药理实验设计

COX是前列腺素类化合物生物合成的关键酶， 在体内有两种同工酶：COX-1与COX-2，COX-1是 结构酶，正常生理情况下即存在，主要介导生理 性前列腺素类物质形成。COX-2是诱导酶，在生 理状态下基本不表达，在炎性刺激（如发热）的 刺激下大量生成，介导花生四烯酸转化产生的 PGE2和PGI2，具有很强的制痛作用。
结果分析
表5.阿司匹林、磷酸可待因以及两者的复 方对小鼠热板致痛反应的镇痛ED50
受试药品名
阿司匹林 磷酸可待因 复方混合物 生理盐水
ED50（mg/kg）
95%可倍限（mg/kg）
ED50：半数有效量。在量反应中指能引起50%最大反应强度的药 量，在质反应中指引起50%实验对象出现阳性反应时的药量。 LD50：半数惊厥量或半数致死量。 （药物的ED50越小， LD50越大说明药物越安全。） 95%可倍限：在此剂量范围内95%的实验对象出现阳性反应。
技术可行性
1.本实验操作简单，不需要过多的专业操作技术；通 过舔后足、扭体反应和痛反应时间作为效应指标，直 观、易测； 2.热板测痛仪能较精确地调定温度，且温度较恒定， 不会因为温度过高而使小鼠提前死亡，同时能较少实 验误差； 3.阿司匹林和可待因有较好的镇痛作用，效果明显， 而且有明显的浓度梯度差异，在本实验中能在较短时 间内观察到随着浓度变化而变化的镇痛有效率。
实验步骤概述
选取体重在18～22 g的小鼠，雌雄各半，随机 分成15组，每组20只动物。同上一实验方法给 药，给药后30 min腹腔注射0.6％的醋酸溶液 0.2 ml／只，记录15 min内小鼠的扭体反应， 以15 min内小鼠不出现扭体反应作为镇痛有效 指标，计数不扭体的小鼠数，计算药物镇痛的 的ED50)并进行结果分析。
• 3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1 ml的注射器 配灌胃针头。灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住 舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会 有一个刺空感，进入食道后就可以推注药液了。 • 4. 灌胃容积一般是0.1～0.2 ml/10 g，最大0.35 ml/10 g，每只小鼠的灌胃最大容积不超过0.8 ml。
2.体型小，饲养管理方便
3.生长期短，成熟早，繁殖力强 4.性情温顺，胆小怕惊，对环境变化敏感
5.种系纯，容易作比较，可以排除不同种系的干 扰因素
选择昆明小鼠（Kunming mice，KM小鼠）的原因：
来源： 1926年美国Rockfeller研究所从瑞士引入白化小鼠培育成 Swiss小鼠 。1944年3月17日由汤飞凡教授从印度Hoffkine 研究所引进Swiss小鼠，饲养在昆明中央防疫处。由于该小 鼠起初引入地是昆明，故称之为昆明小鼠。解放后中央防 疫处迁回北京天坛，更名为卫生部生物制品研究所。1950 年小鼠随之引到北京天坛（检定所现址），当时保种9对。 1953年10月移至北京东郊，1954年扩种，相继引到其他单 位，现已遍布全国各地。
阿司匹林与可待因的 联合镇痛作用研究
效果
相同镇痛效果
背景
美国药典收载有复方阿司 匹林胶囊，由阿司匹林、 可待因和咖啡因组成，其 中的阿司匹林和磷酸可待 因的比例为25：1，临床 用于各种疼痛和发烧，疗 效较好。
降低两药的使 用剂量 减轻了两药的 副作用
联 系
郑 惠 玲
、
美国药典
是美国政府对药品质量标准和检定方法作出的技术规定， 也是药品生产、使用、管理、检验的法律依据。NF收 载了美国药典(USP)尚未收入的新药和新制剂。 美国药典正文药品名录分别按法定药名字母顺序排列， 各药品条目大都列有药名、结构式、分子式、CAS登记 号、成分和含量说明、包装和贮藏规格、鉴定方法、干 燥失重、炽灼残渣、检测方法等常规项目，正文之后还 有对各种药品进行测试的方法和要求的通用章节及对各 种药物的一般要求的通则。
我们根据国外上市品种的处方比例设计了复方阿司 匹林片，并通过几种动物模型对阿司匹林与磷酸可 待困的镇痛协同作用进行了研究。
阿司匹林 可待因
7
阿司匹林的镇痛机制
唐 广 博
• 阿司匹林主要是通过抑制前列腺素及其他能使痛 觉对机械性或化学性刺激敏感的物质(如缓激肽、 组胺)的合成，属于外周性镇痛药。PG是一族含有 一个五碳环和两条侧链的二十碳不饱和脂肪酸， 多种细胞都可合成。 细胞中的花生四烯酸以磷脂 的形式存在于细胞膜中。多种刺激因素可激活磷 脂酶A，使花生四烯酸从膜磷脂中释放出来。 游 离的花生四烯酸经细胞微粒体内环氧酶（COX)的 催化生成各种PG，其中PGE2主要参与疼痛的调节。
间接测量
是机体对外力刺激最大的承受能力，痛阈值越高，承受疼 痛的能力越强，反之越弱。
痛阈值提高是身体的正常调节机制，是合理的、有益的 调节。 痛阈值的提高，并不表示刺激也要相应增强。如果刺激 量超出了正常范围，但尚未达到痛阈值，很有可能会在 感觉不痛的情况下受伤。
不可盲目用药
热板致痛法
将小鼠置于一定温度的热 板上，热刺激小鼠足部产 生痛反应，即舔足反应。 以小鼠出现舔足的时间作 用为痛反应指标，判断药 物镇痛作用好坏。
• 脊髓水平上的网状结构、丘脑、大脑皮层等均参 与疼痛的调节机制，其通路复杂，也需要多种神 经递质传递信号，在这些部位，阿片受体极为丰 富，是可待因参与调节疼痛的重要基础。
热板致痛原理
于 帆
痛反应阈值：
又称痛阈值，是疼痛刺激引起应激组织反应的最低值，为 临界值的意思。也就是刺激生物体系时，虽然对小刺激不 反应，但当超过某限度时就会激烈反应的界限值。
可待因的镇痛机制
• 在体内存在有“抗痛系统”，它由脑啡肽神经元、 脑啡肽及阿片受体共同组成。去极化或刺激脑啡 肽神经通路可引起脑啡肽释放，并依赖于钙离子。 在正常情况下约有20%～30%的阿片受体与脑啡肽 结合，起着疼痛感觉的调控作用，维持正常痛阈， 发挥生理性止痛机能，可待因的作用是激动阿片 受体，激活了脑内“抗痛系统”，阻断痛觉传导， 产生中枢性镇痛作用。
从以上结果可知，阿司匹林与磷酸可待 因同用可降低两药对小鼠扭体反应抑制 的ED50。但对这一模型的协同作用不如其 他模型明显。
主要特性：
KM小鼠是我国生产量、使用量最大的远交群小鼠。基 因库大，基因杂合率高，我国学者已从KM小鼠远交群 中先后培育出不少近交系小鼠。经50多年的选育，现在 KM小鼠肿瘤自发率极低。不同地饲养的昆明小鼠封闭 群的生长发育与繁殖性能存在一定差异，但其共同特点 是抗病力和适应力很强，繁殖率和成活率高。它在我国 生物医学动物实验中约为小鼠总用量的70%。
扭体反应
将某些化学物质，如强 酸、强碱、钾离子、缓 激肽等，涂布于动物的 的某些敏感部位或腹腔 注射。 腹腔注射损伤物质引起 受试动物腹痛，动物表 现出“扭体反应”（即 腹部内凹、躯干与后肢 伸张、臀部高起）
实验步骤概述
选取体重在18～22 g的小鼠，雌雄各半，随机 分成15组，每组20只动物。同上一实验方法给 药，给药后30 min腹腔注射0.6％的醋酸溶液 0.2 ml／只，记录15 min内小鼠的扭体反应， 以15 min内小鼠不出现扭体反应作为镇痛有效 指标，计数不扭体的小鼠数，计算药物镇痛的 的ED50)并进行结果分析。
表3.磷酸可待因对小鼠热板致痛反应的镇痛作用（n=20）
磷酸可待因 （mg/kg） 镇痛有效率（%） 痛反应时间超过 60S的动物数（只）
结果分析
表4.复方混合物对小鼠热板致痛反应的镇痛作用 （n=20） 镇痛有效率（%） 痛反应时间超过 复方混合物（阿司 匹林：磷酸可待因 60S的动物数（只）
=25：1）（mg/kg）
选择雌性小鼠以避免雄性小鼠阴囊与Woolfe
热板接触而影响实验结果
注意 事项
为尽量减少个体差异，应事先筛选痛 阈小于30秒的小鼠作为实验鼠 实验室室温应在15℃左右，Woolfe
热板温度55℃左右；痛阈超过60秒
的小鼠应立即取出以免烫伤
各组给药后观察痛阈的时间要一致
吴 紫 薇
可行性分析
罗 欣 然
经济可行性
1.本实验用的昆明种小鼠和Wistar大鼠容易购得、 繁殖能力强，个体差异相对较小，适合用于本实 验； 2.阿司匹林和可待因是常用镇痛药，价格低廉， 容易获得，可购置充足药品用于实验；
讨论&小结
闫 睿
热板致痛模型主要用于筛选中枢性镇痛 药，对于解热镇痛药的筛选可使用化学性 致痛模型----扭体反应模型。
3）于给药后1 h分别将各组小鼠置于55℃±0．5℃ 的热板测痛仪的金属板上，以舔后足作为痛反应指 标，记录小鼠投入热板至舔后足的时间作为痛反庙 闺值，以痛反应阈值超过60 S作为有效指标，计数 痛反应时间超过60 s的动物数，
小鼠捉拿
从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起，放在笼盖(或表面 粗糙的物体)上，轻轻向后拉鼠尾，在小鼠向前挣脱 时，用左手(熟练者也可用同一只手)拇指和食指抓 住两耳和颈部皮肤，无名指，小指和手掌心夹住背 部皮肤和尾部，并调整好动物在手中的姿势。
结果分析
张 敏 洁
结果分析
表1.生理盐水灌胃小鼠热板致痛反应（n=20）
生理盐水（mg/kg） 镇痛有效率（%） 痛反应时间超过 60S的动物数（只）
结果分析
表2.阿司匹林对小鼠热板致痛反应的镇痛作用（n=20）
阿司匹林（mg/kg） 镇痛有效率（%） 痛反应时间超过 60S的动物数（只）
结果分析
控温精确 计时精确 发热均匀
思路
选取生长状况相近且适于实验的小鼠并分组 测定给药前各组动物的痛反应阈值 分别给予不同剂量的阿司匹林、磷酸可待因和复方混合物 热板测痛仪测其用药后痛阈值（指标）
记录并分析
实验动物、器材和药品
肖 健 林
实验动物：
雌性昆明小鼠 （18g—22g)
一般实验选择小鼠的原因： 1.哺乳动物，解剖和生理结构与人较相似
• 小鼠灌胃 • 1. 准备灌胃针头。一般可以从市场上面买 到，实在没有的话，可以用12号的针头， 剪去针尖，用砂纸将头端磨平，也可以用。 但是买的灌胃针头的头端用锡或者适宜的 方法处理了针头的锐口，自己用砂纸不可 能将所有的锐口都磨掉，用这样的针头灌 胃，损失小鼠食道的可能性比较大。
• 2. 抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线。 抓小鼠的动作很简单，左手的小指和无名 指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小 鼠的颈部即可。因为小鼠始终在活动中， 若一次抓的感觉不是很顺手，要放开重新 抓，不要逞强进行下一步操作。
实验步骤与分组
宋 毅 涵
实验步骤与分组
1）先测定给药前各组动物的痛反应阈值，选取体 重在18g一22 g，痛阈值在5～30 s的雌性小鼠，随 机分成15组,并编号1—20，每组20只小鼠。实验室 温度控制在20℃～25℃。
2）1-5组、5-10组、11-15组、15-20组分别注射 0.10mL 、0.20mL 、0.30mL、0.40mL 、0.50mL的阿司 匹林溶液（50mg/mL）、 磷酸可待因溶液（2mg/mL ） 、 混合溶液（25：1）和生理盐水
选择雌性小鼠的一般原因
1.雌鼠性情温顺，公鼠易打斗 2.雌鼠免疫反应强
本实验选择雌性小鼠的原因是？
实验器材
YLS-6B智能热板仪、1mL注射 器、12号灌胃针头
三个关键 1.表面的导热性和光洁度 2.温度控制 3.计时的准确程度
药品
配制7ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱmg/mL阿司匹林溶液、3mg/mL磷酸可 待因溶液，两者按1：1 体积比配制混合溶液 （25:1）、生理盐水
在对应 对比 药物剂量 表1. 表2. 比条件下， 比较镇痛 &表3. 有效率。
若复方混合物的镇痛有效率大于阿司匹
林、磷酸可待因的镇痛有效率，则两种
药物之间具有协同镇痛作用。 若复方混合物的镇痛有效率小于阿司 匹林、磷酸可待因的镇痛有效率，则 两种药物之间具有拮抗镇痛作用。
若复方混合物的镇痛有效率等于阿司匹林、 磷酸可待因的镇痛有效率，则两种药物之 间无相互作用。
药典
制定
由国家药品监督管理局主 持编纂、颁布实施，国际 ★一个国家记载药品标准、 规格的法典，一般由国家 性药典则由公认的国际组 药品监督管理局主持编纂、 织或有关国家协商订。 颁布实施，国际性药典则 由公认的国际组织或有关 国家协商编订。
特点
药典是从本草学、药物 学以及处方集的编著演 化而来。药典的重要特 点是它的法定性和体例 的规范化。