不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒
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程 晓霞 ， 小 丽 ， 锋 强 ， 仕 龙 ， 朱 林 。陈 陈少 莺 ， 王 劭 ， 兆 龙 李 。
（ ． 建省 农业 科学 院畜 牧兽 医研究 所 ， 建 福州 ３ ０ １ ；． １福 福 ５ ０ ３ ２ 福建 省畜 禽疫病 防治 工程技 术研 究 中心） 摘 要 ： 讨番 鸭呼 肠孤病 毒 强毒株 和弱毒 株在 番 鸭免 疫 器 官 中的分 布 和排 毒 的 差异 。结 果 显 示 探 强毒株 在 感 染后 １ｄ就 可在 脾脏 、 氏囊 、 腺检 出病毒 ＲＮＡ， 法 胸 高峰 期为 攻毒后 ７ ４ｄ 直到 感 染 ～１ ； 后 ３ ， 免 疫 器官 中不能检 测到病 毒 Ｒ ５ｄ 在 ＮＡ。接 种 强毒株 后 ７ｄ开始 向外 界排 毒 ， １ 而 ４ｄ后 停止 向 外界排 毒 。雏 鸭免 疫弱毒 疫 苗后 ３ｄ 即可在脾 、 ， 胸腺 、 氏 囊中检 出病 毒 ＲＮＡ； 法 高峰 期 为攻毒后
呼肠孤 病毒 是一 种免疫 抑制性 病毒 ， 导致 脾 、 胸腺 和 法 氏囊 淋 巴细胞 变性坏 死 ， 量 明显减 少 ， 数 网状纤 维 组织 显露 ， 给番 鸭养殖 带 来 巨大 经济 损 失 。２ ０ ０ ２年
胡奇林 等研 制发 明番 鸭 呼肠 孤 病 毒活 疫 苗 ， 控 制 是 番 鸭呼肠 孤病毒 病 非 常有 效 的措 施 之一 ， 苗 免 疫 疫
Ｍ ｕｓ ｏ ｃ ｔ ｒｅ ｏ ｅ ｒ ｔ ｎ ７ ｈ ｄａ ｎ ｓ ｏ ｃ ｖｙ ｄｕ ｋｓ ｓ ａ ｔ ｄ ｔ ｘｃ ｅ ｅ ｏ ｔ ｙ ａ ｄ ｔ ｐｐｅ ｎ １ｌ ｈ ｄ ｙ． ｄ ｏ ｔ ａ
Ｋｅ ｏ ｄ ：Ｍ ｕ ｃ ｖ ｕ ｋ ｒ ｏ ｉｕ ；ｉ ｙ ｗ ｒｓ ｓ ｏ ｙ ｄ ｃ ｅ ｖ ｒ ｓ ｍｍｕ ｅ ｏ ｇ ｎ；ｖ ｒ ｌｎ ｔａ ｎ ｔｅ ｕ ｔ ｄ ｓ ｒ ｉ ｎ ｒａ ｉｕ ｅ ｔｓ ｒ ｉ ；ａ ｔ ｎ ａ ｅ ｔａ ｎ；ｄ ｓ ｒ ｕ ｉｎ ａ ｄ ｅ ｃ ｅ ｉｎ ｉｔｉ ｔ ｎ ｘ ｒ ｔ ｂ ｏ ｏ
９ ， 死率 达 ６ ～８ ％。研 究 发现番 鸭 呼肠 孤 Ｏ 病 Ｏ ０
２ ０ ０６ ［ 稿 日期 ］ ＺＯｌ — ５— 收
后番 鸭 平均 发 病率 ７ ， 均病 死 率 ３ ， 平 免疫 保 护
率 ９ ， 明该 疫 苗 安 全 、 ０ 证 有效 。林 锋 强 等 研 究 表 明免 疫 番鸭呼肠 孤病 毒活 疫苗后 番 鸭细胞 免疫 功能
根 据建 立 的 Ｒ Ｔ— Ｐ Ｒ方 法 对 样 品 进行 检 测 。 Ｃ 设 Ｄ ＲＶ—Ｃ 株 细胞 病 毒 培养 液 为 阳性 对 照 ， 常 Ａ 正
番鸭 呼肠 孤 病 毒 病 （ 称 番 鸭 “ 白点 病 ” 是 俗 肝 ） １ ９ 年 以来 发 生 于 福 建 、 江 、 东 等 地 番 鸭饲 养 ９７ 浙 广 区的一种 番鸭 新疫 病 ， 病 由番 鸭 呼肠 孤 病 毒 引起 该 以软脚 、 肝脾 等脏 器 出现 灰 白色 坏 死 点 ， 肾脏 肿 大 、 出血 、 面有 黄 白色条 斑 为特 征 。发 病 率为 ３ ～ 表 Ｏ
ｄ ｙａ ｄｓｏ ｐ ｄｏ ４ ｈｄ ｙ ａ ｎ ｔ ｐ ｅ ｎ １ ｔ ａ ．Ｏｎ ３ ｄ ｄ ｙ ｉ ｒ ａ ｍｍｕ ｉｅ ｔ ＤＲＶ ｎ ｚ ｄ ｗｉｈ Ｍ ＣＡ ｔａ ｎ ｉ ｌＲＮＡ ｓｐ ｓｔ ｅｉ ｐ ｅ ｎ ｕ ｓ ，ｔ ｙ ｓ ｓ ｒ ｉ 。ｖ ｒ ａ ｗａ ｏ ｉ ｖ ｓ ｌ ｅ ，ｂ ｒ ａ ｈ ｍｕ ｉ ｎ ｏ ｓ ｏ ｙ ｄ ｃ ｓ ｈ ｅ ｋ ｔ ｓ ｄ ｒｎ ｔ 一 １ ｔ ａ ｆｍｕ ｃ ｖ ｕ ｋ ，ｔ ｅｐ ａ ｉ ｗａ ｕ ｉ ｇ ７ ｈ ｍｅ ４ ｈ ｄ ｙ，ｕ ｔ ８ ｈ ｄ ｙ，Ｍ ＤＲＶ ｎ ｉ２ ｔ ａ ｌ ＲＮＡ ｓｎ ｇ ｔ ｅ ｉ ｈ ｍｍｕ ｅｏ ｇ ｎ ， ｗａ ｅ ａ ｉ ｎ ｔ ｅｉ ｖ ｎ ｒ ａ ｓ
１ ７ ＲＴ— Ｐ Ｒ 检 测 ． Ｃ
Ｃ Ａ弱 毒株 ， 由本实 验 室经 鸡 胚 传 代致 弱 获 得 ； 胚 鸡
成 纤 维 细 胞 测 定 ＴＣ Ｄ５ Ｉ ０为 １ ・ Ｏ ２ｍＬ； 日龄 ０ 。 ． ／ １
雏番 鸭 由莆 田克 里 莫 种 番 鸭 公 司 提 供 ， 打 任 何 未 疫苗 。
ＣＨＥＮＧ ａ — ｉ Ｘｉ ｏ ｘ ａ ’ ，ＺＨＵ ａ —ｉ’ ＬＩ Ｆｅ — ｉ ｎ 。， Ｘｉｏ ｌ ， Ｎ ｎｇ ｑ ａ ｇ ， ＣＨＥＮ ｈｉｌ ｎ 。， Ｓ —ｏ ｇ ’ ＣＨ ＥＮ Ｓｈａ — ｉ ’’ ｏ ｙ ｎｇ ， Ｗ ＡＮＧ ａ ． ａ —ｏ 。 Ｓｈ ｏ ＬｉＺｈ ｏ ｌ ｎｇ ，
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８
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Ｖｏ ． １ １３
Ｎｏ ５ ．
２ １ ０２
不 同毒 力番 鸭呼肠孤病 毒 在 番 鸭 免疫 器 官 的 分 布 和 排 毒
１ ２ 主 要 试 剂 ．
Ｒ —Ｐ Ｒ试 剂 盒 购 自大 连 宝 生 物 工 程 公 司 ； Ｔ Ｃ Ｔ Ｉｏ 试剂 （ 号为 Ｖ ５ ２ ６ ２ ） 购 自 ｉ ｒｖｇ ｎ Ｒ ｚｌ 批 Ｘ ９ ３ ８１ ８ ， ｎ ｏｏ ｅ ｔ
公 司 ； ２０ Ｎ ｒｅ（ 连 宝 生 物 工 程 公 司 ） Ｄ ０ ０Ｄ Ａ Ｍａｋｒ大 。 １３ 引物 设计 与合成 ．
［ 者 简 介 ］ 程 晓 霞 （ ９ ２ ）女 ， 建 福 州 人 ， 科 ， 研 究 作 １７ ～ ， 福 本 副 员， 主要 从 事 畜 禽 传 染 病 和 分 子 生 物 研 究 工 作 。 ＊［ 讯 作 者 ］ 陈 少莺 ， 通 Ｅ—ｍａ ：ｈｎ ｙ ８ １ ３ Ｃｒ ｉ ｃ ｅ ｓ５ ＠ ６ ．Ｏ ｌ ｎ
（ Ｗ ９ １ ）ｏ ｔｅ ｕ ｔ ｄ （ Ｍ ７ Ｏ ｒａ ｔ ｎ ａ ｅ ＣＡ）ｓ ｒ ｉ ｔａｎ ｉ ｉ ｎ ｍｍｕ ｅ ｏ ｇ ｎ ． Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉａ ｅ ｈ ｔｏ ｓ ａ ｎ ｅ ｔ ｄ ｗｉ ＤＲＶ Ｗ ９ １ ｎ ｒａ ｓ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｉｄ ｃ ｔ ｄ ｔ ａ ｎ １ ｔｄ ｙ ｉ ｆ ｃ ｅ ｔ Ｍ ｈ Ｍ ７０ ｓｒ ｉ ｔ ａｎ，Ｖｉａ ｒｌ ＲＮＡ ｓ ｐ ｓｔｖ ｅ ｅ ｔ ｄ ｂ ｗａ ｏ ｉｉｅ ｄ ｔ ｃｅ ｙ ＲＴ— ＰＣ ｉ ｐ ｅ ｎ，ｂ ｒ ａ ｈ ｍｕ ｆｍｕ ｃ ｖ ｕ ｋ ，ｔ ｅ ｐ ａ ｉ ｓ ｉ ～ Ｒ ｎ ｓ ｌｅ ｕ ｓ ，ｔ ｙ ｓｏ ｓ ｏ ｙ ｄ ｃ ｓ ｈ ｅ ｋ ｔ ｍｅ ｗａ ｎ ７
增强 ， 有效 抵抗 病 毒 感染 。现将 番 鸭 呼 肠 孤病 毒 强
［ 金 项 目］ 国 家 自然 科 学 基 金 （０ ７ ６０ ；省 公 益 类 项 目 基 ３ ７ １２ ）
（ ０ １ ０ ５— ７ ２ １ Ｒ１２ ）和 福 建 省 星 火 计 划 项 目
（０００１） 助 。 ２１Ｓ０５资
氏囊 等 组织 。同时 采 集 喉头 和泄 殖 腔 棉 拭 样 品 ， 置
于 内含 双抗 的 ＩｍＬ ０ ０ Ｍ Ｈ ７ ２Ｐ Ｓ管 中 。样 ． １ ｐ ． Ｂ
ＭＤ ＲＶ—ＭＷ９ １ ７ ０株 番 鸭 呼 肠 孤 病 毒 ＭＤ ＲＶ
—
品保 存 于一 ２ ℃备 用 。 ｏ
１６ 样 品 Ｒ ． ＮＡ 的 制 备
毒 株和 弱毒株 在感 染 鸭 的免 疫 器 官 的分 布 、 毒 的 排
差 异结 果报告 如下 。
畜牧 兽 医杂志
第 ３ 卷 １
第 ５期
２１ ０ ２年
９
１ 材 料 和 方 法
１ １ 病 毒 株 及 实 验 鸭 ．
每 组分 别 随机选 取 ５羽 鸭 采 血 致死 ， 取脾 、 胸腺 、 法
（ ．Ｉ ｓ ｔ ｔ ｆ Ａｎｍａ ｓａ ｄ ｙ ａ ｄ Ｖ ｔｒｎ ｒ ｄ ｃｎ ，Ｆ ｊａ ａ ｅ ｆ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ Ｚ ｃｅ ｃｓ，Ｆ ｚ ｏ ｕ ｎ ３ ０ １ ， ｈ ｎ ； １ ｎ ｔ ｕ ｅ ｉ ｌＨｕ ｂ ｎ ｒ ｎ ｅｅｉ ａ ｙ Ｍｅ ｉｉｅ ｕ ｉｎＡｃ ｄ ｍｙ ｏ ｒｃ ｌｕ ａ ｉｎ ｅ ｉ ｏ Ｓ ｕ ｈ ｕＦ ｊａ ５ ０ ３ Ｃ ｉａ ｉ
２ Ｆｕ ｉ ｉ ｌＤｉｅ ｓｓＣｏ ｔｏ ｃ ｎ ｌ ｇ ｖ ｌｐｍｅ ｔＣｅ ｔｒ ． ｊａｎＡｎ ｍａ ｓａｅ ｎｒ ｌＴｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｄｅ ｅｏ ｎ ｎｅ ）
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒｃ ：Ｔｈ ｂｅ ｔ ｅ ｏ ｈｓ ａ ｔ ｌ ｓ ｔ ｎ ｅ ｔ ａｅ ｄｓｒ ｕ Байду номын сангаасｎ ａ ｄ ｅ ｃｅｉｎ ｏ ｓｏ ｙ ｄ ｃ ｅ ｖｒ ｓ ｖｒ ｌｎ ｅｏ ｊｃｉ ｆｔ ｉ ｒｉ ｅ ｗａ ｏ ｉｖ ｓｉ ｔ ｉｔｉ ｔｏ ｎ ｘ ｒｔ ｆｍｕ ｃ ｖ ｕ ｋ ｒｏ ｉｕ ｉｕｅ ｔ ｖ ｃ ｇ ｂ ｏ
７ １ ， 疫后 ２ ～ ４ｄ 免 １ｄ免 疫 器官 中的检 测逐 渐 降低 ， 直到 感 染后 ２ ， 免疫 器 官 中不 能检 测 到病 ８ｄ 在
毒Ｒ ＮＡ。表 明番鸭 接种 活疫 苗后 ７ｄ开始 向 外界 排毒 ， ｌ 而 １ｄ后停 止 向外界排 毒 。 关键 词 ： 番鸭 呼肠孤 病毒 ； 疫 器官 ； 免 强毒株 ； 弱毒株 ； 分布 排毒 ［ 中图分 类号］ ￥ ５ ． ５ ［ 献标识 码］ Ａ ［ ８ ８ ６ 文 文章 编号 ］ １ ０ —７ ４ ２ １ ）５Ｏ Ｏ —３ ０ ４ ６ Ｏ （０ ２ ０ 一 Ｏ ８０
Ｄｉｔ ｉ ｕ ｉ ｎ ａ ｃ ｅ ｉ ｎ ｉ ｍ ｍ ｕ ｅ ｏ ｇ ｎ Ｉ ｆ ｃ ｅ ｔ ｕ ｃ ｖ ｃ ｓ ｒ ｂ ｔｏ ｎｄ Ｅｘ ｒ ｔｏ ｎ Ｉ ｎ ｒ ａ ｎ ｅ ｔ ｄ ｗｉｈ Ｍ ｓ ｏ ｙ Ｄｕ ｋ
Ｒｅ ｖ ｒ ｓ Ｖｉｕ ｅ ｒ Ａｔｅ ａ ｅ ｔ ａ ｎ ｏ ｉ ｕ ｒ ｌ ｎｔｏ ｔ ｎｕ ｔ ｄ Ｓ ｒ ｉ
ＭＷ９ １ ７ ０株 由 本 室 分 离 、 定 并 保 存 ， 鸭 胚 成 鉴 番
纤 维 细 胞 测 定 ＴＣ Ｄ ０为 １ ・／ ． ； ＲＶ－ Ｉ５ Ｏ 。 Ｏ ２ｍＬ ＭＤ －
棉拭 样 品经 眼科 镊 挤 压 后 以 ２ ０ ０ ｇ离 心 ２ ０ ０ ａ ｎ 上清 双抗 处理 （ ０ Ｕ／ ｒｉ ， １０ ０Ｉ ｍＬ） 待 用 。组织 样 后 品加无 菌 Ｐ Ｓ ０ ０ ｐ ． ） 碎 研 磨 后 制 成 Ｂ （ ． １ Ｍ Ｈ７ ２ 剪 １ 悬液 ， Ｏ 冻融 ３次后 ， ０ ／ ｎ离 心 ２ ｉ， ４０ ０ｒｍｉ ０ｒ ｎ 上 ａ 清 用双 抗 （ ０ Ｕ／ １０ ０Ｉ ｍＬ） 理后 ， 处 取上 清 液 ２ ０肚 ５ Ｉ ， ＴＲ ｚ ｌ 剂提 取病 毒 ＲＮＡ。 Ｉｏ 试
（ ． 建省 农业 科学 院畜 牧兽 医研究 所 ， 建 福州 ３ ０ １ ；． １福 福 ５ ０ ３ ２ 福建 省畜 禽疫病 防治 工程技 术研 究 中心） 摘 要 ： 讨番 鸭呼 肠孤病 毒 强毒株 和弱毒 株在 番 鸭免 疫 器 官 中的分 布 和排 毒 的 差异 。结 果 显 示 探 强毒株 在 感 染后 １ｄ就 可在 脾脏 、 氏囊 、 腺检 出病毒 ＲＮＡ， 法 胸 高峰 期为 攻毒后 ７ ４ｄ 直到 感 染 ～１ ； 后 ３ ， 免 疫 器官 中不能检 测到病 毒 Ｒ ５ｄ 在 ＮＡ。接 种 强毒株 后 ７ｄ开始 向外 界排 毒 ， １ 而 ４ｄ后 停止 向 外界排 毒 。雏 鸭免 疫弱毒 疫 苗后 ３ｄ 即可在脾 、 ， 胸腺 、 氏 囊中检 出病 毒 ＲＮＡ； 法 高峰 期 为攻毒后
呼肠孤 病毒 是一 种免疫 抑制性 病毒 ， 导致 脾 、 胸腺 和 法 氏囊 淋 巴细胞 变性坏 死 ， 量 明显减 少 ， 数 网状纤 维 组织 显露 ， 给番 鸭养殖 带 来 巨大 经济 损 失 。２ ０ ０ ２年
胡奇林 等研 制发 明番 鸭 呼肠 孤 病 毒活 疫 苗 ， 控 制 是 番 鸭呼肠 孤病毒 病 非 常有 效 的措 施 之一 ， 苗 免 疫 疫
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９ ， 死率 达 ６ ～８ ％。研 究 发现番 鸭 呼肠 孤 Ｏ 病 Ｏ ０
２ ０ ０６ ［ 稿 日期 ］ ＺＯｌ — ５— 收
后番 鸭 平均 发 病率 ７ ， 均病 死 率 ３ ， 平 免疫 保 护
率 ９ ， 明该 疫 苗 安 全 、 ０ 证 有效 。林 锋 强 等 研 究 表 明免 疫 番鸭呼肠 孤病 毒活 疫苗后 番 鸭细胞 免疫 功能
根 据建 立 的 Ｒ Ｔ— Ｐ Ｒ方 法 对 样 品 进行 检 测 。 Ｃ 设 Ｄ ＲＶ—Ｃ 株 细胞 病 毒 培养 液 为 阳性 对 照 ， 常 Ａ 正
番鸭 呼肠 孤 病 毒 病 （ 称 番 鸭 “ 白点 病 ” 是 俗 肝 ） １ ９ 年 以来 发 生 于 福 建 、 江 、 东 等 地 番 鸭饲 养 ９７ 浙 广 区的一种 番鸭 新疫 病 ， 病 由番 鸭 呼肠 孤 病 毒 引起 该 以软脚 、 肝脾 等脏 器 出现 灰 白色 坏 死 点 ， 肾脏 肿 大 、 出血 、 面有 黄 白色条 斑 为特 征 。发 病 率为 ３ ～ 表 Ｏ
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［ 金 项 目］ 国 家 自然 科 学 基 金 （０ ７ ６０ ；省 公 益 类 项 目 基 ３ ７ １２ ）
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氏囊 等 组织 。同时 采 集 喉头 和泄 殖 腔 棉 拭 样 品 ， 置
于 内含 双抗 的 ＩｍＬ ０ ０ Ｍ Ｈ ７ ２Ｐ Ｓ管 中 。样 ． １ ｐ ． Ｂ
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１６ 样 品 Ｒ ． ＮＡ 的 制 备
毒 株和 弱毒株 在感 染 鸭 的免 疫 器 官 的分 布 、 毒 的 排
差 异结 果报告 如下 。
畜牧 兽 医杂志
第 ３ 卷 １
第 ５期
２１ ０ ２年
９
１ 材 料 和 方 法
１ １ 病 毒 株 及 实 验 鸭 ．
每 组分 别 随机选 取 ５羽 鸭 采 血 致死 ， 取脾 、 胸腺 、 法
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Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒｃ ：Ｔｈ ｂｅ ｔ ｅ ｏ ｈｓ ａ ｔ ｌ ｓ ｔ ｎ ｅ ｔ ａｅ ｄｓｒ ｕ Байду номын сангаасｎ ａ ｄ ｅ ｃｅｉｎ ｏ ｓｏ ｙ ｄ ｃ ｅ ｖｒ ｓ ｖｒ ｌｎ ｅｏ ｊｃｉ ｆｔ ｉ ｒｉ ｅ ｗａ ｏ ｉｖ ｓｉ ｔ ｉｔｉ ｔｏ ｎ ｘ ｒｔ ｆｍｕ ｃ ｖ ｕ ｋ ｒｏ ｉｕ ｉｕｅ ｔ ｖ ｃ ｇ ｂ ｏ
７ １ ， 疫后 ２ ～ ４ｄ 免 １ｄ免 疫 器官 中的检 测逐 渐 降低 ， 直到 感 染后 ２ ， 免疫 器 官 中不 能检 测 到病 ８ｄ 在
毒Ｒ ＮＡ。表 明番鸭 接种 活疫 苗后 ７ｄ开始 向 外界 排毒 ， ｌ 而 １ｄ后停 止 向外界排 毒 。 关键 词 ： 番鸭 呼肠孤 病毒 ； 疫 器官 ； 免 强毒株 ； 弱毒株 ； 分布 排毒 ［ 中图分 类号］ ￥ ５ ． ５ ［ 献标识 码］ Ａ ［ ８ ８ ６ 文 文章 编号 ］ １ ０ —７ ４ ２ １ ）５Ｏ Ｏ —３ ０ ４ ６ Ｏ （０ ２ ０ 一 Ｏ ８０
Ｄｉｔ ｉ ｕ ｉ ｎ ａ ｃ ｅ ｉ ｎ ｉ ｍ ｍ ｕ ｅ ｏ ｇ ｎ Ｉ ｆ ｃ ｅ ｔ ｕ ｃ ｖ ｃ ｓ ｒ ｂ ｔｏ ｎｄ Ｅｘ ｒ ｔｏ ｎ Ｉ ｎ ｒ ａ ｎ ｅ ｔ ｄ ｗｉｈ Ｍ ｓ ｏ ｙ Ｄｕ ｋ
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ＭＷ９ １ ７ ０株 由 本 室 分 离 、 定 并 保 存 ， 鸭 胚 成 鉴 番
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棉拭 样 品经 眼科 镊 挤 压 后 以 ２ ０ ０ ｇ离 心 ２ ０ ０ ａ ｎ 上清 双抗 处理 （ ０ Ｕ／ ｒｉ ， １０ ０Ｉ ｍＬ） 待 用 。组织 样 后 品加无 菌 Ｐ Ｓ ０ ０ ｐ ． ） 碎 研 磨 后 制 成 Ｂ （ ． １ Ｍ Ｈ７ ２ 剪 １ 悬液 ， Ｏ 冻融 ３次后 ， ０ ／ ｎ离 心 ２ ｉ， ４０ ０ｒｍｉ ０ｒ ｎ 上 ａ 清 用双 抗 （ ０ Ｕ／ １０ ０Ｉ ｍＬ） 理后 ， 处 取上 清 液 ２ ０肚 ５ Ｉ ， ＴＲ ｚ ｌ 剂提 取病 毒 ＲＮＡ。 Ｉｏ 试