-1(1) 羧肽酶A疏水口袋与底物的结合以及作为广义碱催化的Glu270
CPA的特异性由其活性中心的形状和化学性质决定，多肽底物结合在疏水口袋之中。疏水口袋特别适合容纳C-端为芳香族或较大的脂肪酸氨基酸的侧链。参与对多肽底物C-端氨基酸残基选择的有Asn144、Arg145和Tyr248，它们与末端羧基以氢键结合[图e10-1(1)]。CPA的两个催化基团一个是Glu270，另一个Zn2+，它们直接参与水解反应。Glu270 作为一个广义碱，激活作为弱亲核进攻试剂的水分子，或者自己作为亲核基团直接进攻肽键上的羰基碳；Zn2+与CPA分子上的三个氨基酸残基——His69、His196和Glu72配位结合，如果没有底物，则还有一个水分子会与Zn2+配位结合，这个水分子很可能就是参与水解的。如果有底物，Zn2+就与底物C-端肽键上的羰基氧结合，产生临近和稳定效应。 关于两个催化基团催化的确切机制还有争议[图e10-1(2)]，一种观点认为（机制A），Glu270直接作为亲核催化剂，进攻肽键的羰基碳，导致羧酸酐中间物的形成，而Zn2+是作为亲电催化剂将底物水分子“抓”到中间物旁边；另一种观点认为（机制B），Glu270和Zn2+分别作为广义碱和Lewis酸进行催化。
转氨酶升高鉴别诊断
血清氨基转移酶简称转氨酶，是一组催化氨基酸与α－酮酸之间的氨基转移反应的酶类，用于肝功能检查的的主要是丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST），ALT 主要分布在肝脏，其次是骨骼肌、肾脏、心肌等组织中；AST 主要分布在心肌，其次是肝脏、骨骼肌和肾脏组织中。ALT 主要存在于非线粒体中，80% 的 AST 主要存在于线粒体内，两者均位于细胞内。正常情况下，二者血清中的含量很低，当肝细胞受损时，肝细胞膜通透性增高，胞质内的ALT 与 AST 释放入血，致使血中 ALT 和 AST 升高，然而 ALT 与 AST 升高又不仅仅局限于肝脏疾病。下面笔者针对转氨酶升高的鉴别诊断进行阐述。 一、病毒性肝炎 临床上碰到转氨酶升高的患者首先应想到病毒性肝炎。病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染病。国内外学者发现并公开的病毒性肝炎的种类包括 8 种类型，分别是：甲型、乙型、丙型、丁型、戊型、庚型、TTV 病毒以及 SEN 病毒。病毒性肝炎主要表现为食欲减退、恶心、上腹部不适、肝区疼痛、乏力、黄疸、发热、肝大、肝功能损害等，有些病人可慢性化，甚至发展成肝硬化，少数可发展为肝癌。各类急、慢性病毒性肝炎均可导致转氨酶升高，为明确转氨酶升高是否由病毒性肝炎引起，可予以不同肝炎病毒的抗原、抗体检查, 以明确是哪一类型病毒引起的肝炎。 二、肝外梗阻性疾病 转氨酶是由胆管排泄的，因此胆管梗阻可引起转氨酶升高，临床上引起胆管梗阻的常见的是胆管、胆囊、胰腺等疾病，比如胆囊炎、胆囊结石、胆管结石、肝胆管结石、胆囊及胆管肿瘤、先天性胆管扩张、壶腹周围癌、急慢性胰腺炎、胰腺癌等。上述疾病一般可通过彩超、CT、MRI 等检查加以区分和鉴别。三、脂肪性肝病 脂肪性肝病是以肝细胞脂肪过度储积和脂肪变性为特征的临床病理综合症，临床上根据是否长期过量饮酒分为非酒精性脂肪性肝病和酒精性脂肪性肝病。非酒精性脂肪性肝病包括单纯性脂肪性肝病以及由其演变的脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化以及肝硬化，是我国最常见的慢性肝病之一；临床上有乏力、上腹部不适、肝区隐痛等非特异性症状，实验室检查可有转氨酶升高，通常以 ALT 升高为主。酒精性脂肪性肝病是长期饮酒导致的慢性肝病，初期表现为脂肪肝，进而发展为酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。临床上表现为乏力、食欲不振、右上腹不适、恶心、呕吐等，70%～80% 的患者转氨酶升高。超声检查是诊断脂肪性肝病的重要手段，确诊率高达 70%～80%；肝 / 脾 CT 平扫密度比值≤ 1 可明确脂肪性肝病的诊断，肝穿刺活检是确诊脂肪性肝病的主要方法。 四、药物 临床上很多药物都可引起转氨酶升高, 有报道在用药 12 小时后即可出现转氨酶升高的情况。常见的引起转氨酶升高的药物有： 1. 抗结核药：雷米封、呲嗪酰胺、对氨基水杨酸钠、利福平、异烟肼等； 2. 解热止痛药物：羟基保泰松、氨基比林、消炎痛等； 3. 抗菌药物：庆大霉素、卡那霉素、先锋霉素、四环素、磺胺类、氯霉素、两性霉素 B 等； 4. 精神类药：如鲁米那、氯丙嗪、丙咪嗪等； 5. 抗肿瘤药物：环磷酰胺、氨甲喋呤、硫唑嘌呤等； 6. 降糖药物：氯磺丙脲、甲磺丁脲、甲磺丁脲等； 7. 降脂药物：他汀类（辛伐他汀等），贝特类； 8. 抗甲状腺药物：丙基硫氧嘧啶、甲基硫氧嘧啶等； 9. 激素类：已烯雌酚、睾丸酮、甲基睾丸酮等； 10. 其它：如麻醉药甲氧氟烷；利尿药氯
第7章 氨基酸代谢习题
第七章蛋白质分解代谢 复习测试 （一）名词解释 1．腐败作用 2．联合脱氨基作用 3．鸟氨酸循环 4．一碳单位 5．生糖氨基酸 （二）选择题 A型题： 1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基 B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基 2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸 +随尿排出 C．合成NH 4 D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等 3．转氨酶的辅酶组分含有： A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素 4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是： A．谷氨酸 B．甘氨酸 C．丝氨酸 D．苏氨酸 E．天冬氨酸 5．经转氨基作用可生成草酰乙酸的氨基酸是： A．甘氨酸 B．天冬氨酸 C．蛋氨酸 D．苏氨酸 E．丝氨酸 6．ALT（GPT）活性最高的组织是： A．心肌 B．脑 C．骨骼肌 D．肝 E．肾7．AST（GOT）活性最高的组织是： A．心肌 B．脑 C．骨骼肌 D．肝 E．肾8．能直接进行氧化脱氨基作用的氨基酸是：
A．天冬氨酸 B．缬氨酸 C．谷氨酸 D．丝氨酸 E．丙氨酸 9．嘌呤核苷酸循环脱氨基作用主要在哪种组织中进行： A．肝 B．肾 C．脑 D．肌肉 E．肺 10．嘌呤核苷酸循环中由IMP生成AMP时的氨基来自： A．天冬氨酸的α-氨基 B．氨基甲酰磷酸 C．谷氨酸的α-氨基 D．谷氨酰胺的酰胺基 E．赖氨酸的α-氨基 11．在尿素合成过程中下列哪步反应需要ATP： A．鸟氨酸+氨基甲酰磷酸→瓜氨酸+磷酸 B．瓜氨酸+天冬氨酸→精氨酸代琥珀酸 C．精氨酸代琥珀酸→精氨酸+延胡索酸 D．精氨酸→鸟氨酸+尿素 E．草酰乙酸+谷氨酸→天冬氨酸+α-酮戊二酸 12．肾产生的氨主要来自： A．氨基酸的联合脱氨基作用 B．谷氨酰胺的水解 C．尿素的水解 D．氨基酸的非氧化脱氨基作用 E．胺的氧化 13．下列哪组反应在线粒体中进行： A. 鸟氨酸与氨基甲酰磷酸反应 B. 瓜氨酸与天冬氨酸反应 C．精氨酸生成反应 D．延胡索酸生成反应 E．精氨酸分解成尿素反应 14．鸟氨酸循环的限速酶是： A．氨基甲酰磷酸合成酶 B．鸟氨酸氨基甲酰转移酶 C．精氨酸代琥珀酸合成酶 D．精氨酸代琥珀酸裂解酶 E．精氨酸酶 15．氨基酸分解产生的NH 在体内主要的存在形式是： 3 A．尿素 B．天冬氨酸 C．谷氨酰胺
天冬氨酸氨基转移酶
天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase AST)，原名谷草转移酶(glutamic oxaloacetic transaminase GOT)，是体内重要的转氨酶，在体内各组织中广泛存在，AST以心脏活性最高。正常人血清中含量甚微。 天冬氨酸氨基转移酶正常范围 正常情况下，血液中来自肝细胞的天冬氨酸氨基转移酶的范围是0-40U/L（单位）。 天冬氨酸氨基转移酶的意义 在肝功能检查中，谷丙转氨酶是反映肝细胞受损的指标的，而天冬氨酸氨基转移酶是反映肝细胞坏死的标准。对于肝硬化、肝纤维化、肝癌的检测非常准确。可以和谷丙转氨酶结合起来反映肝功能的状况，比如谷丙转氨酶/天冬氨酸氨基转移酶比值均在1.0以下为肝硬化或早期肝硬化患者。 天冬氨酸氨基转移酶偏高 在肝功能检查中，天冬氨酸氨基转移酶偏高不一定就是肝炎引起的。因为饮酒、劳累、熬夜、剧烈运动、药物都可能引起天冬氨酸氨基转移酶偏高。所以出现天冬氨酸氨基转移酶偏高也不用过于紧张，需到正规医院进行确诊即可。 天冬氨酸氨基转移酶偏高原因
天冬氨酸氨基转移酶高说明存在肝细胞损伤，一般见于各种乙肝，肝硬化，脂肪肝，酒精肝等肝胆疾病，应做进一步检查，如测乙肝两对半等，以确定天冬氨酸氨基转移酶高的原因，并对症治疗。 天冬氨酸氨基转移酶高的情况也常会在体检中出现，很多人不解。 转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶。普遍存在于动物、植物组织和微生物中，心肌、脑、肝、肾等动物组织以及绿豆芽中含量较高。种类很多，体内除赖氨酸、苏氨酸中外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。其中以谷丙转氨酶(GPT)和天冬氨酸氨基转移酶(GOT)最为重要。 天冬氨酸氨基转移酶高说明存在肝细胞损伤，一般见于各种乙肝，肝硬化，脂肪肝，酒精肝等肝胆疾病。但是，一些外界因素也可使天冬氨酸氨基转移酶一过性增高，如运动，进食，饮酒，熬夜，药物(消炎药即抗生素，但感冒药不是消炎药，要区分开，但是不管是感冒药还是消炎药，服用后都有可能引起天冬氨酸氨基转移酶高)等。应排除这些情况复查一次，若天冬氨酸氨基转移酶持续增高，应做进一步检查，如测乙肝两对半等，以确定天冬氨酸氨基转移酶高的原因，并对症治疗。
口服脾酪氨酸激酶抑制剂治疗类风湿关节炎
口服脾酪氨酸激酶抑制剂治疗类风湿关节炎 摘要 背景 脾酪氨酸激酶(Syk)是一种免疫信号的重要调节剂。这个2期研究的目的是评价应用于患有活动性类风湿样关节炎的患者的R788（一种口服Syk的抑制剂）的有效性和安全性，不管其是否采用甲氨蝶呤治疗。 方法 我们在一项为期6个月、双盲、安慰剂-对照试验中纳入457例患者，这些患者患有活动性类风湿样关节炎并不管其是否采用长期甲氨蝶呤治疗。主要结局是在第6个月时达到美国风湿病学会(ACR) 20反应(即触痛和肿胀关节数至少减低20%并且5项标准中至少有3项改善)。结果 在第6个月时R788以剂量100 mg每天2次和剂量150 mg每天1次治疗显著优于安慰剂(ACR 20反应率分别67%和57%，与这两个剂量组相比用安慰剂为35%；P<0.001)。至于ACR 50也更优，表明至少改善50%(43%和32%相比19%；与服用100-mg剂量的安慰剂比较P<0.001，与服用150-mg剂量的安慰剂比较P = 0.007)和ACR 70 (28%和14%相比10%；与服用100-mg剂量的安慰剂比较，P<0.001，与服用150-mg 剂量的安慰剂比较P = 0.34)。在第一周治疗结束时，可以观察到明显的临床效应。不良效应包括腹泻(服用100-mg剂量 R788受试者为19%vs服用安慰剂受试者为3%)，上呼吸道感染(14%vs7%)，和嗜中性粒细胞减少症(6%vs1%)。使用R788一个月后与基线水平相比心脏收缩压增高大约3mmHg，而使用安慰剂的患者血压下降2mmHg；有23%服用R788的病人和7%服用安慰剂的病人需要开始或改变抗高血压的治疗。 结论 在这项2期研究中，一个Syk抑制剂在类风湿样关节炎患者中减轻疾病活动度；不良事件包括腹泻，高血压，和中性粒细胞减少。将需要更深入的研究进一步在类风湿样关节炎患者中评估Syk-抑制治疗的安全性和有效性。(由Rigel提供资金; 临床试验政府编号NCT00665925.) 脾酪氨酸激酶(Syk)是一种细胞内细胞质的激酶，它是一种重要的免疫受体递质，在巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞和B细胞中传递信号。脾酪氨酸激酶存在于类风湿关节炎患者的滑膜细胞上。Sky的激活对于细胞因子和金属蛋白酶的产生是很重要的，其中可由类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞中的TNF-α诱导产生。在胶原诱导性关节炎的侵蚀性模型中，R788一种口服前体药其可以迅速转换成有效型并且相对选择性的阻止sky，R460，（其具有强有力的抗炎症活动的作用，显示出Syk抑制剂是如何对类风湿炎达到治疗作用的。 在一项既往的12-周，剂量递增、随机化、安慰剂-对照试验(临床试验政府编号NCT00326339)包括189例罹患活动型类风湿关节炎不论是否经过甲氨蝶呤的治疗的患者，与获得安慰剂或50mgR788一天两次治疗组相比，100mg一天两次和150mg一天两次的高剂量治疗的两组可以看到血清IL-6基质金属蛋白酶3和关节炎活动的显著下降。显著地负性事件有腹泻、中性粒细胞减少症和高血压。 在那些阳性结果的基础上，设计出了规模更大和为期更长的2期试验去评估在接受长期甲氨蝶呤治疗的活动性类风湿样关节炎患者中R788的作用。主要目标是在这一群体中经过为期6个月的带有安慰剂对照的情况下去鉴定R788的有效性和安全性。 方法 病人和研究设计 我们在6个国家（保加利亚、哥伦比亚、墨西哥、波兰、罗马尼亚、美国）的64个站点进
蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶 纯化及性质
动物学报 43(2):133～139,1997 A cta Zoologica S i nica 蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶 纯化及性质3 赵小凡 王金星 (山东大学生物学系,济南 250100) 摘 要 采用硫酸铵沉淀、离子交换层析和离子交换凝胶过滤法,从蓖麻蚕卵母细胞中纯 化出一种蛋白酶。该蛋白酶活性能被天冬氨酸蛋白酶特异性抑制剂抑胃肽抑制,初步鉴定 该酶为天冬氨酸蛋白酶。经SDS2聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为90kD,由凝胶过滤估 计分子量在360kD,推测该酶由四亚基组成。该蛋白酶在p H3～5均可水解牛血红蛋白,最 适p H为4。这是首次报道昆虫卵内存在天冬氨酸蛋白酶。 关键词 蓖麻蚕 卵天冬氨酸蛋白酶 纯化 性质 昆虫卵内蛋白酶在胚胎发育中降解卵黄蛋白,供给胚胎发育必需的氨基酸,对昆虫的胚胎发育具有重要的意义。根据活性中心可将蛋白酶分为4大类,分别是半胱氨酸蛋白酶类、丝氨酸蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类和金属蛋白酶类(Bond and Butler, 1987)。目前已从昆虫卵内纯化出多种蛋白酶,如家蚕卵半胱氨酸蛋白酶(Kageyama and Takahashi,1990)和家蚕卵黄蛋白质降解酶(Ikeda et al.,1990)。目前所报道的昆虫卵内蛋白酶分属于半胱氨酸蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类。前者的活性中心含有半胱氨酸残基,酶活性可被E264{N2[N2(1,32trans2carboxyoxiran222carbonyl)2L2leucyl]2agma2 tine}抑制;后者活性中心含有丝氨酸残基,酶活性可被iPr2P2F(diisopropyl fluorophos2 phate)抑制。目前为止,还没有关于昆虫卵内是否存在有天冬氨酸蛋白酶的报道。 在我们对蓖麻蚕卵内半胱氨酸蛋白酶进行研究的过程中发现,卵母细胞中的内源性蛋白酶活性除可被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E264抑制外,还可被天冬氨酸蛋白酶的特异性抑制剂抑胃肽抑制,在纯化蓖麻蚕卵半胱氨酸蛋白酶时也发现多个蛋白酶活性峰,因此曾推测蓖麻蚕卵内可能存在有天冬氨酸蛋白酶(赵小凡等,1994)。现从蓖麻蚕卵母细胞中纯化出一种蛋白酶,由于其活性可被抑胃肽抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶类。 1 材料和方法 111 动物 蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)用蓖麻叶人工饲养,取羽化前的剖腹卵洗净备用。112 化学试剂 DEAE2纤维素(DE252)为Whatman公司产品;DEAE2Toyopearl为日本Tosoh公司产品;Sepharose CL26B和标准蛋白质为Pharmacia公司产品;部分抑制剂由S.Y.Takahashi教授惠赠;蓖麻蚕卵黄磷蛋白(分子量468kD,刘正廉等,1987)和蓖麻蚕卵半胱氨酸蛋白酶(分子量 1994206207收稿,1997202218修回 3国家教委留学回国人员基金及优秀年轻教师基金资助项目
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定 1. 实验原理：国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法，酶偶联反应式为： L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸A S T草酰乙酸 +L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD++H2O 在340nm波长下，监测NADH的氧化速率，即吸光度的下降速率与AST活性呈正比。 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：欧泰克AST测定试剂盒 6.1.1 试剂组成 Tris缓冲液pH7.8 80mmol/L
L-天门冬氨酸240mmol/L MDH(苹果酸脱氢酶) ≥600U/L LDH(乳酸脱氢酶) ≥1200U/L a-酮戊二酸12mmol/L NADH 0.18mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用罗氏公司提供的复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7. 仪器：日立7060生化分析仪 8. 操作步骤
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 本试剂以国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。 ⑴样本中的天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天冬氨酸和α-氧代戊二酸氨基转移，生成草酰乙酸和L谷氨酸； ⑵在还原型辅酶I（NADH+H+）和苹果酸脱氢酶（MDH）的存在下，草酰乙酸被还原为L-苹果酸，还原型辅酶I （NADH+H+）被氧化为辅酶I（NAD），从而使波长340 nm处的吸光度值下降。通过对波长340 nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性 L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD+
3 标本 3.1 病人准备：12小时禁食。 3.2 类型：血清。 3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～ 25℃保存：<10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个 月。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司AST试剂盒（沪 食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014） 4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）：乳酸脱氢酶＞1365 U/L NADH 0.26mmol/ L-天冬氨酸300mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L 试剂2（R2）：苹果酸脱氢 酶＞1635 U/L α氧代戊二 酸 36mmol/L
天冬氨酸氨基转移酶高是什么原因引起的-
天冬氨酸氨基转移酶高是什么原因引起的? 天冬氨酸氨基转移酶是属于一种人体然组织当中比较丰富的组织，存在于人体的肝脏、心脏，以及骨骼等，出现天冬氨酸氨基转移酶高会容易导致一些肝脏或者是心脏部位疾病，而引起天冬氨酸氨基转移酶高是由于长期酗酒或者是长期身体劳累所引起的疾病，需要及时进行治疗。 ★天冬氨酸氨基转移酶 天门冬氨酸氨基转移酶，存在于人体各种组织中，以心肌含量最丰富，其次是肝脏。在肝脏内，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)绝对值超过谷氨酸氨基转移酶(ALT)。AST以其在细胞内分布的部位不同分为两种同工酶，即细胞质型天门冬氨酸氨基转移酶(s-AST)和线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶(m-AST)。由于m-AST 定位于线粒体内，不易释放入血。当肝细胞出现坏死时，m-AST 从线粒体中释放出来，使得血清中的AST增高。同工酶的测定有助于了解心肌、肝、肾组织的损伤程度。 ★临床意义 血清天门冬氨酸氨基转移酶测定有助于判定心和肝细胞有
无坏死及损伤程度。AST增高：常见于急、慢性重症肝炎、肝硬变、心肌炎、心肌梗塞、肾炎、胆管炎、皮肌炎、胰腺炎等病症。 由于心肌含AST量最高，其次是肝脏，所以心和肝细胞损伤后血中酶活性能迅速升高。但仅仅测定总AST活性不能完全反映心与肝损伤程度和判定预后。测定血清m-AST可间接了解肝细胞超微结构损伤及线粒体损害的严重程度。m-AST不仅能作为心、肝细胞坏死的指标，也能作为对心与肝脏疾病动态监测的指标。 ★正常值参考范围 血清天门冬氨酸氨基转移酶的正常参考值：15～40U/L。 ★天冬氨酸氨基转移酶高是什么原因 天冬氨酸氨基转移酶存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。正常人血清中含量很低，但当肝细胞或心肌细胞受损时，由于细胞膜通透性增加，胞浆内的ALT与AST释放入血浆，致使血清中转氨酶活性升高。可以和谷丙转氨酶结合起来反映肝功能的状况。 在肝功能检查中，天氨酸氨基转移酶偏高不一定就是肝炎引
转氨酶是反映肝脏功能的一项指标
转氨酶是反映肝脏功能的一项指标，在体检时常常要做这项检查。有些人认为转氨酶高了，就是得了肝炎。最近，某单位组织员工献血，有一个部门12名参加体检的员工中，竟有9人的转氨酶比正常值高。怎么会有这么多人转氨酶高？他们会不会得肝炎？近些年，我们好像常听到类似的事情，身边也常遇到转氨酶高的人。这到底是不是一种正常现象，他们的身体出没出问题？为此，记者前往北京大学第一医院，采访了感染病科的主任医师王勤环教授。 转氨酶反映肝脏健康状况 王教授首先告诉记者，转氨酶是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”，主要存在于肝细胞内。当肝细胞发生炎症、坏死、中毒等，造成肝细胞受损时，转氨酶便会释放到血液里，使血清转氨酶升高。 通常，体检中主要检查的转氨酶是丙氨酸转氨酶(ALT)。1%的肝脏细胞损害，可以使血中ALT的浓度增加1倍。因此，ALT水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受到损害。 转氨酶水平在0—40之间是正常的。如果超出正常范围，医生会建议再查一次，排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。如果转氨酶水平还高，多半是由病毒性肝炎或其他肝病所致。但要确定是不是病毒性肝炎，还需要做其他检查，结合病史、症状、体征等全面分析。 即使确认是病毒性肝炎，也不能简单地以ALT升高的程度来判断病情，因为对于重型肝炎，可能由于存活的肝细胞比较少，释放到血液中的转氨酶很少，ALT反而随病情的恶化而降低。 转氨酶高不都是肝炎 ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起转氨酶增高。王教授指出，主要还有以下情况： 首先，人体内许多组织都含有转氨酶，比如心肌炎和心肌梗死都可能使天冬氨酸转氨酶升高。 其次，如果有胆结石等胆道梗阻性疾病，可能因为淤胆而使血中转氨酶水平升高。 此外，对于一些看起来没什么大病的人来说，还有可能因为长期酗酒导致酒精肝，或饮食结构不合理导致脂肪肝，造成转氨酶高。 劳累也可能让转氨酶升高
转氨酶升高的误区解释及治疗
转氨酶 转氨酶（aminotransferase，transaminase）是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶。普遍存在于动物、植物组织和微生物中，心肌、脑、肝、肾等动物组织以及绿豆芽中含量较高。转氨酶参与氨基酸的分解和合成。 转氨酶 转氨酶的种类很多，体内除赖氨酸、苏氨酸之外，其余α－氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。前者是催化谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，后者是催化谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用。转氨酶催化的反应都是可逆的，有研究认为转氨酶高可用五味子的养肝片来降低转氨酶。转氨酶可按底物的不同分成3大类。L-a-氨基酸（酮酸转氨酶）、ω- 氨基酸（酮酸转氨酶）和D-氨基酸转氨酶。转氨酶的辅基是磷酸吡哆醛或磷酸吡哆胺，两者在转氨基反应中可互相变换。 在高等动物各组织中，活力最高的转氨酶是谷氨酸：草酰乙酸转氨酶（ GOT ）和谷氨酸：丙酮酸转氨酶（GPT）。 GOT以心脏中活力最大，其次为肝脏；GPT则以肝脏中活力最大，当肝脏细胞膜破裂损伤时，谷丙转氨酶GPT释放到血液内，于是血液内酶活力明显地增加。在临床上测定血液中转氨酶活力可作为诊断的指标。如测定GPT活力可诊断肝功能的正常与否，急性肝炎患者血清中GPT活力可明显地高于正常人；而测定GOT 活力则有助于对心脏病变的诊断，心肌梗塞时血清中GOT活性显示上升。 作用
肝硬化特
早期症状 人们常常对转氨酶存在各种错误认识，认为转氨酶升高就是肝炎；转氨酶异常就有传染性；转氨酶水平与肝细胞损害程度呈正比等等。事实上，很多情况下转氨酶水平正常与否，不能代表肝脏功能好坏单纯转氨酶偏高，早期的转氨酶高一般都用五味子的养肝片来降低转氨酶。 转氨酶高的早期症状？一些人认为转氨酶高意味着肝炎，转氨酶高还不能确定是病毒性肝炎，确定患上肝炎必须同时具备以下三点才成立。 1、有肝炎的症状、体征（如发热、厌油、恶心、呕吐、乏力、食欲差、肝脏肿痛等）和临床诊断（如急性黄疸型、慢性迁延型等）； 转氨酶 2、血清转氨酶增高；病原学诊断（有抗甲肝抗体是甲型，乙肝病毒表面抗原、e 抗原和核心抗体阳性是乙型）。 3、个别人单纯转氨酶偏高，不排除在检测前因饮酒过量、剧烈运动、上夜班、感冒或口服某些药物等因素干扰。 肝受损 人体内存在很多氨基转移酶，临床上通过抽血化验检测肝功能的转氨酶主要有两种，一种叫丙氨酸转氨酶（ALT）；另一种叫天门冬氨酸转氨酶（AST）。 天冬氨酸转氨酶 ALT及AST主要存在于肝细胞中，其他脏器中如肾、心肌、胰、肌肉、脾、胆、肺也含有一定数量的ALT和AST。ALT主要存在于细胞浆中，AST主要存在于细胞浆的线粒体中。当细胞损伤时（如肝炎、心肌炎、胰腺炎等），ALT首先进入血中，当细胞严重损伤、危及线粒体时，AST也会进入血中。此外，营养不良、
第七章氨基代谢
第七章氨基酸代谢一、选择题 A型题
1.必需氨基酸是这样一些氨基酸 A.可由其它氨基酸转变而来 B.可由糖转变而来 C.可由三羟循环中间产物转变而来 D.可由脂肪中的甘油转变而来 E.体内不能合成，只能从食物中摄取 2.提高食物蛋白生理价值的蛋白质互补作用是指 A.糖和蛋白质混合食用 B.脂肪和蛋白质混合食用 C.几种营养价值低的蛋白质混合食用 D.糖、脂、蛋白质及维生素混合食用 E.蛋白质对糖和脂肪的替代作用 3.蛋白质生理价值的高低主要取决于 A.氨基酸的种类 B.氨基酸数量 C.必需氨基酸的种类、数量及比例 D.必需氨基酸的数量 E.必需氨基酸的种类 4.对婴儿、孕妇、恢复期病人，必须保持下列哪种 平衡才有利于生长发育和恢复健康？ A.氮平衡 B.氮的负平衡 C.氮的正平衡 D.氮的总平衡 E.物质代谢总平衡 5.体内合成非必需氨基酸的主要途径是 A.转氨基 B.联合脱氨基作用 C.非氧化脱氨 D.嘌呤核苷酸循环 E.脱水脱氨 6.只含非必需氨基酸的是 A.色氨酸，苯丙氨酸 B.亮氨酸，异亮氨酸 C.色氨酸，缬氨酸 D.赖氨酸，甲硫氨酸 E.谷氨酸，天冬氨酸 7.对蛋白质消化吸收的叙述不正确 ．．．的是 A.小肠是主要消化场所 B.胰酶是主要消化酶类 C.胰腺细胞最初分泌的各种蛋白酶都以酶原的 形式存在 D.蛋白质经胰酶分解的产物全是氨基酸 E.肠粘膜细胞对氨基酸的吸收以主动吸收为主 8.可在体内生成黑色素的氨基酸是 A.甲硫氨酸 B.色氨酸 C.组氨酸 D.谷氨酸 E.酪氨酸9.蛋白质的腐败作用与下列哪项无关 A.需要肠道细菌 B.必需在有氧条件下进行 C.可以产生胺类和氨 D.可以产生少量脂肪酸 E.还可以产生硫化氢 10.对真核细胞中蛋白质降解途径的叙述不正确 ．．．的是 A.降解途径有溶酶体和胞液2个系统 B.溶酶体系统不依赖泛素但需ATP C.胞液系统依赖泛素也需ATP D.溶酶体系统对降解蛋白无选择性 E.胞液系统对降解蛋白有选择性 11.下列对氨基酸转氨基作用的描述哪项是不正确 ．．． A.转氨酶的辅酶是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆醇 B.转氨基作用是体内大多数氨基酸脱氨基的途 径之一 C.转氨基作用也是体内合成非必需氨基酸的主 要途径之一 D.转氨酶主要分布于细胞内，而血清中的活性很低 E.转氨基作用与糖异生有关 12.在人体内氨的最主要代谢去路为 A.合成非必需氨基酸 B.合成尿素 C.合成必需氨基酸 D.合成嘌呤、嘧啶核苷酸等 E.合成NH4+随尿排出 13.下列哪一种氨基酸经过转氨作用可生成草酰乙酸？ A.谷氨酸 B.丙氨酸 C.苏氨酸 D.天冬氨酸 E.脯氨酸 14.转氨酶的辅酶中含有下列哪种维生素？ A.维生素B1 B.维生素B12 C.维生素C D.维生素B6 E.维生素D 15.能直接转变为α-酮戊二酸的氨基酸为 A.天冬氨酸 B.丙氨酸 C.谷氨酸 D.谷氨酰胺 E.天冬酶胺 16.牛磺酸由下列哪种氨基酸衍变而来 A.甲硫氨酸 B.甘氨酸 C.半胱氨酸 D.谷氨酸 E.苏氨酸 17.骨骼肌中丙氨酸脱氨基方式为 A.嘌呤核苷酸循环脱氨 B.由GOT催化脱氨 C.经D-氨基酸氧化酶催化脱氨 D.经丙氨酸酶催化脱氨
谷草转氨酶(AST)_IFCC速率法
目录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理
谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。 AST L-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸 MDH NADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+ 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。 3．试剂 3.1 试剂： 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
07 生物化学习题与解析--氨基酸代谢
氨基酸代谢 一、选择题 （一） A 型题 1 ．不出现于蛋白质中的氨基酸是 A ．半胱氨酸 B ．胱氨酸 C ．瓜氨酸 D ．精氨酸 E ．赖氨酸 2 ．肌肉中氨基酸脱氨基的主要方式是 A ．嘌呤核苷酸循环 B ．谷氨酸氧化脱氨基作用 C ．转氨基作用 D ．鸟氨酸循环 E ．转氨基与谷氨酸氧化脱氨基的联合 3 ．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式是 A ．氧化脱氨基 B ．还原脱氨基 C ．直接脱氨基 D ．转氨基 E ．联合脱氨基 4 ．哺乳类动物体内氨的主要去路是 A ．渗入肠道 B ．在肝中合成尿素 C ．经肾泌氨随尿排出 D ．生成谷氨酰胺 E ．合成营养非必需氨基酸 5 ．蛋白质的互补作用是指 A ．糖和蛋白质混合食用，以提高食物的营养价值 B ．脂肪和蛋白质混合食用，以提高食物的营养价值 C ．几种营养价值低的蛋白质混合食用，以提高食物的营养价值 D ．糖、脂肪、蛋白质及维生素混合食用，以提高食物的营养价值 E ．用糖和脂肪代替蛋白质的作用 6 ．脑中氨的主要去路是 A ．扩散入血 B ．合成谷氨酰胺 C ．合成谷氨酸 D ．合成尿素 E ．合成嘌呤 7 ．丙氨酸 - 葡萄糖循环中产生的葡萄糖分子来自于 A ．肌肉内的谷氨酸 B ．肌肉内的α - 酮戊二酸 C ．丙氨酸 D ．肝细胞内的α - 酮戊二酸 E ．肝细胞内的谷氨酸 8 ．消耗性疾病恢复期的病人体内氮平衡的状态是 A ．摄入氮＜排出氮 B ．摄入氮≤排出氮 C ．摄入氮＞排出氮 D ．摄入氮≥排出氮 E ．摄入氮＝排出氮 9 ．下列属于营养必需氨基酸的是 A ． Leu B ． Ser C ． Pro D ． Glu E ． Ala 10 ．转氨酶的辅酶是 A ．维生素 B 1 的磷酸酯 B ．维生素 B 2 的磷酸酯 C ．维生素 B 12 的磷酸酯 D ．维生素 PP 的磷酸酯 E ．维生素 B 6 的磷酸酯 11 ．临床上对肝硬化伴有高血氨患者禁用碱性肥皂液灌肠，这是因为 A ．肥皂液使肠道 pH 值升高，促进氨的吸收 B ．可能导致碱中毒 C ．可能严重损伤肾功能 D ．可能严重损伤肝功能 E ．可能引起肠道功能紊乱 12 ．体内最重要的甲基直接供体是 A ． S- 腺苷甲硫氨酸 B ． N 5 - 甲基四氢叶酸 C ． N 5 ， N 10 - 甲烯四氢叶酸 D ． N 5 ， N 10 - 甲炔四氢叶酸 E ． N 10 - 甲酰四氢叶酸 13 ．磺胺类药物可干扰哪种物质的合成
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)产品技术要求senmeixikema
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法) 适用范围：用于体外定量检测人血清中天门冬氨酸氨基转移酶的活性。 1.1规格 a) 试剂1：2×50ml，试剂2：2×10ml； b) 试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml； c) 试剂1：2×90ml，试剂2：2×18ml； d) 试剂1：2×400ml，试剂2：2×80ml； e) 试剂1：3×80ml，试剂2：3×16ml； f) 试剂1：4×50ml，试剂2：4×25ml； g) 试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml； h) 试剂1：6×50ml，试剂2：6×55.5ml； i) 试剂1：6×66ml，试剂2：6×16.5ml； j) 试剂1：8×50ml，试剂2：2×40ml； k) 试剂1：8×60ml，试剂2：2×48ml； l) 试剂1：12×20ml，试剂2：12×4ml； m) 试剂1：4×50ml，试剂2：4×10ml； n) 试剂1：1×50ml，试剂2：1×10ml； o) 试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。 1.2 组成 试剂主要组分见表1： 表1 试剂主要组分 2.1 外观
外包装完整无破损，标签清晰；试剂1应为无色或淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。 2.2 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 在340nm处测定试剂空白吸光度，应≥1.0。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.004。 2.4 分析灵敏度 测定浓度为150U/L的样品，吸光度变化率（△A/min）应不低于0.015。 2.5 线性 2.5.1在[5，500]U/L范围内，线性回归的相关系数应不低于0.990； 2.5.2测试浓度[50，500]U/L的样品，相对偏差应不超过±10%；测试浓度[5，50)U/L的样品，绝对偏差应不超过±5U/L。 2.6 重复性 2.6.1 批内重复性 变异系数(CV)应不超过5%。 2.6.2 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差(R)应不超过10%。 2.7 准确度 回收率应在90%～110% 范围内。 2.8 稳定性 原包装试剂在2℃～8℃条件下有效期为18个月，取到效期后6个月内的试剂盒检测，应符合本技术要求2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂比色法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏比色法) 简介： 转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。 Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏比色法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT催化下，其反应公式如下： L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。 二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过分光光度计检测在处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。100T该检测试剂盒可检测50个样本(不含标准品)，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、蒸馏水 2、离心管 3、水浴锅 4、比色杯 5、分光光度计 操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：编号 名称TE0133 100T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L)1ml 4℃避光试剂(B): 丙酮酸标准稀释液2ml RT 试剂(C): 标准对照液2ml 4℃ 试剂(D): AST assay buffer30ml -20℃避光使用说明书1份
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， -20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个 月有效，用于AST/GOT的检测。 ③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。 2、制作AST标准曲线：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)： 丙酮酸标准稀释液混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。最好设定平行检测管，求平均值。 加入物0 1 2 3 4 丙酮酸标准(2mmol/L)(μl) 0 20 40 60 80 标准对照液(μl) 40 40 40 40 40 AST assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) 200 180 160 140 120 相当于ALT/GPT(卡门单位) 0 24 61 114 190 混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液，混匀，孵育后，加入ALT显色基液，混匀。室温放置，分光光度计，以蒸馏水调零，读取各管吸光度。各管吸光度均减去”0”号管吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。 3、AST酶促反应：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免 产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。 加入物对照管测定管 待测样品(如血清等)(μl) 40 40 AST assay buffer(μl) 200 ? 混匀，水浴孵育。 AST assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) ?200 二硝基苯肼显色液(μl) 200 200 混匀，水浴孵育。 AST显色基液(ml) 2.0 2.0 4、AST检测：混匀，室温放置5min。分光光度计检测吸光度，比色杯光径1cm，以蒸馏 水调零，读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。 计算： 以标准管活力单位为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。测定管吸光度减去对照管吸光度后，从标准曲线查得AST活力单位。