枯草芽孢杆菌B_1_菌株产蛋白酶液体发酵条件优化
枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化
枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化李洪康;李由然;李赢;顾正华;丁重阳;石贵阳;张梁【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2016(042)005【摘要】对1株枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵培养基以及发酵条件进行了优化,最终确定了摇瓶最佳发酵培养基为:甘油40 g/L、豆粕粉30 g/L、麸皮10 g/L、Na2HPO44 g/L、K2HPO40.3 g/L.摇床最佳发酵条件为:温度30℃、转速250 r/min、接种量体积分数6％,在此发酵条件下,酶活达到6 082.7 U/mL,发酵强度为56 U/(mL·h).在15 L发酵罐进行了初步验证,通过流加甘油分批发酵,在第25h酶活达到最大值,为11 871 U/mL.【总页数】6页(P102-107)【作者】李洪康;李由然;李赢;顾正华;丁重阳;石贵阳;张梁【作者单位】江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡,214122【正文语种】中文【相关文献】1.枯草芽孢杆菌J-4菌株产抑菌物质发酵条件优化 [J], 翟玉洁;邓祖丽颖;姜军坡;王世英2.枯草芽孢杆菌8-32产抗真菌物质发酵条件优化 [J], 贾田惠;杨可欣;时向哲;王欢;刘雪娇;高同国;朱宝成3.枯草芽孢杆菌L07产中性蛋白酶发酵条件优化 [J], 卢超;陈景鲜;王国霞;陈刚;李春阁;王会鱼4.枯草芽孢杆菌S-16产抗菌蛋白发酵条件优化及蛋白分离纯化 [J], 路妍;杨鑫;吴文庆;连紫倩;扈景晗;周洪友5.枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质的发酵条件优化 [J], 丰磊;魏伟群;付鸣佳;肖世平;叶德晓;钟雪晴;黄紫妍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
泡盛曲霉液体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的条件优化
泡盛曲霉液体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的条件优化刘二伟;杨绍青;闫巧娟;江正强【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2017(038)016【摘要】从土壤样品中筛选得到一株高产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的真菌,经鉴定为泡盛曲霉(Aspergillus awamori),命名为Aspergillus awamori CAU33.依次采用单因素试验和响应面分析法优化了其液体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的条件,得到该菌株产酶的最适条件为:玉米芯质量浓度55 g/L、大豆蛋白胨质量浓度25 g/L、曲拉通X-114质量浓度23 g/L、初始pH 4.5、培养温度35℃、培养时间6d.在此条件下β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力达到8 447U/mL,为优化前的17.6倍.【总页数】7页(P29-35)【作者】刘二伟;杨绍青;闫巧娟;江正强【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471000;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学工学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.产β-1,3-1,4-葡聚糖酶特基拉芽孢杆菌Bacillus tequilensis CGX5-1发酵培养基的优化 [J], 刘晓玲;王金晶;李永仙;李崎2.拟青霉WPG-1的鉴定及固体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶条件的优化 [J], 唐艳斌;胡婉峰3.泡盛曲霉CAU33固体发酵产β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵条件优化 [J], 刘二伟;刘学强;杨绍青;江正强4.泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶的纯化、性质及其用于制备β-葡寡糖 [J], 陈子贤;刘学强;张彬;闫巧娟;江正强5.黄曲霉产胞外β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵条件优化 [J], 刘璐;陈洲;陈瑶瑶;刘杨柳;李思霆;贾英民;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的优化
Ｉｄ ｓ ａＥ ｚｍ ｓＴａｊ ｅ ｂｒｔ ｙ ｆｎ ｕｔａＭｉ ｏ ｉｏ ， ｈ ｏ ｅｅ ｆ ｉ ｅｈ ｏ ｇ， ｉ ｊ ｎｖｒｔ ｏ ｎ ｕｔ ｌ ｎｙ ｅ， ｉ ｉ Ｋ ｙ ｏａ ｒ ｏ ｄ ｓ ｉ ｃ ｂ ｌ Ｔ ｅ ｌ ｇ ｏ ｃ ｎｌ ｙＴａ ｉ Ｕ ｉ ｓｙ ｆ ｉ ｒ ｎｎ ａ Ｌ ｏ Ｉ ｒｌ ｒ ｏ ｇ ｙ Ｃ ｌ ｏＢ ｔ ｏ ｎｎ ｅ ｉ
—＝ １ ６ ＝＝ ３
２１ ０ ２年 ７月 第３ ３卷第 ７期
Ｆ ｏ ｅｅｒｈＡ ｄＤ ｖｌ ｍ ｎ ｏｄＲ ｓａｃ ｎ ｅｅ ｐ ｅ ｏ
食品研究与开发
生物 工程
枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的 优化
刘逸寒 ， 薄嘉鑫 。 王亚品， 张志萌 。 王建玲试 验进行发 酵培养基优化 ，得 到产酶最佳 配方为玉米淀粉 ３０％，酵母 膏 ２ ． ． ０％，ａ １００ Ｃ Ｃ ． ３％， Ｎ ２ Ｐ ．％。 ａ Ｏ１ Ｈ Ｏ 同时对重组菌株摇瓶条件下液体发酵的主要 影响因素初 始 ｐ 接种 量、 Ｈ、 装液量、 转速 、 温度等进行探 讨， 确定 了产酶 最佳培养条件为 ， ３ 以 ％接种量接种 于优化后培养基 ， 初始 ｐ ７ ， Ｈ ． 装液量 ３ ｍｌ２０ ，７ ２０ｄ ｉ ０ ０ Ｊ ５ ｍＬ ３ ℃，０ ｍ ｎ
（ 工业发酵微 生物教育部重点实验室 ， 工业酶 国家工程实验室 ， 天津市工业微生物重点实验室 ， 天津科技大学生物工程学院 ， 天津 ３ ０ ５ ） ０ ４ ７
摘 要 ： 用基 因工程手段获得的产长野 芽孢杆 菌普鲁 兰酶的枯草 芽孢杆 茵基 因工程 菌株 ＷＢ Ｏ／ＷＢ ｐ ｌ 通过 利 ６Ｏｐ － ｕ Ｂ，
摇 床 培 养 ３ 。 此优 化 条 件 下 ， 鲁 兰酶 活 力 达到 ２ ． ／ Ｌ 是 之 前 研 究结 果 （０ ４ ， Ｌ 的 １ ４倍 。 ６ｈ 在 普 ０１ Ｕｍ ， ６ １． ｍ ） ． ９Ｕ ８
玉米原料高产γ-聚谷氨酸优良菌株的选育及发酵条件优化
玉米原料高产γ-聚谷氨酸优良菌株的选育及发酵条件优化梁金钟;李艳华;范洪臣
【期刊名称】《中国生物工程杂志》
【年(卷),期】2007(27)12
【摘要】以筛选到的一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-1为出发菌株,采用紫外诱变技术对出发菌株进行反复诱变,得到一株能够利用玉米原料生产γ-聚谷氨酸的优良高产菌株B-115,摇瓶发酵γ-聚谷氨酸的产量由原菌株的12.5g/L提高到19.5g/L。
再以该菌株为研究对象利用响应面法进行碳源、氮源、谷氨酸钠、金属离子等发酵条件的优化实验,经48h摇瓶发酵,γ-聚谷氨酸产量达到40.98g/L。
【总页数】6页(P46-51)
【关键词】γ-聚谷氨酸;枯草芽孢杆菌;玉米原料;诱变;优化
【作者】梁金钟;李艳华;范洪臣
【作者单位】哈尔滨商业大学食品工程学院;东北农业大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q933
【相关文献】
1.常熟虞山松蕈优良菌株选育及深层发酵条件的优化 [J], 徐兵;郑丽雪;翁渝洁;冀宏
2.γ-聚谷氨酸高产菌株的选育和发酵培养基的初步优化 [J], 邓毛程;宋炜;张远平
3.γ-聚谷氨酸高产菌株选育及发酵条件优化 [J], 罗丽娟;王刚;万玉军;关统伟;李南
臻;庹有朋;吴泽;苟红梅
4.γ-聚谷氨酸高产菌株的选育及发酵条件优化 [J], 杜沛;宴正;陈双喜
5.γ-聚谷氨酸高产菌株筛选及发酵条件优化 [J], 胡荣章;叶海峰;金丽;吴昌琳;吴自荣
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枯草芽孢杆菌菌株发酵生产工艺优化
３ 结论 风干燥箱 ，上海产，型号 Ｉ Ｏ １ Ａ 一 ３ ；电热恒温培养箱 ，上海产 ，型号 对于培养基的选择应该遵循原料取材方便 ， 来源广泛 ， 价格低廉的 Ｄ Ｈ Ｐ 一 ９ １ ６ ２ ； 垂直流超净工作 台， 上海产 ， 型号 ２ Ｈ Ｊ Ｈ 一 １ １ １ ２ ； 显微镜 ， 日 原则， 酵母膏、 酵母粉这类药品成本较高， 不适用于工业化生产。 本研究 本产 ， 型号 Ｎ ｉ ｋ ｏ ｎ — Ｙ Ｓ １ ０ ０ ； 手提式高压灭菌锅 ， 哈尔滨市医疗器械厂制 在通用培养基中添加了不同比例的的工农业副产品——豆饼粉和麸子 造； 可控温式摇床， 哈尔滨市东联科学仪器厂制造。 即适量的碳源和氮源 ， 根据发酵过程中枯草芽孢杆菌菌体数量的变 １ ． ４方法 。１ Ａ ． １ 菌种活化。 将保存的枯草芽孢杆菌移接到斜面试管 粉 ， 化 ， 得到最佳培养基配方， 即通用培养基 ＋ １ ． ５ ％豆饼粉 ＋ １ ｍ 麸皮 ， 利用 培养基 中， 在恒温培养箱 ３ ７ ±１ 。 ｃ 培养 ２ ４ ｈ 。１ ． ４ ． ２种子液的制备。 取一 这一配方， 生产 出了成本低廉 、 菌活数达 １ ８ 亿 ／ ｍｌ 以上的枯草芽孢杆菌 环 已活化完成斜 面菌种接人到三角瓶种子培养基 中， ５ ０ ０ ｍＬ三角瓶 达到了促进枯草芽孢杆菌菌株生长的目的， 增加了发酵液中菌体 中，装量为 １ ０ ０ ｍ Ｌ种子培养基 ， ３ ７± １ ｏ Ｃ ， １ ８ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ， 摇床 中震荡培养 菌剂 ， 数 量 和代谢 产物 ， 为 工业 化发 酵生 产 和大 面积 推广应 用 提供 充足 的 、 廉 ２ ４ ｈ 。１ ． ４ ． ３ 菌株发酵培养。取 ｌ ｍ Ｌ培养好的种子液， 以２ ％的接菌量ｆ 即 价 的微 生物 菌体及 发酵 菌液 。 在每 ｌ Ｏ Ｏ ｍｌ 的液体培养基 中接入 ２ ｍ ｌ 浓度为 ｌ ｘ ｌ Ｏ ｇ ｅ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ 的发酵液汾 参 考文 献 别接入到 ｌ ５ 个（ 每种培养基 ３ 个） 装有 １ ０ ０ ｍ Ｌ发酵培养基的 ５ ０ ０ ｍＬ １ 阿 红， 蔡 学清， 洪永聪等． 辣椒内生细菌的分 离及拮抗菌的筛选ｌ Ｊ １ ． 中国 三角瓶 中， ３ ７ ±１ ℃， １ ８ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ ， 摇床中振荡培养 。 １ Ａ ． ４ 测定方法。 将各摇 ［
枯草芽孢杆菌液态发酵的研究
枯草芽孢杆菌液态发酵的研究李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【摘要】该研究选取了一株从无花果中分离出的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)作为试验菌株,它可以产生抗逆性强的芽孢,非常适合应用于益生菌饲料加工生产.在单因素试验基础上,进行L9(33)正交试验,获得芽孢产量高、原料成本低廉的液态发酵培养基最佳配方为碎米水解液6％、酵母粉0.7％、KH2PO40.5％;对该菌的摇瓶发酵条件进行了初步研究,确定了液态发酵的最佳条件为pH值为5,温度37℃,接种量6％,转速200 r/mm,培养时间19h.在此最佳培养基配方及发酵条件下,发酵液OD600mm值可达7.38.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】5页(P43-47)【关键词】枯草芽孢杆菌;液态发酵;培养基配方;培养条件;优化【作者】李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【作者单位】江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;赣州农业学校食品教研组,江西赣州341100;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6益生菌的生理功能有很多，最重要的是可以促进肠道有益微生物的繁殖，降低病原菌数量，提高机体免疫的功能［1］。
益生菌制剂以无毒、无残留、无副作用、不污染环境等优点，使其成为了有效的抗生素替代物，在防治动植物疾病，促进机体发育，延缓人类衰老等方面被人们广泛使用［2］，并成为生态循环农业中的一个重要纽带。
由于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）可形成抗逆性极强的芽孢，在稳定性方面具有先天优势，且枯草芽孢杆菌是我国农业部和美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）允许作为饲料添加剂的菌种［3-4］，其可以产生抑菌活性物质［5-6］，也可以作为一种理想的抗生素替代物。
枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化
枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化刘颖;张彬彬;孙冰玉;刘琳琳;邹丽宏;石彦国【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)013【摘要】通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌10075菌株发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化,达到提高菌株中性蛋白酶产量的目的.结果表明,发酵培养基的最佳组分:添加麦芽糖8.0％、蛋白胨4.0％、MgSO4 0.08％;最适发酵条件为发酵温度37℃、初始pH 7.0、发酵时间42 h,酶活力由最初的98.36 U/mL提高到353.45 U/mL.【总页数】5页(P166-170)【作者】刘颖;张彬彬;孙冰玉;刘琳琳;邹丽宏;石彦国【作者单位】哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076【正文语种】中文【中图分类】Q939.97;TS201.3【相关文献】1.枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化 [J], 李洪康;李由然;李赢;顾正华;丁重阳;石贵阳;张梁2.枯草芽孢杆菌ZC 1发酵产中性蛋白酶的条件优化 [J], 黄达明;宋庆春;管国强;张志才;李倩3.枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化 [J], LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai4.枯草芽孢杆菌L07产中性蛋白酶发酵条件优化 [J], 卢超;陈景鲜;王国霞;陈刚;李春阁;王会鱼5.蜡样芽孢杆菌高产新型中性蛋白酶发酵条件的优化 [J], 于平;吴赟婷;杨柳贞;贺敏;胡淳玉;刘航;易明花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
微生物学控制与发酵考试重点
微生物学控制与发酵考试重点work Information Technology Company.2020YEAR1、代谢控制发酵：指利用遗传学的方法或者其它生物化学的方法，人为地在脱氧核糖核酸（DNA）分子水平上改变和控制微生物的代谢，使目标产物大量生成、积累的发酵。
2、营养缺陷型：指原菌株由于发生基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养基中补加该营养物质才能生长的突变型菌株。
3、结构类似物：指与代谢途径中的代谢产物结构相类似，能与代谢物一样与调节酶结合引起酶活性的变化，但不具有代谢物生理功能的一类化合物。
4、调节酶：是参与代谢调节的酶的总称。
作为一个反应链的限速因子，对整个反应起限速作用。
常称为关键酶，主要包括变构酶、同功酶和多功能酶。
5、积累反馈抑制：每一个最终产物只单独地、部分地抑制共同步骤第一个酶，并且各最终产物的抑制作用互不影响，当几个最终产物同时存在时，他们的抑制作用是积累的6、转化：指相当大的游离的供体细胞的DNA片段被直接吸收到受体细胞内，并整合于受体细胞的基因组中，从而使受体细胞获得供体细胞部分遗传性状的现象。
7、操纵子：是指原核生物基因组的一个表达调控序列，长度约1000bp左右，由若干结构基因串联在一起，其表达受到同一调控系统的调控。
8、巴斯德效应：在有氧的条件下，由于进行呼吸作用而使酒精发酵和糖酵解作用受到抑制的现象。
9、诱变：利用物理或化学因素处理微生物细胞群体，促使其中少数细胞中的遗传物质（主要是DNA）的结构发生改变，从而引起微生物的遗传性状发生变化，然后通过目的选择标记设法从群体中筛选出少数性状优良的突变菌株的过程。
10、二次生长：在分批培养微生物的过程中，由于微生物分阶段利用基质中的主要成分，而出现的两个高速生长现象。
1、能荷：能荷是机体能量在数量上的衡量形式。
为从量上表示细胞内ATP-ADP-AMP的能量情况，1968年Alkinson提出了能荷概念。
枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化
枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【摘要】选用玉米粉、豆饼粉、KH2 PO4及Na2 HPO4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化.确定了优化的发酵培养基为:20 g·L-1甘油,30 g·L-1豆饼粉,2 mmol·L-1氯化钙,0.3 g·L-1 KH2 PO4,4 g·L-1 Na2 HPO4;优化的发酵条件为:温度30℃,接种量5％.调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵周期40 h,最终的酶活达到7344 U·mL-1.进行甘油补料流加实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和风量控制溶氧30％～35％,接入5％种子,经过40 h发酵,最终酶活达到10654 U·mL-1,较未补料提高了45％.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P47-52)【关键词】枯草芽孢杆菌;中性蛋白酶;液体发酵;酶活性【作者】LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【作者单位】;;;【正文语种】中文蛋白酶是一类在生理及商业上都有非常重要地位的水解酶类，能催化肽键水解成氨基酸或短肽，其销售量约占酶制剂市场的一半以上[1]。
按蛋白酶作用的最适pH值可分为酸性、中性和碱性蛋白酶。
中性蛋白酶是最早被应用的蛋白酶之一，能在中性pH值范围内将大分子蛋白质水解成相对分子量在5 000以下的多肽[2]，普遍存在于细菌和真菌中，在pH值7～8时活性最大[3]。
目前，中性蛋白酶高产菌株主要通过自然界筛选、人工诱变和分子生物学改造获得[4-8]。
近年来，国外研究侧重于基因结构特性研究、定点突变改变蛋白酶的特性、稳定性的提高、与医学相关的蛋白酶的分离鉴定、蛋白酶的应用等[9-12]。
微生物发酵工艺优化研究进展
微生物发酵工艺优化研究进展摘要：在本篇，笔者主要针对于微生物发酵工艺中可能影响发酵产物的有关因素进行了分析研究，主要包含培养基如碳源、氮源以及无机盐等以及客观因素中的温度、pH 值等。
最后深入探讨微生物发酵工艺的优化研究进展，希望能有效提升生产效率，推进产业化应用。
关键词：微生物；发酵工艺；优化研究；进展引言：伴随着生物发酵工艺的不断发展，其应用领域变得更加广泛，并发挥着愈来愈大的作用和效率。
例如在农业生产中，有效应用微生物发酵，可助力于农业的增产以及防病等多方面。
为了促进微生物发酵更好的发展，需要集中研究发酵工艺的优化。
众所周知，微生物种类繁多，并且不同种类有着不同的菌种特性，因此所需要的发酵条件也是不同的，所以需要不断改进发酵条件来帮助有益发酵产物的出现。
下面主要介绍微生物发酵的影响因素，并应用不同工艺优化方法来推进发酵工艺的高量发展。
1影响微生物发酵的因素1.1培养基因素探究1.1.1碳源、氮源微生物能量来源于碳源，并且微生物细胞构建以及产物形成都无法离开碳源。
通常情况下，碳源主要含有单糖、双糖以及多糖、天然复合物等等。
例如葡萄糖、蔗糖以及淀粉等。
微生物蛋白质以及其他含氮有机物的源头则是氮源，除此之外，氮源是含氮产物形成的重要参与物。
无机氮源和有机氮源都是氮源，例如氨盐、硝酸盐以及豆粉等等。
为了确保菌体能够正常顺利地长大，还需要保证培养基中碳源和氮源的比例是均衡有效的，由此还可以促进产物合成的速度。
1.1.2无机盐对于微生物来说，无机盐有着重要的作用，它会直接影响到代谢产物和微生物的生长。
例如磷，属于无机盐，在微生物生长代谢中，微生物细胞核酸等辅酶的形成离不开磷的作用；此外还有钙离子，对于细胞生理状态的调节发挥着重要作用，更是有相关研究表面，添加碳酸钙将会很好缓冲发酵液的pH 值，确保菌体的生长环境趋于良好；同时还有镁元素、锰离子等无机盐，都会影响到微生物的发酵，譬如镁元素可以充当酶的催化剂，而锰离子更是能大幅提升枯草芽孢杆菌发酵产物抑菌物质的活性[1]。
枯草芽孢杆菌B03液体发酵条件的优化
（ ． 阳 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院 ， 宁 沈 阳 １０ ６ ； １沈 辽 １１１ ２ 北 京 市 农 林 科 学 院 植 物保 护 环境 保 护研 究 所 ， 京 １０９ ） ． 北 ００ ７
摘 要 ： 用 单 因 素 筛 选 和 均 匀 设 计 试 验 对 拮 抗 性 枯 草 芽 孢 杆 菌 Ｂ ３发 酵 生 产 活 菌 体 的 液 体 培 养 基 和 发 酵 条 件 进 利 ０ 行 了研 究 ， 化 出 了以 经 济 、 优 易得 的玉 米 粉 和 豆 饼 粉 为 碳 、 源 的 最 佳 摇 瓶 发 酵 培 养 基 ， 配 方 为 ： 米 粉 ３ Ｏ ， 饼 氮 其 玉 ．％ 豆 粉 ６ Ｏ ， ２ Ｐ ４ ３ ２ ． ％ ； 佳 发 酵 条 件 为 ： 龄 ２ —２ ， 种 量 ５ ，０ Ｌ三 角 瓶 装 液 量 ５ Ｌ 初 始 ｐ ．％ Ｋ Ｈ Ｏ ・Ｈ Ｏ ０ ３ 最 种 １ ４ｈ 接 ％ ５０ｍ ０ｍ ， Ｈ值 ６ ０ 发 酵 温 度 ３ ℃ ， 床 转 速 １０ ｒｍ ｎ 发 酵周 期 ６ ６ 。 利用 优 化 后 的 培 养 基 和 发 酵 条 件 进 行 验 证 试 验 ， 得 了 ．， ５ 摇 ８ ／ ｉ ， Ｏ ６ｈ 获
，
（ ． ｏｌｇ ｆＰａ ｔＰｏｅｔ ｎ， ｈ ｎ ａ ｇＡ ｃ ｌ ｒｌＵｎｖ ｒｉ ， ｈ ｎ ａ ｇ １０ ６ ， ｈｎ ； １ Ｃ ｌ ｅｏ ｌｎ ｒｔｃｉ Ｓ ｅ ｙ ｎ ｕｔ ａ ｉｅｓ ｙ Ｓ ｅ ｙｎ １ １ Ｃ ｉａ ｅ ｏ ｕ ｔ １ ２．ｎｔｕｅ ｏ ｌｎ ｎ ｎ ｉ ｎ ｎ ｒｔｃｉｎ Ｂ ｉｎ ｃ ｄ ｍｙｏ ｇｉｕｔｒ Ｉｓｉ ｔ ｆＰａ ｔ ｄ Ｅ ｖｒ ｍｅ ｔＰｏｅ ｔ ， ｅ ｉｇＡ ａ ｅ ｆＡ ｒ ｌ ｅ ｔ ａ ｏ ｏ ｊ ｃ ｕ ａ ｄ Ｆ ｒｓ ｙ Ｓ ｉｎ ｅ ， ｅｊ ｇ １ ０ ９ Ｃ ｉａ ｎ ｏｅｔ ｃｅ ｃ ｓ Ｂ ｉｎ ０ ０ ７， ｈｎ ） ｒ ｉ
枯草芽孢杆菌SW-08和SW-11液体发酵条件的优化
６ 、Ｏ ８ 、 ０ ｍＬ液 体 ， 接 种 量 ２ 接 种 ， ８ ０ ７ 、０ １ ０ 按 ４ ｈ分 别测 活菌数 ， 平 皿 中抑 菌带 宽 度 ， 定 最 适 通 气 测 确
量。
１ ６ ５ 摇 床 转速对 活 菌生长 量 的影响 ．．
关 键 词 ： 草 芽 孢 杆 茵 ； 酵 条件 ； 长 量 枯 发 生
枯 草芽孢 杆菌 是一 种 嗜温性 好氧产 芽孢 的革 兰 氏阳性 细菌 ， 对人 畜 无 毒 无 害 ， 污 染环 境 ， 有 广 不 具 谱 抗菌 活性 和极 强 的抗 逆 能 力 等 特 点 ， 用枯 草 芽 孢 杆 菌来 防治 植物 病害 已有许 多 成功 的例 子 。
１ ３ 细菌种 子 液的 制备 ． 将灭菌的 Ｉ Ｂ培养液 ５ ｍＩ装 于 ２ ０ ０ ５ ｍＬ的三角
确 定最佳 ｐ 值 。 Ｈ
１ ６ ３ 接 种量对拮抗 细菌生长量及抑 菌活性 的影 响 ． ．
将拮 抗 细菌 的种子 液接种 量分 别调 节为 摇瓶 装 液 体积 的 １ 、 、 ％ 、 、 、 和 １ ， ８ ３ ４ ５ ７ ８ ０ ４ｈ 测 含菌 量 ， 平皿 中抑 菌带宽 度 ， 测 确定最 适接 种量 。
８
现 代 化 农 业
２ １ 年 第 １ 期 （ 第 ３ ９期 ） ０１ ２ 总 ８
枯 草 芽孢 杆 菌 Ｓ ０ Ｗ一８和 Ｓ １ 液 体 发 酵条 件 的优 化 Ｗ一 １
陈 明丽 ， 高 虹 ， 丽华 ， 洪 亮 ， 谢 刘 刘 民
（ 黑龙 江 省农 垦科 学 院 植 物保 护研 究 所 ， 尔滨 １ ０３ ） 哈 ５ ０ ８
采用 优 化 培 养 基 ， 别 测 定 不 同 的 温 度 、 Ｈ 分 ｐ
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化焉兆萍，宋士良，陆克文(上海邦成生物工程有限公司，上海 201506)中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A文章编号：1001-0769(2019)01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境；能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。
该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。
枯草芽 孢杆菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2]；其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。
由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。
本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。
1 材料与方法1.1 供试菌种枯草芽孢杆菌，由上海邦成生物工程有限公司菌种保藏室提供。
1.2 培养基LB固体培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、琼脂粉20 g、水1 000 mL，pH 7.2。
LB液体种子培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、水 1 000 mL，pH 7.2。
1.3 种子液的制备将菌种接种于LB固体培养基中，37 ℃恒温培养箱活化18 h后，挑取单菌落接入装有100 mL LB液体种子培养基的250 mL三角瓶中，37 ℃条件下180 r/min振荡培养24 h。
枯草芽孢杆菌B1⑥菌株产蛋白酶液体发酵条件优化
别， 因此选择～个合适的发酵条件对于蛋白酶的生产是非常必要 的。为此 ， 笔者测定了碳源 、 氮源、Ｈ值 、 ｐ 温度 、 接种量 、 种龄、 溶氧量等条件对该菌株液体发酵产蛋白酶的影响 ， 以确定其最佳发酵条件 ， 以期为蛋 白酶的液体发酵生产和应用奠定一定的基础。
１ 材料 与方 法
１ １ 菌株 ．
Ｋｅ ｒ ｓ Ｂａ ｉｕ ｕ ｔ ｉ； ｒｔａｅ； ｑ ｉ ｅｍｅ ｔｔ ｎ；ｆ ｃ ｎ ａｔｒ ｙｗｏ ｄ ： ｃｌ ｓｓｂｉｓ ｐｏｅｓ ｌ ｕｄｆｒ ｎａｉ ａ ｅ ｔ ｇｆｃｏｓ ｌ ｌ ｉ ｏ ｉ
蛋 白酶作为一种重要的酶制剂 ， 广泛应用于医药 、 食品、 酿造 、 纺织 以及洗涤剂等行业 Ｊ在工农业 ， 生产和人们的生活 中发挥着重要 的作用 。本实验室从酱香酒高温大曲中分离到 １ 株产酱香兼性嗜热枯草 芽孢杆菌 Ｂ⑥ ， 该菌株可用来生产优异的具有浓郁酱香风味的食 品 。研究表明 ， Ｊ 该菌株产生 的蛋 白酶
以筛选出来的 ２ 牛肉膏作为氮源 ， ｇ 小麦粉、 玉米粉、 小麦粉 ＋ 玉米粉、 、 、 蔗糖 木糖 乳糖葡萄糖各 ２ 作 ｇ
为碳源 ， 培养基装量为５ ｍ ， ０ Ｌ 自然 ｐ Ｈ值 ， ￣ 、０ ｒ ｉ ４ Ｃ ２０ ・ ｎ ０ ｍ 发酵４ ｈ 测定酶活力。不同碳源的酶活力分别 ８， 为 ５５ ｍ ～、６ ・Ｌ ５６Ｌ Ｌ ６ ８． Ｌ。 ５８ ｍ ～、０ ￣ ｍ ～、０ ￣ ｍ ～。以葡萄糖作为 ０ ・ Ｌ ４ １ ｍ ～、７ ￣ ｍ ～、 ｐ ｍ 。 ｌ ・ ６ ・ 。 ・Ｌ ５８Ｌ Ｌ ７８Ｌ Ｌ 、 ・ ・ 氮源时， 产酶量最高 ， 这可能是因为葡萄糖结构简单 ， 是最容易被利用的单糖 ， 不需要被降解和转化 。 ２３ 发酵培 养基优 化 实验 ． 以葡萄糖、 大豆粉 、ａ １ Ｎ Ｃ 作为三因素 ， 采用三水平 （ 因子初筛 ） 单 正交实验 ： 葡萄糖 （ ， ，） 大豆粉 ３４５ 、 （ ， ，） Ｎ Ｃ（ ． ，． ，． ） 培养基装量为 ５ ｍ ， 然 ｐ ３４ ５ 、 ａｌ０ ４０６０ ８ ， ０Ｌ自 Ｈ值 ， 接种量体积分数为 ２ ， ℃、０ ｒｍｎ ％ ４ ２０ ・ ｉ ０ 发酵 ４ ｈ 测 定酶 活力 。 ８， 从表 ｌ 和图 １ 可以看出， 葡萄糖为 ３ ， ｇ 大豆粉为 ４ ， ａ １ ０６ 时的培养基， ｇＮ Ｃ 为 ． ｇ 产生蛋白酶量最高 ， 说 明这是产蛋白酶最优培养基。从表 ｌ 可以看 出， 因子对蛋 白酶产 量影 响大小为大豆粉 ＞葡萄糖 ＞ 还 各 ＮＣ ， ａ １大豆粉在蛋白酶生产中的作用 比较大 ， 极差比较明显。
枯草芽孢杆菌培养基优化
表 3 液体培养基配方试验结果
图2 在样品组中出现第 1个生长峰值情况 个生长峰值情况
根据 跟踪测试结果，枯草芽孢杆菌试验组 14达到 生长峰值后，有一段平滑生长期，随后锐减。这主 要是由于接种时，每个试验组均接种20％，枯草芽 孢杆菌数量较大，导致培养基消耗殆尽，满足不了 枯草芽孢杆菌继续生长的需要所致。但是接种量较 大，可缩短培养时间，提高生产效率。
枯草芽孢杆菌 OD420值一活菌数量的关系
按体积比计取，枯草芽孢杆菌菌悬液用液体培养基进行 稀释 ，稀释浓 度分别为 20％、40％、60％、80％ 和 100％ ，形成 了 5个等差梯度试 20％、40％、60％、80％ 100％ 验组 ，每个试验组 3个重复，样品总数 l5个。紫外线分光光度计将波 l5个。紫外线分光光度计将波 长调制到420 nm后，分别测定各试验组菌悬液的OD 长调制到420 nm后，分别测定各试验组菌悬液的OD 420值，并用平板计 数法检测活菌数量，从而得到活菌数量与 OD 420值的关系。结果见表2. 值的关系。结果见表2.
枯草芽孢杆菌培养基的优化
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～ 0.7～ 0.8× 0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。 革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状， 革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状， 位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面 粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时， 常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分 解色氨酸形成吲哚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中， 易在枯草浸汁中繁殖。枯草芽孢杆菌是一种很好的菌种。 应用领域很广，可以用作饲料添加剂，用作生物肥料的发 酵剂，可以应用在养殖场直接添加给动物吃，可以应用在 鱼塘净化水质。或者一些城市环境监测部门或环保公司， 他们用于污水或污染物的处理。以及一些糖厂或公司用于 治理污染等。
枯草芽孢杆菌固态高密度发酵工艺条件的优化
meal, rice husk and straw were made into the solid-state fermentation medium. The best fermentation technology of
Bacillus subtilis was optimized by single factor test and orthogonal test of four factors and three levels. Results
721
单因素试验结果
3.2.1 发酵时间对活菌数的影响
发酵时间对枯草芽孢杆菌固态发酵产物中活菌
数的影响结果见图1，发酵时间达到25 h时，活菌数
数也在升高，当发酵时间达到 30 h 时，增长幅度减
下培养 12~14 h。取活化后的液体培养基 2 mL 接入
200 mL 液 体 培 养 基 进 行 扩 大 培 养 ， 置 于 37 ℃ 、
195 r·min-1 培养 3~6 h 后，作为种子液备用[14]。
2.2
固态发酵
将豆粕、稻壳、玉米秸秆粉碎后过筛，按表 1
的比例置于 500 mL 的烧杯中。将烧杯置于高压灭
质量比 631 为最佳配比，不但降低了原料成本，
同时也提高了粮食作物的性价比。
根据原料的市场保有量和价格设计不同的原料
配比，以固态发酵产物中的活菌数为指标，将豆
粕、玉米秸秆和稻壳按比例配制后进行固态发酵试
验，确定最佳原料配比，结果见表 3。
活菌数/（cfu·g-1）
451
5.2×107
631
玉米秸秆，购自吉林华展生物工程有限责任公司。
培养基
斜面培养基：蛋白胨 10.00 g·L- 1，酵母浸粉
纤溶酶高产菌株筛选及其液体发酵条件研究
２ 实验方 法
２１ 纤 溶酶产 生 菌 的分离 筛 选 ．
取 豆豉 等各 种待 分 离食 品 １ ， Ｏｇ加入 １０ｍ ０ Ｌ灭菌 水 中 ， 荡 ，０ 振 １０℃沸 水 煮沸 ５ｍｉ， 止 片刻 后 取上 层 ｎ静
收稿 日期：２０ — ９ １ ０７０ —０
基金项 目：河南省省属科 研单位 社会公益项 目（６ １ ８２ ３ ０４ ０ ０ ） １ 作者简介：周伏忠 （９ ５ ） 男 ， 南浚县人， １６ 一 ， 河 副研究员 ， 硕士， 研究方 向为微生物发酵工程 ．
和 ６ ～ ４ｈ 在优 化条件下 ， ０ ８ ． 菌株 １ 菌株 ２液体发酵最 高酶活分 别为 ３６４ ｍＬ和 ３９７ ｍＬ 、 ０ ．６Ｉ Ｕ／ １ ．６Ｉ Ｕ／ ．
关键词 ：纤溶酶； 菌株 筛选 ； 液体发酵
中图分类号 ：Ｑ９ ９９ ３ ． 文献标识码 ：Ａ
心 脑血 管 疾病 是 当前 危 害人 类健 康 ， 致死 亡 率最 高 的疾 病 之一 ， 中血栓 栓塞 类 疾 病如 脑 栓塞 、 导 其 心肌 梗 塞 、肺栓 塞等 给病 患 者带 来终 身痛 苦 ．治疗 血栓 栓塞 类疾 病 目前 最 为有 效 并且 可 靠 的方法 是 溶栓 疗 法 ． 然 而 ， 统溶 栓药 物如 尿 激 酶 、 激 酶等 具 有 半衰 期短 、 出血 、 传 链 易 口服 无 效等 缺 点 ． 自从 １８ ９７年 日本科 学家 须 见洋行 等【 ｌ 】 从 ｊ 纳豆食 品 中分 离 到一种 具 有 强烈纤 溶 活性 的酶 即纳 豆激 酶 以来 ， 首先 微生 物来 源 的新 型 溶 栓 药物 的研 究 开发 受 到世 界各 国 的普 遍 重 视［４０４ ２，－１ －１１．我 国科 技人 员 也 从我 国各类 传 统 食 品如 豆 豉 、 酒 药
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化作者：焉兆萍宋士良陆克文来源：《国外畜牧学·猪与禽》2019年第01期摘; 要：本文对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了筛选优化。
采用单因素试验和正交试验方法，确定该枯草芽孢杆菌的优化培养基为：豆粕40 g/L、玉米粉20 g/L、葡萄糖15 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、磷酸二氢钾1.5 g/L、硫酸镁0.5 g/L、硫酸铵0.35 g/L、酵母浸粉0.2 g/L、硫酸锰0.2 g/L、硫酸亚; ;铁0.1 g/L、碳酸钙0.1 g/L。
最适发酵条件为：初始pH 7.2，接种量5%，发酵温度35 ℃，摇床转速250 r/min。
关键词：枯草芽孢杆菌;发酵培养基;发酵条件中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2019）01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境;能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。
该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。
枯草芽; 孢桿菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2];其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。
由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。
本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。
枯草芽孢杆菌发酵过程的优化
枯草芽孢杆菌发酵过程的优化
崔京春;吴俊罡;刘吉华;王梅雪
【期刊名称】《饲料工业》
【年(卷),期】2004(25)7
【总页数】4页(P52-55)
【关键词】枯草芽孢杆菌;发酵过程;抗生素;饲料添加剂
【作者】崔京春;吴俊罡;刘吉华;王梅雪
【作者单位】大连民族学院;大连翔大生物技术有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S816.7
【相关文献】
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4.枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌发酵过程中的黄曲霉毒素变化研究 [J], 贾佩峤;赵玉山;常苗苗
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Bacillus subtilis 168菌株产surfactin改造
Bacillus subtilis 168菌株产surfactin改造刘丽霞;高玲;别小妹;陆兆新;张充;吕凤霞【期刊名称】《南京农业大学学报》【年(卷),期】2014(37)6【摘要】枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株基因组中含有编码surfactin合成酶系的srfA操纵子,却不产抗菌肽surfactin。
运用同源重组的方法将外源的有活性的sfp基因(编码4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶)整合入B.subtilis 168中,将其改造为产surfactin的菌株。
通过分析多株枯草芽孢杆菌和解淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的sfp基因,从基因的上、下游找出较为保守的区域,设计引物,从枯草芽孢杆菌Nja-9中扩增sfp基因,将获得的sfp基因与P43启动子和终止子相连,构建了sfp基因表达框,并连接于枯草整合质粒pDG1730上,最终构建了枯草芽孢杆菌整合质粒pST-1730,利用pST-1730本身的淀粉酶E基因与B.subtilis 168菌株的基因组DNA进行同源重组整合,获得了产surfactin的重组菌株B.subtilis121。
本研究为surfactin合成酶基因的改造和分析奠定了基础。
【总页数】6页(P97-102)【关键词】同源重组;Bacillus;subtilis;168;surfactin;sfp基因;改造【作者】刘丽霞;高玲;别小妹;陆兆新;张充;吕凤霞【作者单位】南京农业大学食品科技学院【正文语种】中文【中图分类】Q812【相关文献】1.重组大肠杆菌产Bacillus subtilis 168来源γ-谷氨酰转肽酶的摇瓶发酵优化 [J], 陈星奕;宿玲恰;吴敬2.产蛋白酶菌株Bacillus subtilis GS-1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究[J], 王方华;刘亮;王永华;杨博3.有机溶剂胁迫处理对菌株Bacillus subtilis OST23a产胞外多糖的影响 [J], 房耀维;刘姝;王淑军;吕明生;焦豫良;陈丽;曹纯4.产角蛋白酶菌株Bacillus subtilis A1-2液体发酵产酶条件的优化 [J], 闫志宇;李术娜;李红亚;徐丽娜;朱宝成5.A Mutant of Bacillus Subtilis with High-Producing Surfactin by Ion Beam Implantation [J], 刘清梅;袁航;王军;贡国鸿;周伟;樊永红;王丽;姚建铭;余增亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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山地农业生物学报25(6):554~557,2006Jour nal of M oun tai n Agricu lture and B iology⑥菌株产蛋白酶液体发酵条件优化枯草芽孢杆菌B1郭成栓,谢和(贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025)关键词:枯草芽孢杆菌;蛋白酶;液体发酵;影响因素中图分类号:TQ92016;TQ92512文献标识码:A文章编号:1008-0457(2006)06-0554-04Opti m iz i n g li q ui d fer m entation conditions of protease by Bacill u s subtilis B1⑥GUO Cheng-shuan,X IE H e(Co llege of L ife Science,Gu izhou University,Guizhou Guiyang550025,China)K ey word s:B acillus subtilis;protease;liquid fer m en tati on;a ffecti ng fac tors蛋白酶作为一种重要的酶制剂,广泛应用于医药、食品、酿造、纺织以及洗涤剂等行业[1-2],在工农业生产和人们的生活中发挥着重要的作用。
本实验室从酱香酒高温大曲中分离到1株产酱香兼性嗜热枯草芽孢杆菌B1⑥,该菌株可用来生产优异的具有浓郁酱香风味的食品[3]。
研究表明,该菌株产生的蛋白酶与食品酱香风味的产生具有密切的关系,利用提取的蛋白酶可发酵生产出酱香风味的食品[4],因而该菌株产生的蛋白酶在食品开发上具有重要的应用价值。
液体发酵一直是微生物生产酶类的主要方法,然而微生物的代谢过程受到p H、温度、溶解氧等一系列外界条件的影响,不同的菌株其发酵条件有非常大的差别,因此选择一个合适的发酵条件对于蛋白酶的生产是非常必要的。
为此,笔者测定了碳源、氮源、p H值、温度、接种量、种龄、溶氧量等条件对该菌株液体发酵产蛋白酶的影响,以确定其最佳发酵条件,以期为蛋白酶的液体发酵生产和应用奠定一定的基础。
1材料与方法111菌株兼性嗜热枯草芽孢杆菌B1⑥,分离自贵州珍酒高温大曲。
112培养基11211种子培养基细菌种子培养基:葡萄糖10g、蛋白胨5g、酵母膏5g、N a C1014g、KH2HPO40103g、CaC120102g、M gSO417H2O0102g,p H值710~712,121e、011MPa灭菌30m in。
11212发酵培养基碳源、氮源、NaC10.4g、KH2H PO40.03g、C a C120.02g、M gSO417H2O0.02g、p H值710~7.2,121e、011MPa灭菌30m i n。
113蛋白酶活力测定采用FoLin)酚法[5]。
2结果与分析211不同氮源对产酶的影响以2g葡萄糖作为碳源,大豆粉、胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硫酸铵各2g作为氮源,培养基装收稿日期:2006-06-02;修回日期:2006-07-03作者简介:郭成栓(1977-),男,河南南阳人,华南理工大学在读博士生,主要从事发酵工程的研究。
量为50mL ,自然p H 值,40e 、200r #m i n -1发酵48h ,测定酶活力。
不同氮源的酶活力分别为634L #mL -1、460L #mL -1、520L #m L -1、354L #mL -1、686L #mL -1、0L #mL -1。
由此可见,以牛肉膏为氮源产酶量最高,以硫酸铵作为氮源时则不产酶。
212 不同碳源对产酶的影响以筛选出来的2g 牛肉膏作为氮源,小麦粉、玉米粉、小麦粉+玉米粉、蔗糖、木糖、乳糖葡萄糖各2g 作为碳源,培养基装量为50mL,自然pH 值,40e 、200r #m i n -1发酵48h ,测定酶活力。
不同碳源的酶活力分别为505L #mL -1、461L #m L -1、576L #mL -1、668L #mL -1、518L #mL -1、508L #mL -1、708L #mL -1。
以葡萄糖作为氮源时,产酶量最高,这可能是因为葡萄糖结构简单,是最容易被利用的单糖,不需要被降解和转化。
213 发酵培养基优化实验以葡萄糖、大豆粉、N a C l 作为三因素,采用三水平(单因子初筛)正交实验:葡萄糖(3,4,5)、大豆粉(3,4,5)、NaC l(0.4,0.6,0.8),培养基装量为50mL ,自然pH 值,接种量体积分数为2%,40e 、200r #m in -1发酵48h,测定酶活力。
从表1和图1可以看出,葡萄糖为3g ,大豆粉为4g ,NaC1为016g 时的培养基,产生蛋白酶量最高,说明这是产蛋白酶最优培养基。
从表1还可以看出,各因子对蛋白酶产量影响大小为大豆粉>葡萄糖>N a C1,大豆粉在蛋白酶生产中的作用比较大,极差比较明显。
表1 培养基优化正交实验极差分析Tab 11 The ana lysis o f devia ti o n o f orthogona l expe rm i en t o f optm i izing med ium处理号1葡萄糖2大豆粉3NaC l A B C 重 复 实 验 结 果12总 和11(3)1(3)1(014)11121082219421(3)2(4)2(016)15121490300231(3)3(5)3(018)10421034207642(4)1(3)2(016)10101045220552(4)2(4)3(018)12561314257062(4)3(5)1(014)10361102213673(5)1(3)3(018)910932184283(5)2(4)1(014)11701208237893(5)3(5)2(016)96210341986K 1727260916078K 2676179507043K c 362066198640820239K c 1121210151118K c 2112713251173A 1B 2C 2K c 3103410331068R B >R A >R CR178310105图1 各因素不同水平的生物效应F i g .1 T he b i o log ic effect o f each fac t o r in d i verse level555第6期 郭成栓,等:枯草芽孢杆菌B 1⑥菌株产蛋白酶液体发酵条件优化214 接种量对产酶的影响发酵培养基装量为50mL ,接种量体积分数分别为1%、2%、3%、4%,40e 、200r #m in -1下发酵48h ,测定酶活力。
从图2可以看出,接种量为2%时,其酶活最高。
这说明接种量为1%时由于菌体细胞量少,产酶量也相应降低;接种量为3%、4%时,菌体细胞量太多,在菌体生长期已把营养物质消耗完,到产酶期营养物质浓度降低,不利于菌体产酶,所以蛋白酶产量下降。
215 pH 值对产酶的影响发酵培养基分别配置成初始p H 值为610、710、810、910、1010,装量为50mL,接种量体积分数为2%,40e 、200r #m i n -1发酵48h ,测定酶活力。
从图3可以看出,在初始p H 值为810时,灭菌后p H 值为710,即中性pH 值产酶量最高,这说明中性培养基有利于产酶。
216 温度对产酶的影响发酵培养基装量为50m L ,接种量体积分数为2%,200r #m i n -1分别置于30e 、40e 、50e 下发酵48h,测定酶活力。
从图4可以看出,温度为40e 时,其酶活最高。
217 种龄对产酶的影响发酵培养基装量为50mL ,接种量体积分数为2%,200r #m in -1分别接种种龄为16h 、24h 、32h 、40h 的菌种,40e 、200r #m i n -1下发酵48h ,测定酶活力。
从图5可以看出,接种24h 种龄的种子产酶量最高,这可能是24h 菌龄的菌株进入对数期,菌体产酶最高活性最强。
218 转速对产酶的影响发酵培养基瓶装量为50mL ,接种量体积分数为2%,分别在50r #m i n -1、100r #m in -1、150r #m in -1、200r #m in -1的振荡速度下培养48h ,测定酶活力。
从图6可以看出,随着摇床转速的增加,产酶量也随着增加,这说明增加溶氧量有利于产酶。
219 培养基装量对产酶的影响250mL 的三角瓶中分别装入25mL 、50mL 、75mL 、100mL 发酵培养基,接种量体积分数为2%,200r #m i n -1振荡速度培养48h ,测定酶活力。
从图7可以看出,随着培养基装量的增加,溶氧量降低,其产酶556山地农业生物学报2006年量相应减少。
对枯草芽孢杆菌B 1⑥菌株产蛋白酶液体发酵条件研究结果表明,其液体最适产酶条件:碳源为葡萄糖,浓度3%,氮源为大豆粉,浓度4%,pH 值810,温度40e ,接种量体积分数为2%,种龄24h ;同时随着溶氧量的增高,蛋白酶的产量随之增高。
但是枯草芽孢杆菌B 1⑥菌株发酵液黏性较大,可能是多糖产量较高,不利于蛋白酶的提取。
后续工作可以对菌株B 1⑥进行诱变育种,从而筛选产蛋白酶活力更高和蛋白酶更易提取的菌株。
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