药理学实验指导22661

目录――基本知识与技能1、药理实验的基本操作技术12、药理实验设计的基本原则63、数理统计在药理学实验中的应用94、Casio fx-180p 计算器的应用165、PowerLab 系统基本操作指南226、怎样写药理实验报告267、处方29――药代动力学部分8、药酶诱导剂及抑制剂对戊巴比妥钠催眠作用的影响319、苯巴比妥钠对小鼠肝脏细胞色素 P450 含量的影响3310、碱化尿液对水杨酸钠经肾排泄的影响3511、酚磺酞（PSP）药代动力学参数的测定37――药效动力学部分12、M 胆碱受体系列实验之一 有机磷酸酯类中毒解救及胆碱酯酶活性的测定 3913、M 胆碱受体系列实验之二 氨甲酰胆碱对大鼠离体空肠的作用4114、M 胆碱受体系列实验之三 M 胆碱受体亚型分析4515、三种作用于传出神经系统的未知药的初步辨别4716、抗癫痫药的抗电惊厥作用4917、氯丙嗪对小白鼠激怒反应的影响5118、镇痛药物的辨别及药效测定5319、夹竹桃对离体蟾蜍心脏的作用5520、普萘洛尔的抗心律失常作用5821、糖皮质激素的抗炎作用59――毒理学部分22、普鲁卡因半数致死量的测定6123、烟碱的毒性作用6424、局麻药的麻醉作用及毒性比较6525、青霉素 G 钾和青霉素 G 钠快速静注的毒性比较67――临床药理学部分26、临床药理学和新药临床研究6827、临床用药讨论69――附表1、实验动物用注射针头的大小及注射药容量722、动物常用麻醉药用法和用量723、常用生理溶液成分表734、常用实验动物生理参数73-精品-1、药理实验的基本操作技术一、常见实验动物性别的鉴定动物雄性雌性大白鼠 与小白鼠 青蛙 与 蟾蜍家兔豚鼠生殖器与肛门之间的距离较大。

较小用手指轻捏外生殖器，可见阴茎凸出；天乳头明显热时可见下垂的阴囊。

捏住腰部将之提起时，前肢作环抱状，并 前肢呈伸直状,鸣叫。

不鸣叫。

前肢拇指与食指间趾蹼上有棕黑色小突起 （所谓婚痣）。

无婚痣左手抓住颈部皮肤；右手拉住尾巴，将之夹在中指与无名指之间，用拇指及食指将靠近生殖器的皮毛扒开。

可见阴茎露出。

仅呈椭圆形间, 无阴茎。

豚鼠无尾，其他同家兔。

二、常用实验动物捉拿法 小白鼠与大白鼠：右手抓住尾部，将之置于铁丝笼或粗糙的平面上，另一 手捏住颈部皮肤，即可将动物捉起。

捉拿大白鼠时可戴软手套。

家兔：右手抓住耳后颈部皮肤，左手托住臀部。

不可抓双耳将之提起，因 兔耳软骨脆弱，不能承受全身重量，易损伤；且实验时常需耳缘静脉注射给药， 抓耳捉拿更应避免。

三、给药方法 1、灌胃法： 小白鼠：（图 1）左手拇指与食指捏住颈部皮肤，将动物背部置于掌心，用 同手无名指与小指将尾部紧压在掌心，使颈部与口保持平直。

右手持灌胃器， 灌胃管从口角插进口腔，紧沿上腭插入食道。

若通畅未遇阻力，动物安静无呼 吸异常，表示已插进食道，即可将药液注入；若遇阻力，应拔出再插；若药液 误入气管，动物立即死亡。

家兔：（图 5）一人坐定，用大腿夹住兔身，一手紧握前肢，一手固定兔头， 使之与颈部呈 90 度角。

另一人将木制开口器横插进兔嘴，向内翻转，压住舌 部。

然后将导管从开口器中央孔插入，直至胃部。

将导管外端放在水中，若连 续有气泡逸出，表示导管插入气管内，拔出重插。

无气泡，即可灌药；灌毕， 用少量清水将残留在导管内药液冲进胃中。

2、注射法：-精品-皮下注射：（图 2）注射部位为背部皮下。

注射时，大动物需固定；小动物 用左手小指压住其颈部，用拇指及食指(或中指)将背部皮肤提起。

右手持住注 射器，针头略与体表平行刺入皮下，注药，退针要快，以免药液外流。

腹腔注射：（图 3）小白鼠腹腔注射可一人操作，捉拿法与灌胃相同，针头 略倾斜约 45 度自下腹部左或右侧刺入，注药，针头插入不宜太深或太近上腹 部，避免刺破内脏，出针也要快。

肌肉注射：注射部位一般多取后大腿外侧肌处。

将动物固定，左手抓住大 腿，右手持注射器，针头与皮肤表面垂直刺入肌肉(小动物斜刺)，回抽无回血， 即可注药。

静脉注射：家兔耳缘静脉注射：（图 7）将耳背外缘注射部位毛拔去，用酒 精棉球连续擦，使血管扩张。

注射时将血管向心端捏紧，然后进针，刺入后， 将针头与兔耳一起捏住，避免针头滑出，注毕退针时，进针处用干棉球按住。

小白鼠尾静脉注射：将动物固定，暴露尾部，用酒精棉球连续擦尾部(必要 时用二甲苯擦，亦可用电灯温烤)，使血管扩张。

尾背与左右两侧三根血管皆为 静脉，均可选用。

选一扩张较好静脉，左手拇指与中指捏住尾部的近尾端，食 指压迫尾根保持血管淤血扩张，(成败关键在于尾静脉是否明显扩张，若不明显 扩张，则不易成功)向下弯约 45 度。

右手持注射器，于弯曲点处成切线方向进 针。

推注时遇阻力，且皮下隆起发白，即针头不在血管内，应拔出重新进针。

针头在血管内，推注时不觉阻力。

实验动物用注射针头的大小及注射药容量、动物常用非挥发性麻醉药用法 和用量见附表。

四、取血方法 1、 小白鼠和大白鼠眼眶后静脉丛取血法： 用左手抓住鼠的颈背部，拇指及中指抓紧头颈部皮肤，食指按在眼睛后， 使眼球轻度突出，鼠侧卧位，眼眶球后静脉丛就瘀血。

右手取一蘸过肝素的 9 号钝针头，沿着内眦眼眶后壁刺入，穿刺时针头应由眼内角向喉头方向前进约 4～5mm，轻轻转动再缩回，血液就会流出。

然后用血红蛋白吸管取血(血红蛋 白吸管预先用肝素浸润管壁)。

2、 兔耳缘静脉取血法： 局部去毛，用电灯照射加热或用酒精或二甲苯棉球涂擦，使静脉扩张，再 以石蜡油涂擦耳缘，防止流出血液凝固。

用粗针头将静脉刺破或刀切小口让血 自然滴入已放抗凝剂的试管中。

3、兔耳中央动脉采血法： 将兔置于兔固定箱内，由于兔耳动脉遇刺易发生较长时间的痉挛性收缩， 因此采血前，必须让兔耳充分充血，力争一次刺中动脉。

为了更好地使耳中动 脉舒张，可用麻醉耳神经丛耳支法。

即取 1%普鲁卡因溶液 2ml 注入一侧耳根 后下方冠状突与侧突间隙的深层软组织，以麻醉支配耳中动脉的耳神经丛，数 秒钟后可见耳动脉充血，指触脉搏感强，证明麻醉成功。

此时即以左手食指与-精品-拇指固定中央动脉离心端，针刺部位从中央动脉末端开始，不要在近耳根部取-精品--精品-血，因耳根部软组织厚，血管位置略深，易刺透血管造成皮下出血。

准备好含有 1%肝素生理盐水抗凝液的动脉套针，先以 12～16 号粗针头，在中央动脉末端，沿动脉平行地向心性方向穿过皮肤，然后退出针头，将动脉套针沿刚刺过的孔道刺入动脉，即可见动脉血涌入针管，这时将套针针芯小心抽出，同时将针芯外紧束着的套管送入动脉内，血即自动涌出，此法一次可迅速取血达 15ml。

若需连续多次取血，可在套针口连接含有抗凝液的注射器，5 分钟左右注射0.5~1.0ml 抗凝剂，以免针头处凝血。

或注射 0.15ml/kg 肝素原液(12500u/2ml)使动物肝素化，以免血液凝固。

五、药物浓度及剂量换算1、药物浓度：是指一定量液体或固体制剂中所含主药的份量。

常用以下几种表示法。

百分浓度：每 100 毫升(克)溶液所含溶质的克(毫升)数，用符号％表示。

如：5％氯化钠溶液，即指 100 毫升溶液中含有氯化钠 5 克。

比例浓度：用比例式计算，是指几克(毫升)溶质，制成几毫升溶液，用 1：x 比例式表示。

如：1：1000 肾上腺素溶液，即指 1000 毫升溶液中含有肾上腺素 1 克。

比例浓度＝1:溶液全容量 溶质重量克分子浓度(M)：一升溶液中所含溶质的克分子数称为该溶液的克分子浓度。

如：0.1M NaCl 溶液表示 1000 ml 中含 NaCl 5.844 g (NaCl 的分子量为 58.44 g)，现均改为摩尔浓度：1M 改为 1 mol/L。

克当量浓度(N)：一升溶液中含有溶质的克当量数称为该溶液的克当量浓度。

如：1N H2SO4 表示 1000 ml 中含 49 g H2SO4( H2SO4 分子量为 98)。

现亦该改 为摩尔浓度，凡 1 价离子者两值相当，如：1N NaOH=1 mol/L NaOH，如 2 价者：2N H2SO4=1 mol/L H2SO4。

2、剂量换算：1) 动物实验所用药物的剂量，一般按 mg/kg (或 g/kg)体重计算，应用时须从已知药液浓度换算出相当于每公斤体重应注射的药物量(ml)，以便给药。

例：小白鼠体重 18 g，腹腔注射盐酸吗啡 10 mg/kg，药物浓度为 0.1%，应注射多少 ml?计算方法：0.1%的溶液每毫升含药物 1 毫克，剂量为 10 mg/kg 相当于容积为 10 ml/kg。

小白鼠常以 mg/10g 计算，换算成容积时也以 ml/10g 计算，相当于 0.1 ml/10g，18 g 重的小鼠注射 0.18 ml，如 20g 体重小鼠，给 0.2 ml，以此类推。

2) 在动物实验中有时须根据药物的剂量及某种动物给药途径的药液容量，然后配制相当的浓度以便于给药。

例：给兔静注戊巴比妥钠 30 mg/kg，注射量为 1.2 ml/kg，应配制戊巴比妥钠的浓度是多少？-精品-计算方法：30 mg/kg 相当于 1.2 ml/kg，因此 1.2 ml 药物应含 30 mg 药物， 如要算成百分比浓度 1.2 : 30 = 100 : x，x = 2500 mg = 2.5 g，即 100 ml 含 2.5 克， 故应配成 2.5%的戊巴比妥钠。

-精品-2、药理实验设计的基本原则药理实验是在整体动物或离体器官标本上进行的科学研究，其目的是阐明 药物的作用或机制。

在实验过程中，由于各种非处理因素如个体差异、实验条 件、仪器设备等均会不同程度影响实验结果，使处理因素（如药物）的效应不 容易充分显示出来。

因此，要获得可靠的实验结果，必须精心设计实验，严格 遵循实验设计的三大原则：重复、随机、对照，避免各种误差和偏性干扰，以 最经济的人力、物力和时间揭示出处理因素的效应，可达到事半功倍的效果。

一、重复（replication） 重复是实验设计的首要原则，可靠的实验结果，应能在相同的实验条件下 重复出来，即重现性。

统计学中显著性检验规定的 P 值作为评定重现性的尺度， P<0.05,说明不能重现的概率小于 5%,而重现的概率大于 95%,即重现性好。

若 P<0.01,说明重现性非常好。

实验的对象即样本大小是保证重现性的基本条件。

为了达到某一重现性，必须有相应的适当的重复数（样本数），样本数过少不 行，样本数过大造成不必要浪费，因此应在保证获得可靠结论的前提下，确定 最少的样本例数。

样本大小的估计与药效强度、生物的个体差异、对实验正确 性要求、P 值的大小及统计学处理的方法等因素有关。

药效作用强或两组药效 差别大则样本数可小，药效作用弱或两组药效差别小则应增加样本数。