大肠杆菌内素试剂盒使用说明书
京聚合美生物科技有限公司 M5 Endofree Pureplasmid Maxi Kit 使用说明
M5Endofree Pureplasmid Maxi Kit使用说明书产品名称单位货号M5Endofree Pureplasmid Maxi Kit10T MF032-01【储存条件】本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂可以常温运输，4˚C保存一个月，长期保存请放-20˚C。
【产品简介】本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
【产品特色】1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用Whatman特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2.不需要苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀，快速方便。
从100-200ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90%。
3.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1EU/μg DNA），细胞转染效果极佳。
也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
【产品组份】10T注意事项细胞悬浮液（S1）77ml初次使用前请按瓶标说明加入所有的RNase A于S1中，4˚C保存细胞裂解液（S2）77ml用毕立即盖紧瓶盖；如有结晶析出，可于55˚C水浴加热助溶中和缓冲液（S3）77ml有刺激性，请勿直接接触皮肤浓缩漂洗液（WB）2x25ml初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀洗脱缓冲液（EB）20mlRNase A溶液（10mg/ml）750μl-20˚C长期保存内毒素清除剂25ml-20˚C长期保存离心吸附柱DC10个室温密闭干燥保存50ml收集管10个室温密闭干燥保存【实验准备】用户需自行准备的材料：含适当抗生素的LB培养基，无水乙醇，台式离心机。
内毒素指示剂 说明书
内毒素指示剂使用说明书【产品标准号】ECV【名称】内毒素指示剂，Endotoxin Challenge Vial，ECV【用途】内毒素指示剂系大肠杆菌O111:B4内毒素冻干品。
应用于验证干热除热原系统的效果。
安瓿内装有极微量内毒素，不含任何赋形剂, 因而外观近似空瓶。
本品为致热原，严禁以任何途径进入机体。
【效价】见出厂检验报告。
ECV效价系参照中国药品生物制品所的细菌内毒素国家标准品和相应批号的鲎试剂标定，标示于安瓿。
请注意选用与其相匹配的鲎试剂批号。
【贮存】常温。
【有效期限】见出厂检验报告。
【注意事项】①本品为致热原，严禁以任何途径进入机体。
需要适当防护，避免接触眼睛、皮肤、或吸入。
如不慎入眼、或皮肤接触，立即用大量水冲洗；如不慎经口摄入，饮用大量水；若有任何不适，请立即就医。
绝对禁止以任何注射方式进入机体。
②试验所用的器皿必需经过有效的除热原处理，以保证试验的准确、有效。
玻璃器皿常用的除热原方法是在250ºC干烤至少60分钟。
③试验过程应防止微生物的污染。
【操作步骤】1. 内毒素指示剂的效价验证内毒素的溶解稀释参见《内毒素工作标准品使用说明书》。
溶解的内毒素溶液每一步的稀释倍数小于等于10，每稀释一步均应在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟。
稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。
1.1任取1-2支未烤过的ECV, 用1.0 ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上剧烈振摇15分钟。
1.2 如果用定量法鲎试剂，将步骤1.1所得内毒素溶液稀释P/C m倍，使其理论值在内毒素标准曲线线性范围内，确定ECV的效价。
其中，P为ECV标示值，C m为内毒素标准曲线线性范围内接近中间点的值。
如内毒素标准曲线线性范围为0.01-100 EU/ml，C m取1.0 EU/ml；如内毒素标准曲线线性范围为0.1-1.0 EU/ml，C m取0.25 EU/ml或0.5 EU/ml。
大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)-NEWA
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大肠杆菌宿主残留蛋白（E.coli P）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大肠杆菌宿主残留蛋白（E.coli P）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大肠杆菌宿主残留蛋白（E.coli P）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80 ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
CRISPR Cas9 大肠杆菌基因编辑试剂盒V1.1-使用手册说明书
Cat. No.: CR3011E.coli. CRISPR/Cas9基因编辑试剂盒V1.1产品简介：本试剂盒采用CRISPR/Cas9系统对大肠杆菌基因组进行编辑。
可以实现对基因的敲除、敲入、点突变等。
也可以同时对基因组的多个位点进行编辑。
试剂盒中配备了实验过程所需要的载体及相关试剂，客户仅需合成数条引物即可完成整个实验。
整个实验周期仅需一周，基因敲除成功率高达90%。
该系统中转入的质粒均可以在敲除完成后很方便的清除，恢复对抗生素的敏感性，不残留抗性基因，实现无痕编辑。
产品特点：⚫无痕基因编辑⚫不残留抗性基因⚫可反复编辑多个基因⚫表达单靶点产品内容：pFN-Cas9-K2质粒(50ng/μl) 20μlpFG-sgRNA线性化质粒(50ng/μl) 25μlSL Enzyme Mix 25μl5×SL Buffer 50μlSCV Primer Mix1 200μlSCV Primer Mix2 200μlSCV Primer Mix3 200μl诱导剂1 2ml诱导剂2 250μl相关产品品名货号sgRNA体外转录试剂盒PC1380 Cas9体外酶切试剂盒PC1400相关服务服务名称货号大肠杆菌基因编辑服务SC1020 pFG-sgRNA载体构建服务SC1021产品应用：单点切割，基因删除：单点切割，基因插入/突变：单点切割，同时构建多个突变体：试剂盒组分：pFN-Cas9-K2质粒pFN-Cas9-K2是在原pFN-Cas9-K的改进而来。
通过改进质粒表达结构，我们实现了更加可靠的spCas9诱导表达系统。
该质粒功能为诱导表达spCas9蛋白以及–Red重组酶，实现可控的基因组DNA定点切割和重组修复。
pFG-sgRNA-HR质粒pFG-sgRNA-HR表达sgRNA并提供重组修复所需的重组模板。
SL Enzyme Mix重组连接pFG-sgRNA-HR载体。
实验流程：☆基因编辑设计原则：1.设计的靶点和重组片段所依据的基因组序列要非常精确。
去内毒素质粒小提试剂盒说明书
去内毒素质粒小提试剂盒说明书试剂盒组成50次100次RNase A 100ul 200ul内毒素清除剂20ml 40ml溶液P1 10ml 20ml溶液P2 10ml 20ml溶液P3 10ml 20ml结合液30ml 60ml漂洗液15ml 15ml×2洗脱液10ml 20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，同时加入Solarbio公司特制的内毒素清除剂，可最大限度地去除内毒素。
从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的试验，以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入200ul溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
KIT1 去内毒素试剂盒操作步骤
1 5ml大肠杆菌(导入质粒)接种到10-20毫升LB液体培养基（含有氨苄青霉素（50μ克/毫升））中培养12~16 h，37℃2 放入1.5ml离心管中10000 ×g 1min3 弃去废液，加入250μL Solution l/RNase A. 悬浮菌液4 加入250μL Solution II 轻轻上下翻转4-6次，充分混匀，直至溶液清澈（可以在室温下孵育2min）5 加入150μL冰浴Buffer N3轻轻上下翻转4-6次，直到出现絮状白色沉淀物。
在＞12000 x g离心10分钟，在室温下（最好在4°C）。
6 吸出上清至一个新的EP管中，加入0.1体积的ETR溶液的澄清裂解液。
轻轻上下翻转7-10倍，在冰上孵育10分钟。
ETR溶液加入后，裂解液出现浑浊，但应该培养放在冰上后变得透明。
7 溶菌液在42℃水浴5min 溶液出现浑浊，在在25℃，12000 x g离心3分钟。
出现蓝色沉淀物。
8 将澄清裂解液换到一个新的1.5毫升EP管加入0.5体积的无水乙醇（室温，96-100%）轻轻上下翻转6-7次。
室温孵化1-2min.9 将8步骤中的700μL溶液转入到吸附柱上，室温下10000×g离心1分钟10 弃去废液11 500μL BUFFER HB ，离心12 弃去废液加入700 μL DNA Wash Buffer ，离心，弃去废液13 重新加入700 μL DNA Wash Buffer，重复1214 13，000 x g ，空离2min15 换入新的1.5ml的EP管，加入30-50μL的ndotoxin-Free Elution Buffer 或者是水，13,000 x g 离心1min，也可以再洗脱一次。
全能型质粒小提试剂盒简明说明书（BW-PD1228）
全能型质粒小提试剂盒简明说明书（BW-PD1228）Ver:1904产品简介本试剂盒适用于从1-12mL大肠杆菌培养液中提取质粒，用于所有可能的下游应用。
您可从以下四个方案中任选一个操作。
该试剂盒的特色，●最高得率：每次至多可获得120µg质粒（方案Ⅱ）●处理快速：10min（方案Ⅲ）●高纯度：转染级别（方案Ⅳ）●环境友好型：没有离液盐（方案Ⅲ）●对研究人员安全：无离液盐（方案Ⅲ）产品构成Catalog#-00-01-02 Preps1050250 Mini Columns(White ring)1050250 Lysate Clearance Columns(Green ring)210502mL Collection Tubes1050250 Buffer A15mL27mL135mL Buffer B15mL27mL135mL Buffer N16mL33mL165mL Buffer N33mL12mL60mL Buffer KB6mL30mL150mLBuffer RET1mL6mL30mLDNA Wash Buffer*3mL15mL3×24mLEndoFree Elution Buffer2mL9mL45mLRNase A(20mg/mL)25µL135µL675µLUser Manual111要点●RNase A：20mg/mL。
室温下（15-25℃）可稳定贮藏一年。
使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1，使用后将Buffer A1/RNase A置于4℃保存。
●DNA Wash Buffer：使用前请将12mL(BW-PD1228-00)或60mL(BW-PD1228-01)或96mL(BW-PD1228-02)96-100%乙醇加入至每个DNA Wash Buffer瓶内。
●Buffer B1：低于室温时会沉淀，请于37℃水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清。
大肠杆菌内毒素endotoxin试剂盒使用方法
大肠杆菌内毒素(endotoxin)试剂盒使用方法检测范围：96T0.03Eu/L – 0.8Eu/L使用目的：本试剂盒用于测定大肠杆菌样本中内毒素(endotoxin)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大肠杆菌内毒素(endotoxin)水平。
用纯化的大肠杆菌内毒素(endotoxin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素(endotoxin)，再与HRP标记的内毒素(endotoxin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的内毒素(endotoxin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大肠杆菌内毒素(endotoxin)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原，加入大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品或样品，游离大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）含量成反比，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
Takara 感受态制备试剂盒说明书
TaKaRa Code：D406Competent Cell Preparation Kit次（200量）宝生物工程(大连)有限公司目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。
在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。
●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
本试剂盒只能用于科学研究不得用于医学诊断。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒使用说明书【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒试剂盒名称】大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒试剂盒用途】定量检测大肠杆菌血清、血浆及相关液体样本中O157志贺毒素的的含量。
【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被O157志贺毒素的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中O157志贺毒素的浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中O157志贺毒素的含量。
【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒试剂盒组成】1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL2 标准品：200ng/ml0.6mL 8 底物夜B6mL3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL4 标准品稀释液6mL10 说明书1份5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张6 酶标试剂6mL12 密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【大肠杆菌O157志贺毒素的ELISA试剂盒操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大肠杆菌内毒素试剂盒使用说明书
检测范围：96T
0.03Eu/L – 0.8Eu/L
使用目的：
本试剂盒用于测定大肠杆菌样本中内毒素(endotoxin)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大肠杆菌内毒素(endotoxin)水平。
用纯化的大肠杆菌内毒素(endotoxin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素(endotoxin)，再与HRP标记的内毒素(endotoxin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的内毒素(endotoxin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大肠杆菌内毒素(endotoxin)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。