羟自由基

羟自由基

枸杞粉碎后，按照1:50（W/V)的料液比加入80%的乙醇溶液，70℃浸提3次，每次2.0h，抽滤并合并滤液，55℃下旋转浓缩至點稠状。

在比色管中依次加入2mmol/LFeSO4溶液3mL，1mmol/LH2O2溶液3mL，接着加入6mmol/L 的水杨酸溶液3mL摇勾后在37℃下水浴15min后取出，然后分别加入1mL不同浓度的样液，同时加入1mL超纯水作对照，以消除后加的1.0mL样液中水所造成的体系吸光度的降低，定容至10mL刻度线摇匀，再在37℃下水浴加热15min，取出于510nm下测其吸光值A1,对照所测吸光值A2。样液对经基自由基清除率为：

清除率(％)=(A2-A1)/A2×100%

取1 ～5 g/L多糖样品溶液0. 5 mL，反应体系中加入再分别加入0. 5 mL 9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液，10 mmol/L硫酸亚铁溶液，加入3. 5 mL 蒸馏水后，5 mL 10 mmol/LH2O2启动反应，混匀，37 ℃水浴保温15 min，在510 nm 处测A1，以蒸馏水代替样品溶液作为空白对照测定A0，用0. 5 mL 蒸馏水代替水杨酸-乙醇溶液作为调零组。清除率计算公式同上。

4】9 mmol /L FeSO4 1 mL，9 mmol /L 水杨酸-乙醇1mL，不同浓度的待测溶液1 mL，8 ．8 mmol /L H2O21mL 最后加入混匀并启动整个反应。37 ℃反应0．5h 后，4000 rpm 离心10 min，然后以蒸馏水作为空白，在510 nm 下测定吸光度。以上混合溶液中以蒸馏水代替H2O2作为待测溶液的本底吸收值。清除率( %) = A0 －( Ax －AX0)A0× 100式中: A0为空白对照液的吸光度，Ax为加入待测溶液后的吸光度，Ax0为不加显色剂H2O2待测溶液的本底吸收值。

超氧阴离子

邻苯三酚自氧化法测定按参照文献[11]的方法并略有改动，按照表3进行加样，在325 nm 波长下，每隔0.5 min记录一次值，连续记录3 min。样品在同样条件下测定吸光值，每个处理试样均做3个平行试验，取平均值。多糖对超氧阴离子的清除作用按下列公式计算：

多糖

5%苯酚的配制

将装有苯酚的试剂瓶放在50度的水浴中，待苯酚融化有液体生成，然后乘热用滴管吸出滴在放置在天平上并去皮的容量瓶中，称取12.5g的苯酚于250ml的容量瓶中加蒸馏水定容

准确称取60 ℃烘干至恒重的葡萄糖100mg于1000ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06,、0.07、0.08 mg/ml。2 ml标准液分别加入5% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。摇匀，室温放置20 min 后于490nm测定吸光度值，以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作得到标准曲线

取本品粗粉约0．59，精密称定，加乙醚100ml，加热回流1小时，静置，放冷，小心弃去乙醚液，残渣置水浴上挥尽乙醚。加入80％乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80％乙醇30m1分次洗涤，滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水150ml，加热回流2小时。趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

精密量取供试品溶液lml，置具塞试管中，加水1．0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入5％苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。