非发酵菌及检验
dl第二十一章 非发酵菌及检验
分离培养
BAP、SS、MAC
鉴定
初步鉴定（菌落、菌体特征，色素、氧化酶、 KIA），最后鉴定（系统生化、血清学）
药敏试验
粪便
胸腹水 离心 脑脊液 沉淀 尿液 分泌物 血液 （增菌） 体液
分离培养 （SS、MAC）
可 疑 菌 落 初 步 鉴 定
不动杆菌属
不动杆菌属（Acinetobater）为一群不发酵
糖类、氧化酶 - 、无动力的革兰阴性杆菌。 生化反应：氧化酶 - ，MIU - - - ，硝酸盐 还原试验 - 。 耐药性：对全部氨基青霉素、一代二代头 孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。
鲍曼不动杆菌在BAP上的生长现象
4 2 1
O-F
1
DNA
结果 总值
O
+ + — 6
+ — + 5
+ — — 4
鉴定值：1654
鉴定结果：铜绿假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）为条件致病菌，常引起抵抗力
低下患者的各种感染，在假单胞菌的感染 中检出率仅次于铜绿假单胞菌。 生化反应特殊：氧化酶 - ；赖氨酸脱羧酶 +； 氧化分解麦芽糖；水解七叶苷。 耐药性：含有-内酰氨酶，对亚胺培南天然 耐药，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）； 喹诺酮类：环丙沙星或替卡西林/克拉维酸。
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是假单胞
菌属的代表菌种，为条件致病菌，是医院 感染的主要病原菌。可经多种感染途径、 污染导致多种感染，且对多种抗生素天然 耐药，因此有很重要的临床意义。
非发酵菌PPT课件
1
一. 概论
非发酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或仅以氧 化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌, 需氧或兼性 厌氧.
基本特点: 1. 大多数为机会致病菌; 2. 存在于自然环境; 3. 多为正常菌群的一部分; 4. 对很多抗生素有天然的抗药性。
2
近几年，从临床标本中分离的非发酵菌的 比例逐年上升，目前已经约占分离的阴性 菌的40%。 非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌 科细菌明显，常常表现为多重耐药性，并 且耐药性发展很快。
1998
1999
2000
2001
铜绿 大肠 肺克 不动 肠杆 嗜麦芽 变形 沙雷 其他假单 构椽酸
8
非发酵菌与其他细菌的区别
1. 与其他阴性杆菌的区别: 肠杆菌，弧菌科等
2. 与易脱色的革兰阳性菌区别.
9
辨认非发酵菌的基本方法
1. 在克氏铁琼脂（KIA)上为K/K； 2. 大多数氧化酶阳性； 3. 细菌多不能在麦康凯平板上生长或 生长不良.
2.恶臭假单胞菌： 特点：产荧光素，4℃和42℃不生长， 不产绿脓素
3.斯氏假单胞： 特点：42℃生长，精氨酸双水解酶阴性
27
不动杆菌属
共同特征: 氧化酶阴性, 不发酵糖类, 无动 力，硝酸盐试验阴性。 生物学性状: 1. 形态: 革兰阴性杆菌，多为球杆状，常 见成对排列无芽胞，无鞭毛。 2. 培养特性: 专性需氧菌, 最适生长温度 为35℃，营养要求不高，麦康凯、血平 板均生长。
动力 非发酵菌
OX +－来自嗜麦芽窄食单胞菌+ 端鞭毛
葡萄糖产酸
－ 产碱杆菌属
+ 尿素
－ 无色杆菌属 + 土壤杆菌属
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第二十章_不发酵菌及检验
第二十章不发酵菌及检验（不发酵G-杆菌）本章内容概述假单胞菌属（一）铜绿假单胞菌（二）嗜麦芽窄食单胞菌不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属军团菌属不发酵菌概述不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌；大部分为专性需氧菌。
包括13个属。
大多为条件致病菌。
除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
氧化-发酵（O-F）试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
假单胞菌属铜绿假单胞菌——生物学特性形态与结构形态：细长杆菌。
染色：G-。
特殊结构：无芽胞，无荚膜。
有1～3根鞭毛，运动活泼。
培养特性营养要求：不高。
气体环境：专性需氧。
温度环境：最适35℃，4℃不生长。
菌落特点：普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。
血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽；周围有透明溶血环。
选择培养基：（麦康凯琼脂培养基）微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。
（SS琼脂培养基）类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。
产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性；②绿色荧光素。
铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定标本采集：根据病情采集相应的临床标本。
形态学检查分离培养：依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果。
生化试验（鉴定）耐药性具有多重耐药。
初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。
亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。
铜绿假单胞菌——致病性及临床意义俗称绿脓杆菌。
是医院感染的主要病原体之一。
引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。
假单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌。
端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。
非发酵菌 微生物学检验
非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
实验：非发酵菌的鉴定
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的
1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：
1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据
1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
《非发酵菌及检验》课件
非发酵菌感染可引起机体免疫应 答异常，导致免疫损伤和感染扩 散。
临床表现
肺部感染
非发酵菌引起的肺部感染症状包括咳嗽、咳痰、呼吸 困难等。
泌尿系统感染
尿频、尿急、尿痛等泌尿系统感染症状也是非发酵菌 感染的常见表现。
其他感染
非发酵菌还可引起败血症、脑膜炎、心内膜炎等严重 感染，出现相应的临床表现。
诊断与治疗
阴性等。
非发酵菌对某些抗生素敏感或耐 药，因此需要根据药敏试验结果
进行治疗。
非发酵菌在自然界中广泛分布， 如土壤、水源、空气等，也常常 引起医院感染，如伤口感染、肺
炎等。
02 非发酵菌的检测方法
分离培养法
分离培养法是非发酵菌检测的传统方 法，通过选择性培养基将非发酵菌从 样本中分离出来，然后进行形态学和 生化鉴定。
。
非发酵菌感染常引起医院感染爆发事件 非发酵菌对常用消毒剂和抗生素具有较
，如泌尿道感染、呼吸机相关肺炎等。
高的耐药性，给治疗带来困难。
04 非发酵菌的致病性
致病机制
01
黏附作用
非发酵菌能够黏附在人体黏膜上 皮细胞上，进而侵入细胞间隙和 基质，引发感染。
毒素产生
02
03
免疫损伤
部分非发酵菌能够产生毒素，这 些毒素对人体细胞有毒害作用， 导致感染症状。
缺点是分离时间长，容易受到杂菌干 扰，且对某些非发酵菌的分离效果不 佳。
分离培养法的优点是操作简单，对设 备要求不高，适用于大多数非发酵菌 的分离。
免疫学检测法
免疫学检测法利用抗原-抗体反 应的原理，通过特异性抗体检 测非发酵菌的抗原。
免疫学检测法的优点是灵敏度 高、特异性强，适用于大量样 本的快速检测。
非发酵菌检验程序(详细版)
非发酵菌是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、条件致病菌。
【氧化酶试验】铜绿、粪产碱为阳性，醋酸钙不动杆菌为阴性【非发酵菌生化编码管鉴定】原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参照下述方法，将试验结果换算成4位数字, 加以数值化后查表。
例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734，查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中要求做硝酸盐产气补充实验区分。
无芽胞的革兰阴性杆菌；多为- 4组0-F厌顿2分需氧1分结果：需氧得分匸12组氧化輕分枸携酸2分麦芽犍1分+ + +73纠精氨就4分甘露醇2分木糖1分-+ +4组硝还4分DNA酶2分乙酰胺4分观察结果时按表中说明进行。
—、O-F试验接种2支编码管，1支加无菌石蜡油，另1支不加。
原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。
本试验又称氧化发酵（0/F或Hugh —Leifson , HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。
培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；培养基表面和底部都产酸（变黄）为发酵型；培养基表面变为深蓝色为产碱型；培养基表面变黄、底部不色变为氧化型。
二、硝酸盐还原试验原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐和氮气等。
硝还试验是测定还原过程中生成的亚硝酸盐。
如培养基中有亚硝酸盐存在，则亚硝酸盐与醋酸生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸生成重氮苯磺酸，后者与a -萘胺结合成N- a -萘胺偶氮苯磺酸。
假单胞菌等能使硝酸或亚硝酸盐还原为氮气，此为脱硝化或脱氮化作用。
结果解释：/变红一®性沿试验管加AB液各少许变一加锌粉-不变r阳性，产气\变红阴性注意事项：若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否已被还原，可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色，表示硝酸盐仍然存在；若不出现红色，表示硝酸盐已衩还原为氨和氮。
每日一菌之非发酵菌及检验
每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
微生物学检验非发酵菌及检验
铜绿假单胞菌 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属 金氏杆菌属 土壤杆菌属等
非发酵菌主要特点
氧化酶：＋；不动杆菌属除外 O/F试验：O/－ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力 试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F培养基 （半固体高层）
O/F：O
革兰阴性杆菌 氧化酶＋ O/F： － 硝酸盐还原－；亚硝酸盐还原＋ KIA：底层斜面不变色 注意与不动杆菌鉴别
不动杆菌属－－主要特征
现已命名6个生物种，代表菌为醋酸钙不 动杆菌 革兰阴性球杆菌，成双排列，无鞭毛， 动力阴性 专性需氧，营养要求不高，普通平板、 Mac平板上可生长 氧化酶－；O/F：O／－；硝酸盐还原－ 临床标本分离率仅次于铜绿假单胞菌 检验程序
指示剂：溴麝香草酚蓝 培养基pH：
O/F：F
葡萄糖氧化发酵试验（O/F） O/OF：/F：O F O/F：－
肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别
鉴定试验 肠杆菌科 非发酵菌 弧菌科
氧化酶
－
＋
＋
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F）
鞭毛
F 周鞭毛
O／－
F
单、丛、周 单、丛
假单胞菌属
假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性 分为5群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共 7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 多为条件致病菌，是医院感染的主要病 原菌
假单胞菌属共同点
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或 丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高 氧化酶：＋ O/F：O Mac生长：＋ 产生水溶性色素
铜绿假单胞菌－－形态染色
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
铜绿假单胞菌－－培养特性
专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素， 培养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味
第12章非发酵菌
标本直接检查：
• 直接涂片镜检 • 脓液、分泌物可直接涂片 • CSF、胸、腹水可直接涂片或离心后
取沉淀物涂片
• 抗原检测： 血清学分型、噬菌体分型——有24种 • 核酸检测： 质粒指纹图分析 脉冲电场凝胶电泳分析 基因芯片技术、PCR等
KIA - - - -
MIU - - -
微生物学检验
• 标本采集： 根据病情采集适当标本
• 涂片镜检： CSF沉淀物及除血液外其他标本均
可直接涂片染色镜检，可见G-球菌或 球杆菌、常呈双排列，有的存在于 吞噬细胞内，易误诊为奈瑟菌
分离培养：
• 血液、CSF→增菌→分离培养（BAP） • 其他标本接种BAP和MAC
无荧光 • 荧光素—为绿色荧光素，溶于水而不
溶于氯仿
• 普通琼脂平板：
圆形、大小不一、边 缘不整齐、扁平、湿润 的菌落，呈亮绿色
• BAP：
大而扁平、湿润、有 金属光泽、蓝绿色菌落， 有透明溶血环，有生姜 味
•SS、 MAC：
微小、半透明菌落，
48h菌落中心常呈棕绿
色
MAC
•肉汤： 18～24 h液面可形成菌 膜，细菌在深层发育不 良、呈微混浊或透明状， 菌液上层为蓝绿色
• 几乎可感染人体的任何组 织和部位
• 表现为局部和全身化脓性 炎症。多见于烧伤和创伤 后感染
• 婴儿：流行性腹泻
生物学特性
• 形态结构： G-杆菌，细长且长短不一
有鞭毛——运动活泼 临床分离株常有菌毛
培养特性
• 专性需氧菌，4℃不生长、42℃生长， 可与荧光假单胞菌等区别
产生多种色素： • 绿脓素—为蓝绿色，可溶于水和氯仿，
非发酵菌特征及鉴定思路课件
微生物质谱分析
利用质谱技术对微生物细胞壁进行分 析，获取菌株的分子量信息，进行鉴 定。
03
非发酵菌的鉴定步骤
菌落形态观察
观察菌落大小、形状、边缘、表面和透明度
非发酵菌的菌落形态多样，大小、形状、边缘、表面和透明度等特征有助于初步 鉴别。
观察菌落颜色
非发酵菌的菌落颜色多样，包括白色、黄色、橙色、红色等，不同颜色可能代表 不同的菌种。
确的分类和鉴定。
分类依据
根据基因序列相似性、进化关系 等因素，将非发酵菌分为不同的 分类单元，如属、种、亚种等。
分类标准
根据国际微生物分类学界的共识 和标准，结合形态学、生理生化 特征和分子生物学数据，确定非
发酵菌的分类地位。
系统发育分析
方法
通过构建系统发育树，分析非发酵菌在进化过程 中的位置和亲缘关系。
数据来源
利用多基因序列分析、宏基因组学等方法，获取 非发酵菌的系统发育数据。
树形结构
根据系统发育数据，绘制出非发酵菌的系统发育 树，明确各菌种之间的亲缘关系和进化路径。
05
非发酵菌的致病性与临床意义
非发酵菌的感染途径与症状
感染途径
非发酵菌主要通过呼吸道、皮肤或接 触等途径感染人体。
症状表现
非发酵菌感染的症状多样，常见的有 发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等，严 重时可导致败血症、感染性休克等。
生化试验
通过测定菌株对不同碳源、 氮源的利用以及在特定环 境下的生长情况，了解菌 株的生理生化特性。
血清学试验
利用特异性抗体与抗原的 结合反应，对菌株进行特 异性鉴定。
分子生物学鉴定方法
16S rRNA基因测序
通过对菌株16S rRNA基因的测序，进行系统发育学分析，确定菌 株在分类学上的位置。
12第十二章 非发酵菌检验
第十二章 非发酵菌检验
临床微生物学检验技术
第一节 概 述
临床微生物学检验技术
非发酵菌（non-fermenters）是一大群需氧或兼性厌氧、 无芽胞、不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的革兰 阴性杆菌或球杆菌，广泛存在于人体体表、开放体腔，以 及医院相关的外环境中，多为条件致病菌。除不动杆菌属 和嗜麦芽窄食单胞菌等少数菌种外，其他菌种氧化酶均为 阳性
菌属（Burkholderia）、窄食单胞菌属（Stenotrophomonas） 、罗尔斯通菌属（Ralstonia）、食酸菌属（Acidovorax）、 短波单胞菌属（Brevundimonas）、代夫特菌（Delftia）和丛 毛单胞菌属（Comamonas）等
临床微生物学检验技术
二、临床意义
临床微生物学检验技术
假单胞菌属的分类和命名变化主要包括：①浅黄假单胞菌
（P. luteola）和栖稻假单胞菌（P. oryzihabitans）最初被 分类为金色单胞菌属（Chryseomonas）和黄色单胞菌属（ Flavimonas），后经16S rRNA序列分析划归到假单胞菌属。②
rRNAⅡ－rRNAⅤ群重新分类为新的菌属，主要包括：伯尔霍德
• 除铜绿假单胞菌外，其他假单胞菌导致感染的情况不多见。但需要注意荧光假单 胞菌的血流感染，特别是近期输注过血液制品后出现的血流感染，因为该菌能在 4℃生长，与血液制品的污染关系密切
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
假单胞菌属的细菌为革兰阴性、直或微弯曲杆菌，菌体大小为（ 0.5-1.0）μm×（1.5-5.0）μm，末端多呈圆形，散在排列；无芽孢， 无荚膜，有端鞭毛或丛鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见 运动活泼，大多数菌株有菌毛，黏液型细菌有由藻酸盐组成的类似于荚 膜的外膜结构
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
氧化酶（+） 触酶（+） 不分解任何糖 动力、吲哚、 甲基红、VP 、DNA酶（-） 6.5%NaCL肉汤不生长
+ 二、微生物检验
+ 1.标本采集 + 2.方法与鉴定
+ 临床意义
人和动物黏膜上的正常菌群，也引起社 区和医内感染。本菌是呼吸道感染的主要 致病菌。大多菌株对青霉素、四环素、氨 基糖苷类敏感。
+ 1.标本采集 + 2.方法及鉴定
+ 临床意义
条件致病菌 医院感染常见菌 对广谱抗生素有耐药性，红霉素、克 林霉素、复方磺胺敏感。
鉴定试验
肠杆菌科
非发酵菌
弧菌科
氧化酶
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F） 鞭毛
－
F
＋
O／－
＋
F
周鞭毛
单、丛、周
单、丛
+ 脑膜败血性黄杆菌 + 芳香黄杆菌 + 短黄杆菌
+ 水生黄杆菌
+ 嗜糖黄杆菌 + 嗜醇黄杆菌
+ 嗜温黄杆菌
+ F.yabuuchiae
+ 定义：氧化酶阳性、产黄色素、无动力、
吲哚阳性或阴性的非发酵革兰阴性菌。
+ 一、生物学性状 + 1.形态与染色 革兰阴性杆菌 菌体细长
两端略膨大 无动力 无芽胞
发 氧 产
+ 《伯杰系统细菌学手册》（1984）分类法
+ + + + + +
按rRNA和DNA同源性，分5个RNA Ⅰ 铜绿假单胞菌 Ⅱ 洋葱假单胞菌 鼻疽假单胞菌 Ⅲ 食醋假单胞菌 Ⅳ 微小假单胞菌 Ⅴ 嗜麦芽假单胞菌 腐败假单胞菌
+ 特性：
+ 革兰阴性 直、弯曲的杆菌 + 有鞭毛， 单端单毛或单端丛毛
+ 一、生物学性状
+ 3.生化反应 氧化酶（+）
葡萄糖O/F 产碱型 吲哚（-） H2S（-） VP（-） 明胶（-）
+ 二、微生物学检验
+ 1.标本采集 + 2.检验程序
+ 3.检验方法
+ 4.鉴定
+ 临床意义
广泛分布于自然界，水和土壤中，也存 在于人和动物的肠道中，并污染人体皮肤 和医疗器械，是医院感染的病原菌之一。 可引起各种机会感染，如心内膜炎，外 伤感染和败血症等。
+ 一、生物学性状
2.培养特性 专性需氧菌 最适生长温度:28-30.C 血平板：圆形 大 光滑隆起 有光泽的淡黄色、 黄色 菌落
脑膜败血性黄杆菌 在营养琼脂上特征
+
+ 一、生物学性状
+ 3.生化反应
氧化酶（+） 触酶（+） 分解葡萄糖、麦芽糖、甘露 醇，七叶苷、明胶阳性
+ 二、微生物学检验
+ 伯杰分类：
莫拉亚属 布兰汉亚属 条件致病菌 引起眼结膜炎、中耳炎、肺炎等
+ 一、生物学性状
+ 1.形态与染色 革兰阴性球杆菌 成对、短
链状排列 无芽胞 无鞭毛， 多数有荚膜
+ 一、生物学性状
2.培养特性 专性需氧 最适温度33-35.C 奥斯陆莫拉菌在血平板的形态
+ 一、生物学性状
+ 3.生化反应
+ 嗜麦芽假单胞菌
荧光假单胞菌
+ 恶臭假单胞菌
斯氏假单胞菌 鼻疽假单胞菌
+ 定义： 一群氧化酶阴性、不发酵糖类、无
动力的革兰阴性杆菌
醋酸钙不动杆菌 洛菲不动杆菌 约翰逊不动杆菌
鲍曼不动杆菌 琼氏不动杆菌 溶血不动杆菌
+ 一、生物学性状
+ 1、形态与染色：
革兰阴性球杆菌 成双排列 有荚膜 无芽胞 无鞭毛 2、培养特性：专性需氧 最适生长温度35.C 鲍曼不动杆菌42.C可生长
《伯杰系统细菌学手册》（1984） + 粪产碱杆菌 + 脱硝产碱杆菌 脱硝产碱杆菌脱硝亚种 脱硝产碱杆菌木糖氧化亚种
+ 一、生物学性状
+ 1. 形态与染色 革兰阴性短杆菌，成双、
单 或链状排物学性状
+ 2.培养特性 专性需氧菌 最适生长温度：
25-37。C 血平板：灰白色、不规则、凸起，较湿润 的菌落 卖康凯：无色透明或半透明 有水果味
+ + + + + + + +
三、微生物学检验 １、标本采集 ２、检验程序 ３、检验方法 （１）直接镜检 （２）分离培养：血平板 卖康凯 （３）鉴定 （４）分型
+ 临床意义：
铜绿假单胞菌分布广泛，为条件致病菌. 当手术、化疗、放疗激素治疗等原因使人 抵抗力下降时易引起感染。 感染的患者，经抗生素治疗3-4日后，原 来敏感的抗生素易变成耐药。
+ 三、微生物学检查
+ 1、标本采集 + 2、检验程序
+ 3、检验方法
+ （1）：直接涂片
+ （2）：分离培养 血平板 卖康凯
+ （3）：鉴定：
+ 临床意义
鲍曼不动杆菌是人类皮肤、呼吸道、胃 肠道、生殖道的正常菌群，也是条件致病 菌，亦是医院感染的主要细菌。鲍曼不动 杆菌已经发现多重耐药的菌株，故每个分 离株都要进行药敏分析。 对四环素敏感，则对多西环素和米若环 素敏感。
+ 鲍曼不动杆菌在血平板上的形态
+
卖康凯上粉红菌
+ 鲍曼不动杆菌在卖康凯上粘液型菌落
+ 洛菲不动杆菌在卖康凯上菌落
+ 一、生物学性状
+ 3、生化反应：氧化酶（-）葡萄糖O/F氧化型
动力（-） 吲哚（-） 甲基红（-） V-P （-） 硝酸盐还原（-）
+ 二、致病性
条件致病菌 医院感染的主要致病菌 呼吸道 消化道 泌尿生殖道感染
+ 无芽胞 专性需氧
+ 35
最适生长 少数4 。C ，42 。C + 氧化酶：阳性
。C
+ 一、生物学性状
1、形态与染色：革兰阴性杆菌 菌体球杆状 或长丝状 单个、成对或短链状排列 2、培养特性：专性需氧菌 最适生长温度：35。C， 4 。C 不长 42 。C生长
3、生化反应 氧化酶（+） O/F 分解葡萄糖 木糖产酸 精氨酸双水解酶（+）硝酸盐 还原（+） 枸橼酸盐（+）
+ 一、生物学性状
４、抗原构造与分型： Ｏ抗原 Ｈ抗原 Ｓ抗原 菌毛抗原 ５、抵抗力： 强 ，对热敏感，对某些消毒剂敏感 临床分离菌株对多种抗生素不敏感
+ 二、致病性与免疫性
致病物质：内毒素－发热、休克、DIC 外毒素－抑制多种脏器易感 细胞的蛋白质合成 荚膜－抗吞噬 菌毛－宿主细胞粘附 溶血物质－可溶解红细胞 免疫性：感染后产生特异性抗体
+ 定义：一群不利用或仅以氧化形式利用糖
类的革兰阴性无芽胞杆菌。 + 主要细菌：假单胞菌属 不动杆菌属 产碱杆 菌属 莫拉菌属 黄杆菌属等 + 条件致病菌 引起感染及院感
+ 非发酵菌分群依据：
+ 氧化酶试验：除不动杆菌及个别假单胞
OXI（+） + 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：利用葡萄糖产生 弱酸 + 动力 + 卖康凯培养基生长