大鼠视神经切断后视网膜Muller细胞及小胶质细胞变化特点

大鼠视神经切断后视网膜Muller 细胞及小胶质细胞变化特点

唐茂丹1），陈家波1），孙永芳1），童世琼1），武丽红2），吴春云2

）（1）昆明医学院05级临床医学（眼视光学专业）；2）组织胚胎学教研室，云南昆明

650031）

［摘要］目的观察视网膜M uller 细胞和小胶质细胞在大鼠视神经切断后的变化特点．方法应用大鼠视

神经完全横断模型，随机分为术后1d 、3d 、7d 、14d 4个损伤组和假手术组（

每组n ＝5）；分别用M uller 细胞和小胶质细胞特异性标记物谷氨酰胺合成酶（GS ）和OX-42，进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP ）法染色，以显示视网膜M uller 细胞和小胶质细胞的变化．结果在视神经切断后，大鼠视网膜M uller 细胞GS 阳性产物立即增粗、深染，并与周围细胞紧密联系在一起，3d 达高峰，14d 明显减弱；小胶质细胞OX-42的阳性产物表达在视神经切断后7d 明显增强，14d 达高峰．结论

视神经切断后大鼠视网膜

M uller 细胞反应性增生，小胶质细胞被激活，但反应高峰晚于M uller 细胞，其作用有待进一步研究．

［关键词］视神经切断；M uller 细胞；小胶质细胞；大鼠

［中图分类号］R774；R779.12［文献标识码］A ［文章编号］1003－4706（2010）01－0001－05

Immunohist ochemical St udy of Muller Cells and Micr oglia

Cells Responses t o Opt ic Ner ve Tr ansect ion in Rat s

TANG Mao －dan 1），CHEN Jia －bo 1），SUN Yong －fang 1），TONG Shi －qiong 1）

，

WU Li －hong 2），WU Chun －yun 2

）

（1）2005Year of Clinical Medicine （Ophthalmology and Optometry ）；2）Dept.of Histology and

Embryology ，Kunming Medical University ，Kunming Yunnan 650031，China ）

［Abstract ］Objective To study features of the retinal M uller cells and microglia cells in rats after optic

nerve transection ．Methods We built the optic nerve transection model which was randomly divided into five groups ：four injury groups （n ＝5in each group ：the 1，3，7，and 14day groups post optic nerve injury ），control group （n ＝5）．Then we observed the changes of M uller cells and glial cells which is immunohistochemically streptavidin-perosidase stainned by using anti-GS （glutamine synthetase ）and anti-OX-42antibody （amoeba-like glial cell line-specific marker ）．Results The expression of （GS ）-immunoreaction （GS-IR ）increased significantly compared to the control group ．The most significant change occurred in the 3-day group ．the expression of GS-IR had a descending tendency in the 7-day and 14-day groups compared to the 3-day group ．And immunoreaction of 0X-42increased significantly compared to the control group ，at day 7post-axotomy were markedly expressed ，and in 14day group reached the peak ．Conclusions Rat retinal M uller cells are reactive gliosis after optic nerve transection and have roles of protecting the retinal neurons and repairing the injury retina ；The response of microglial cell are the same as M uller cells basically with the exception

昆明医学院学报2010，（1）：1～4Journal of Kunming Medical University

CN 53-1049/R

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（30760093）

［作者简介］唐茂丹（1985～），女，云南昆明市人，在读本科生，昆明医学院2005级临床医学（眼视光学专业）.［通讯作者］吴春云．E-mail:wuchunyunkm@

第31卷

昆明医学院学报2视神经损伤是临床上的常见多发病，常引起视力降低或丧失，严重影响病人的工作、生活和学习．由于中枢神经损伤或病理改变后神经元不易再生，许多机制还有待揭示，且在视神经损伤后会出现胶质细胞活化、增殖，一方面起着隔离、清洁、营养和支持等抗损伤作用，但另一方面胶质瘢痕的形成又阻碍了损伤后的修复以及神经元轴突再生，并能明显改变局部正常结构及神经元的生存环境，因此胶质细胞对神经元的作用具有利弊双重性[1]．为了探索视神经完全损伤后视网膜神经胶质细胞的变化及作用，为视神经、视网膜相关疾病的发病机制的研究提供新的思路．本实验将Muller 细胞的特异性标志物谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase ，GS ）和小胶质细胞的特异性标志物OX-42抗体，用免疫组织化学染色的方法对视网膜神经胶质细胞进行研究．

1材料与方法

1.1

实验动物、分组

健康成年雌性S-D 大鼠25只，体重（

240±30）g ，购自昆明医学院实验动物供应中心．用随机数字法分为5组：假手术组、单纯性视神经横断术后1d 、3d 、7d 、14d 组，每组5只．1.2视神经切断模型制作

用雷季良等[2]研制的视神经完全横断模型标准复制动物模型．

1.3免疫组织化学样品制备及染色

各组大鼠定时用30g/L 戊巴比妥钠（50mg/kg ）腹腔注射麻醉，并用4g/L 盐酸奥布卡因滴眼液（日本参天制药株式会社）表面麻醉大鼠角膜，20g/L 多聚甲醛缓冲液灌注固定取眼球，进行石蜡包埋和连续切片，切片厚7μm ，每只大鼠切片间隔5片取2片，每只大鼠5张切片．用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（streptavidin-perosidase ，SP ）法染色进行免疫组织化学染色，一抗分别为兔抗GS （1:500）和鼠抗OX-42（1:400），4℃，24h ；生物素标记的二抗（羊抗兔IgG 和羊抗鼠IgG ，1:150，福州迈新公of peak of the response which is later than Muller cells ．and microglial cells with releasing inflammatory mediator and phagocytosis.

［Key words ］Optic nerve transection ；Muller cells ；M icroglia cells ；Rats 司），室温30min ；链霉菌抗生物素蛋白-过氧

化物酶溶液（

SP ，1:150，福州迈新公司），室温12min ；二氨基联苯胺（DAB ）显色，室温8min （避光进行），光镜观察染色情况．梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片．阴性对照用0.01mol/L 的PBS 代替一抗，其余步骤不变．

2结果

2.1GS 的免疫组织化学表达变化

在假手术组大鼠视网膜上（见图1），M uller 细胞的特异性标记物GS 免疫阳性产物（棕色）显示出M uller 细胞的整体结构，细胞多呈细长状或丝状．它自外界膜（ELM ）纵向伸展，穿过整

个视网膜至内界膜（ILM

），其胞核位于内核层（INL ），几乎与视网膜内所有的神经元发生接触．

视神经切断后1d 组（见图2），视网膜GS 阳性纤维立即增粗、深染，并与周围细胞紧密联

系在一起．视神经切断后3d 组（见图3

），GS 免疫的阳性产物在内丛状层（IPL ）表达增强，着色更加深和密集．虽然视神经切断后7d 组阳性纤维还呈丝条状贯穿于ILM 、ELM 之间，但是表达开始减弱，直至切断后14d 组（见图4），M uller 细胞特异性标记产物表达明显减弱，并在ILM 表面发现有少量阳性产物表达．2.2OX-42的免疫组织化学表达变化

在假手术组的大鼠视网膜上（见图5），小胶质细胞特异性标志物OX-42免疫阳性产物（棕色）呈弱阳性表达，主要见于神经节细胞层（GCL ）、INL ，呈分支状，染色深．

视神经切断后1d 组、3d 组，OX-42阳性产物少量表达在GCL 、INL 和外丛状层（OPL ）．但视神经切断后7d 组OX-42阳性产物表达明显增强，细胞呈卵圆形或阿米巴状（椭圆形），着色深，无突起，胞体明显增大，且数量增多．在视神经切断后14d 组小胶质细胞特异性标记产物表达达到高峰，可见视野下视网膜GCL 至ELM 之间有大量小胶质细胞浸润，阳性产物表达非常