糖尿病大鼠造模过程

1 材料与方法
1. 1 实验动物
SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。

1. 2 试剂与高脂饲料配方
STZ购自Sigama公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。

高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。

1. 3 动物分组与饲养
SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。

模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。

STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。

正常组只注射等量的缓冲液。

72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。

一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。

糖尿病大鼠成模后给予要付治疗，分别是药物A+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）10只；药物B+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物C+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物A+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物B+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物C+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；正常对照组（5只），多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃，七叶皂甙钠组给予腹腔注射。

除
正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。

1. 4 标本采集
4周后，除取材组外，其他大鼠进行尾静脉取血，约300微升，30min 后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

并且对糖尿病模型组3只，正常对照组1只进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），动物称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。

8周后正常对照组2只，糖尿病模型组3只进行尾静脉取血，约300微升，30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

其余大鼠进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。

其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。

12周后对正常对照组2只和糖尿病模型组3只进行取材，称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。

其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理
盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。

实验结束时将各组动物处死。