各种荧光染料光谱数据

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流式细胞术中应用的荧光染料介绍

流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。

在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。

荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。

以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。

1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。

FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。

它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。

2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。

PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。

PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。

3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。

APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。

5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。

它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。

除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。

例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。

这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。

需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。

流式常用荧光染料概要

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。

荧光染料

荧光染料简介荧光定义荧光染料会发出荧光，所谓荧光是指物质分子吸收紫外光后发出的可见光荧光以及吸收波长较短的可见光后发出的波长较长的可见光荧光。

荧光发生机理每个分子具有一系列严格的分立能级，室温下物质分子大部分处于"基态"，当这些物质在光的照射下吸收光能后，进入新的状态，称为"激发态"。

处于"激发态"的分子是不稳定的，它可以通过以10-9-10-7秒的极短时间内发射光量子回到基态。

这一过程称为荧光发射，也就是发光。

激发光谱和发射光谱任何发荧光的物质分子都具有两个特征光谱--激发光谱和荧光发射光谱。

在测定时，用以激发荧光的吸收光谱，一般称为荧光物质的激发光谱，它是指相对于不同激发波长的辐射所引起物质发射某一波长荧光的光谱。

荧光发射光谱简称为发射光谱，是指某一波长激发光引起物质发射不同波长荧光的光谱。

荧光效率和荧光强度分子能产生荧光必须具备两个重要的条件，一是物质的分子必须具有吸收一定频率光能的基团--生色团，二是必须具有能产生一定光量子的荧光团。

而物质发射荧光的能力用荧光效率表示。

荧光效率为荧光团发射荧光的光量子数与生色团吸收的光量子数的比值称。

荧光效率往往小于1。

如罗丹明B的乙醇溶液的荧光效率为0.97；荧光素的水溶液的荧光强度为0.65，荧光效率与物质结构有关，还与所处的环境紧密相关。

而对于某种荧光物质在特定的环境下它的荧光效率是固定的。

在一定范围内，激发光越强，荧光也越强。

即荧光强度（发射荧光的光量子数）等于吸收光强度乘以荧光效率。

提高荧光强度的根本方法选择适当强度的光源作为荧光物质的激发光源，和选择适合于被检荧光物质选择性吸收的光谱滤光片作为激发滤光片，是提高荧光强度的根本方法。

许多染料的最大吸收峰并不是紫外光，而是在400nm-500nm的蓝绿光，所以紫外光不是这些染料的最佳激发光源，可见光才是这些染料的最佳光源。

常用荧光色素波长名称最大吸收波长（nm）最大发射波长（nm）适用性吖啶橙（Acridine orange）405585中吖啶黄（Acridine yellow）455620好碘化丙啶（Propidium iodide）488620中溴化乙啶（Ethidium bromide）488610中光神霉素（Mithramycin）457570好派若宁Y（Pyronin Y）488580好罗丹明123（Rhodamine 123）560540-660中赫斯特33258（Hoechst 33258）338505差荧光素（Fluorescein）495525好荧光黄（Lucifer yellow）428544好伊红（Eosin）525546中四甲基罗丹明（Tetramethyl rhodamine）555580中SYBR GreenⅠ498522好SYBR Gold495540好SYPRO Orange475580好SYPRO Red545635中NBD467538好GelStar495530好黄色荧光蛋白EYFP515530好绿色荧光蛋白EGFP490510好蓝色荧光蛋白EBFP380440差常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC（异硫氰酸荧光素）绿色：激发波长488nm，最大发射波长525nm。

荧光染料参数表

荧光染料参数表荧光染料参数表（下图举例）能够让您查看某一选定荧光染料的性能参数，并确定其是否适合于您的实验，以及最适合的实验方法。

参数表将提供染料关键特性的介绍——更为详细的资料可到相应产品页面查看。

•初始亮度是指示荧光染料的相对亮度，该值由摩尔消光系数和量子产率得出，这两个参数对于每一单个荧光染料来说都是特异性的。

具有较高初始亮度的荧光染料适用于检测较低丰度的靶标。

•缓冲液中的光稳定性是初始荧光强度在经过30秒连续照明后残留比率的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察置于磷酸盐缓冲液中的样本获得。

缓冲体系中光稳定性较高的染料将更适合于活细胞成像和检测等相关应用。

•抗淬灭剂中的光稳定性是初始荧光强度在经历30秒连续照明后残留强度的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察ProLong® Gold或SlowFade® Gold抗淬灭剂中的样本获得。

抗淬灭试剂中光稳定性较高的染料更适合于固定细胞样本的成像和检测实验。

•染色指数是一个归一化数值，可用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光亮度的差异；该值通过使用阳性区域的平均荧光强度（MFI）减去阴性区域的平均荧光强度得到的差值，再除以两倍的阴性区域标准差获得。

•激光束表示流式细胞检测中常用的激光束•通用检测通道表示能够生成最佳成像结果的标准显微镜滤光片设置•最大激发波长表示获得峰值的激发波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）•最大发射波长表示获得峰值的发射波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）荧光染料参数表样例初始亮度摘要部分突出强调荧光染料的关键属性及其典型应用和多通道兼容性。

缓冲液中的光稳定性抗淬灭剂中的光稳定性92 488 FITC 490 525染色指数激光束通用检测通道最大激发波长最大发射波长荧光光谱查看器。

荧光染料基础知识大全

荧光染料基础知识大全纺织染整团队今天荧光显微镜技术的基本原理是借助荧光剂让细胞成分呈现高度具体的可视化效果,比如在目的蛋白后面连一个通用的荧光蛋白—GFP。

在组织样本中,目的基因无法进行克隆,则需要用免疫荧光染色等其他技术手段来观察目的蛋白。

为此,就需要利用抗体,这些抗体连接各种不同的荧光染料,直接或间接地与相应的靶结构相结合。

此外,借助荧光染料,荧光显微镜技术不只局限于蛋白质,它还可以对核酸、聚糖等其他结构进行染色,即便钙离子等非生物物质也可以检测出来。

1免疫荧光<IF>在荧光显微镜技术中,可以通过两种方式观察到你的目的蛋白：利用源荧光信号,即通过克隆手段,用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连；或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。

有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要。

比如,组织学样品无法使用荧光蛋白,因为通常来说,标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。

此外,当有一个有功能的抗体可用时,免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多,因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中。

荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质。

因此,细胞的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性,其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况。

然而,荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。

免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性,对此它还有两种不同的表现形式。

最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体。

这种方法被称为"直接免疫荧光法"。

在很多情况下,我们可以利用两种不同特性的抗体。

第一种抗体可以结合目的蛋白,但其本身并未进行荧光标记〔一抗。

第二种抗体本身就携带荧光染料〔二抗,并且可以特异性结合一抗。

这种方法被称为"间接免疫荧光法"。

这种方法存在诸多优势。

一方面,它会产生放大效应,因为不只一个二抗可以与一抗相结合。

另一方面,没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体,但可以使用市售荧光标记的二抗。

荧光染料的简介及BODIPY类的发展历程

2.5. 萘酰亚胺类
萘酰亚胺类染料多应用于生物方面的研究，例如与 DNA 相结合。利用萘酰亚胺类染料的特殊性质，将其转变为 DNA 嵌入材料，在生物标记等方面的应用性很强[27] [28] [29] [30] [31]，并且萘酰亚胺类染料荧光量子效率高，因此，萘酰亚胺类染料可被广泛应用于生物标记物领域。但是这类染料也具有吸收
O R2
N R1 R3
O Figure 5. The parent structure of naphthalimide 图 5. 萘酰亚胺的母体结构
N
N
S
N
NH
N
O
NH
N
N
O
Figure 6. Molecular structure of Nile blue, methylene blue and oxazine 750 图 6. 耐尔蓝、亚甲基蓝和噁嗪 750 的分子结构
荧光素和罗丹明[10]-[20]是最常见的两种荧光染料(如图 1)。它在水中的溶解性较好，有吸收、发射波长较长(一般>500 nm)，光稳定较好，荧光量子产率高等优点。但因为荧光素和罗丹明染料中有羟基和氨基，使得其对 pH 比较敏感，将这两种染料应用于离子检测或荧光探针中时，要严格控制工作环境的 pH[21]。
2.3. 菁染料
菁染料[25](如图 3)的最大吸收波长较大，λ的数值都会超过 600 nm，因此，菁染料在近红外区应用于荧光标记效果很理想。同样，通过引入不同的 R1、R2 基团，对菁染料的母体结构有很大影响，从而改变菁染料的光谱性质。另外，菁染料的荧光量子效率相比其他染料较低，与此同时，多川结构的菁染料容易发生聚集，由此菁染Dyes, BODIPY, Structure and Properties, Development Process

光谱分析荧光光谱

F = K′（I0—I）
I0——入射光辐射强度； I——透射光辐射强度；
K′——荧光量子产率（Ф）。
基本原理
F = K′（I0—I）根据朗伯-比尔定律， lg I 0 =εbc I
则 I I 0 e 2.303bc
F K I 0 (1 e 2.303bc )
假设εbc＜0.05
磷光：从第一激发三重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。由于磷光的产生伴随自旋多重
态的改变，辐射速度远小于荧光，磷光寿命为10-4
~10s。
基本原理
荧光强度及影响荧光的因素
荧光是物质吸收光子之后发出的辐射，荧光强度（F）与荧光物质的吸光程度及其发射荧光的能力有关。
1. 荧光强度与浓度的关系
免疫荧光技术，即荧光抗体方法，就是把特异性抗原多
次注入动物体，使之产生抗体，将抗体球蛋白从血清中分离出来，用荧光染料标记，制成荧光标记抗体溶液。免疫荧光染色比其他的生物染色方法有较高的特异性和灵敏度。抗体（免疫球蛋白）与荧光染料结合后，仍不失抗体的免疫活性，称为荧光抗体。用于标记抗体的荧光染料于一般的荧光染料不同，必须容易与抗体球蛋白结合，又不影响其免疫活性；还要求性能稳定、容易溶解和标记方法简单。由于蛋白质本身也具有荧光，为了减少蛋白质本身的荧光干扰，标记抗体的荧光染料不但荧光量子产率高，还要求荧光发射波长较长。常用的标记抗体的荧光染料有荧光素异硫氰酸酯、四甲基罗丹明异硫氰酸酯和罗丹明B200等。
生物分子探针
按化学反应性可将荧光染料分为三类。碱性荧光染料；含碱性助色团，在酸性溶液中电离，荧光色离子为阳离子。酸性荧光染料：含有酸性助色团，在碱性溶液中荧光色离子为阴离子。中性荧光染料：酸性荧光染料和碱性荧光染料混合而成的一种复合染料。量子点：量子点最有前途的应用领域是在生物体系中作为荧光探针。量子点又称为半导体纳米粒子。按使用类型：蛋白质及酶的荧光探针核酸分子荧光探针

食用合成色素日落黄和柠檬黄荧光光谱解析

食用合成色素日落黄和柠檬黄荧光光谱食用色素,又称食用染料或着色剂,作为最重要的食品添加剂之一,一直被广泛用于食品生产、医药和化妆品工业。

食用色素按其来源可分为天然色素和食用合成色素,食用合成色素大多为含有R-N=N-R键、苯环,或氧杂蒽等结构的化合物,被人体吸收后可转化成致癌物质,对人体造成不同程度的损害。

因此,必须严格控制其使用品种、数量,限制每日允许摄入量(ADI),并建立快速有效的检测方法。

近几年,在世界范围内,食品安全事件屡屡发生(如苏丹红事件、农药残留、三聚氰胺奶制品等),触目惊心、举世震惊。

世界各国都将食品安全视为国家公共安全,纷纷加强管理制度,积极建立有效的检测方法。

目前,科研人员已运用紫外分光光度法,高效液相色谱法,导数吸附伏安法等方法对食用合成色素进行了检测研究。

然而,在国内外,鲜有运用分子荧光光谱法定性表征、定量检测食用合成色素的报道。

分子荧光光谱法具有测量精确,样品量少、高分辨率等特点,能解决传统方法中,分析过程繁琐、费时且不易推广等不足,是高效、精确的分析方法,近年来在测定物质种类、含量残留等方面取得了很好的应用。

但是,食用合成色素含有多个荧光团,其荧光光谱规律较复杂,荧光相对强度与其浓度存在的非线性关系难以用偏最小二乘(PLS),多元线性回归等方法定性、定量分析。

本文采用Roper Scientific SP--2558多功能光谱测量系统对浓度为0.100mg/ml的日落黄、柠檬黄溶液的荧光光谱进行了实验研究,实验发现,在波长310nm-400nm的紫外光激励下,日落黄溶液荧光光谱的最佳激发波长为370nm,荧光峰值波长为576nm,柠檬黄溶液荧光光谱的最佳激发波长为350nm,荧光峰值波长为569nm。

根据分子光谱理论,日落黄和柠檬黄能产生荧光,是因为其分子中含有=C=O、、苯环或萘环等荧光发色基团及-OH、-SO3Na等荧光助色基团,通过偶氮键连结在一起,形成足够长的共轭双键体系,电子主要以π→π*跃迁方式吸收光子,产生荧光。

近红外荧光染料的结构_性质及生物荧光成像应用_王晓驰

［14 ］大吸收波长发生红移。而共轭骨架上吸电子基［15 ］团如醛基的存在，会使得共轭体系上的电子云密
。开发高荧光效率、低毒性的
近红外荧光材料一直是近红外荧光成像技术发展中的热点和难点之一。与贵金属纳米晶簇、半导体量子点、稀土掺杂纳［11 ］有机米粒子、碳点等无机近红外荧光材料相比，近红外荧光染料具有高的摩尔消光 / 吸光系数和荧光量子产率、生物相容性好、结构易调、价格低廉等特点而备受重视。本文综述了五类主要有机近红外
2
2. 1
有机近红外荧光染料
菁类
菁染料（聚甲川菁染料）是一类优良的荧光染料，由奇数个碳原子组成共振次甲基（甲川基）共轭链并被两个含氮杂环封端构成的一类共轭有机小分子体系。其共振结构通式如图 1 所示。
1
引言
图1 Fig． 1 菁染料的化学共振结构 The resonance structures of cyanine dyes
Structure and Properties of NearInfrared Fluorescent Dyes and the Bioimaging * Application
Wang Xiaochi Chang G ang Cao Ｒuijun
＊ Meng Lingjie ＊
（ Department of Chemistry ，School of Science ，Xi’ an Jiaotong University ，Xi’ an 710049 ，China） Abstract The nearinfrared （ NIＲ） fluorescence imaging technologies have attracted considerable interest in

各种荧光染料光谱数据

尼罗红和 BODIPY 荧光染料在微藻油脂含量测定中的应用

尼罗红和 BODIPY 荧光染料在微藻油脂含量测定中的应用郝翠翠;梁成伟;石蕾【摘要】In the face of energy crisis , using microalgae to produce biofuel and high value-added products has attracted great attention . Microalgae constitute a diverse group of microorganisms with advantages like fast and efficient growth .In addition, they do not compete for arable land and offer very high lipid yield potential .Microalgae are currently considered as the most promising alternative sources for the next generation of food , feed, cosmetics and renewable energy in the form of biofuel .Major challenges for the development of this resource are to select lipid-rich strains using high-throughput staining for neutral lipid content in microalgaespecies .Compared with traditional quality method, the fluorescent staining method is simpler , cheaper and easier to operate .In this article, the properties of fluorescent Nile red and BODIPY and the use of fluorescentfor lipid measurement in microalgae were summarized .%面对能源危机，利用微藻生产生物燃料及其相关高附加值产品引起了人们的极大关注。

四甲基罗丹明荧光光谱

四甲基罗丹明荧光光谱
四甲基罗丹明（简称TMR）是一种具有荧光的染料，常用于生物荧光标记、荧光探针等领域。

关于TMR的荧光光谱，我们可以从光谱特性和影响因素等方面来了解。

首先，TMR的荧光光谱通常在可见光区域，峰值大约在570nm 左右，具体峰值位置可能因溶液浓度、溶剂种类、温度等因素而有所变化。

此外，TMR的荧光光谱也表现出一定的激发波长依赖性，即在不同激发波长下，荧光发射峰的位置和强度也会有所不同。

其次，影响TMR荧光光谱的因素主要包括溶液浓度、溶剂种类、温度、pH值等。

例如，随着溶液浓度的增加，TMR的荧光强度也会增强，但当浓度达到一定值时，荧光强度不再增加；在不同的溶剂中，TMR的荧光光谱也会有所不同；温度对TMR荧光光谱的影响也较为显著，随着温度的升高，荧光强度逐渐减弱；在酸性或碱性条件下，TMR的荧光光谱也会发生变化。

综上所述，四甲基罗丹明（TMR）是一种具有荧光的染料，其荧光光谱具有明显的特征和影响因素。

通过对TMR荧光光谱的研究和分析，可以更好地了解其在生物荧光标记、荧光探针等领域的应用和性能。

同步荧光光谱法

F a
b
c
二、同步扫描仪器设备 1、固定波长的荧光光谱的获得
对于以光栅为单色器的荧光分光光度计，只要分别设置激发和发射两个单色器所需的起始波长，并使它们以同样的速率进行扫描，便可进行固定波长同步扫描荧光测定。
2、固定能量同步扫描是非线性的可变角同步扫描，需通过微处理机控制而加以实现。
三、应用 1、在多环芳烃分析中的应用
m 越小发射光被调制的幅度越小
随的增大而增大，寿命越长，延迟的越大。当荧光分子的寿命越长，发射相对于激发延迟的时间就越长。
2、多指数衰变的荧光
如果样品中含有两种荧光体，或者单一荧光体而进行进一步激发态反应，则荧光是双指数衰变。如果进行多步反应，则荧光是多指数衰变。
由和 m 所计算的是表观荧光寿命。如采用相灵敏检测器的相荧光计，
3、相分辨荧光法与时间分辨荧光法比较用于荧光参数测量的仪器可分为两大类
稳态测量 steady-state 时间依赖的测量 time dependent
相分辨荧光法与时间分辨荧光法本质上都是时间依赖或时间分辨的测量。
（1）仪器时间分辨荧光法的局限性
a. 仪器常常非常复杂，常局限于有关专家使用； b. 灵敏度常低于稳态测量。
dd1212三应用1在多环芳烃分析中的应用减小光谱的重叠1固定波长同步荧光法用于煤中多环芳烃的测定苊ace23苯并芴bf蒽ant苯并芘bap苝per用标准加入法计算23苯并芴2低温固定能量同步荧光法dd1313煤液化样品中各种有机物的同步荧光光谱煤液化样品的固定波长同步荧光光谱dd14142同步荧光法在医药检验方面的应用1违禁药品中苯丙胺和吗啡加奎宁麦角酸二乙酰胺的测定2二苯并呋喃中痕量咔唑和蒽nmdd15153酪氨酸和色氨酸严重重叠cwslnmnm1560的同步荧光色氨酸的光谱特征的同步荧光酪氨酸的光谱特征nm3070nm的二阶导数同步荧光可对trp和tyr分辨nm50同步荧光可对trptyrphe分辨dd16164维生素b的测定用铁氰化钾将b氧化硫胺荧5尿液中肾上腺素和去甲肾上腺素的同时测定nm50nm100dd1717总结

Alexa Fluor系列染料

Alexa Fluor 350—-亮蓝和紫外光激发Alexa Fluor 350的蓝色荧光比AMCA 亮50％，而且最大发射波长稍短（为442nm ,AMCA 为448nm），因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。

Alexa Fluor 405-—近乎完美的匹配蓝色二极管激光器Alexa Fluor 405的激发/发射最大波长为402/421nm，与荧光显微镜和流式细胞仪405nm 谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配.Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生物，后者是乙酰叠氮化物。

Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔，使得荧光基团与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。

Alexa Fluor 430-—高斯托克斯频移的430nm吸收少数400nm—450nm吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500nm。

Alexa Fluor 430弥补了这一缺陷,430nm激发时发射在540nm 附近。

Alexa Fluor 488——最好的绿色荧光基团Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素，实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。

不仅亮度更高，而且光稳定性更好.在pH4—10的范围内保持稳定是其另一优越之处。

Alexa Fluor 532-—最适于532nm激发光源的染料激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488和橙色荧光的Alexa Fluor 546之间，适用于双频Nd：YAG激光器在内的532 nm激发光源。

Alexa Fluor 546—-Cy3和四甲基罗丹明的替代物Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱,比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA）及Cy3荧光更强，容易被汞弧灯激发，发射波长546 nm。

Alexa Fluor 555--优于Cy3的替代物Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配，因此适用于Cy3 的滤光器。

常见细胞核荧光染料

细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。

透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。

EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。

DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

DAPI对双链DNA 的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。

这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm 处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。

与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。

RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和 Draq?7。

RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。

RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。

不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。

EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。

常用抗体标记荧光染料的选择

1、蓝色（350-450nm处激发）CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发。

CF350是类似于Alexa Fluor 350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350的荧光强度高于Alexa Fluor350、AMCA，吸附在蛋白上的荧光超过50%，水溶性更好，耐光性非常优秀亮，更容易与现有的绿色荧光基团区分。

CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405 ----近乎完美的匹配蓝色二极管激光器。

CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm;谱线的蓝色二极管激光器完美的匹配。

在流式细胞仪上的分析结果显示CF 405S/ CF 405 M荧光信号强度高于Alexa Fluor 405染料1.7倍。

2、绿色（488nm处激发）CF 488A、Alexa Fluor 488、FITC、FAM、DyLight 488、Cy2等----针对488nm 氩离子激光器的绿色荧光染料。

以上染料其标记的抗体蛋白适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪，流式细胞仪的FL1通道检测，或者可用于荧光显微镜技术。

CF 488A最低限度的带电量降低了与抗体耦联物的非特异性结合，在红色通道溢出少于Alexa Fluor 488，耐光性好、水溶性好和pH 不敏感，良好的稳定性和活性染料的标记率。

Alexa Fluor 488在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4~10）；FITC激发波长488nm，最大发射波长525nm，缺点：荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。

3、橙红色（543-555nm处激发）CF 543、Alexa Fluor 546、ATTO550, Cy 3, DyLight 549, Rhodamine (TRITC) 匹配543nm的橙色荧光染料；CF ™543 荧光条带明亮，耐光，水溶性好，确保了CF 543染料与抗体的耦联物保持优异的水溶性，为该波段最亮的橙色荧光染料。

EvaGreenqPCR染料

EvaGreen qPCR 染料适于qPCR 和HRM 最佳（没有之一）荧光染料图1. EvaGreen® dye binds to dsDNA via a “release-on-demand”mechanism.图2. EvaGreen无毒，无致突变性，对水生生物无危害性。

EvaGreen 是一种用于实时定量PCR （qPCR ）的DNA 结合染料。

该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I 。

除了有相似的光谱特性，EvaGreen 有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。

首先，EvaGreen 对PCR 的抑制性远小于SYBR Green I 。

因此，使用EvaGreen 进行的qPCR 实验可以使用快速PCR 步骤。

同时，EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于SYBR Green I 扩增信号（图3）。

较高浓度的EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使EvaGreen 既可用于多重PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（HRM ）（图4 ）。

该分析正被越来越多的用于PCR 后的基因分型和异源双链分析。

由于SYBR Green I 对PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重PCR 也不能用于HRM 。

同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的DNA 链可能由于这种原因而无法检测到。

特性:极高的灵敏度∙在推荐浓度下使用时可以获得最强的PCR 扩增信号。

PCR 抑制性极小∙智能化的“按要求释放”DNA 结合技术使得EvaGreen 对PCR 的抑制远小于SYBR GreenI 。

和快速PCR 兼容∙对PCR 干扰极小，从而极大的缩短了PCR 延伸时间。

非常适合HRM 分析∙无“染料重分布”缺陷，兼容PCR 后的高分辨率熔解曲线（HRM ）分析。

guassian荧光发射光谱

guassian荧光发射光谱
高斯荧光发射光谱是一种常见的光谱形式，用于描述物质在受到激发后发射的荧光信号强度随波长的分布。

其形状可以由高斯函数来拟合。

高斯函数是一个钟形曲线，其数学表达式为：
f(x) = A * exp((x - μ)^2 / (2 * σ^2))
其中，A表示峰值的幅度，μ表示峰值的位置，σ表示曲线的标准差，决定了曲线的宽度。

在荧光光谱中，高斯函数通常用于描述单一的发射峰。

峰值位置μ对应着特定荧光染料或荧光标记的波长。

标准差σ为一个衡量荧光峰宽度的参数，其值越大，峰越宽，反之越窄。

通过高斯拟合分析荧光发射光谱可以得到各个峰的位置和相对强度，这对于荧光探针的选择和定量分析非常重要。