猪链球菌的比较基因组学研究进展
上海地区种猪场健康猪群猪链球菌监测及血清分型研究
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•调查研究！
《上海畜牧兽医通讯》2021年第3期
1. 2. 2 猪链球菌的分离与鉴定
1.2.4 血清凝集实验
用一次性接种环蘸取口液样本，划线接种哥
取2 mL菌液滴于玻片上，滴加15 mL生理盐
伦比亚血琼脂培养基，置于5% CO2恒温培养箱 水，静置1 min,观察是否发生自身凝集。取2 mL
中，36 =培养24〜4< h；每份样品挑取3〜5个可 菌液滴于玻片上，向菌液中加入15 mL标准阳性血
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猪链球菌9型钦州株的分离及其cps9H基因序列分析
猪链球菌9型钦州株的分离及其cps9H基因序列分析摘要对临床疑似猪链球菌9型(SS9)的病料进行实验室诊断。
通过实验室检测结果证实,分离菌属于SS9,将其命名为QZ49;扩增其cps9H目的基因长为389 bp;与GenBank上国内外SS9毒株核苷酸同源性介于97.2 %~99.5 %之间。
关键词猪链球菌9型;cps9H基因;分离;序列分析近年来,猪链球菌9型的流行趋势逐渐上升,在我国各省(市)均有不同程度的发生和流行[1-2],SS9已逐渐成为危害我国养猪业发展的疫病之一。
本研究就钦州疑似SS9症状的病料进行细菌分离、PCR扩增,并进行测序分析,以期为SS9的分子流行病学提供数据支持。
1材料与方法1.1标准毒株及主要试剂猪链球菌9型标准毒株(Y142株)由广西动物疫病预防控制中心实验室提供。
dNTP、Taq酶、蛋白酶K、SDS、饱和酚等购自TaKaRa公司;LB培养基购自GIBCOL公司。
1.2引物根SS9荷兰5218株设计扩增cps9H基因引物:cps9H1:5′-GGCTACATATAATGGAAGCCC-3′;cps9H2:5′-CCGAAG TATCTGGGCTACTG-3′,预期扩增片段长约389bp。
1.3细菌培养、纯培养及涂片镜检采集某猪场疑似SS9型症状的病料接种鲜血琼脂培养基,37 ℃培养12 h后观察。
挑选可疑的单个菌落接种于链球菌增菌培养基中,37 ℃培养20 h收取细菌液体培养物,涂片、革兰氏染色镜检。
1.4细菌的涂片镜检与DNA的抽提取细菌纯培养物,涂片、革兰氏染色镜检。
之后取液体培养物1.5 mL按传统DNA抽提方法抽提DNA,获得的DNA模板用于下一步操作。
1.5cps9H基因扩增取抽提的DNA模板进行cps9H基因的扩增,反应体系总体积25 μL,内含模板2.0 μL,加10×Reaction Buffer 2.5 μL,dNTP(2.5 mmoL/μL)2.0 μL,Taq DNA酶(5 U/μL)0.25 μL,MgCl2(25 mmoL/L)1 μL,上下游引物(25 pmoL/μL)各0.5 μL,加ddH2O补至25 μL,置PCR仪中,95 ℃预变性5 min;94 ℃变性45 s,56 ℃退火45 s,72 ℃延伸60 s,30个循环;72 ℃延伸10 min。
一株猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究
一株猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究猪链球菌（Streptococcus suis）是一种致病菌，可以引起猪类及人类的疾病。
为了研究猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性，我们进行了以下的研究。
我们从猪体表或组织样本中分离出猪链球菌。
具体的分离方法可以是通过在富含葡萄糖、肉肠葡萄糖（Todd-Hewitt Broth）或大豆消化酶蛋白胨培养基中将样本接种，然后进行培养。
接种后，我们将培养物进行血液琼脂平板上进行培养。
猪链球菌在血液琼脂平板上形成典型的小而圆形的菌落，菌落周围有血红蛋白的降解，形成一个透明的溶血环。
通过观察菌落形态及溶血现象，我们可以初步判断是否分离到了猪链球菌。
我们通过生化试验对分离到的猪链球菌进行进一步的鉴定。
猪链球菌通常对溶血血球敏感，能够在溶血血液琼脂平板上形成溶血环。
猪链球菌在亮氨酸琼脂平板上能够形成胆固醇酰化沉淀，呈现黑色斑点。
猪链球菌还可以产生沉淀酸，对甘露糖进行发酵。
通过这些生化试验，我们可以更加准确地鉴定出猪链球菌。
我们对猪链球菌进行了生物学特性的研究。
猪链球菌是一种革兰氏阳性球菌，可以形成成对或链状排列。
它是一种革兰氏阳性球菌，不产生芽胞。
猪链球菌在37℃下能够生长，并且可以在富含葡萄糖的寒冷环境中长期存活。
猪链球菌通常具有多重药物耐药性，对常用的抗生素如青霉素和四环素等有抗药性。
猪链球菌还可以产生多种毒素，如纤毛毒素和溶血素等，这可以解释其对猪类及人类的致病性。
猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性的研究对于了解猪链球菌的致病机制、寻找有效的防治方法具有重要意义。
通过分离鉴定可以准确判断出猪链球菌的存在，进一步的生化试验则可以更加详细地鉴定出猪链球菌。
猪链球菌的生物学特性研究可以为寻找抗菌药物或疫苗的开发提供重要参考。
链球菌感染的研究进展(完整版)
链球菌感染的研究进展（完整版）前言链球菌感染作为一种常见且具传染性的疾病，其进展不容忽视。
这类细菌广泛存在于自然界及人体中，一旦侵入机体，可迅速引发多种症状，从轻微的上呼吸道感染到严重的化脓性炎症乃至变态反应性疾病。
因此，对于链球菌感染的及时识别与有效治疗至关重要。
链球菌链球菌为革兰阳性球菌，成对或链状排列，兼性厌氧，营养要求高，部分嗜CO2。
生长依赖特殊培养基，如含血培养基，通过同型乳酸发酵分解葡萄糖。
无触酶，种类繁多，多数为人体正常菌群，少数可致病或条件致病。
根据溶血现象，链球菌分为α-、β-、γ-三种类型。
01链球菌分类链球菌是一类多样化的细菌，根据遗传关系和特性，可以细分为多个类别。
链球菌及其相关菌株的遗传关系，包括草绿色链球菌（Mitis Streptococcus）、肺炎链球菌（S.pneumoniae）、血链球菌（Sanguinis）以及牛链球菌（S.bovis，分为有荚膜和无荚膜两种）。
链球菌的分类不仅有助于理解其生物学特性，还对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
例如，肺炎链球菌是引起肺炎等严重感染的主要病原体，而草绿色链球菌则常在口腔中发现，与牙齿健康密切相关。
此外，其他链球菌相关菌株，如肠球菌（Enterococci）等，这些菌株在医学和微生物学领域也具有重要意义。
02人体常见链球菌常见的从人类分离的链球菌分类多样，主要包括以下几种类型：甲型（α）溶血性链球菌：也称为草绿色链球菌，是人类呼吸道及肠道的正常寄居菌，致病力相对较低，但在特定条件下可引起感染。
乙型（β）溶血性链球菌：致病力强，能引起人类多种疾病，如化脓性感染、肺炎等。
其中，A群链球菌（化脓性链球菌）是对人类致病性最高的链球菌之一。
丙型（γ）链球菌：非溶血性链球菌，一般不致病，但在某些情况下也可能引起感染。
此外，根据链球菌的抗原结构和DNA同源性等特征，还可以进一步细分为不同的菌族和血清型，如变形链球菌族、唾液链球菌族、咽峡炎链球菌族等。
一株猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究
一株猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究猪链球菌（Streptococcus suis）是一种常见的猪类病原菌，引起猪脑膜炎、败血症、关节炎等严重疾病。
为了进行猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究，我们进行了一系列实验。
我们收集了来自猪脑膜炎、猪血液和猪关节滑液等病理标本。
将这些标本接种到含有生长培养基（如血平板、肉汤培养基）的培养皿中，经过培养后观察菌落形态和生理特性。
我们观察到猪链球菌的菌落呈乳白色或灰白色，有时伴有微小的溶血现象。
猪链球菌是革兰氏阳性球菌，具有能产生溶血素、生产多糖、氧化酶和嗜热（CAMP试验）等特征。
为了进一步确认分离的菌株是否为猪链球菌，我们进行了一系列鉴定实验。
通过形态学鉴定，我们观察到菌株是革兰氏阳性球菌，呈圆形或椭圆形，成对或链状排列。
之后，通过生理生化试验，我们发现菌株可以产生酸和气体，并能发酵多种碳水化合物，如葡萄糖、麦芽糖、乳糖等。
菌株还具有嗜热性、耐酸性和胆汁溶血性等特征。
进一步进行分子生物学鉴定，我们提取了菌株的基因组DNA，利用PCR技术扩增16S rRNA基因。
将扩增的产物进行测序和比对，我们确定了菌株的物种归属。
我们还利用多型性PCR和脉冲场凝胶电泳等技术，研究了不同分离菌株的遗传多样性和基因型。
在了解猪链球菌的分离鉴定后，我们进一步研究了其生物学特性。
我们通过生长曲线分析菌株在不同温度和pH条件下的生长情况。
结果显示，猪链球菌在37℃下呈现最佳生长，并在pH为7.2-7.4的中性环境中生长最好。
我们还研究了菌株在不同抗生素和环境因子的敏感性和耐受性。
我们通过对猪链球菌的分离鉴定及生物学特性的研究，深入了解了该病原菌的形态学特征、生理生化特性、分子生物学特征和生长特性。
这些研究为进一步探索猪链球菌的致病机理和疫苗研发提供了重要的参考。
2型猪链球菌gene0969基因敲除突变体的构建及毒力分析
方 法 搭建 ３个 片段 ， 克 隆 到 自杀 载体 ｐ Ｅ ４ 并 Ｓ Ｔ ｓ上 ， 建 基 因敲 除载 体 ， 过 同 源 重 组 构建 ｇｎ０ ６ 构 通 ｅｅ ９ ９突 变体 ， 用 小 再
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通
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比有 下 降趋 势 。 结 论 ： ２型 猪链 球 菌假 想 毒 力 因子 ｇｎ ０ ６ ｅｅ９ ９可 能 与毒 力 有 关 ， 作 用 和 机 制 值 得进 一步 分 析 。 其
猪链球菌2型毒力因子研究进展
猪链球菌2型毒力因子研究进展摘要：猪链球菌是重要的人兽共患病，尤以猪链球菌2型最为流行。
通过对猪链球菌2型毒力因子的研究，已确定几种主要毒力因子，研究中又发现几种新型的毒力因子，期望从这些毒力因子当中发现它们的功能及其相互关系，揭开猪链球菌感染的神秘面纱，进而控制猪链球菌病的发生。
关键词：猪链球菌2型；主要毒力因子；新型毒力因子猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是世界范围内引起猪链球菌病最主要的病原，也是重要的人畜共患病病原体，根据菌体荚膜多糖抗原性的不同，分为35个血清型（1—34型，1/2型）[1,2]。
可以引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、肺炎、流产、多浆膜炎及人的急性脑膜炎、永久性耳聋、感染性中毒性休克综合症等疾病，严重的可导致死亡[1,3,4]。
主要致病血清型为SSl、SS2、SSl／2、SS7、SS9和SSl4，其中以SS2流行最广、致病性最强[5]。
我国发生的猪链球菌病主要由C群和D群引起。
由猪链球菌2型引起的猪链球菌病，过去在欧洲、南亚、北美一些国家流行比较多，但近些年在我国也时常发生。
国内1991年在广东省首次分离鉴定到SS2；1998年我国江苏发生的猪链球菌2型引起的链球菌病造成几十人感染，十余人死亡；2005年在四川发生的猪链球菌2型引起的链球菌病导致206人感染，38人死亡；2006年9月，广西某猪场发生由猪链球菌2型引起的链球菌病，导致多头猪只死亡，所幸无人感染。
由于猪链球菌2型引起的链球菌病属人兽共患病，死亡率较高，不仅可造成巨大的经济损失，而且给公共卫生带来严重威胁。
从2007年至2010年，每年暑假我都去猪场实习，发现我所到的几个猪场都将链球菌病列入免疫程序当中，可见人们对链球菌的恐惧并未消除。
SS2存在着强致病力、弱致病力和无致病力菌株。
强致病株引起猪严重的临床症状，并能从中枢神经系统分离出病菌。
弱致病力菌株仅引起温和的临床症状，偶尔能从中枢神经系统分离出该菌。
猪链球菌毒力因子研究进展
猪链球菌毒力因子研究进展马建华;魏建忠【摘要】猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种人畜共患病，不仅给养猪业的健康发展造成极大的危害，还严重威胁着人类的公共卫生安全，已经引起人们的高度重视。
目前，发现和鉴定新的毒力因子成为国内外猪链球菌研究的重点。
论文主要对猪链球菌相关毒力因子荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、胞外因子、溶血素及近几年新发现的相关毒力因子荚膜唾液酸、Cbp40、VirA、pgdA、T rag、溶血素相关基因、CiaRH、CcpA、T ro A进行综述。
通过总结毒力因子对猪链球菌致病机理的影响，以期为猪链球菌病的治疗及疫苗的研制提供理论基础。
%Porcine streptococcosis ,a zoonotic disease caused by Streptococcus suis ,not only does great harm to the development of pig industry ,but also is an important threat to public health security .Now this disease has caught public attention .In recent years ,the detectioin and identification of new virulence factors has become the focus of research at home andabroad .This paper focused on the relevant virulence factors of Streptococcus suis , such as capsular polysaccharide (CPS ) , muramidase-released protein (MRP) ,extracellular protein factor(EF) ,suilysin(SLY) and new virulence-associated gene sequences and proteins foundlately ,containing capsular sialic acid ,Cbp40 ,VirA ,pgd A ,Trag ,hemolsis-related gene , CiaRH ,CcpA ,TroA .This paper summarized the effects of these virulence factors on the mechanisms in pathogenesis of Streptococcus suis ,providing a theoretical basis for the treatments and development of vac-cine .【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】5页(P95-98,99)【关键词】猪链球菌;毒力因子;致病机制【作者】马建华;魏建忠【作者单位】安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230000;安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230000【正文语种】中文【中图分类】S852.611猪链球菌（Streptococcus suis，SS）呈世界范围流行，是一种重要的人兽共患病原菌［1］，根据猪链球菌表面荚膜多糖（capsular polysaccharide，CPS）的抗原性，可以将其分为35个血清型（1～34型和1/2型），其中毒力最强、临床检出率最高的血清型是猪链球菌2 型（Streptococcus suis serotype 2，SS2）［2-3］。
猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析
猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析2021年第2期猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析周婷婷，李媛，任立松，侯凤，贺笋，张飞*（天康生物股份有限公司，新疆乌鲁木齐830010）摘要：为明确导致新疆某猪场猪急性死亡的病原菌，试验对采集的猪病变淋巴结、肺脏进行病原菌分离培养、形态观察、16S rDNA测定、生化鉴定、药敏试验以及PCR血清型鉴定。
将该分离株与国内外13株分离株构建系统进化树进行比对分析。
结果显示：分离菌株镜检观察为革兰氏阳性长链状球菌，具有β溶血性，可发酵大多数糖类，符合猪链球菌的生化特性；分离菌株16S rDNA序列与猪链球菌标准菌株ATCC43765（GenBank登录号：NR_115737.1）同源性为100%；采用PCR方法对分离菌株进行血清型鉴定扩增出约390bp的荚膜血清9型特异性条带。
分离菌株对林可霉素、多西环素、青霉素钠、环丙沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、替米考星、氧氟沙星、磺胺嘧啶钠、硫酸黏菌素、氨苄西林钠11种药物敏感，对四环素、庆大霉素、阿莫西林表现耐药。
研究表明，分离株为猪链球菌，荚膜血清9型，命名为XJS9。
关键词：猪链球菌；分离鉴定；16S rDNA中图分类号：S855.1文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）02-0057-05 Isolation,identification and16S rDNA sequencehomology of Streptococcus suisZhou Tingting,Li Yuan,Ren Lisong,Hou Feng,He Sun,Zhang Fei*(Tecon Bio-technology Co,Ltd,Xinjiang Urumqi830010)Abstract:In order to clarify the pathogenic bacteria that caused the acute death of pigs in a pig farm in Xinjiang,the test carried out the isolation and culture of pathogenic bacteria,morphological observation,16S rDNA determination, biochemical identification,drug sensitivity test and PCR serotype identification on the collected diseased lymph nodes and lung tissues of pigs.A phylogenetic tree was constructed from this isolated strain and13domestic and foreign isolates for comparative analysis.The results showed that the isolated strain was gram-positive long-streptococcus observed under microscopy.It hadβ-hemolytic properties which can ferment most sugars,and conforms to the biochemical characteristics of Streptococcus suis.The16S rDNA sequence of the isolated strain was comparable to the standard strain ATCC of Streptococcus suis.43765(GenBank accession number:NR_115737.1)had a homology of100%.The serotype identification of the isolated strains by PCR method was used to amplify a type9-specific band with a size of about390bp. The isolated strains were p-lincomycin,doxycycline,penicillin sodium,ciprofloxacin,ceftiofur,florfenicol,tilmicosin, ofloxacin,sulfadiazine sodium,colistin sulfate,ampicillin Cillin sodium was sensitive to11drugs and was resistant to tetracycline,gentamicin,and amoxicillin.The study indicated that the isolated strain was Streptococcus suis,capsular serotype9,named XJS9.Key words:Streptococcous suis;isolation and identification;16S rDNA猪链球菌病（swine Streptococcosis）是由多种不同菌群的链球菌感染引起的一类传染病的总称[1]，以败血症、淋巴脓肿、心内膜炎、多发性浆膜炎等为典型特征，也可引起人的化脓性脑膜炎、败血症、关节炎，主要表现为发热和毒血症状，导致器官衰竭而死亡，是一种人畜共患病。
猪链球菌2型的生物学特性检测与分析
猪链球菌2型的生物学特性检测与分析猪链球菌可以引起猪、人及其他动物疾病，是一种产生严重经济损失的病原菌。
猪链球菌在生物学上分型，主要以血清型分类，目前已确定23个血清型。
其中，2型猪链球菌是最常见的病原型，在猪和人中广泛分布。
2型猪链球菌的形态特征是革兰氏阳性球菌，直径在0.5~1.0μm之间，呈二联体或长链状。
它是一种能利用大量碳源的嗜肉性细菌，生长速度较慢，需要富含营养物质的培养基，如Todd-Hewitt培养基或Columbia-血培养基。
它能够利用细胞外基质附着蛋白（FnBP）进行附着，在细胞表面形成胞外聚集体（biofilm），从而增加了其与宿主免疫反应的逃避性。
2型猪链球菌能够产生多种外毒素和组织破坏酶，并在感染过程中形成膿性分泌物，对宿主组织产生直接的损害。
检测2型猪链球菌的方法主要包括传统方法和分子生物学方法。
传统方法主要包括生物化学鉴定和血清学鉴定两种。
生物化学鉴定是基于2型猪链球菌的代谢特征进行，包括商用酶板试剂（API20 STREP系统）、氧化/还原试验等；血清学鉴定是基于2型猪链球菌特异性抗原进行，利用酶联免疫吸附试验、血凝试验等方法进行。
分子生物学方法主要包括PCR技术和DNA测序技术。
PCR技术可以针对2型猪链球菌的特定基因进行扩增，如sodA、ply和cps2J等基因，以实现2型猪链球菌的快速检测和定量分析。
DNA测序技术可以对2型猪链球菌的整个基因组进行测序分析，对其生物学特性进行全面的揭示。
总之，2型猪链球菌是一种常见的病原菌，具有复杂的生物学特性。
传统方法和分子生物学方法可以实现2型猪链球菌的检测和分析，为疫情监测、病原防控和药物研发提供有力支持。
猪群链球菌病诊断及治疗
摘要：猪链球菌病是一种急性热性高度接触性的人畜共患病。
除了危害猪以外，还可以危害多种动物和人类。
已知的链球菌血清型有35个，其中具有致病性的是链球菌二型，并且在全球范围内流行较为广泛。
临床表现猪链球菌病以心内膜炎、急性败血症、关节炎和脑膜炎为主要特征，具有发病急、死亡率高的特点。
在某些地区，猪链球菌病的死亡率甚至高达20%。
由于猪链球菌病在规模化生猪养殖产业发展过程中呈现高发趋势，对猪群健康造成严重威胁。
此外，人类也容易感染猪链球菌病，尤其是与猪打交道的养殖工人和屠宰工人等高风险人群。
因此，对于猪链球菌病的诊断和治疗变得至关重要。
本文结合实际工作经验，探讨了猪链球菌病的流行病学诊断和治疗措施，希望对广大同行更好的防控各种疾病有一定的帮助。
关键词：猪链球菌病；诊断；治疗措施猪群链球菌病诊断及治疗张玉冬（秦皇岛抚宁区农业农村局留守营动物防疫监督站河北秦皇岛066300）收稿日期：2023-04-25作者简介：张玉冬（1975.12.29—），女，河北秦皇岛人，本科，兽医师，动物疫病防控。
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.03.013秦皇岛市抚宁区的生猪养殖业比较发达。
目前，该区域的生猪养殖主要以小规模家庭式养殖为主，同时也有一些中等规模的养殖场。
据统计数据显示，截至2020年底，抚宁区生猪养殖户数为2976户，养猪头数为15.9万头，年出栏量达到32.3万头。
其中，规模以上生猪养殖场有9家，规模以上养猪头数占全区总养猪头数的比例为6.9%。
抚宁区的生猪养殖业以生态养殖为重点，大部分养殖户采用无公害、绿色环保等先进的生产方式，从而保证了肉品的质量和安全性。
同时，抚宁区还积极开展生猪养殖业的规范化、标准化建设和管理，提高了生产效益和经济效益。
不过，随着环保要求的不断提高，抚宁区生猪养殖业也面临一些环保压力，需要加强技术改造、污染治理和资源节约等方面的工作，尤其应该注重做好动物疫病有效防范，加强常见差异性疾病的流行病学调查，提高养猪业的可持续发展水平。
猪链球菌GZ1基因组密码子使用分析
・
１ ・ ０
罗 雪 莲 等 ： 猪链 球 菌 Ｇ １ 因组 密 码 子 使 用 分 析 Ｚ基
表 达水平 也越 高 。 Ｅ Ｃ绘 图分析 （ ｃ ｌｔ： Ｎ Ｎ —ｐｏ） 主要 是探 索 Ｅ Ｃ值 Ｎ
望值 可 以通 过 以下 公 式 计 算 ： Ｎ Ｅ Ｃ期 望 值 ＝ ２ ＋Ｓ ＋｛９ ÷［ １一ｓ ２ ｓ ＋（ ） ］｝ 其 中 ｓ 表 Ｇ ３ ＿’ 。 ， 代 Ｃ ｓ１
１２ ２对应分 析 ．．
对 应分 析 （ ｏｒｓｏ ｄ ｎｅａ ａ ｓ ，Ｃ Ａ） 主 ｃｒ ｐ ｎ ｅ ｃ ｎｌ ｉ Ｏ ｅ ｙｓ 要是用 来检 测基 因 Ｒ Ｃ Ｓ Ｕ值 的变 化并 推测 影 响基 因
子使用 变异 ， 的值 是 实 际观 察 值 与 理 论期 望 值 的 它
比率 。如 果 该 密 码 子 使 用 平 均 ， 偏 好 性 ， 无 则 ＲＣ Ｓ Ｕ值 为 １ 如果 该 密码 子 比起 其他 同 义密码 子 出 ； 现 更为 频繁 ， Ｒ Ｃ 则 Ｓ Ｕ值大 于 １ 反之 亦然 。 ， Ｇ ３ 值 是第 三 位 密 码 子 的 Ｇ＋Ｃ含 量 在基 因 Ｃｓ 碱基 总量 中所 占 的 比率 （ 氨 酸 、 氨 酸 和终 止 密 蛋 色
量 轴上 的位置 可 以确定 一组数 据 的主要 变化趋 势 。
２ 结 果
和 Ｇ ３ 分布的关系。图中标准 曲线表示在不存在 Ｃｓ
选 择压力 时 ， 密码子 偏好 性完 全取决 于 突变压 ， 即序 列 本身 核酸组 成偏 好性 。若 一个 基 因 的密码 子 使用 模 式受 到 Ｇ Ｃ碱 基组 成 的影 响 ，那 么这 个 基 因将 落 在 Ｎ ｐｏ 期 望 曲线 的上面或 较近 的位 置 ， 则该 ｃ— ｌｔ 否 基 因将 落在 离 期 望 曲线 比较 远 的 位 置 Ｎ １ 。Ｅ Ｃ期 ４ ３
猪2型链球菌
石河子部分猪场链球菌2型的分离鉴定与毒力因子检测霍永，李劼，张银国*(新疆石河子大学动物科技学院，石河子市832003)摘要：为了解石河子垦区具有呼吸道病症状的病死猪感染猪链球菌2型的情况，对采集的53份肺脏组织进行了猪链球菌的分离培养、生化鉴定、PCR鉴定以及cps2J、ef、mrp毒力因子的检测。
结果：分离出猪链球菌2型21株；其中株毒力因子为ef，株毒力因子为cps2J/ef结论：关键词：猪链球菌2型；分离鉴定；毒力因子猪链球菌2型(Streptococcus suis,SS2)是一种严重危害养猪业的重要病原之一，能引起猪的关节炎、脑膜炎、胸膜肺炎、败血症、脓肿等，并且猪链球菌2型能引起人感染发病，是重要人畜共患病病原[1]，从事屠宰或与生猪肉打交道的人易通过伤口感染，引致人脑膜炎、败血症、心内膜炎、并可致死[2]。
为了解石河子垦区具有呼吸道病症状的病死猪感染猪链球菌2型的情况，对采集的55份肺脏样品进行了猪链球菌2型的分离鉴定与药敏试验，以期为垦区预防和控制该病的流行提供重要依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1病料于12个猪场无菌采集具有明显呼吸道病症状的病死猪肺脏组织，共75份。
1.1.2主要试剂及仪器含5%血清的Todd-Hewitt肉汤(THB)，含5%血清的选择性THB，普通琼脂绵羊血平板，选择性普通琼脂绵羊血平板；药敏纸片由本实验室自制；小白鼠由石河子大学实验动物中心提供。
2×Taq PCR MasterMix（北京诺维森生物科技有限公司），定量Marker1、Marker2000(广东东盛生物科技有限公司)，PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统均为Bio-Rad公司产品。
1.3.3引物合成猪链球菌2型荚膜多糖基因(cps2J)、溶菌酶释放蛋白基因(mrp)、胞外因子(ef)的引物参照文献[4]由上海生工生物工程有限公司合成。
详见表1：表1 PCR引物、退火温度及目的片段大小目的基因引物序列退火温度/时间产物大小ef P1 5'-ACA AAG GCG TAG GTT CAA TC-3'55℃/30s 269bp P2 5'-CGG CAT CAA GAA TGT CTT TG-3'cps2J P1 5'-GTT GAG TCC TTA TAC ACC TGT T-3' 55℃/30s 450bp P2 5'-CAG AAA ATT CAT ATT GTC CAC C-3'mrp P1 5'-GGTATACCT TGC TGG TAC CGT TC-3' 60℃/30s 532bp P2 5'-AGT CTC TAC AGC TGT AGC TGG-3'1.1.3PCR阳性对照××疫苗。
猪链球菌核糖体基因分型研究
１ ． 猪 链 球 菌 基 因组 Ｄ Ａ 的提 取 ．１ ２ Ｎ
１２１１ 取 １５ ．．． ．ｍＬ培 养 至 对 数 晚 期 的 菌
链 球 菌 ）是 一 种 重 要 的 人 畜共 患 病 病
不 同地 区菌 株 之 间 的 遗传 背景 、毒 力 因 子 的表 型 、临 床 特征 以及 鉴 定 猪 群 是 否
携 带 毒 力 菌 株
Ｉ Ｃ ＴＴ Ｔ ＡＣＣ Ｔ Ｉ ＡＣ ５ ＧＧ Ａ Ｔ ２ Ｔ Ｇ ｒ ＧＡＣＩ农 业 大 学 动 物 科
杂 交 带 型 分 析 ． 进 而 对 猪 链 球 菌
参 照 Ｇ ｎ ａ ｋ上 已发 表 的 猪链 球 ｅ ｅＢ ｎ 菌 １ ｓ Ｎ 序 列 两 侧 保 守 区 域 ，利 用 ６ｒ Ａ Ｒ
Ｐｉ ｒ． ｒ ５０设 计 引 物 ． 由 上 海 生 工 生 物 ｍｅ
进 行 核 糖 体 基 因 分 型
清 型 的菌 株 之 间 的毒 力 差 别 很 大 ，并 非
所有 的 ｍ 清 均致 病 ， 即使 同一 血 清 型 ｌ 的菌 株 也 不 一 定 引起 相 同 的临 床 症 状 和 疾 病 。 而 且 不 同 国 家 分 布 的 血 清 型 不 同 ，如 血 清 型 ２型 存 在 于 世 界 各 地 ，但 主要 是 在 欧洲 的大 部 分 地 区 ： 咀清 ９型
验 室并 不 熟 悉 这 种细 菌 ，往 往 误 认 为 是 肠 球菌 、肺 炎球 菌 、 牛链 球 菌 等 ，从 而
１ 实验 材 料 与 方法
１１ 实 验 材 料 ．
１小 时 。 １２１３ 加 １ ０ｚ ｍｏ／Ｎａ ．充 分 混 －．＿ ０ ｔＬ ５ ｌ Ｌ Ｃ１
猪链球菌2型毒力因子研究进展
猪链球菌2型毒力因子研究进展吴立志;王金良;肖跃强;李书光;祖立闯;伍晓雄;沈志强【摘要】猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,其主要毒力因子包括英膜多糖、溶菌酶释放蛋白、溶血素、纤连蛋白结合蛋白、谷氨酸脱氢酶等,但是这些经典的毒力因子不足以解释猪链球菌病发病的临床症状,而且毒力表型往往与实际毒力及临床症状不符.近年来随着研究的深入,鉴定出一系列毒力相关元件,主要有Sao蛋白、存在于89K毒力岛的双信号转导系统(salk-salR)、dltA基因、pgdA基因、srtA基因、Ⅳ型二肽基肽酶(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPPⅣ)、毒力调控子R(control of virulence R,CovR)、烯醇酶(enolase)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GlnA)等.论文对以上毒力因子研究进展进行综述,以期为SS2毒力因子及致病机制研究提供参考.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)006【总页数】5页(P118-122)【关键词】猪链球菌2型;毒力因子;致病机制【作者】吴立志;王金良;肖跃强;李书光;祖立闯;伍晓雄;沈志强【作者单位】华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600【正文语种】中文【中图分类】S852.4猪链球菌2型（Streptococcussuis serotype 2，SS2）是重要的人兽共患病病原。
1998年和2005年分别在我国江苏省和四川省暴发了人感染猪链球菌2型的疫情，患者表现出中毒性休克综合症（STSS）、败血症、脑膜炎甚至死亡等严重的临床症状［1］。
我国不同地区健康猪猪链球菌检出率调查
我 国不 同地 区健 康 猪猪 链 球 菌检 出率 调 查
纪少博 ， 白雪梅 ， 刘 凯， 刘志 杰 ， 侯 雪新 ， 郑 翰 ， 李振 军
摘 要 ： 目的 了解 我 国 不 同地 区健康 猪 猪 链 球 菌 的检 出率 ， 评 估猪 链 球 菌 感 染 风 险 。方 法 分 别 从 不 同地 区采 集 正 常
屠 宰猪 或 活体 采 集 猪 咽 拭 子 ， 经选 择 性 培养 基 增 菌 培 养 ， 用Ｐ Ｃ Ｒ 的方法进 行猪链 球菌特 异 的 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ ＮＡ、 ｇ ａ ｐ ｄ ｈ 以及 ｃ ｐ ｓ ｌ ｊ 、
ｃ ｐ ｓ ２ ｊ 、 ｃ ｐ ｓ ７ ｈ 、 ｃ ｐ ｓ ９ ｈ 、 ｍｒ ｐ 、 ｅ ｆ和 ｓ ｌ ｙ 的 检 测 。 结 果 共 采 集 ３ ３ ７份 咽拭 子 标 本 。猪 链 球 菌 的检 出率 为 ９ ３ ． ８ Ｖ ｏ （ ３ １ ６ ／ ３ ３ ７ ） 。３ １ ６ 份 阳 性标 本 ｅ ｅ ， 毒 力 基 因 ｍｒ ｐ、 ｅ ｆ 、 ｓ ｌ ｙ 的 检 出率 分 别 为 ２ ９ ． ４ ，７ Ｏ ． ３ ， ８ ３ ． ９ ， 血 清 ２型 为 优 势 血 清 型 ６ １ ． ４ （ １ ９ ４ ／ ３ １ ６ ） 。 结 论 高 致 病 性 猪 链 球 菌 的检 出率 很 高 ， 可 能 的猪 链 球 菌 感 染 风 险不 容 忽视 。 关键词 ： 猪链球 菌； 毒力基 标 识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ —２ ６ ９ ４ （ ２ Ｏ １ ３ ） ０ ２ —０ ４ ２ ３ —０ ４
Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ２ ２ ０ ６ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
一株猪源豕链球菌的分离鉴定
一株猪源豕链球菌的分离鉴定陈煜;吴达;孙敏;王楷宬;邓明俊;吴振兴;岳志芹;郑小龙;孙涛【摘要】从一头痛死猪分离到一株疑似猪链球菌的菌株,通过生化鉴定、链球菌血清学分群、猪链球菌的血清学分型、PCR鉴定排除了是猪链球菌的可能.应用16 S rDNA的通用引物27F和1492R对可疑菌的核酸扩增、测序及序列比对表明,所分离到的菌株与豕链球菌具有98％的同源性,因此判断为豕链球菌.小鼠感染试验显示,感染的小鼠没有明显的发病症状,且2周后仍正常存活,因此认为所分离的豕链球菌不具有致病性或具有较弱的致病性.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)012【总页数】5页(P219-223)【关键词】豕链球菌;分离鉴定;致病性分析【作者】陈煜;吴达;孙敏;王楷宬;邓明俊;吴振兴;岳志芹;郑小龙;孙涛【作者单位】山东出入境检验检疫局,山东青岛266002【正文语种】中文【中图分类】S852.611链球菌科包括2个属，链球菌属和乳球菌属，链球菌属包括89种链球菌，豕链球菌和猪链球菌同属于链球菌属。
Collins于1984年将豕链球菌归入兰氏血清群E、P、V、U以及其他3个抗原群，即C1、5916T和7155A，豕链球菌的模式株包括NTCC10999、SS-1029和 ATCC43138［1］。
而猪链球菌的血清群包括C、D、E和L群，在血清学上两者可能存在交叉反应。
两者在生长表现及形态学上非常相似，即在血琼脂平板上菌落都为光滑、圆润的呈现明显的β型溶血，在普通光学显微镜下，经革兰染色后都表现为革兰阳性、长短不一的球菌。
据报道，豕链球菌通常与猪的化脓性感染有关，如子宫颈淋巴管炎、脓肿、肺炎、败血症和心内膜炎［2］。
有报道称该菌可引起猪流产［3-4］。
据报道从健康猪也能分离到该菌［5］。
从女性的生殖系统可分离到该菌［6］，作为致病菌，主要感染女性的生殖系统［7］，可引起死胎［8］。
也有该菌引起皮肤外伤感染的报道［9］。
猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性试验
反应 体 系的基 础上 ， 点优 化 ３种 引 物 之 间 的 比例 重 和退 火温 度 。优化 后 的 Ｐ Ｒ反 应 体 系 为 ５ Ｌ， Ｏ Ｃ Ｏ １
×Ｂｕ ｆ ｒ（ ｇ 一 ｅ ） ５ ｕ ２ ｆｅ Ｍ 抖 Ｆｒ ｅ Ｌ， ５ ｍｍｏ／ ４ ｌ Ｌ Ｍｇ
２ １ 病 原分 离 与培 养 特 性 病 料直 接 涂 片及 分 离 ． 菌 固体 培养 物 以双球 、 在为 主 ， 体培 养 物 以长 链 散 液 为 主 ， 般 ６ ２个 ， 兰染 色 为 阳性 ： 色呈 蓝 紫 一 ～１ 革 染 色， 短链 状 ， 链较 长且 长短 不一 。分 离菌 株 在普通 营 养 琼脂 平板 上 生长极 贫瘠 ， 养 ２ 培 ４ｈ后 仅 在划线 处 见 有针 尖大 小 的菌 落 ； 绵 羊 鲜 血 琼 脂平 皿 上 直 径 在
酶 ０ ３ Ｌ， ． ＤＮＡ 模 板 １ Ｌ， 物 均 为 ０ ８ Ｌ。 最 引 ．
后 用无 菌去 离 子 水 补 至 ５ Ｌ Ｏ 。Ｐ Ｒ 反 应程 序 为 ： Ｃ ９ ℃预 变性 ４ ｍｉ ， 后 ９ ℃变 性 ４ ， ４℃ 复 性 ４ ｎ然 ４ ５Ｓ ５ ４ ，２℃延 伸 ８ ， ３ ５Ｓ ７ ０Ｓ 共 ０个 循 环 ， 后 ７ 最 ２℃延 伸
０ ３ １ ０ｍｍ 形 成灰 白色 、 透 明 、 面光 滑 、 缘 ． ～ ． 半 表 边 整齐、 针尖 大 的圆形 小 菌 落 ， 多呈 ａ溶 血 ， 分 菌 大 部
株 产 生 Ｂ溶 血 。
Ｌ，． ２ ５ｍｍｏ／ ＮＴ Ｌ， Ｔ ｑ Ｄ ｌＬ ｄ Ｐ ４ｇ ５Ｕ ａ ＮＡ 聚 合
的差异 ， 猪链 球 菌可分 为 ３ ５个 血清 型 （ １型 ～ ３ ４型 和 １ ２型） 其 中 ２型对 猪 和人 均有 很 强 的致 病力 ， ／ ，
猪链球菌基因芯片检测方法的研究
３ ８
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
Ｃ ｈ ｎｅ ｅＪ ｒ ｌｏ ｏｎ ｅ ｉ ｓ ｏｕ ｎａ ｆＺｏ ｏｓ ｓ
文章 编 号 ：０２ ６ ４ ２ ０ ） １ ０ ８ ４ １０ —２ ９ （０ ８ ０ —０ ３ —０
猪 链 球 菌 基 因芯 片检 测 方 法 的 研 究 ＊
郑 峰 。王 长 军。 曾海 攀。 董 亚 青 鞠 爱萍。 潘 秀珍 。 朱 进 。唐 家琪 － ， ， ， ， ， ， ，
摘 要 ： 目的 建 立 猪 链 球 菌 基 因 芯 片 检 测 方 法 ， 现 对 猪 链 球 菌 种 、 病 血 清 型 及 毒 力 相 关 基 因 的 同 步 检 测 和 鉴 定 。 实 致
ＺＨＥ ＮＧ ｅ ｇ Ｗ ＡＮＧ ａ ｇｊ ｎ， ＥＮＧ ｉ ａ ＤＯＮＧ — ｉ ｇ，Ｕ — ｉｇ， Ｆｎ ， Ｃｈ ｎ —ｕ Ｚ Ｈａ— ｎ， ｐ Ｙａｑｎ Ｊ Ａｉ ｎ ｐ
ＰＡＮ ｕ ｚ ｅ ＺＨＵ ｉ ＴＡ ＮＧ ｉ— ｉ Ｘｉ—ｈ ｎ， Ｊｎ， Ｊａｑ
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ＡＢ Ｔ Ｓ ＲＡＣ Ｉ ｒ ｅ ｏ ｄ ｖ ｌ ｐ ａＤＮＡ ｃ ｏ ｒ ａ ｅ ｅ ｔＳ ｅ ｔ ｃ ｃ ｕ ｕ ｓ ｓ ｅ ｉ ｓ ｔ ｅ ｏ ｙ ｅ ａ ｄ ｖ ｒ Ｉ ｎ ｅ ａ ｓ ｃａ ｅ Ｔ； ｎ ｏ ｄ ｒｔ ｅ ｅｏ ｍｉｒ ａ ｒ ｙｔ ｄ ｔ ｃ ｔ ｐ ｏ ｏ ｃ ｓ ｉ ｐ ｃｅ ，ｉ ｓ ｒ ｔ ｐ ｎ ｉｕ ｅ ｃ — ｓ ｏ ｉｔ ｄ ｏ ｓ ｓ ｇ ｎ ｓ ｓｍｕ ｔ ｎ ｏ ｓｙ ｅ ｆｐ ｏ ｅ ｐ ｃ ｆ ｏ ｈ ａ ｇ ｔｇ ｎ ｓｗｅ ｅ ｄ ｓｇ ｅ ．Ｔｈ ｓ ｒ ｂ ｓ ｗｅ ｅ ｓ ｎ ｈ ｓｚ ｄ ｂ ｅ ｅ ｉ ｌ ｅ ｕ ｌ ，ａ ｓ ｔｏ ｒ ｂ ｓ ｓ ｅ ｉ ｃｆ ｒｔ ｅｔ ｒ ｅ ｅ ｅ ｒ ｅ ｉ ｎ ｄ ａ ｉ ｅ ｅ ｐ ｏ ｅ ｒ ｙ ｔ ｅ ｉｅ ｙ ＤＮＡ ｙ — ｓｎ ｔｅｉ ｒ ｈ ｓ ｅ ．Ｔｈ ｃ ｏ ｒ ａ ｓ ｐ ｅ ａ ｅ ｙ ｓ ｏ ｔ ｇ ｔ ｅ ｅｐ ｏ ｅ ｎ ｏ ｔ ｅ ｓ ｅ ｉｌ ｒ ａ ｅ ｌｓ ｌｄ ｒ ．Ｇｅ ｏ ｃＤＮＡ ｆ ｐ ｃ— ｚ ｅｍｉ ｒ ａ ｒ ｙ ｗａ ｒ ｐ ｒ ｄ ｂ ｐ ｔｉ ｈ ｓ ｒ ｂ ｓｏ ｔ ｈ ｐ ｃａ ｌ ｔ ｅ ｔ ｄ ｇ ａ ｓ ｓｉ ｅ ｓ ｎ ｙ ｎ ｍｉ ｏ ｅ ｉ ｓ ｍｅ ｓ ｐ ｅ ａ ｅ ｏ ｔｎ ｌ ｎ ａ ｅ ｅ ． Ｆ ｌｏ ｎ ｙ ｒｄ ｚ ｔ ｎ ｏ ｂ ｌｄ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｔ ｅｍ ｉｒ ａ ｒ ｙ ，ｄ ｔ ｃ ｉｎ ｗａ ａ ｒｅ ｎ ｗａ ｒ ｐ ｒ ｄ ｒ ｕ ｉ ｅｙ ａ ｄ ｌ ｂ ｌ ｄ ｏ ｌ ｗｉ ｇ ｈ ｂ ｉ ｉａ ｉ ｆｌ ｅｅ ｒ ｄ ｃｓ ｏ ｈ ｃ ｏ ｒａ ｓ ｅ ｅ ｔｏ ｓ ｃ ｒ ｉｄ ｏ ａ ｏ ｔ ｂ ｌ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅｓ ａ ｎ ｒ Ｉ ｓｄ ｍｏ ｓ ｒ ｔ ｄ ｔ ａ ｈ ｒ ｂ ｓｄ ｓ ｎ ｄ ｆ ｒ Ｓ ｅ ｔ ｃ ｃ ｕ ｕ ｓ ｓ ｅ ｉｓ ｅ ｏ ｙ ｅａ ｄ ｖｒ ｌ ｎ ｅ ｕ ｙ ｆｕ ｒ ｓ ｅ ｃ ｃ ｎ ｅ ． ｔｗａ ｅ ｎ ｔａ ｅ ｈ ｔｔ ｅ ｐ ｏ ｅ ｅ ｉ ｅ ｏ ｔ ｐ ｏ ｏ ｃ ｓｓ ｉ ｐ ｃｅ ，ｓ ｒ ｔ ｐ ｎ ｉｕ ｅ ｃ － ｇ ａ ｓ ｃａ ｅ ｅ ｅ ｏ ｌ ｅ ｅ ｔｔ ｅ ｃ ｒ ｅ ｐ ｎ ｉ ｇ ｔ ｒ ｅ ｅ ｅ ｔ ｒ ａ ｅ ｓｔ ｉ ｎ ｐ ｃｆ ｙ ｈ ｗｅ ｅ ｅｅ ｔ ｎ ｗｉ ｒ ｂ ｓ ｏ ｉｔ ｄ ｇ ｎ ｓ ｃ ｕ ｄ ｄ ｔ ｃ ｈ ｏ ｒ ｓ ｏ ｄ ｎ ａ ｇ ｔ ｎ ｓ ｗｉ ａ ｇ ｅ ｔｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ａ ｄ ｓ ｅ ｉ ｔ ， ｏ ｖ ｒｄ ｔ ｃ ｉ ｔ ｐ ｏ ｅ ｇ ｈ ｉ ｙ ｉ ｏ ｈ ｓ ｅ ｉ ｃ ｆ ｒ ｄ ｆｅ ｅ ｔｓ ｒ ｉ ｓｆ ｉ ｄ Ｉ ｉ ａ ｐ ｒ ｎ ｈ ｔｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｓ ｉ ｅ ｅ ｈ ｐ ｍｅ ｈ ｅ － ｐ ｃｆ ｏ ｉｆ ｒ ｎ ｔａ ｎ ａｌ ． ｔ ｓ ｐ ａ ｅ ｔ ａ ｈ ｉｇ ｏ ｔｃｇ ｎ ｃ ｉ ｔ ｏ ｓ ｎ ｉｉｅ ａ ｄ ｓ ｅ ｉ ｏ ｄ ｔ ｃ ａ ｈ ｇ ｎ ｉ ｅ ｔ ｓ ｉ ｉ Ｓ ｒ ｐｔｃ ｃ ｕ ｕ ｓ ｃ ｔｅ ｏ ｏｃ ｓ ｉ． ｓ ＫＥＹ ＯＲＤＳ：Ｓｔｅ ｔ ｃ ｃ ｕ ｕ ｓ ｍｉｒ ａ ｒ ｙ ｓ ｒ ｔ ｐ ； ｉｕ ｅ ｃ Ｗ ｒｐ ｏ ｏ ｃ ｓ ｉ； ｃ ｏ ｒａ ； ｅｏｙ ｅ ｖｒｌｎ ｅ ｓ
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猪链球菌的比较基因组学研究进展
猪链球菌是一种重要的人兽共患病病原菌, 可以引起人猪链球菌病暴发流行。
近几年来, 猪链球菌的基因组学研究发展迅速: 共有6株猪链球菌的基因组全序列公布。
6株测序菌株都是血清2型, 并引起脑膜炎、败血症等侵袭性感染。
其中89- 1591为北美分离株, P1 /7 为欧洲分离株,BM407为越南分离株, SC84、98HAH33和05ZYH 33等3株为引起暴发流行的中国分离株。
6株测序菌株的基因组都含有一条染色体, C + G 含量为41% 。
近几年来, 猪链球菌的比较基因组学研究发展迅速, 采用多种技术从基因组水平发现和比较了猪链球菌菌株间共同具有的和菌株特异的基因。
通过对菌株P1 /7 的基因组序列进行功能注释, 同时将其与菌株89- 1591的部分基因组序列进行系统的比较基因组学的研究。
2个菌株的基因组比较结果表明, 其平均编码区( CDS )的长度非常接近, 大部分的CDS序列具有一定的相似性。
在所有开放阅读框( ORF) 中, 同源ORF 数为1306 个。
2个菌株的毒力相关因子大多数具同源性, 都含有编码溶菌酶释放蛋白(M rp)、纤维原结合因子( FBP)、谷氨酸脱氢酶( GDH )、甘油醛- 3-磷酸脱氢酶( GAPDH )以及与其他细菌如戈登链球菌(Streptococcus g ord on ii )、肺炎链球菌( Streptococcus pneumoniae) 以及化脓性链球菌( Streptococcus pyogenes) 等具同源性的双肽酰肽酶( D ipeptidy l peptidase, DPP)。
但毒力因子也存在明显差异, P1 /7中编码细胞外因子( EF)和溶血( Haemo lysin)的基因未在89- 1591菌株中发现。
预测到的P1 /7的表面蛋白质( surface protein) 中有11个具有革兰阳性锚定蛋白功能域, 其中有2 个蛋白( SSU1474,SSU1886) 未能在89 - 1591 中找到相应的同源基因。
同时, P1 /7的7个具有YSIRK 功能域的表面蛋白质中有3个( SSU1715、SSU1773、SSU1849)未在89- 1591 中发现。
对于具有转肽酶( sortase) 功能域的蛋白, 89- 1591 中只找到4个可能与P1 /7 相关蛋白质匹配的基因, 而缺失SSU1882 和SSU 1883的同源基因。
这些特性表明2个菌株的遗传背景不同, 为了适应不同的环境压力而演化出各自特有的功能单位, 提示2个菌株在致病机制上存在着一定的差异。
单核苷酸多态性( SNP ) 分析表明,05ZYH33与98HAH12之间的Ka /Ks比值为0.776;98HAH12与P1 /7之间的Ka /Ks比值为0.816; 3个基因组的K a /K s无显著差异, 提示其进化过程中经历了相近的选择压力。
基因组全长的C + G 含量、共线性比较等, 提示流行株98HAH12 和05ZYH 33中都含有一个约89Kbp 长度的特异DNA 片段。
不同来源的2个89K 片段序列几乎完全相同, 不同之处为89K05较89K98长19 bp。
89K 特异片段的平均G+ C含量为36.8% , 显著低于猪链球菌基因组的平均G + C 含量( 41.1% )。
随着DNA 测序技术的发展, Roche 454、So lex a等新一代高通量测序平台被应用于细菌的基因组测序。
Sanger 研究所采用Sanger 法、454 /Roche GS20、So lex a等技术分别完成了3株猪链球菌(血清2型)的基因组测序[ 14] 。
其中, 欧洲菌株P1 /7分离自疫猪的血培养物, MLST 型别为ST1。
ST1型菌株BM 407分离自越南胡志明市1 名脑膜炎患者的脑脊液。
基因组序列的比较结果显示, 3株测序菌株的基因组高度保守, 共有成分占绝大多数。
病例分离株与疫猪分离株的主要遗传学差异为3个长度约90Kbp的插入片段。
插入片段为镶嵌样结构, 由ICE 成分和转座子组成。
测序的猪链球菌与链球菌属的其他基因组相比, 约60% 编码基因为直系同源基因, 猪链球菌
特有的编码基因约占40% 。
其中,血链球菌( Streptococcus sanguinis )与戈登链球菌的基因组序列与猪链球菌P1 /7的直系同源匹配率最高, 分别为66.1%和65.6% 。
3个测序菌株的基因组结构呈现明显的共线性特征。
P1/7与SC84之间的基因组比较, 发现其序列差异的区域仅局限于SC84 的外源可移动成ICESsuSC84, 除此之外两者所有的基因都是高度同源的。
BM407含有 2 个外源插入成分( ICESsuBM 4071 和ICESsuBM 4072), 并且其序列与SC84的外源可移动成分( ICES suSC84 )相似。
此外, 相对于P1 /7和SC84其基因组有2个片段发生缺失。
BM407与P1 /7和SC84在基因组共线性方面的一个明显差异为包括复制起始区的约80Kbp大片段发生反转, 推测此基因组重排由位于翻转片段两端的2个IS3元件重组引起。
BM407发生反转的染色体结构中, 复制起始位点和终止位点位于环状染色体的两端并维持复制弧的对称, 因此这种排布方式应该在猪链球菌更常见。
应用全基因组PCR 扫描(WGPScaning)、多位点序列分型技术(MLST)、血清2型毒力相关基因的序列测定等方法，综合比较了( SC22, SC152)和病猪( SC17)的分离菌株、菌株( 98015)以及来自欧洲的血清2型菌株( P1 /7)的基因组序列。
多种比较方法的综合分析显示, 不同年代、不同地理分布、不同来源的代表菌株的基因组结构基本一致, 主要毒力相关基因序列没有差异, 所有菌株都属于ST1序列群。
由于已公布的测序菌株局限于血清 2 型, 很难提供猪链球菌所有种群的遗传多态性的息。
未来对其他代表性菌株基因组的测定和比较分析将极大地丰富对各种群间关系的认识, 有助于发现不同种群的特异遗传成分和特征, 并且提高猪链球菌病的防治水平。
参考文献：
[ 1 ]齐翀, 刘军, 祝令伟, 等. 抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因[ J] . 中国兽医学报, 2009, 29( 5) : 588- 593
[ 2 ]郑霄(综述), 徐建国(审校).猪链球菌的比较基因组学研究进展[ J] .疾病监测，2011,26（1）:068—072
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