【临床微生物实验】_非发酵菌概述、假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌
【临床微生物实验】_非发酵菌概述、假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌
表面生长
恶臭假单
胞菌在血 平板和中 国蓝平板 上菌落
脂溶性色素
水溶性黄绿色色素
Pseudomonas生化特征
氧化酶阳性
触酶阳性
Pseudomonas生化特征
氧化分解葡萄糖
VP、甲基红、吲哚均（－ ）
有单鞭毛 有菌毛 无芽孢 无荚膜
痰涂片中被吞噬的铜 绿假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿 假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿假单胞菌
Pseudomonas aureginosa 形态和培养特征
• 专性需氧（部分菌株可兼性厌氧）
• 营养要求不高
• 最适生长温度25~30℃，42℃生长， 4℃不生长
Pseudomonas aeruginosa
MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-OprJ ④整合子携带耐药基因盒：1类，3类（多重耐药） ⑤生物膜形成阻碍抗菌药物进入
➢ 临床治疗假单胞菌感染常用抗菌药物 主要有：
β内酰胺类 氨基糖苷类 喹诺酮类
铜绿假单胞菌固有耐药种类 氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、厄
他培南、四环素/替加环素、复方磺胺甲 恶唑、氯霉素等
KEY POINTS
➢ The term nonfermenting bacilli (NFB) describes a large group of aerobic,non-fermentative, nonsporeing, grame-negative bacilli belonging to taxonomically diverse genera, species that all share the common phenotypic features.
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第二十章_不发酵菌及检验
第二十章不发酵菌及检验（不发酵G-杆菌）本章内容概述假单胞菌属（一）铜绿假单胞菌（二）嗜麦芽窄食单胞菌不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属军团菌属不发酵菌概述不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌；大部分为专性需氧菌。
包括13个属。
大多为条件致病菌。
除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
氧化-发酵（O-F）试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
假单胞菌属铜绿假单胞菌——生物学特性形态与结构形态：细长杆菌。
染色：G-。
特殊结构：无芽胞，无荚膜。
有1～3根鞭毛，运动活泼。
培养特性营养要求：不高。
气体环境：专性需氧。
温度环境：最适35℃，4℃不生长。
菌落特点：普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。
血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽；周围有透明溶血环。
选择培养基：（麦康凯琼脂培养基）微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。
（SS琼脂培养基）类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。
产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性；②绿色荧光素。
铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定标本采集：根据病情采集相应的临床标本。
形态学检查分离培养：依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果。
生化试验（鉴定）耐药性具有多重耐药。
初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。
亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。
铜绿假单胞菌——致病性及临床意义俗称绿脓杆菌。
是医院感染的主要病原体之一。
引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。
假单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌。
端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。
非发酵菌(wmy)
2.生物学特性
❖ 血平板，麦康凯平板上五种菌落 ❖ 1.典型型-灰绿色，大小不一，扁平湿润，金属
光泽 ❖ 2.大肠菌样型-灰白色半透明 ❖ 3.黏液型-光滑突起，成粘液状 ❖ 4.侏儒型-细小，无光泽，半透明 ❖ 5.粗糙型-中央凸起，边缘扁平，表面粗糙
铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)
共性 :G-杆菌，无芽孢，有荚膜，多数菌 有鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广， 最适35度 ，普通培养基上可以生长，可 产各种水溶性色素。抵抗力强，多种抗生 素耐药
微生物检验
2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶 氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。
微生物检验
3.药敏试验 A组：头孢他定、庆大霉素、美洛西林、替卡西林、哌拉西林 B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星 C组：头孢噻肟、氯霉素 U组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星、SMZ
临床意义
致病物质： 1.粘附素-菌毛 2.多糖荚膜 3.内毒素，外毒素 4.绿脓毒素-催化过氧化氢和超氧化物 5.弹性蛋白酶 6.磷脂酶C
生物学性状
❖形态与染色：G- 杆
菌，多形性，有鞭毛、 菌毛、荚膜，无芽孢, 产荧光素和绿脓素
2.生物学特性
❖ 培养特性：专性需氧，
4℃不生长42 ℃生长， 在血平板上经35—37℃， 18—24h培养可表现为： 菌落大而扁平、湿润、 边缘不齐,有金属光泽, 有生姜样芳香气味,菌落 周围有宽大的兰绿色透 明溶血环。
不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱 杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、 金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌 属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。
分群依据
❖ 氧化酶试验 ❖ 葡萄糖氧化发酵试验 ❖ 动力试验
非发酵革兰阴性杆菌的检验 微生物实验
1、贝多芬的童年尽管如是悲惨，他对这个时代和消磨这时代的地方，永远保持着一种温柔而凄凉的回忆。
2、社会永远处在这两条路的中间：真理或爱。
它通常的解决，往往是把真理和爱两者一齐牺牲了。
3、脸上的肌肉突然隆起，血管膨胀、犷野的眼睛变得倍加可怕；嘴巴发抖；仿佛一个魔术家召来了妖魔而反被妖魔制服一般。
4、我的信仰使人厌恶或阻碍别人，这是可能的。
但要更改它却不在我能力范围以内，好似我不能改变我的**一样。
我除了我所相信的以外不能相信别的，尤其在这个我将回到神那边去的时候。
5、也许是他作品中最深刻的，仿佛用血泪写成的，结果是一文都不曾拿到。
把贝多芬煎熬完的是，日常的窘况，无穷尽的讼案：或是要人家履行津贴的诺言，或是为争取侄儿的监护权，因为他的兄弟卡尔于一八一五年死于肺病，遗下一个儿子。
6、我称为英雄的，并非以思想强力称雄的人，而只是靠心灵而伟大的人。
7、没有伟大的人格，就没有伟大的人，甚至也没有伟大的艺术家，伟大的行动者；所有的只是些空虚的偶像，匹配下贱的群众的；时间会把他们一齐摧毁。
成败又有什么相干？主要是成为伟大，而非显得伟大。
8、宽大的鼻子又短又方，竟是狮子的相貌。
一张细腻的嘴巴，但下唇常有比上唇前突的倾向。
牙床结实得厉害，似乎可以磕破核桃。
左边的下巴有一个深陷的小窝，使他的脸显得古怪地不对称。
9、艺术家对于他的作品的爱是艺术的心灵。
没有爱便没有艺术作品。
10、在这些**的痛苦之上，再加另外一种痛苦。
韦格勒说他从没见过贝多芬不抱着一股剧烈的热情。
这些爱情似乎永远是非常纯洁的。
11、他甚至在一八二六年时在自己头上打了一枪。
然而他并不死，倒是贝多芬几乎因之送命：他为这件事情所受的难堪，永远无法摆脱。
12、贝多芬的心灵里多少有些清教徒气息；粗野的谈吐与思想，他是厌恶的：他对于爱情的神圣抱着毫无假借的观念。
13、竭力为善，爱自由甚于一切，即使为了王座，也永勿欺妄真理。
14、有时候，人生的现象与痛苦是那么悲惨，对于我们的爱是一种打击，那时，为了拯救这爱，拯救这信念，我们不得不把它超临人世之上，以致它有和人世脱离一切关系的危险。
非发酵菌
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 鲍假单胞菌
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
产碱杆 菌属
不动杆菌属
鲍曼不动杆菌
感染部位或疾 病 医院获得性肺 炎 败血症
宜选药物 氨苄西林／舒巴坦，头 孢哌酮/舒巴坦 氨苄西林/舒巴坦
可选药物 碳青霉烯类，氟喹诺酮 类 氨基糖苷类，头孢哌酮/ 舒巴坦，碳青霉烯类， 氟喹诺酮类
备注 重症患者可联合 氨基糖苷类 菌株之间对药物 敏感性差异大， 需根据药敏试验 结果选药
• 嗜麦芽窄食单胞菌：首选甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲恶 唑（复方新诺明），次选替卡西林-克拉维酸或氨 曲南+替卡西林-克拉维酸。 • 嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南等碳氢酶烯类天然 耐药。尚无公认的推荐抗菌治疗方案。可根据体 外药敏结果选用复方磺胺甲恶唑（复方新诺明）， 替卡西林-克拉维酸、环丙沙星或左氧氟沙星等。
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
• 嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，广泛分 布于自然界的水、土壤和植物中是医院环 境中的常见微生物，在非发酵菌感染中排 第3位。
形态及特征
• 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力的需氧革兰阴 性杆菌，具有从及鞭毛，不发酵糖。在多 数培养基上均能生长，在血平皿上呈淡黄 色、淡灰色或淡绿色，有氨味。 • 本菌产生锌离子依赖的金属β内酰胺酶而对 碳氢酶烯类抗生素和β内酰胺酶抑制剂天然 耐药。
兵中流行，造成严重
的公共卫生问题
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是指有多重耐药性的病原 菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨 基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。 • 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷、 青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四环 素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
非发酵菌
美洛培南
庆大霉素
阿米卡星
多粘菌素B
环丙沙星
左旋氧氟沙星
11
14 May 2020
菌株量
%R
%I
%S
9828
36
0.1
63.9
10028
29.8
0.1
70
5412
34.8
14.6
50.6
10687
18.2
20.5
61.3
11010
23.6
5.3
71.1
10587
24.5
9.3
66.2
9902
31
23.4
50 45
40 35
30
25 20 15
10
5 0
哌哌拉拉西西林林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
头孢他啶
头孢吡肟
亚胺培南
阿米卡星
环丙沙星左旋氧氟沙星
2006年 2007年 2008年
22
14 May 2020
鲍曼不动杆菌2006～2008年耐药趋势
耐药率%
80
70
60
50
40
30
20
10
0
氨苄西林/哌舒拉巴西坦林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
13.8
52.8
1720
52.5
12.6
34.9
1934
43
6.7
50.3
893
30.6
24.7
44.7
1918
18.7
21.9
59.4
1958
3.5
4.9
91.6
370
30
22.2
47.8
非发酵菌
0.3
0.2
13.5%
0.1
0
铜绿假单胞菌组
n = 49
MRSA组 n = 148
铜绿假单胞菌感染者的死亡率达 MRSA感染者死亡率的2倍以上
Osmon S, et al. CHEST 2004;125:607–616.
45%
40%
35%
30%
22.10%
25%
20%
15%
10%
5%
0%
肺部感染 n = 33
44.2
41.2
40 34.4 36.8
31.3 31.7 32.1
30
27.6 28.9
22.5 22.8
20
10
0 阿 头 头 头 亚 环 美哌 氨 头 哌 庆 替
米 孢 孢 孢 胺 丙 罗拉 曲 孢 拉 大 卡
卡 哌 吡 他 培 沙 培西 南 哌 西 霉 西
星 酮/ 肟 啶 南 星 南 林/
酮 林 素 林/
. 侯天文等. 医学综述2002;8:547-548.
常见的非发酵菌有哪些？
非发酵菌
假单胞菌属
铜绿假单胞菌
不动杆菌属
鲍曼不动杆菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
产碱杆菌属
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
黄杆菌属
. 汪复，张婴元. 实用抗感染治疗学 2004
为何需要高度重视非发酵菌？
分布广泛 分离率日益增高 耐药形势严峻
哌 培 培西 西 他 卡 吡 沙 噻新 西 霉 呋 西西 唑
酮/ 南 南 林 林 啶 星 肟 星 肟 诺 林 素 辛 丁 林 啉
舒
//
明
巴
舒三
临床检验技师微生物不发酵菌及检验讲义
第二十章不发酵菌及检验（不发酵G-杆菌）本章内容概述假单胞菌属（一）铜绿假单胞菌（二）嗜麦芽窄食单胞菌不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属军团菌属不发酵菌概述不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌；大部分为专性需氧菌。
包括13个属。
大多为条件致病菌。
除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
氧化-发酵（O-F）试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
假单胞菌属铜绿假单胞菌——生物学特性形态与结构形态：细长杆菌。
染色：G-。
特殊结构：无芽胞，无荚膜。
有1～3根鞭毛，运动活泼。
培养特性营养要求：不高。
气体环境：专性需氧。
温度环境：最适35℃，4℃不生长。
菌落特点：普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。
血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽；周围有透明溶血环。
选择培养基：（麦康凯琼脂培养基）微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。
（SS琼脂培养基）类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。
产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性；②绿色荧光素。
铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定标本采集：根据病情采集相应的临床标本。
形态学检查分离培养：依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果。
生化试验（鉴定）耐药性具有多重耐药。
初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。
亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。
铜绿假单胞菌——致病性及临床意义俗称绿脓杆菌。
是医院感染的主要病原体之一。
引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。
假单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌。
端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。
4非发酵菌
（二）临床意义
1. 致病因子 （1）侵袭力 粘附素、荚膜多糖 （2）毒素 外毒素、内毒素 （3）绿脓素 （4）侵袭性酶类 弹性蛋白酶、磷脂酶C 2. 所致疾病
医院感染的主要病原菌。烧伤创面感染、皮肤感染、肺部 感染、泌尿道感染、中耳炎、脑膜炎、心内膜炎、败血症 等。也可引起小儿类似沙门菌和霍乱样的严重腹泻。
二、细菌特性
1. 形态染色
革兰阴性杆菌，多为球杆 状，单个存在或成双排列，无 芽胞，无鞭毛，粘液型菌株有 荚膜。
2. 培养特性
专性需氧，营养要求不高，最 适生长温度为37℃，但有些 菌株可在42℃生长。
血琼脂平板：菌落圆形、光滑、 边缘整齐、灰白色，多数菌 株不溶血。
麦康凯琼脂平板：菌落呈粉红 色，但在SS琼脂培养基上只 有部分菌株生长。
可疑菌落
革兰阴性球杆菌 氧化酶阴性
动力 阴性
KIA
底层斜面 不变色
全面生化反应 最终鉴定
报告
寡养单胞菌属 (Stenotrophmonas）
一、分类
寡养单胞菌目前仅一个种，即嗜麦芽寡养单胞菌
（S.maltophilia） 。其分类经过了两次改名： 假单胞菌属（嗜麦芽假单胞菌）→黄单胞菌属（嗜麦芽
24h生长 （非军团菌）
48h后生长பைடு நூலகம்
革兰染色 姬美耐染色
直接荧光抗体 PCR、DNA探针
革兰阴性菌
血琼脂平板 巧克力琼脂平板
革兰阳性菌 非军团菌
BCYE琼脂
生长 （非军团菌）
不生长
生长
可能是军团菌
鉴定： 菌落特征 生化反应 直接荧光抗体染色
黄单胞菌）→窄食单胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。
二、细菌特性
1. 形态染色 革兰阴性杆菌，有一端或两端丛 鞭毛，多数在三根以上， 无芽 胞，无荚膜，可产生菌毛。
非发酵菌微生物学检验
非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
非发酵菌的培养与鉴定
铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
3.粗糙型：菌落呈纽扣状，表面 粗糙或菌落中央隆起边缘扁平。
铜绿假单胞菌在血平板和巧克力平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
4.粘液型：菌落光滑，隆起，呈黏液 状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克 雷伯菌菌落，但菌落呈无色半透明。
结果判读：出现红色为 阳性，不变色为阴性。
氧化酶阳性
非发酵菌生化鉴定反应共选“套餐”
各生化管阴阳性结果的判读
斜面产碱，底层不变 H2S阴性K/K，H2S-
斜面产酸，底层产酸 斜面产碱，气体阴性，
产气， H2S阴性（A/A, H2S阳性（K/A,气体
气体+，H2S-）
+，H2S+）
动力实验 左管阳性，右管阴性
嗜血杆菌鉴定实验：“卫星现象”
原理：嗜血杆菌生长需要Ⅴ因子和（或）Ⅹ因子，血平 板中红细胞本身含这两种因子，Ⅹ因子溶血后可直接 释放，Ⅴ因子会被溶血时释放的NAD酶水解，而金 黄色葡萄球菌等在生长中能产生Ⅴ因子，因此，将这 两种细菌共培养时，释放或产生的因子可以促进嗜血 杆菌的生长，从而出现靠近金黄色葡萄球菌周围环绕 较大的嗜血杆菌菌落。该现象称之为卫星现象。
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
苏州大学附属第二医院 微生物室 周惠琴
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
1 实验目的 2 实验内容 3 操作步骤 4 结果观察
一.实验目的
1.掌握常见非发酵菌的菌落特点、染色形 态及生化反应鉴定实验。
2.掌握嗜血杆菌属的菌落特点及鉴定实验。
二.实验内容
实验：非发酵菌的鉴定
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 42ﾟ 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+/+ +
方法： 方法：
1.形态观察； 1.形态观察； 2.菌落观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据 1.铜绿假单胞菌： 1.铜绿假单胞菌：
单端鞭毛（三根以下） 单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 培养基） 氧化分解（ 葡萄糖 乳糖、蔗糖 乳糖、 木 糖 氧化酶 赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 H2S产生 在42℃ 生长 42℃ ＋ － ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋ 98 0 85 100 0 99 0 0 100 ＋ ＋ 97 97
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 生长温度: 37℃ 41℃ 41℃ 42℃ 42℃ + － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － － － － － － ＋ － － － － ＋ － － +/－ － +/－ +/－ － +/－ － ＋ － ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ －
实酵菌的形态、染色特性、生 1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸，明胶、 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 蔗糖。
非发酵菌的鉴定的临床探讨
非发酵菌的鉴定的临床探讨发表时间：2011-08-31T14:47:05.327Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：吕春凤[导读] 非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。
吕春凤（黑龙江省绥滨农场疾病控制中心 156203）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0284-02 【关键词】非发酵菌鉴定探讨非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。
在临床微生物学实验室遇到所有革兰阴性杆菌中，非发酵菌占15%，其中2/3是假单胞菌。
非发酵菌大多为机会致病菌，是引起医院内感染的重要致病菌。
临床标本中遇到的非发酵菌有近10个菌属的数十个种别。
主要菌属有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属等。
1 假单胞菌属1.1 生物学特性直或微弯杆菌，长1.5～5.0μm，宽0.5～1.0μm，革兰染色阴性。
单端鞭毛，1根或数根，有动力。
严格需氧代谢。
氧化酶阳性，触酶阳性。
1.2 常规鉴定从临床标本中分离到的非发酵菌，大约占所有革兰阴性杆菌中的15%，其中铜绿假单胞菌占70%，其次是不动杆菌属，嗜麦芽窄食单胞菌占第三位，荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、斯氏假单胞菌较少见。
荧光假单胞菌DNA 同源群的鉴定。
该群有3个菌种，铜绿、荧光和恶臭假单胞菌，主要生物学特性是能产生水溶性色素，如青脓素或称荧光素，绿脓素不发荧光，可用氯仿从培养液抽提获得。
此外，尚有少数菌株可产生红脓素、黑脓素，也有不产色素的菌株。
氧化酶阳性、精氨酸双水解酶阳性，一般能在麦康凯琼脂上生长，利用枸橼酸盐，对多粘菌素敏感。
氧化葡萄糖、蔗糖无反应。
据统计，临床标本中铜绿假单胞菌不产绿脓素的菌株约占10%，既不产生绿脓素亦不产生青脓素的也占10%左右。
对于不产生绿脓素的铜绿假单胞鉴定最低限度应具有以下特性：端极一根鞭毛，有动力，在O-F葡萄糖培养基需氧管中产酸，氧化酶阳性，精氨酸双水解酶阳性，42℃生长，其他如硝酸盐还原产生氮气，麦康凯琼脂上生长，对多粘菌素敏感皆有鉴定参考价值。
[医药卫生]非发酵菌
![[医药卫生]非发酵菌](https://img.taocdn.com/s3/m/13fc1a28e518964bcf847c86.png)
少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓 素（红色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素 （黄色）。
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29
铜绿假单胞菌
鉴定无色素/只产生荧光素的铜绿假单胞菌： 42℃能够生长 乙酰胺的碱化作用 硝酸盐、亚硝酸盐的脱氮作用 极性单鞭毛，有动力
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15
铜绿假单胞菌感染的控制
易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感 染的病房
各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应避免被铜 绿假单胞菌污染
采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调 查和监控
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16
荧光假单胞菌(P.fluorescens)
产青脓素，但不能产绿脓素， 4℃生长, 42℃ 不生长, 最适温度25-30℃ 。
+/- -
+
+
-
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6
一、假单胞菌属(Pseudomonas)
直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌，氧化酶阳 性，动力+（一个或多个极鞭毛），严格 需氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、 MAC 生长，水溶性色素。
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7
铜绿
氧化酶
99
麦康凯
100
42℃
100
硝酸盐还原 98
青脓素
65
精氨酸 100
明胶液化 82
葡萄糖
引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通气、 广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性 粒细胞减少等。
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18
嗜麦芽窄食单胞菌
嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛， 血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。
根据 赖氨酸脱羧酶试验阳性和DNA酶阳性、氧化酶 阴性可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧 化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。
最新微生物检验非发酵菌及检验名师精编资料汇编
第二十五章非发酵菌及检验本章考点：1.概述：概念2.假单胞菌属●概念●分类●铜绿假单胞菌临床意义和微生物学检查3.不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
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引起的疾病?
条件致病菌 （opportunistic pathogen） ➢ 尿路感染（ urinary tract infections） ➢ 呼吸系统感染（respiratory system infections） ➢ 皮肤软组织感染（dermatitis, soft tissue infections） ➢ 菌血症（ bacteremia） ➢ 骨关节感染（ bone and joint infections） ➢ 胃肠感染（gastrointestinal infections ） ➢ 各种系统感染尤其是严重烧伤患者、伴有免疫抑制
➢ 分布广泛 多存在于潮湿环境 ➢ 条件致病 皮肤粘膜破损感染 （烧伤患者感染等） 医院感染 （呼吸道、泌尿道
等感染）
Pseudomonas形态和培养特征
形态：杆菌 染色性：革兰阴性 排列：散在排列 特殊结构：
有鞭毛（端、丛） 有菌毛 无芽胞 无荚膜
Pseudomonas形态和培养特征
➢培养特征：
➢ 2006年发展到12家（2所儿童医院，以及新疆和甘 肃的2 所）
➢ • 2009年发展到14家（昆明和安徽的2所） 按统一 方法（K-B法）、标准化的材料进行动态性耐药性 监测
➢ The SENTRY Antimicrobial Surveillance Program was initiated in January 1997 and was designed to monitor the predominant pathogens and antimicrobial resistance for both nosocomial and community-acquired infections globally by using validated, reference-quality identification and susceptibility testing methods performed in a central laboratory.
肉汤增菌
标本
血平板和Mac平板
可疑菌落
涂片革兰染色
革兰阴性杆菌，氧化酶试验（+）、OF：O、动力（＋）
非发酵菌鉴定系统（自动或半自动）鉴定到种
铜绿假单胞菌 （Pseudomonas aureginosa)
Pseudomonas aeruginosa 临床意义
➢存在于医院潮湿环境中 ➢条件致病
多引起医院感染 ➢致病因子：
➢ 产碱杆菌属(Alcaligenes)
➢ 莫拉菌属(Moraxella)
➢ 黄杆菌属(Flavobacterium)
➢ 军团菌属(Legionella)
分属不同的科属种
➢ 由复旦大学附属华山医院抗生素研究所牵头成立 的“中国CHINET细菌耐药监测网”成立于2004年10 月
➢ 涉及北京、 上海、杭州、广州、武汉、重庆等6个 城市的8所三级甲等 医院（教学医院） •
非发酵革兰阴性杆菌 (nonfermentative bacilli, NFB)
广州医科大学临床微生物检验教研室学习
概
述
➢ 不发酵菌概念关键点： 不发酵葡萄糖 多为专性需氧菌 革兰阴性杆菌
➢ 不发酵菌共性： 不发酵葡萄糖
（氧化利用或不利用） 氧化酶阳性
（除嗜麦芽和不动杆菌） 动力阳性
（除不动杆菌和莫拉菌）
硝酸盐还原（＋） [Pf(-/+)、Pp(-)]
药物敏感性试验
➢ 根据CLSI规定: 非发酵菌中仅 铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、洋葱
伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌可使 用K-B法进行药敏试验
其余非发酵菌均需使用肉汤或琼脂 稀释法或E-test法检查药敏情况。
Pseudomonas微生物检验程序：
与人类疾病有关的主要 有11个种。代表菌为铜 绿假单胞菌。
假单胞菌属原来和现行分类对照
原假单胞菌属rRNA同 源群
rRNA同源群Ⅰ
现行分类 假单胞菌属
rRNA同源群Ⅱ
伯克霍尔德菌属
rRNA同源群Ⅲ rRNA同源群Ⅳ
丛毛单胞菌科（丛毛单 胞菌属、食酸菌属）
短波单胞菌属
rRNA同源群Ⅴ
窄食单胞菌属
临床常见假单胞菌及特点
专性需氧 营养要求不高 最适生长温度35℃ 最适pH7.0 有些菌生长过程中 产色素（水溶性）
表面生长
恶臭假单
胞菌在血 平板和中 国蓝平板 上菌落
脂溶性色素
水溶性黄绿色色素
Pseudomonas生化特征
氧化酶阳性
触酶阳性
Pseudomonas生化特征
氧化分解葡萄糖
VP、甲基红、吲哚均（－ ）
➢ 铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假 单胞菌属于荧光组假单胞菌，可产生青 脓素（水溶性、黄褐色、在短波长的紫 外光下可发荧光），42℃不生长（铜绿 除外）。
➢ 斯氏、门多萨、产碱、假产碱、浅黄和 栖稻（氧化酶阴性）假单胞菌属非荧光 组假单胞菌，不产生青脓素，42℃可生 长。
Pseudomonas临床意义
的癌症和艾滋患者（ a variety of systemic infections, particularly in patients with severe burns and in cancer and AIDS patients who are immunosuppressed）目前，伤创面细菌生态学呈现如下特点：
➢NNIS: National Nosocomial Infection Surveillance System(国立医院感染监测系统)
➢由美国政府于1970年建立，是美国全国性医 院感染监测系统
第一节 假 单 胞 菌 属 （Pseudomonas）
Pseudomonas分类
隶属于假单胞菌科 （Pseudomonadaceae)
➢ 不发酵菌不是严格意义上的分类学命名
➢ 仅是具有某些共同表型特征（如形态结 构和生化反应类似）的一些细菌统称。
临床常见不发酵菌
➢ 假单胞菌属（Pseudomonas）
➢ 不动杆菌属 (Acinetobacter)
➢ 窄食单胞菌属（Stenotrophomonas）
其他临床较常见非发酵菌
➢ 伯克霍尔德菌属（Burkholderia)