非发酵菌特征及鉴定思路
dl第二十一章 非发酵菌及检验
分离培养
BAP、SS、MAC
鉴定
初步鉴定（菌落、菌体特征，色素、氧化酶、 KIA），最后鉴定（系统生化、血清学）
药敏试验
粪便
胸腹水 离心 脑脊液 沉淀 尿液 分泌物 血液 （增菌） 体液
分离培养 （SS、MAC）
可 疑 菌 落 初 步 鉴 定
不动杆菌属
不动杆菌属（Acinetobater）为一群不发酵
糖类、氧化酶 - 、无动力的革兰阴性杆菌。 生化反应：氧化酶 - ，MIU - - - ，硝酸盐 还原试验 - 。 耐药性：对全部氨基青霉素、一代二代头 孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。
鲍曼不动杆菌在BAP上的生长现象
4 2 1
O-F
1
DNA
结果 总值
O
+ + — 6
+ — + 5
+ — — 4
鉴定值：1654
鉴定结果：铜绿假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）为条件致病菌，常引起抵抗力
低下患者的各种感染，在假单胞菌的感染 中检出率仅次于铜绿假单胞菌。 生化反应特殊：氧化酶 - ；赖氨酸脱羧酶 +； 氧化分解麦芽糖；水解七叶苷。 耐药性：含有-内酰氨酶，对亚胺培南天然 耐药，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）； 喹诺酮类：环丙沙星或替卡西林/克拉维酸。
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是假单胞
菌属的代表菌种，为条件致病菌，是医院 感染的主要病原菌。可经多种感染途径、 污染导致多种感染，且对多种抗生素天然 耐药，因此有很重要的临床意义。
非发酵菌
杭州艾迪康临床检验中心微生物 赵德扬
非发酵菌
非发酵菌是一群需氧或兼性氧、不发酵糖
类能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌 主要存在于外界环境中,其中大多数是条 件致病菌.其种类繁多,在鉴定上较为复杂, 但可以根据基本生化反应来鉴别.
非发酵菌的鉴别
(一)基本生化反应 1 氧化酶试验 在营养平板或半固体培养
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
3 气味可初步鉴别 铜绿假单胞菌有生姜味，产
碱属有水果味，腐败希瓦菌、恶臭假单胞、洋 葱伯克霍德菌有腐败样气味. 4 色素 色素的产生有利于细菌的鉴别, 但不同 的细菌可形成相似的色素,在非发酵菌中产生黄 色色素的有非发酵菌杆菌 、洋葱伯克霍、施氏 假单胞菌、少动鞘氨醇杆菌、食神鞘氨醇杆菌 等.产蓝绿色色素的有铜绿假单菌，产生荧光色 素的有恶臭假单胞菌、荧光单胞菌和铜绿单胞 菌,产红棕色或淡紫色的腐败希瓦菌产、紫色色 素的有紫色杆菌.
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
5 动力和氧化酶
㈠动力和氧化酶阴性:不动杆菌 CDC ED-5 CDC NO-1 ㈡动力阴性和氧化酶阳性的非发酵菌: 莫拉菌属威克斯属、金黄杆菌属、尿道寡 源杆菌、鞘氨醇杆菌属. ㈢动力阳性和氧化酶阴性细菌：非发 酵菌唐菖蒲霍德菌、洋葱伯克德菌、浅黄 色单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌、少动鞘氨醇 单胞菌
基上作氧化酶试验.麦康凯、SS及其他含 有糖的培养基不能作为氧化酶试验,因糖 分解产酸会有影响. 2 葡萄糖O/F 观察待检菌对葡萄糖是否氧 化发酵或产碱，传统的糖发酵不能作为氧 化发酵,因为糖发酵管含有蛋白胨高.
ห้องสมุดไป่ตู้
非发酵菌的鉴别
3 硝酸盐还原/产气
观察待检菌是否还 原硝酸盐或硝酸盐产气. 4 动力试验 可采用半固体穿剌,玻片滴 法或鞭毛染色,观察待检有无动力,以及鞭 毛的位置和数量. 5 触酶试验 在不含血的培养基上作触酶 试验,区别待检菌阳性/阴性.
api 20 ne 非发酵菌 鉴定条
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第一部分：介绍API 20 NE非发酵菌鉴定条API 20 NE非发酵菌鉴定条是一种用于鉴定非发酵菌的检测工具，它采用了生物化学方法和微生物学方法来确定微生物的种类和特性。
这种鉴定条广泛应用于临床医学、食品工业和环境监测等领域，可以帮助科研人员和临床医生对非发酵菌进行快速而准确的鉴定和分类。
第二部分：深入探讨API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理和方法API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理基于微生物菌落的代谢反应，通过监测微生物对不同营养物质的利用情况来推断其种属和分类。
该鉴定条包含20个小管，每个小管内都含有不同的营养物质，当微生物菌落接种到这些小管中后，根据颜色变化和气体产生等特征，就可以判断微生物的代谢特性和种属分类。
第三部分：API 20 NE非发酵菌鉴定条在临床医学和食品工业中的应用在临床医学中，API 20 NE非发酵菌鉴定条被广泛应用于临床微生物学检测，可以帮助医生快速鉴定非发酵菌，从而选择合适的治疗方案。
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未来，随着新的技术和方法的引入，该鉴定条将更加高效、准确地鉴定非发酵菌，为临床医学和食品工业提供更好的支持和帮助。
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它不仅可以帮助医生进行微生物感染的诊断和治疗，还可以帮助食品企业保障食品质量和安全。
我对这种鉴定条的发展前景充满信心，相信它会在未来发挥更加重要的作用。
非发酵菌群的分类鉴定
产碱杆菌属
莫拉氏菌属
无色杆菌属
土壤杆菌属
黄色素
.
+
13
—
黄杆菌属
莫拉氏菌属
假单胞菌属 产碱杆菌属
无色杆菌属 土壤杆菌属
鞭毛染色
端毛菌
周毛菌
假单胞菌属
产碱杆菌属，无色杆菌属，土壤杆菌属
O型
O/F —
无色杆菌属，土壤杆菌属
还原硝酸盐后产气
+
—
产碱杆菌属
土壤杆菌属
无色杆菌属
.
14
第四节、非发酵菌群的属内鉴别
支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属，无色杆菌属，
莫拉氏菌属，艾肯氏菌属，土壤杆菌属。
触酶
+
—
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属，
金氏杆菌属，
支气管败血鲍特氏菌，无色杆菌属，
艾肯氏菌属
莫拉氏菌属，土壤杆菌属
O/F
动力
弱F
—
37℃
18—24 ℃
金氏杆菌属
艾肯氏菌属
—
+
—
+
+
—
支气管败血 假单胞菌属
黄杆菌属
鲍特氏菌
.
20
铜绿假单胞菌鉴别要点：
（1）、铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上能 产生水溶性绿色素，使整个培养基变为绿色。
（2）、在血平板上经35—37℃，18—24h培 养可表现为：菌落灰绿色、半透明、大而扁 平、表面湿润、边缘不齐；有金属光泽；有 生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色 透明溶血环。
.
5
因此在临床上真正能分离出来且 有临床意义的非发酵菌群有：
假单胞菌属、寡氧单胞菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、 鲍特氏菌属（百日咳鲍特氏菌除外）、金氏杆菌属、不 动杆菌属、无色杆菌属、莫拉氏菌属、艾肯氏菌属、土 壤杆菌属。
实验九：非发酵菌
• 思考题：鞭毛染色法的原理？
小结
非发酵菌的鉴定要点，尤其是铜绿假单胞菌的鉴定。 1、培养特点及菌落特征：在普通琼脂平板上产生特征性的 蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素，血平板上形成大而 扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿 色菌落，并形成透明溶血环 最适生长温度35℃，4℃不生长，42℃可生长 2、95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得 到鉴定： • 氧化酶阳性（10秒内）。 • 菌落较大，生姜样气味。 • 绿脓素产生。 • 少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素（红 色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。
非发酵菌生化编码鉴定管
• 原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参 照下述方法，将试验结果换算成4位数字，加以数值化后 查表。 • 例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734， 查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中 要求做硝酸盐产气补充实验区分。 • 1组 2组 3组 4组 O-F 氧化酶4分 精氨酸4分 硝还4分 厌氧2分 枸橼酸2分 甘露醇2分 DNA酶2分 需氧1分 麦芽糖1分 木糖1分 乙酰胺1分 结果：需氧 + + + - + + + - 得分： 1 7 3 4
实验九：非发酵菌
实验目的
• 掌握非发酵菌的基本特征和鉴定程序 • 掌握非发酵菌分类的鉴别试验
不发酵革兰阴性杆菌
• 假单胞菌属：铜绿假单胞菌 • 不动杆菌属：硝酸盐不动杆菌 • 产碱杆菌属：粪产碱杆菌
不发酵革兰阴性杆菌鉴定程序
• 见检验程序
实验内容
• 一、ＧＳ、氧化酶试验 • 二、接种非发酵菌生化编码鉴定管 • 三、鞭毛染色
非发酵菌 微生物学检验
非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
实验：非发酵菌的鉴定
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的
1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：
1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据
1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +
非发酵菌群的分类鉴定
假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 端毛菌 假单胞菌属 鞭毛染色 周毛菌 产碱杆菌属，无色杆菌属，土壤杆菌属 O/F O型 无色杆菌属，土壤杆菌属 还原硝酸盐后产气 + — 土壤杆菌属 无色杆菌属 — 产碱杆菌属
第四节、非发酵菌群的属内鉴别
一、假单胞菌属和 寡氧单胞菌属
假单胞菌属属假单胞菌科，该属为严格的专性需 氧的革兰氏阴性杆菌，具有一端鞭毛，无荚膜、 无芽孢。该菌属在自然界中分布广泛，营养要求 不高，氧化酶试验均为阳性，是假单胞菌科的代 表菌属。
氧化酶阴性菌群
不动杆菌属，寡氧单胞菌属，付百日咳鲍特氏菌 动力 + 寡氧单胞菌属 （嗜麦芽寡氧单胞菌） — 不动杆菌属，付百日咳鲍特氏菌 在鲍—金二氏培养基上产 棕色素 麦康凯上生长 — + 不动杆菌属
+ —
付百日咳鲍特氏菌
）、氧化酶阳性菌群的 鉴别
氧化酶阳性菌群
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，艾肯氏菌属，土壤杆菌属。 触酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，土壤杆菌属 动力 37℃ 18—24 ℃ — + 支气管败血 鲍特氏菌 + + 假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 + 黄杆菌属 黄色素 — 莫拉氏菌属 — — 黄杆菌属 莫拉氏菌属 弱 F 金氏杆菌属 — 金氏杆菌属， 艾肯氏菌属 O/F — 艾肯氏菌属
绿棕红无 部分黄色 — 黄 —/棕 — — — — — —
+（周毛） O 型
+（周毛） O 型
非发酵菌群 氧化酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属， 无色杆菌属，莫拉氏菌属，艾肯氏菌属， 土壤杆菌属。 — 不动杆菌属 寡氧单胞菌属 付百日咳鲍特氏菌
非发酵菌-2010
辅助培养
嗜麦芽窄食单胞菌
鉴定： 氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 麦芽糖
– + + +/+ + O
耐药性
对亚胺培南天然耐药，主要是产金属酶； 经验用药首选磺胺类，但目前磺胺类抗生 素的耐药率已经开始上升。 K-B法可选用的药物有SXT、LEV和MNO。
洋葱伯克霍尔德菌
一般不引起人致病，但易从纤维囊肿病人 中分离，在一些免疫力低下的患者中也可 能分离到。 生物学特性：氧化酶>90%阳性，赖氨酸阳 性，多鞭毛。
＋
＋
97
98
－ ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋
0 85 100 0 99 0 0 100
（2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝 胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、 16SrDNA分型鉴定技术
致病机制
粘附素：粘附 结构成分 荚膜多糖：抗呑噬
内毒素：LPS
毒力因子 毒素 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧 化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解 弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞
3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性， 能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特 异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。 对化学消毒剂敏感。
致病性
可引起肺炎型（重症类型）、流感样型 （轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
微生物学检验非发酵菌及检验
铜绿假单胞菌 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属 金氏杆菌属 土壤杆菌属等
非发酵菌主要特点
氧化酶：＋；不动杆菌属除外 O/F试验：O/－ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力 试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F培养基 （半固体高层）
O/F：O
革兰阴性杆菌 氧化酶＋ O/F： － 硝酸盐还原－；亚硝酸盐还原＋ KIA：底层斜面不变色 注意与不动杆菌鉴别
不动杆菌属－－主要特征
现已命名6个生物种，代表菌为醋酸钙不 动杆菌 革兰阴性球杆菌，成双排列，无鞭毛， 动力阴性 专性需氧，营养要求不高，普通平板、 Mac平板上可生长 氧化酶－；O/F：O／－；硝酸盐还原－ 临床标本分离率仅次于铜绿假单胞菌 检验程序
指示剂：溴麝香草酚蓝 培养基pH：
O/F：F
葡萄糖氧化发酵试验（O/F） O/OF：/F：O F O/F：－
肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别
鉴定试验 肠杆菌科 非发酵菌 弧菌科
氧化酶
－
＋
＋
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F）
鞭毛
F 周鞭毛
O／－
F
单、丛、周 单、丛
假单胞菌属
假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性 分为5群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共 7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 多为条件致病菌，是医院感染的主要病 原菌
假单胞菌属共同点
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或 丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高 氧化酶：＋ O/F：O Mac生长：＋ 产生水溶性色素
铜绿假单胞菌－－形态染色
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
铜绿假单胞菌－－培养特性
专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素， 培养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味
非发酵菌的培养与鉴定
铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
3.粗糙型：菌落呈纽扣状，表面 粗糙或菌落中央隆起边缘扁平。
铜绿假单胞菌在血平板和巧克力平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
4.粘液型：菌落光滑，隆起，呈黏液 状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克 雷伯菌菌落，但菌落呈无色半透明。
结果判读：出现红色为 阳性，不变色为阴性。
氧化酶阳性
非发酵菌生化鉴定反应共选“套餐”
各生化管阴阳性结果的判读
斜面产碱，底层不变 H2S阴性K/K，H2S-
斜面产酸，底层产酸 斜面产碱，气体阴性，
产气， H2S阴性（A/A, H2S阳性（K/A,气体
气体+，H2S-）
+，H2S+）
动力实验 左管阳性，右管阴性
嗜血杆菌鉴定实验：“卫星现象”
原理：嗜血杆菌生长需要Ⅴ因子和（或）Ⅹ因子，血平 板中红细胞本身含这两种因子，Ⅹ因子溶血后可直接 释放，Ⅴ因子会被溶血时释放的NAD酶水解，而金 黄色葡萄球菌等在生长中能产生Ⅴ因子，因此，将这 两种细菌共培养时，释放或产生的因子可以促进嗜血 杆菌的生长，从而出现靠近金黄色葡萄球菌周围环绕 较大的嗜血杆菌菌落。该现象称之为卫星现象。
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
苏州大学附属第二医院 微生物室 周惠琴
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
1 实验目的 2 实验内容 3 操作步骤 4 结果观察
一.实验目的
1.掌握常见非发酵菌的菌落特点、染色形 态及生化反应鉴定实验。
2.掌握嗜血杆菌属的菌落特点及鉴定实验。
二.实验内容
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
非发酵菌2015
可用于纸片法药敏试验的抗菌药物：甲氧苄氨 嘧啶/磺胺甲噁唑、米诺环素和左氧氟沙星
嗜麦芽寡养单胞菌端丛鞭毛
临床意义
嗜麦芽寡养单胞菌分布广泛，是一种重要的 医院获得性病原体，可分离于几乎所有部位，居 临床分离的非发酵菌第3位
非发酵菌常见菌属
假单胞菌属(Pseudomonas)
金氏杆菌属(Kingella)
不动杆菌属(Acinetobacter)
金黄杆菌属(Chryseobaterium)
寡养单胞菌属(Stenotrophmonas) 艾肯杆菌属(Eikenella)
伯克菌属（Burkholderia）
土壤杆菌属(Agrobacterium)
本菌对多种抗菌药物（氨苄西林、四环素、一、二代 头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等）天然耐药
各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能 发生耐药性改变。
铜绿假单胞菌对-内酰胺类抗菌药物的 耐药机制
膜孔蛋白缺失：亚 胺培南
外排泵：美罗培南
-内酰胺酶水解： 所有
L. Silvia Munoz-Price & Robert A. Weinstein. N Engl J Med. 2008;358:1271-81.
产碱杆菌属(Alcaligenes) 无色杆菌属(Achromobacter) 莫拉菌属(Moraxella)
黄单胞菌属(Xanthomonas) 丛毛单胞菌属(Comamonas) 食酸菌属（Acidovorax）
2013年瑞金医院的菌种构成 （5596株）
奇异变形杆菌, 无乳链球菌, 2.8% 2.6%
力
每日一菌之非发酵菌及检验
每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
非发酵菌微生物学检验
⾮发酵菌微⽣物学检验⾮发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. ⾮发酵菌是⼀群需氧、⽆芽孢、不利⽤糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的⾮发酵菌指在KIA中24⼩时内表⾯能够⽣长，在底部不⽣长的需氧G-杆菌。
（2）⾮发酵菌与其它苛养或⾮糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来⽇益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的⾮发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛⽑单胞菌属、⾷酸菌属；④rRNAⅣ群/短波⽑单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄⾷单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希⽡菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. ⾮发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中⽆酸产⽣，斜⾯和底部均呈红⾊。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄⾷单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并⾮所有氧化酶+的G-杆菌都是⾮发酵菌。
（3）麦康凯上⽣长很差或不⽣长。
（4）动⼒：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜⽤直接动⼒观察或染⾊法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利⽤（O/F试验）：O/F培养基:蛋⽩胨和糖类的⽐例为1:5⽽不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动⼒：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6⼩时后⾸次观察结果,24和48⼩时后再次观察结果。
更准确的⽅法是湿⽚法和鞭⽑染⾊。
（4）⾊素形成：⾮发酵菌可形成多种⾊素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产⽓：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进⽽释放氮的⽣化过程。
非发酵菌特征及鉴定思路课件
感染途径
非发酵菌主要通过呼吸道、皮肤或消化道侵入人体，引发局 部或全身感染。
致病机制
非发酵菌的致病性与其产生的毒素、酶和细胞表面结构有关 ，这些物质能破坏人体组织，引发炎症和免疫反应。
临床表现与诊断
临床表现
非发酵菌感染的临床表现多样，包括发热、咳嗽、呼吸困难、胸痛等，严重时可 导致败血症和多器官功能衰竭。
物抑制或杀灭。
抗菌药物选择与治疗策略
1 2 3
根据药敏试验结果选择抗菌药物
根据非发酵菌的药敏试验结果，选择敏感的抗菌 药物进行治疗，以提高治疗效果并降低耐药性的 产生。
联合用药
针对非发酵菌的耐药性，可以采用联合用药策略 ，通过不同抗菌药物的协同作用，增强抗菌效果 ，并延缓耐药性的产生。
更新抗菌药物
分离培养与纯化
分离培养
通过选择性培养基，将非发酵菌从样本中分离出来。
纯化
通过反复划线培养，获得纯培养物，保证后续实验的准确性。
生理生化特征分析
氧化酶试验
通过氧化酶试验，初步判断非发 酵菌是否为革兰氏阴性菌。
糖发酵试验
检测非发酵菌对糖的利用能力，有 助于分类鉴定。
吲哚试验
检测非发酵菌是否产生吲哚，用于 鉴别肠道细菌。
非发酵菌特征及鉴 定思路课件
目 录
• 非发酵菌概述 • 非发酵菌的鉴定方法 • 非发酵菌的鉴定思路 • 非发酵菌的致病性与感染 • 非发酵菌的耐药性与抗菌药物选
择 • 非发酵菌的生物安全与防护
01
非发酵菌概述
定义与分类
定义
非发酵菌是指不能以葡萄糖为碳 源，不进行发酵性代谢的细菌。
分类
非发酵菌属于革兰氏阴性杆菌， 主要包括假单胞菌属、不动杆菌 属、黄杆菌属等。
非发酵菌的鉴定的临床探讨
非发酵菌的鉴定的临床探讨发表时间：2011-08-31T14:47:05.327Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：吕春凤[导读] 非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。
吕春凤（黑龙江省绥滨农场疾病控制中心 156203）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0284-02 【关键词】非发酵菌鉴定探讨非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。
在临床微生物学实验室遇到所有革兰阴性杆菌中，非发酵菌占15%，其中2/3是假单胞菌。
非发酵菌大多为机会致病菌，是引起医院内感染的重要致病菌。
临床标本中遇到的非发酵菌有近10个菌属的数十个种别。
主要菌属有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属等。
1 假单胞菌属1.1 生物学特性直或微弯杆菌，长1.5～5.0μm，宽0.5～1.0μm，革兰染色阴性。
单端鞭毛，1根或数根，有动力。
严格需氧代谢。
氧化酶阳性，触酶阳性。
1.2 常规鉴定从临床标本中分离到的非发酵菌，大约占所有革兰阴性杆菌中的15%，其中铜绿假单胞菌占70%，其次是不动杆菌属，嗜麦芽窄食单胞菌占第三位，荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、斯氏假单胞菌较少见。
荧光假单胞菌DNA 同源群的鉴定。
该群有3个菌种，铜绿、荧光和恶臭假单胞菌，主要生物学特性是能产生水溶性色素，如青脓素或称荧光素，绿脓素不发荧光，可用氯仿从培养液抽提获得。
此外，尚有少数菌株可产生红脓素、黑脓素，也有不产色素的菌株。
氧化酶阳性、精氨酸双水解酶阳性，一般能在麦康凯琼脂上生长，利用枸橼酸盐，对多粘菌素敏感。
氧化葡萄糖、蔗糖无反应。
据统计，临床标本中铜绿假单胞菌不产绿脓素的菌株约占10%，既不产生绿脓素亦不产生青脓素的也占10%左右。
对于不产生绿脓素的铜绿假单胞鉴定最低限度应具有以下特性：端极一根鞭毛，有动力，在O-F葡萄糖培养基需氧管中产酸，氧化酶阳性，精氨酸双水解酶阳性，42℃生长，其他如硝酸盐还原产生氮气，麦康凯琼脂上生长，对多粘菌素敏感皆有鉴定参考价值。
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• 不动杆菌中还产IMP或VIM型金属酶，该 酶水解底物范围广，包括碳青霉烯类、 青霉素类和头孢菌素抗生素，不被克拉 维酸等酶抑制剂抑制，但能被EDTA、2巯基丙酸抑制
嗜麦芽窄食单胞菌
• 常感染严重衰弱和免疫力低下病人 • 在医院水龙头、污水排水孔呼吸机湿化器 均可分离到 • 可引起菌血症、心内膜炎、医院获得性肺 炎、尿路感染、皮肤、软组织 • 静脉放置插管是引起菌血症的主要原因， 死亡率达41～69％
非发酵菌的分类 第一组 有动力 极鞭毛
rRNA I群 假单胞菌属
假单胞菌科
rRNA II群 rRNA III群 rRNA IV群 rRNA V群
伯克菌属
丛毛单胞菌属 短波单胞菌属 寡养（窄食）单胞菌属
假单孢菌科根据rRNA-DNA同源性 研究分为5组
• rRNA-I: • 假单孢菌属
铜绿 荧光 恶臭 门多萨 产碱 斯氏
鉴定非发酵革兰阴性杆菌的 基本步骤
• • • • • • • • • 初始菌落识别: 在中国兰或麦康开培养基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶 革兰染色 色素 确认非发酵细菌 O/F 鞭毛染色 选择鉴定系统 API 20NE ATB VIEK2Compact等
临床常见非发酵革兰阴性细菌的耐 药特征
• 铜绿假单孢菌
临床少见 体弱 免疫力低下患者感染 菌血症 氧化酶阳性 不分解糖 醇或反应很弱 短波 紧密螺旋单极鞭毛
生长缓慢 48h 可见菌落 深黄到橘黄色素 七液苷阳性 区别于其他产碱假单胞菌
rRNA V
寡养单胞菌属或窄食单胞菌属
嗜麦芽寡氧单胞菌
寡养单胞菌属生物学特性
嗜麦芽寡养单胞菌名称变化 1961年嗜麦芽假单胞菌 1983年嗜麦芽黄单胞菌 1993年嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌
非发酵细菌原分类:
•
• •
假单孢菌科
奈瑟菌科 未分科
非发酵细菌现代分类
• 假单孢菌科 • 产碱杆菌科 • 甲基球菌科 • 根瘤菌科 • 黄杆菌科 • 莫拉菌科 • 未定
临床常见非发酵菌的分类
科 名
假单胞菌科 甲基球菌科 产碱杆菌科 假单胞菌属 甲基杆菌属 产碱杆菌属
属
名
寡氧（窄食） 单胞菌属 鲍特菌属 金色杆菌属 伯杰菌属 稳杆菌属 无色杆菌属 鞘氨醇菌属 伯克菌属
产KPC酶
国内： • 已在肠杆菌科的多个菌属中有报道。 • 肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、产酸克雷伯菌、 沙门菌属、弗劳地柠檬酸杆菌和铜绿假单胞菌等。 • 该类酶除阴沟肠杆菌可有染色体介导外，其他各类细菌均 可为质粒介导，已成为临床治疗难题
如何检测?
• 产KPC酶的菌株用常规药敏试验不容易检出。 • CLSI关于碳青霉烯类的判断标准： 厄他培南≤2μg/ml 亚胺培南、美罗培南≤4μg/ml • 因此，MIC2μg/ml 或4μg/ml的菌株仍可判断为敏感的 • 警惕：在常规药敏中如遇第三、第四代头孢菌素以及其他 的β-内酰胺类耐药的菌株均应该进行稀释法测定碳青霉烯 类的对这些菌株的MIC。
检测KPC酶的最佳底物
• 厄他培南是检测KPC酶的最佳底物。 • 建议1：可将该药列为常规药敏试验的品种 • 建议2：对所有具有ESBLs/AmpC酶样表型（即 对第三、第四代头孢菌素耐药）的肠杆菌科细 菌采用纸片法或MIC法（E-试验）进行厄他培南 （和其他碳青霉烯类）的测定。 • 如MIC为2或4μg/ml应视作有产KPC酶和其他碳 青酶霉烯酶的可能。 • 这时应与临床医师联系，并将该菌株送往参考 试验室作进一步的研究。
根瘤菌科 黄杆菌科 莫拉菌科 分类不明
土壤杆菌属 黄杆菌属 威克菌属 莫拉菌属 玫瑰单胞菌属
不动杆菌属 人苍白杆菌
与鉴定方法相关的分组
第一组 有动力,极鞭毛: 假单胞菌科 rRNA群I~V 第二组 有动力,周鞭毛: 产碱杆菌科 产碱杆菌属 第三组 无动力,OXI(+): 黄杆菌科 黄杆菌属 华丽杆菌属 稳杆菌属 第四组 无动力,OXI（-） 不动杆菌属
土生单胞菌 不是人类致病菌
食酸丛毛单胞菌 机会感染菌 唯一橘黄色吲哚反应 睾酮丛毛单胞菌属 极为少见
食酸菌属生物学特性
食酸菌属
敏捷食酸菌
中泛食酸菌 德氏食酸菌
氧化酶阳性 有动力 氧化利用糖类
临床意义不明
rRNA IV
• 短波单胞菌属
缺陷短波单胞菌 泡囊短波单胞菌
短波单胞菌属生物学特性 短波单胞菌属
伯克菌属生物学特性
葱头伯克菌
G-杆菌 氧化利用葡萄糖 氧化酶阳性 弱阳
多根极鞭毛
伯克菌属生物学特性
葱头伯克菌 生长无特殊要求 黄色菌落 赖氨 酸阳性 氨基糖甙类 天然耐药 SXT 敏感 常用药物 植物病原菌葱头腐烂和人类的坏疽 水源和潮湿表面
伯克菌属生物学特性
唐菖蒲伯克菌
黄色无荧光菌落
浅金黄单胞菌 （浅黄假单胞菌）
黄色单胞菌属 栖稻黄色单胞菌 （栖稻黄色假单胞菌）
不定菌属的非发酵细菌
鞘氨醇 单胞菌属 16个种
少动鞘氨醇菌 有意义
希瓦 深海 羽田
希瓦菌属
• 鞘氨醇单胞菌: • 16个 少动鞘氨醇有意义 • 希瓦菌: • 希瓦 深海
非发酵菌的分类 第二组 有动力 周鞭毛
产碱杆菌属 鲍特菌属
新一版伯杰手册 醋酸钙不动杆菌
不动杆菌的分类主要生物学特性
只有7个基因种有菌名：
基因种1——醋酸钙 基因种2—— 鲍曼 基因种4——溶血 基因种5—— 琼氏 基因种7—— 约翰逊 基因种8—— 洛菲不动杆菌
其余基因种未命名
不动杆菌的分类主要生物学特性
生物学特性
G-球杆菌 常成对排列 不易脱色 常染成假阳性 拉丝试验容易成假阴性
嗜麦芽窄食单胞菌的耐药机制
• • • • 细胞壁对抗生素的亲和力极差 膜蛋白对氨基糖甙渗透力低下 药泵外排机制 产二种－内酰胺酶
– L1 －内酰胺酶 （金属酶） L2－内酰胺酶 （头孢菌素酶）
• 细菌定植的定义 • 定植是个”相对”的概念
氧化酶阴性 不分解麦芽糖 ONPG 阳性 尿酶阳性
伯克菌属生物学特性 皮氏伯克菌 生长缓慢
3个生物型 针尖样菌落 1~2根鞭毛
伯克菌属生物学特性
类鼻疽伯克菌
人和动物类鼻疽病 生长有特定区域 存在于赤道南北纬20度之间的土壤 和不流动的水中，主要泰国和越南。
大多数感染无症状，只能通过血清学诊断
黄杆菌属 金色杆菌属 华丽杆菌属 稳杆菌属 威克菌属 伯杰菌属
分类学不明
寡源菌属 莫拉菌属 鞘氨醇菌属
黄杆菌科生物学特性
最新分类 变动很大 大比目鱼黄杆菌 粘黄杆菌 金色杆菌属 产吲哚黄杆菌
脑膜败血黄杆菌 大菱鲆黄杆菌
黄杆菌科生物学特性
芳香黄杆菌 归为新的属—Myroides，
短黄杆菌
黄杆菌属
被重新分为短稳杆菌 水生 约翰 食果胶 嗜冷 嗜糖 琥珀黄杆菌
非发酵阴性杆菌特征 及鉴定思路
内容
• 非发酵细菌分类
• 主要非发酵细菌特征 • 非发酵细菌耐药特征 • 临床最常分离非发酵细菌鉴定
非法酵革兰阴性杆菌感染特点
• 引起临床各科室 人体各部位感染
• 鉴定比肠杆菌科复杂 • 耐药谱广 临床治疗困难
非发酵菌的分类和生物学特性
非发酵菌 Nonfermentative Bacilli
生长无特殊要求
刺激性泥土味
rRNA III
丛毛菌科: • 丛毛单胞菌属 • 食酸菌属
丛毛单胞菌科生物学特性
具有特征性的长极丛鞭毛 OF葡萄糖培养基上不产酸 食酸丛毛单胞菌最常分离 通过OF果糖 甘露醇 乙酰胺阳性 与其它菌相鉴别 唯一橘黄色吲哚反应
丛毛单胞菌属生物学特性
丛毛单胞菌属
E coli ATCC25922
KPC+？ KPC+？
KPC -
不动杆菌的耐药机制
• 对多种窄谱－内酰胺酶耐药由于TEM－1 和CARB型－内酰胺酶 • 对新型三代头孢菌素耐药是因为产大量染 色体头孢菌素酶和超广谱的TEM酶
不动杆菌主要耐药机制
• 不动杆中最主要的碳青霉烯酶是D类酶 OXA-23、24、25、26、27、40、49、51、 54、55、58、60 • 该酶能水解亚胺培南、青霉素，但不水解三代 头孢菌素.
• 不动杆菌 • 嗜麦芽窄食单孢菌
绿脓杆菌耐药机制
• 膜蛋白缺失使通透性下降
• 高产ampC酶; 产ESBL; • 产金属酶 • 泵出机制
铜绿假单孢菌
• 铜绿假单胞菌的细胞外膜上没有大多数革 兰阴性细菌所具有的典型的高渗透性孔蛋 白，它的孔蛋白通道对小分子物质的渗透 速度仅为典型孔蛋白通道的1%。 •
产碱杆菌属生物学特性
产碱杆菌属 粪产碱杆菌 木糖氧化产碱杆菌 木糖氧化亚种 脱硝亚种 皮氏产碱杆菌（1986年描 述）
产碱杆菌属生物学特性
粪产碱杆菌 临床标本中最常见
菌落细小 边缘不规则 在碳水化合物培养基上 强烈碱性反应 还原亚硝酸盐 不还原硝酸盐
非发酵菌的分类 第三组
黄杆菌科
无动力 氧化酶阳性
非发酵菌的生物学特性
G-杆菌 球杆菌
OF糖大多氧化型 少数产碱或不利用
氧化酶大多阳性 少数阴性 多数菌属有动力 少数无动力 极生 周生鞭毛 无鞭毛
非发酵菌的鉴定
简便法
临床标本中最常见 铜绿 鲍曼不动 嗜麦芽窄食单胞菌 选择少数关键性试验便可容易鉴定 快速为临床医生提供信息
非发酵菌的鉴定
分组法
非铜绿 鲍曼不动 嗜麦芽
必须增加其他试验进行种的鉴定 根据动力和氧化酶将各种 临床上重要的非发酵菌分为 四个部分
非法酵革兰阴性杆菌的共同特点
• 在中国兰或麦康开选择培养基上呈不发酵 乳糖的菌落(中国兰上粉红色) • 氧化酶大多阳性 • 有鞭毛或无鞭毛 • 革兰阴性杆菌或球杆菌 • 不能发酵糖 • 色素