百草枯中毒血、尿标本分析检测方法的研究进展

０．０１
采用离子交换同相萃取法提取水溶性正相高效液相色谱法．
５ｔｕｎ柱
ｐＨ ３．３
９９６ＰＤＡ检测器．波长２５９ｎｍ，柱温３０℃．流速０．１ｍｌ／ｍｉｎ。高氯酸：甲
醇ｆ６：９４ｖ）混合液对检材前处理，
６
血液ＮｏｖａｐａｋＣｌ８
禽ＳＯＳ的磷酸缓冲
Ｏ．１
含３．０Ｍ含辛烷磺酸钠的乙腈溶液：二乙胺一磷酸缓冲液（ｐＨ３１
标本中百草枯的定性和定量分析。其叫收率为９９１３％＋７．６％， 检测限为２０ｎｇ／ｍｌ。Ｄｒａｆｆａｎ ＧＨ等㈣用硼氢化钠与百草枯反应
行优化，明显提高了自由基的稳定性。
生成二烯六氢化衍生物，用有机溶剂提取后，以１，１，＿二乙
２．２气相色谱法
基－－４，４’一联吡啶二氯化物作内标物，用ＦＩＤ检测器血、尿中
万方数据
第２７卷第６期 ２００９年１２月
实 验 与检 验 医 学
ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
．６５１．
Ｖ０１．２７ Ｎｏ，６ Ｄｅｃ．２００９
２．５．２液一质联用法 王朝虹等［２７１以ＡｔｈａｎｔｉｓＨＬｌＣ ｓｉｌｉｃａ为色谱柱，以乙腈：
２００ｒｅｔｏｏｌ／１甲酸铵（甲酸调ｐＨ ３．３）＝（４０：６０ｖ，ｖ）为流动相，在流 速为０．２ｍｌ／ｍｉｎ，柱温３０。Ｃ条件下．利用ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法测定肝 脏中百草枯。检测限为１０ｎｇ／ｍｌ。且此方法采用水溶性正相液 相色谱柱。既克服了普通正相液相色谱法应用的高毒性挥发 性有机溶剂的缺点。叉避免了使用离子对反相液相色谱柱带 来的诸多不使。
２．６其它方法 血、尿标本中百草枯的检测方法还有免疫法，核磁共振
法、薄层层析法等。这些方法操作简便、快速，但要求检材量 大、纯度高，浪费较严重．在临床实际检测中不宜推广应用。
３展望 纵观国内外百草枯中毒分析检测方法现状．再依据百草
枯独有特性。离子对固相萃取方法研究仍为今后百草枯提取
方法的主流方向。另外，随着分析方法的优化改进．百草枯的 前处理方法将更加简化。固相萃取与在线预富集技术的结合 也将进一步降低百革桔的检测限。反相离子对高效液相色 谱、液一质联用、毛细管电泳、毛细管电泳一质谱联用、芯片毛 细管电泳等分析方法在今后均将得到大量研究。尤其芯片毛 细管电泳在成本、效率和便携性等方面更具优势．在百草枯 分析乃至整个农药分析方面都有很大的潜力。
相等的不同而异。现将国内外研究应用于血、尿标本中百草
供气相色谱Ｎ、Ｐ检测分析。以乙基百草枯为内标物，进行血
枯分析检测的液相色谱法归结为表２【，，１１－１３，１９－２１］。
衰２不同色谱柱、不同流动相中不同百草枯液相色谱法
方法 标本
色谱柱
流动相试剂
篆躲
实验条件．
１
血液 Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ一２
含ＳＯＳ的磷酸缓冲
Ｉｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液酸化，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１５分钟后，取上清液 加ＮａＯＨ、ＮＩ－ｈＣＬ－ＮＨ３（ｐＨ＝１０．３）。用连二亚硫酸钠显色，波长 ３９５ｎｍ处比色，回收率达１０１．４％＋３．８２％。孙世义等【ｌａ用固体 碳酸钠和碳酸氢钠调尿液标本ｐＨ大于９后，慢速定量滤纸 过滤，滤液加连二亚硫酸钠显色，波长３９６ｎｍ处比色．回收率 达９６．５％一１０３．５％．最低检出限为０．１５ｎｇ／ｍｌ。赵燕燕等１１日将血 样经２０％三氯乙酸去蛋白处理后采用５０１ｘｌ微量比色池．波 长２５７ｎｍ处比色．其回收率为９０．Ｏ％～１０２．４％，最低检出限为 ０．Ｏｌｎｇ。上述这些方法设备简单，仪器通用，灵敏度高。精密度 和加标回收率均能满足实验要求。但操作条件要求苛刻．不 易控制．还原产生的蓝色自由基稳定性差。结果的稳定性大
１．２固相萃取法同相萃取法目前是百草枯净化提取最常 用的方法，它将百草枯从非常稀释的溶液中富集起来．从而 有利于分析。现将国内外对于血、尿标本中百草枯的固相萃 取法归结为表ｌ弘ｍ。
百革枯固相萃取法操作简便、快速。萃取回收率高．重现 性好，适合提取微量样品，能满足基层实际检验的需要。不足 之处是常采用酸液或碱液作为洗脱液．提取液难以浓缩且易 损害分析柱．
１．３其它方法渗透一超滤一热凝固法操作简单．但提取净 化时间长，提取物难浓缩且不易纯化。水浸法提取较容易．但
表１血、尿标本不同萃取柱中百草枯的周相摹取方法
提取液较难浓缩，操作较费时，百草枯含量少时易漏检。柱切 换法（ｃｏｌｕｍｎ—ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ）聚富集、净化、分离于一体。克服了以 往样品前处理复杂、费时费力的缺点，但设备昂贵．较难推广 应用。
为还原剂的水溶液中还原法较易推广应用。由于百草枯极性
２．３液相色谱法
强，通常情况下较难气化裂解．所以有关气相色谱检测百草
液相色谱法尤其是高效液相色谱法是最常用的百草枯
枯的报道较少。张婷等１１０Ｊ将血中百草枯用国产阳离子交换树
检测方法。检测效果和具体分析方法因选择的色谱柱、流动
脂同相提取后．在碱性提取条件下用硼氢化钠还原为三级胺
的分析检测结果．最低检测限可达ｌｎｇ／ｍｌ。 ２．４毛细管电泳法 对于百草枯毛细管电泳检测方法的研究国外起步较早．
国内却比较滞后。国外，Ｖｉｎｎｅｒ Ｅ等［２２１用三氯甲烷和硫酸铵将 血清样本去蛋白处理后ｆ尿液标本直接离心后取上清进样）。 利用熔融石英毛细管载５０ｒａｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液（ｐＨ ２．５）为 载体进行毛细管电泳分析．紫外波长２００ｈｍ处检测。其血、尿 中百草枯回收率分别为５２％、７１．４％，线性范围为４ｍｇ／Ｌ，检 测限均达５ｐｇ／ｍ１．国内，赵燕燕㈤等用推扫富集胶柬电动毛细 管色谱法检测了血清中的百草枯。实验将血清样品用ｌＯ％＝三 氯乙酸去蛋白处理后．以５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐一８０ｍｍｏＩ／ＩＳＤＳ （ｐＨ＝２．５）为缓冲液，５５ＫＰａ压力进样，利用未涂层的溶硅弹性 石英毛细管在电压为２２ＫＶ下进行电泳分析，ＤＡＤ波长 ２６０ｎｍ处检测。检测限为０．００２ｍｇ／Ｌ，ＲＳＤ为２．９５％。同时将 该方法与百草桔的紫外分光光度法作了多方面比较。
百草枯是离子型有机物质．挥发性差，必须转化为具有
百草枯的检测限为０．１ｍｇ／Ｌ，用ＮＰＤ检测器检测限为
挥发性的物质后才能进行气相色谱分析。已报道的转化方法０．０２５ｍｇ／Ｌ。上述方法均需要对样品进行特殊的衍生或裂解处
有热解法．催化氢化法、水溶液中还原法。其中以硼酸氢化钠
理后才能进行检测，操作比较复杂。
（ＳＯＳ，回收率可达９０％以上唧，但ＳＤＳ比ＳＯＳ更便宜易得。另 外选用一般试剂：氯仿＋乙醇＋硫酸铵＋苯酚回收率也能达 ７６．６％嘲，均能满足实际检测的需求。但液一液萃取法使用了大 量有毒试剂，对环境和操作人员的身体健康造成威胁．操作 时引人外源性杂质较多，易产生乳化现象，萃取重现性较差． 操作也较费时费力不能及时进行检测．已经被其它提取方法 所取代。
参考文献 【ｌ】１ Ｓｔｅｗａｒｔ町，Ｌｅｖｉｔｔ Ｔ＇Ｊａｒｖｉｅ ＤＲ．Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐａｘａｑｕａｔ
第２７卷第６期 ２００９年１２月
实 验 与 检验 医学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＩＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
·６４９．
Ｖ０１．２７ Ｎｏ．６ Ｄｅｅ．２００９
·综述·
百草枯中毒血、尿标本分析检测方法的研究进展
陈辉凤，宋乃国综述，田喜凤审校
ｆ华北煤炭医学院生物科学系，河北唐山０６３０００）
２分析方法 ２．１紫外分光光度法
百草枯有效成分（１，１＂－二甲基－４，４’一联吡啶阳离子盐１ 的测定早期基本采用分光光度法．如测定百草枯最经典最权 威的方法一美国公职分析化学协会（ＡＯＣＯ）的“公定分析方 法”９６９．０９法。该方法均采用碱性连二亚硫酸钠将百草枯还 原成蓝色自由基后．用分光光度法测定。石杰等１１ｑ将尿液用
中图分类号Ｒ４４６．１１，Ｒ４４６．１２
文献标识码Ｃ 文章编号１６７４—１１２９（２００９）０６—０６４９—０３
［亟叵Ｑ墅曼蚴』墅！匝ｊ！堑：巫匦匿亟匝］
百草枯（ｐａｒａｑｕａｔ。ＰＱ）又名对草快、杀草快．是目前全世界 使用最广泛的除草剂之一。虽然百草枯为中等毒性农药．但 对人畜有很强毒性。由于目前尚无特效解毒剂．中毒死亡率 较高。口服吸收率为５％。１５％．其血浆浓度与死亡率密切相 关。对中毒患者血中百草枯浓度检测及监测对临床救治有很 大作用。另外，由于百草枯吸收后不经代谢．在肾小管中不吸 收．多以原形从肾脏排出．故尿也作为监测中毒患者体内百 草枯浓度变化的常用检材．同时取样难度不大。本文主要对 近年来国内外对于血液和尿液中百草枯分析方法的研究作 了综述．以便临床检验工作者选择更有效的检测方法。
液乙腈
ｆｌｏ：９０ｖ）的混合液为洗涤液．以二乙基ｆｌ－草枯为内标物。
７
尿觑 Ｓｈｉｕｒｐａｃｋ ＣＬＣ—ＯＤＳ 含庚烷磺酸钠的磷酸
Ｏ．００ｌ
采用离子对ＳＰＥ一高效液相色谱法，ＤＡＤ检测器。波长２５８ｎｍ。柱
缓冲液乙腈
温３５℃．流速ｌｍｌ／ｎｆｉｎ。二己胺调磷酸缓冲液ｐＨ４．０。
纵观上述方法发现．通常情况下百草枯液相色谱法选用 离子对试剂的流动相、富集特性强的色谱柱。更能获得显著
万方数据
·６５０·
第２７卷第６期 ２００９年１２月
实 验 与 检验医 学
ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｖ０１．２７ Ｎｏ．６ ＤｅＣ．２００９
受影响．针对此不足，蔡春平等ｌｉＴ／在（ＡＯＣＯ测定农药百草枯 含量方法的不足和改进》一报道中对操作方法和还原条件进
０．１
采用在线样品预处理柱切换高效液相色谱法．磷酸缓冲液调
液乙腈
ｐＨ２．０，ＵＶ３０００检测，波长２８０ｎｍ，桂温２５℃，流速为ｏ．８ｍｌ／ｍｉｎ。
２
血液ＶａｒｉａｎＯＤＳ Ｃ１８
含ＳＯＳ磷酸缓冲液
Ｏ．２
采川在线样品预处理柱切换反相离子对高效液相色谱法．用
甲醇
ＴＥＡ调磷酸缓冲液ｐＨ２．８，ＵＶ—ＤＡＤ检测，波长２５８ｎｍ，柱温为
４
血液Ｓｙｍｍｅｔｒｙｓ ｈｉｅｌｄ ＴＭ 含２５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｓｏｓ ０．００５
上清渡过柱后．用３０％甲醇水洗杂质．用Ｉ．０ｍｏｌ／ｌ氯化铵５０％甲
ＲＰｌ８柱
４５％的乙腈
醇液洗脱待测物．采用反相离子对高效液相色谱法，９６９ＰＤＡ检测
器，波长２５９ｎｍ，柠温２５℃．流速ｌｍｏｌ／ｍｉｎ。
５
血液 Ａｔｌａｎｔｉｓ ＨＵＣ Ｓｉｌｉｃａ 甲酸铵：乙腈（６０：４０ｖ１
目前国内外报道的质谱联用技术主要有气一质联用、液一质联 用、毛细管一质谱联用等。这些方法检测结果准确可靠、重复 性好，但仪器设备较昂贵，技术含量较高。难以推广应用。
２．５．１气一质联用 麦剑平等［２５１利用Ａｇｉｌｅｎｔ ＧＣ／ＭＳＤ联用仪．ＨＰ一５ＭＳ色谱
柱，以氨气为载气，２３０℃以上的温度中．Ｉｍｌ／ｍｉｎ恒流进样方 式，对血样中百草枯进行检测．该方法获得样本后２０ｍｉｎ内 可以定性出结果．但其回收率在８０％左右．检测限为１０ｎｇ。 Ｄｒａｆｆａｎ ＧＨ等１１８Ｊ用ＧＣ—ＭＳ检测血样中的百草枯，以二乙基百 草枯为内标物．选择离子监测法对百草枯进行定量，提高了 选择性积检测灵敏度。Ｂａｇｃｈｉ Ｄ等闲．用ｅＣ—ＭＳＤ法检测尿 液中百草枯诱导四个脂质过氧化代谢产物。间接反应出尿液 中百草枯含量。
另一篇报道中Ｇａｌａｃｅｒａｎ等１２４１对缓冲液的ｐＨ值、温度、 应用电压缓冲液中阳离子种类和浓度及进样模式等因素对
百草枯及其他除草剂分离的影响做了研究。毛细管电泳具有 分离效率高、分离速率快、消耗成本低等特点，且样品的前处 理方法简易、避免了分析柱的损害等问胚，是气相色谱和液 相色谱的补充．
２．５质谱联用法 质谱联用是近几年发展起来的一类新型分离检测技术。
３０℃．流速为０．８ｍｌ／ｍｉ。
３
血浆 Ｓｉｍｏｃｈｒｏｍ ＧＤＳ—ＢＰ 含ＳＯＳ的磷酸缓冲０．０ｌ
无需进化提取．血浆沉淀蛋白处理后高效液相色谱法．用二乙胺
分析Ｃ８预柱
Fra Baidu bibliotek液已腈
调ｐＨ为３．０，内标物为Ｅｔｈｙｌｖ ＶｉｏＩｏｇｅｎ Ｄｉｂｒｏｍｉｄｅ，ＳＰＤ一２０Ａ检测
器，波长２５８ｎｎｌ．柱温２８℃．流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ。
１提取方法百草枯的的提取方法有液一液萃取法、固相萃 取法、渗透一超滤一热凝固法、水浸法及柱切换法等很多种．目 前主要常用的是液一液萃取法和固相萃取法。
１．１液一液萃取法液一液萃取是最早用于提取检材中百草 枯的方法。通常情况下．依据所选用的萃取试剂不同．萃取效 果也不相同。对于血、血浆和尿液一般选用离子对试剂：十二 烷基硫酸钠ｆＳＤＳ。回收率均在８０％以上ｌ，１或辛烷磺酸钠