he.银染.胶原染色方法

固定4-12小时。

HE染色步骤

1、苏木素

苏木色精2.5g，硫酸铝钾22g，碘酸钠0.25g，无水乙醇10ml，蒸馏水350ml，冰醋酸5ml甘油140ml

苏木色精溶于无水乙醇中，完全溶解后加入碘酸钠为A液。硫酸铝钾溶于蒸馏水中为B液。将A，B两液混均搅拌3min，溶液由淡红色逐渐加深呈暗紫红色，再加入甘油、冰醋酸混匀，无需过滤即可使用。

2、伊红（水溶性）

改良醋酸化伊红溶液5g伊红Y溶于100ml蒸馏水,完全溶解后加醋酸20ml 立即有沉淀物生成,充分搅拌混合均匀沉淀物呈糊状,过滤后将沉淀物放入60℃烤箱中烘干,将烘干的沉淀物用棕色瓶装备用。配制时称取0.25g溶于95%乙醇100ml。

3、0.5%～1%盐酸乙醇：将0.5ml盐酸缓缓加入95%乙醇中，再用95%乙醇稀释至100ml。

4、中性甲醛：甲醛(40%) 100 ml、无水磷酸氢二钠 6.5 g、磷酸二氢钠 4.0g、蒸馏水 900 ml 。

染色过程：

Gomori染色方法

1、Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变

清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止（有少量颗粒）。最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。

2、10%中性甲醛：pH=8.210％中性甲醛固定液，福尔马林（40％ W/ 甲醛） 100ml，磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O） 4g （无水NaH2PO4 3.5g ），磷酸氢二钠（Na2HPO4）6.5g，补蒸馏水至1000ml。

3、酸性高锰酸钾液：0.25%高锰酸钾100ml与3%硫酸5ml混合。

注意事项：

1、所使用的玻璃仪器，须用清洁液处理。

2、配制氨银溶液时，氨水加入的量不能过多或不足，过多感应下降，会使液体过碱，滴染时，切片容易脱落，过少则感应上升，浸染效果不佳，不好掌握。

3、配制氨银液时，有可能用玻璃蒸馏水。（玻璃蒸馏水器蒸馏的双蒸水）

4、使用的化学试剂应尽量用分析纯以上。

5、切片氧化漂白应彻底，不能使残存的福尔马林留于片上，否则将导致过早还原而使浸染不均匀。

6、如果有某种原因而导致切片脱落时，应使用涂胶的载片，以增加附贴性，

7、如有可能，氨银溶液以新配为佳，但也可保存于4℃冰箱中达一个月左右，这种液体易挥发，用后即须盖紧，当沉淀物出现时，该溶液应抛弃。

8、20%福尔马林还原5分钟。

Masson三色染色法

1.丽春红S0.5g，蒸馏水100ml，配制0.5%丽春红S染液。

2.配制苦味酸饱和水溶液：100ml蒸馏水+1.2g苦味酸。

3.丽春红S苦味酸溶液：0.5%丽春红S15ml与苦味酸饱和水溶液85ml混合。

4.配制维多利亚蓝B染液：维多利亚蓝B0.5g溶解在100ml70%乙醇中。