组织培养的条件

组织培养的条件

1实验室

在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。

1.实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。

2.实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室。化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.

洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：水池、操作台、压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。

无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。无菌室的建造要求严格，接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求接种室干爽安静，清洁明亮，除出入口和通气口外，应当密闭，配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动，用紫外光灯灭菌后，能较长时间保持无菌状态。为避免消毒药品的腐蚀，地板、内墙和作业台应采用耐水、耐药的材料，如经过油漆，铺上瓷砖或玻璃，或采用磨光水泥等，通气口要安装排风扇，定期开机更换空气。无菌室设内外二间，外间小些，为缓冲室，供工作人员换衣、帽、鞋、口罩之用。备有衣帽钩和拖鞋架。内间较大，接种用，备有工作台，放物台，小型离心机，真空抽气机等。内外间分别安装紫外灯，操作前至少开灯20分钟。室内定期用甲醛和高锰酸钾熏蒸。

主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。

培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。室内要求内壁保温和油漆，具有磨光水泥的或油漆过的地板，顶高以2.6m为宜，易于控制温湿度，窗户上要装双层密封玻璃窗。有窗户虽对保温保湿不利，但有自然光射入，对苗的生长和无菌有好处。室内要有足够的电源。室内要保持清洁，定期用20%新洁尔灭消毒，防止杂菌生长。

由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。培养架可分4－5层，上面安装30－40Ｗ日光灯照明，每天照明10－16小时左右，用自动定时器控制。温度最好保持在15－25℃左右。此外还可根据需要安置液体培养所需的摇床、转床等。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。

设备主要应有：空调机，供升降温用；加热器，供加热用；温度控制器，供恒温用；定时器，供控制光照时间用；培养架，供放置培养瓶用，培养架的框子用木制或三角铁制皆可，应漆成白色或银灰色，每层隔板可用玻璃或木料制成，但光照效果要好；日光灯供光照之用。

2常用药品组织培养所需药品主要用于培养基的配制，也有部分用于消毒，主要有以下几类： （一）消毒药品

主要有次氯酸钠、次氯酸钙、双氧水、漂白精片、溴水、硝酸银等。

（二）无机盐类(inorganic element)包括大量元素和微量元素两类，主要的盐类有KNO3、MgSO4·7H2O、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Fe2（SO4）3、Na2HPO4、CuSO4、NaNO3、Na2SO4、ZnSO4、MnSO4·4H2O、MnCl2·2H20、KI、H3BO3等，无机盐是供外植体吸收的基本营养成分，各有不同作用，如N、P影响蛋白质的合成，Ca、K、S、Mg影响酶活性等。

（三）有机化合物(organic compound)

主要有蔗糖、维生素类(vitamin)肌醇（myo—inosltol）、氨基酸（almino acide）等。其中蔗糖是不可缺少的碳源，也是渗透压调节物质。维生素的主要作用是促进细胞分裂和诱导器官分化。氨基酸是蛋白质组成成分，也是有机氮源。

（四）植物生长调节剂（hormone）

用于组织培养的主要有生长素、细胞分裂素及赤霉素三大类：

⒈生长素类(auxin) 主要有吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、2，4－D和吲哚丁酸（IBA）。2，4－D有利愈伤组织生长，NAA、IAA、IBA有利于器官分化。 ⒉细胞分裂素类（cytokinin）主要有激动素（KT）、6－苄基腺嘌呤（BA）、玉米素（ZT）等。其作用是促进细胞分裂与分化，其中KT能明显促进芽的分化而抑制根的形成。

⒊赤霉素（gibberellic acid）以GA3运用最广泛，有促进不定芽和幼株伸长的作用。

（五）有机附加物

包括人工合成和天然的有机物，常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相应的植物组织浸出液。对细胞和组织的增殖和分化有一定促进作用。此外琼脂在组培中作为凝固剂，是外植体的支持体，常用浓度为0.5－1％。（六）水

培养基用水原则上使用蒸馏水，去离子水等，尤其在对化学成分要求较精确的试验中。但在组培苗的批量生产中，可选用自来水配制，以降低成本。