一株犬细小病毒的分离及VP2基因序列分析
犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析
犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析Ξ董江丽1,李淑芬2,张鹤龄11(内蒙古大学生命科学院,呼和浩特010021)2(内蒙古农业大学生物工程系,呼和浩特010018)摘要:从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV )。
提取病毒基因组DNA ,并以此DNA 为模板,采用人工合成的引物进行PCR 扩增,PCR 产物经B am H I 、S ac I 双酶切后,克隆于pUC19质粒的B am H I/S ac I 位点。
重组质粒pUCVP2经PCR 鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV 2IM )VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt ,与国外报道的美国1株(CPV 2N )、美国2株(CPV 2B )和猫全白细胞减少症病毒(FPLV )的核苷酸序列同源性分别为99.32%、98.29%、98.52%,氨基酸序列同源性分别为98.87%、97.09%、97.77%。
关键词:犬细小病毒;VP2基因;序列分析中图分类号:S852.655 文献标识码:A 文章编号:1003-5125(2000)04-0379-09犬细小病毒(Canine Parvovirus ,CPV )属自主复制的细小病毒,该病毒可引起犬细小病毒病,又称犬细小病毒性肠炎。
本病以剧烈呕吐、出血性肠炎、白细胞显著减少为主要特征,不同品种和年龄的犬都易感,幼犬在16周出现心肌炎、死亡率高达20%～100%[1]。
目前,国内主要采用CPV 灭活疫苗和犬五联弱毒疫苗进行免疫预防,由于母源抗体的干扰及CPV 毒株在强大的免疫压力下产生抗原漂移,常导致免疫失败。
1993年,布日古德等用HA 和HI 调查内蒙警犬基地的CPV 感染,结果表明,在正常接种下,感染率高达26%[2]。
细小病毒是目前动物病毒中最小、最简单的一类单链线状DNA 病毒。
CPV 病毒粒体直径为25nm ,无囊膜,呈二十面体,其基因组为单链、负链DNA ,全长5323nt 。
犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析
犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析林鹏;赵航;王建科;程悦宁;任静强;易立;仝明薇;程世鹏【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)010【摘要】本试验从北京某动物医院疑似犬细小病毒(CPV)感染犬粪便中分离出一株病毒.通过电子显微镜观察、血凝试验、动物回归试验和分子生物学鉴定,本试验成功分离出一株CPV,命名为BJ-24.对BJ-24株的VP2基因序列分析发现该分离株为CPV-2a亚型,其VP2基因与GenBank中19株CPV VP2基因核苷酸序列有较高的同源性,均在98.7％以上,甚至与CPV-JS2株达到100.0％.系统进化分析结果表明所分离的BJ-24株属于中国分支,与CPV-JS2株遗传距离最近.本试验对进一步开展北京地区CPV的流行病学调查提供基础依据,并对防制病毒传播和疫苗研制奠定了坚实的基础.【总页数】7页(P2587-2593)【作者】林鹏;赵航;王建科;程悦宁;任静强;易立;仝明薇;程世鹏【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析 [J], 张立媛;高旭;陈海迪;于清洋;方爽2.犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川3.犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析 [J], 赵屹钦;曾梦颖;郭娟;张迪;高洪;严玉霖4.犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定 [J], 周宏专;苏霞;林路路;齐颀;张进;徐福洲;杨兵5.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 陈延宗;钱晶;王晶宇;赵航;毕振威;夏兴霞;诸玉梅;芮荣;王永山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析
况， 分 离鉴 定 Ｃ Ｐ Ｖ 的 当地流 行毒 株 以及 对结 构蛋 白
ＶＰ ２基 因进行 序 列分 析 是 了解 和 掌握 Ｃ Ｐ Ｖ 变异 趋 势 的 主要方 法＿ ４ ］ 。本研 究从 疑似 犬 细小 病 毒感 染 犬 粪便 中成 功分 离鉴 定一 株 Ｃ Ｐ Ｖ， 并 进行 了 ＶＰ ２ 基
病毒科（ Ｐ 口 ｒ ０ 口 Ｐ ） 细小 病 毒属 （ Ｐ ａ ｒ ｖ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ） ， 基
因序列 分 析 ， 旨在 丰 富 我 国 Ｃ Ｐ Ｖ 分 子 流 行 病 学 资 料， 为Ｃ Ｐ Ｖ 新 型疫 苗与诊 断试 剂 的研究 提供 依据 。
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材 料
引起 的犬 的 一 种 急性 、 烈性传染病 ， 该病 于 １ ９ ７ ８年
在美 国首 次 发现 ， 目前 呈世 界范 围 内流行 ， 是 危 害犬
类 的最重 要 传染 病 之 一 ， 每 年都 给 全 球 养 犬 业 和 宠 物行 业带 来 了 巨大 的 经 济 损 失＿ １ ］ 。Ｃ Ｐ Ｖ 属 于 细小
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ２ 文 献标 识 码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ — ０ ０ ８ ３ — ０ ４
犬 细小 病毒 病 （ Ｃ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｐ ａ ｒ ｖ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ， Ｃ Ｐ ＶＤ） 是 由犬 细 小 病 毒 （ Ｃ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｐ ａ ｒ ｖ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｃ Ｐ Ｖ）
Ｈ Ａ Ｎ Ｔｉ ｎｇ — ｙ ｉ ， Ｗ Ａ Ｎ Ｇ Ｓｈｅ ｎ ｇ — ｇｕ ｉ
犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析
犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2008()4【摘要】2006年从南京疑似细小病毒感染的病犬中分离犬细小病毒一株,分离的病毒培养物能凝集猪红细胞,凝集效价达到128倍,并能被已知的犬细小病毒阳性血清所抑制。
其衣壳蛋白基因VP2被克隆并测序,核酸、氨基酸序列同源性分析表明:血清型为CPV-2b。
通过软件对其氨基酸序列分析,预测VP2区域可能的B细胞表位分别为:5-30,300-320,360-380,380-400,400-420区段,这为犬细小病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。
【总页数】4页(P60-63)【关键词】犬细小病毒;分离;鉴定;克隆;序列分析【作者】易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军【作者单位】中国农业科学院特产研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.犬细小病毒CPV-SHZ分离株VP2基因的克隆与序列分析 [J], 刘志强;钟发刚;王新华2.犬细小病毒山东分离株VP2基因的克隆与遗传变异分析 [J], 于永乐;张传美;张倩;杨海燕;杨瑞梅;张洪亮;单虎3.成都地区犬细小病毒VP2基因克隆分析及基因型鉴定 [J], 杨晓农;王成东;项振义;王斌;张焕容;杨发龙;于学辉;龙虎;刘群;陈世界;严玉宝;余华4.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 陈延宗;钱晶;王晶宇;赵航;毕振威;夏兴霞;诸玉梅;芮荣;王永山5.犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析 [J], 杨玲;徐向明;殷俊;宗卫峰;陈璐;李厚达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析
犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川【摘要】本研究从疑似犬细小病毒感染犬粪便中分离鉴定一株犬细小病毒,并进行了VP2基因序列分析.分离株病毒命名为JN株,分离株病毒对猪红细胞的血凝效价为1∶512,Reed-Muench法测定分离株病毒TCID50为10-3.5/0.1 mL,动物回归试验显示攻毒犬能复制出犬细小病毒病的典型临床症状和病理变化,VP2基因序列分析表明该分离株为CPV-2a亚型,与GenBank中的8株CPV VP2基因序列核苷酸同源性在98.7 ％～99.6％之间.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2013(034)005【总页数】4页(P83-86)【关键词】犬细小病毒;分离鉴定;VP2基因;序列分析【作者】姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川【作者单位】滨州医学院附属医院,山东滨州256603;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;滨州市妇幼保健院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;湖南省宁远县畜牧水产局,湖南宁远425600【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2犬细小病毒病（Canine parvovirus disease，CPVD）是由犬细小病毒（Canineparvovirus，CPV）引起的犬的一种急性、烈性传染病，该病于1978年在美国首次发现，目前呈世界范围内流行，是危害犬类的最重要传染病之一，每年都给全球养犬业和宠物行业带来了巨大的经济损失［1－5］。
CPV属于细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus），基因组为单股线状DNA病毒，全长为5.0kb，编码2个结构蛋白（VP1、VP2），其中VP2蛋白是保护性颗粒抗原，可诱导机体产生中和抗体，VP2中的几个关键碱基和氨基酸的变化就可改变病毒的抗原特性和宿主范围［4－6］。
近年来，CPV不断出现新的变异情况，分离鉴定CPV的当地流行毒株以及对结构蛋白VP2基因进行序列分析是了解和掌握CPV变异趋势的主要方法［4.6－7］。
犬细小病毒DD株的分离鉴定和VP2基因序列分析
Ａ ｓ ａｔ Ａ ｓ ａｎ ｏ ａ ｉｅ ｐ ｒｏｉ ｓ Ｃ Ｖ） ａ ｓｌ ｅ ｒｍ ｂｏｄ ｅｅ ｆａ ｌ ｐ ｐ ｙ ｓｓｅｔ ｆ ｂ ｔ ｃ ： ｔ ｉ ｆｃｎｎ ａｖｖｒ （ Ｐ ｗ ｓｉ ａ ｄ ｆ ｌ ｙ ｆｃｓｏ ｎ ｉ ｕ ｐ ｕｐｃｅ ｏ ｒ ｒ ｕ ｏｔ ｏ ｏ ｌ ｄ ｐｒｏｉ ｓｉ ｅｔ ｎ ｅ ｉｇ ｈ ｔ ｉ，ｄｓ ｎｔｄａ Ｐ ａｖｖ ｕ ｆｃ ｏ ｓｉ Ｂ ｉｎ ．Ｔ ｅｓ ａ ｒ ｎ ｉ ｎ ｊ ｒ ｎ ｅｉ ａ ｓＣ Ｖ—Ｄ ｗ ｓｉ ｌ ｅ ｙｉｏｕａｉｇＣ Ｆ ｅ ｓ ｎ ｇ ｅ Ｄ， ａ ｏ ｔｄｂ ｃｌｔ Ｒ Ｋ ｃｌ ｓａ ｎ ｎ ｌｉ
ｓ ｎ ｈ ｏ ｉｍ ｎ ａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｓ ｓ ｒ ｔｐ Ｐ 一２ ｙ Ｐ Ｒ ，ｔ ｅ ＨＡ ，Ｉ Ａ ， ｌｃ ｒ ｎ ｍｉｒ ｓ ｏ ｙ ｏ ｓ ｒ ａｉ ｎ ａ ｄ ｙ ｃ ｒ ｎ ｓ ａ ｄ ｗ ｓｉ ｅ ｔ ｄ ａ ｅｏ ｙ ｅ Ｃ Ｖ ｉ ｆ ａｂ Ｃ ｈ Ｆ ｅｅ ｔ ｃｏ ｃ ｐ ｂ ｅｖ ｔ ｎ ｏ ｏ
［ 关键词 ］ 犬细小病毒 ；Ｐ ； Ｖ ２ 分离； 鉴定
Ｉ ｏａ ｉｎ ｎ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ｆ Ｃａ ｉ ｒ ｏ ｉｕｓＤＤ ｔ ａｎ ｎｄ ｓ ｌ ｔｏ ａ ｄ Ｉ ｅ ｔｆ ａ ｉ ｎ ｏ ｎ ｎｅ Ｐａ ｖ ｖｒ ｉ Ｓｒｉ ａ
Ｓ ｑ ｅ ｃ ａｙ ｉ ｆｔ ｅ ＶＰ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ Ａｎ ｌ ｓｓｏ ２ Ｇｅ ｅ ｈ
ｓｑ ｅ ｃｎ ｆ ２ｇ ｎ ．Ａ ｕ ｉｕ ｌ ｅ ｕ ｎ ｉｇｏ ＶＰ ｅ ｅ ｎｑ ｅＩ ｅ一３ ４ ｉ ２ ｏ ２ ｎＶＰ ｆＤＤ ｓ ａｎｗａ ｕ ｄ，ｃ ｎｒｓ ｎ ｒ ｔ ｉ ｓｆ ｎ ｒ ｏ ｏ ｔ ｔ ｇｔ ａＴ ｙ一３ ４ ｉ ｅＶＰ ａｉ ｏ ２ ｎｔ ２ ｈ
犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定
本研究在对 ＶＰ２基因进 行 分 析 的 基 础 上，对 鉴 定为 Ｎｅｗ ＣＰＶ２ａ的北京毒株进行分离和病毒相 关 特性鉴定，有 助 于 了 解 和 掌 握 目 前 ＣＰＶ 的 流 行 情 况，为更好地防控 ＣＰＶ 提供参考。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 １．１．１ 临床 样 本 临 床 样 品 来 自 北 京 和 山 东 两 地 的宠物医院，病 犬 临 床 症 状 为 呕 吐、腹 泻 等，临 床 疑
似为 ＣＰＶ 感染，同时采集病犬的粪便样品备用。 １．１．２ 细 胞 与 主 要 试 剂 Ｆ８１ 细 胞，本 实 验 室 保 存；ＣＰＶ 单 克 隆 抗 体，ＩＮＧＥＮＡＳＡ 公 司 产 品；Ｇｏａｔ ａｎｔｉＭｏｕｓｅＩｇＧ （Ｈ ＋Ｌ）Ｈｉｇｈｌｙ ＣｒｏｓｓＡｄｓｏｒｂｅｄ ＳｅｃｏｎｄａｒｙＡｎｔｉｂｏｄｙ，ＦＩＴＣ（货 号 Ａ１６０７９），英 潍 捷 基（上 海 ）贸 易 有 限 公 司 产 品；２×Ｅｓ犜犪狇 Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ，康为世纪生物 制 品 有 限 公 司 产 品；粪 便 基 因 组 提取试剂盒、质 粒 提 取 试 剂 盒、ＤＮＡ 片 段 回 收 试 剂 盒、Ｔｏｐ１０ 感 受 态 细 胞 和 细 菌 基 因 组 ＤＮＡ 提 取 试 剂盒，天 根 生 化 科 技 有 限 公 司 产 品；ＤＮＡ 标 准 ＤＬ２０００，ＴａＫａＲａ 有 限 公 司 产 品；ＤＭＥＭ、胎 牛 血
犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析
第 ２ ３卷 第 ３期
２０ ０ ２年 ９月
扬 州大学 学报 （ 业 与生命 科 学 版 ） 农
Ｊ ｕｒ ａ ｆ Ｙａ ｇ ｈｏ ｏ ｎ ｌ ｏ ｎ ｚ ｕ Ｕｎｉｅ ｓ ｔ （ ｒｃ ｌｕｒ ｌａ ｄ Ｌｉ ｃ ｅ ｃ ｓ Ｅｄ ｔｏ ｖ ｒ ｉｙ Ａｇ ｉｕ ｔ ａ ｎ ｆ Ｓ ｉ ｎ ｅ ｉｉ ｎ） ｅ
Ｓｌ ａ Ｉ双 酶 切 筛 选 到 阳 性 质 粒 ， 一 步 对 该 片 段 进 行 序 列 分 析 。结 果 表 明 ：所 扩 增 基 因 片 段 长 度 为 １ ４ ｐ 进 ０ｂ ，与 美 国 参 考 ７ 侏 Ｃ Ｖ— （ｙ ｅ２ 、 Ｐ １ ｔｐ ａ 、 Ｐ ３ （ｙ ｅ２ ） 比较 ， 苷 酸 同 源 性 分 别 高 达 ９ ． 、９ ７ 、９ ７ 。 Ｐ ｄ ｔ ｐ ） Ｃ Ｖ一 ｙ ｅ２ ） Ｃ Ｖ一 ９ ｔｐ ｂ 相 ５（ 核 ９ ５ ９ ． ９ ． 关 键 词 ：犬 细 小 病 毒 ；ＶＰ ２基 因 ；序 列 分 析 ；同 源 性 中 图 分 类 号 ： ５ ． ５ ． Ｓ８ ２ ６ ９ ２ 文 献标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ７ ４ ５ （ ０ ２ ０ —０ １ —０ ６ １— ６ ２ ２ ０ ） ３ ０ ２ ３
ｍ ｅａ ｅｃ ｒ ｓ ｈａｉ ｅ ｃ ｉ ｎ Ｏ ａ ｐｌ ｙ ｈｅ Ｖ Ｐ２ ｇｅ ． Ｔ ｈ ｐ ｃｆｃ ７ ｐ ａｎｄ ｗ ａ ｍ ｐｌｆ ｄ ａ ｌ ｎｅ ｎｔ Ｕ Ｃ １ ｖ ｃ ｏｒ ａ ｎ ｒ ａ ｔｏ ｔ ｍ ｉ ｔ ｆ ｎｅ ｅ ｓ ｅ ｉｉ １ ４０ ｂ ｂ ｓａ ｉｅ ｎｄ ｃ ｏ ｄ ｉ ｏ ｐ ８ ｅｔ ｔ ｔ ｅ ｔ ｉｔｏｎ ｅ ｈｅ ｒ ｓ ｒｃ ｉ ｎｄｏｎｕ ｅ ｓ ｏ Ｉ ａ ｃｌａ ｅ Ｅｃ Ｒ ｎｄ ＳａｌＩ ｓｔ ｓ Ｔｈｅ ｒ ｃ ｍ ｂ ｎａ ａ ｍ ｉ ｅ ｅ ｉ ｎｔｆｅ ｅ ｔ ｉｔｏｎ ｅ ｉｅ ． ｅ ｏ ｉ ｎｔ ｐｌｓ ｄｓ ｗ ｒ ｄｅ ｉｉｄ ｂｙ ｒ ｓ ｒｃ ｉ ｎｄｏ ｎｕｃｅａ ｅ ｌ ｓ ａ ｌ ｉ． Ｔｈｅ ｅ ｇｅ ｎａｙｓｓ ｘｏ ｎｏｕｓ ｉ ｅｒ ｆｒ ｃ ｍ ｂ ｎａ ａｓ ｉ ａ ｕｒ ｈｅ ｏｎｆｒ ｅ ｙ ｅ ｅ ｅ ａ ｎｓ ｔ ｏ ｅ ｏ ｉ ｎｔｐｌ ｍ ｄ ｗ ｓｆ ｔ ｒｃ ｉｍ ｄ ｂ ｓ ｑｕ ｎｃ ｎａｌ ｉ ． Ａ ｆｅｒｓ ｕｅ ｉ ｙｓｓ ｔ ｅｑ ｎｃｎｇ， Ｖ Ｐ２
犬细小病毒VP2基因测序分析
与Ｐ Ｃ Ｒ检 测结果 符合 率达 ７ ６ ． ９ ； ３个试验 毒株之 间 ＶＰ ２基 因 同源性 达 ９ ６ ． ５ ～９ ７ ． ３ ， 与参 考毒株 同源
性为 ９ ５ ． ２ ～９ ６ ． ８ ； 由遗传进 化树 可见 ， 与 国 内分 离毒 株 的亲缘 性略 高于 国外分 离株 。结果表 明 ， Ｃ Ｐ Ｖ 抗 原 快速检 测试 剂盒 与 Ｐ Ｃ Ｒ 法符合 率较 高 ， ３个试验 毒株 与 国 内外流 行毒株 之 间差异性 不 大。 关键 词 ： 犬细 小病毒病 ； ＶＰ ２基 因； 聚合 酶链 反应 ； 序 列 分析
（ １ ． 贵 州 大 学 动 物科 学 学 院 ， 贵州贵阳 ５ ５ ０ ０ ２ ５ ； ２ ． 贵州省动物疫病研究室 ， 贵州贵 阳 ５ ５ ０ ０ ２ ５ ；
３ ． 贵阳市黔灵动物医院， 贵州贵阳 ５ ５ ０ ０ ０ ４ ）
摘 要 ： 为 了解 贵 阳市犬细 小病 毒 （ Ｃ Ｐ Ｖ） ＶＰ ２基 因的遗 传 变异 情 况 ， 从 贵 阳 市黔 灵动 物 医院采 集 经 试
Ｅ Ｉ Ｉ Ｓ Ａ 检测 方法 ， 具 有 良好 的 特 异 性 ， 与 常 见 的 犬
病 毒性传 染病 阳性 血清无 交叉 反应 ， 重 复性 良好 ， 与
为了解贵 阳市 Ｃ Ｐ Ｖ ＶＰ ２基因 变异情 况 ， 本研 究 选择 Ｃ Ｐ Ｖ 的 ＶＰ ２ 基 因作 为研 究 对 象 ， 采用 Ｐ Ｃ Ｒ方
我国， Ｃ Ｐ Ｖ 一 ２曾 在 ２ ０世 纪 ８ Ｏ年 代 早 期 流 行 ， 但
ｌ ９ ８ ６年后全 国 范 围 内 主要 以 Ｃ Ｐ Ｖ 一 ２ ａ占优 势 地 位 。 ２ ０ ０ ９年杜强 等Ｌ ４ 用猫 肾（ Ｆ ８ １ ） 细胞 分 离鉴 定 出一 株 细小 病毒 为 Ｃ Ｐ Ｖ一 ２ ａ亚 型 。近 年 来 ， 该 病 的 诊 断 方 法层 出不穷 ， 姜 骞 等＿ ＿ ５ ］ 利 用 重 组 蛋 白建 立 了 间 接
犬细小病毒河南方城株分离及VP2_基因序列分析
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为了解犬细小病毒的临床流行及变异情况，本研究于河南省方城县采集了8份疑似CPV 感染犬粪便样品，经过PCR 检测、CRFK 细胞增殖培养、透射电镜观察和病毒滴度测定后，对其VP2基因进行序列分析。
结果表明5株分离株为犬细小病毒，病毒滴度分别为10-4.22/0.1 mL （China-HN-01株）、10-3.56/0.1 mL （China-HN-02株）、10-3.78/0.1 mL （China-HN-05株）、10-4.47/0.1 mL （China-HN-06株）、10-4.4/0.1 mL （China-HN-07株）。
VP2基因序列比对和遗传进化树分析结果显示，4株分离株基因型为New CPV-2a ，1株分离株基因型为CPV-2c ，5株分离株与疫苗株的同源性为97.8%~98.7%，与国内外参考毒株的同源性为94.0%~99.0%，4株New CPV-2a 基因型毒株与四川的Canine/China/24/2017株亲缘关系最近，CPV-2c 基因型毒株与蒙古国5-MGL 分离株位于同一分支，与我国河南地区的3株CPV-2c 毒株亲缘关系较远。
对河南方城地区CPV 毒株的分析，为研究CPV 变异株在河南地区的传播和宠物疫病防控提供了理论依据。
关键词：犬细小病毒；分离；VP2基因；进化分析中图分类号：S852.65文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）03-0054-08Isolation and Sequence Analysis of VP2 Gene of Canine Parvovirus from Fangcheng, HenanLIN Yuting 1,2, ZHAI Qi 2, ZHAI Shaolun 2, LYU Dianhong 2, ZHOU Xiurong 2, JIA Chunling 2, HUO Wei 2,WEN Xiaohui 2, Wei Wenkang 1,2,3(1. College of Animal Science & Technology, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China; 2. Institute of Animal Health, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Livestock Disease Prevention of Guangdong Province, Scientific Observation and Experiment Station of Veterinary Drugs and Diagnostic Techniques of Guangdong Province, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Guangzhou 510640, China; 3. Agro-biological Gene Research Center, Guangdong Academy of AgriculturalSciences, Guangzhou 510640, China)收稿日期：2021-01-11基金项目：国家重点研发计划（2016YFD0501000）；广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金（2019KJ119）；广东省农业科学院学科团队建设（201634TD）；广东省农业科学院院长基金（202024）作者简介：林瑜婷，女，硕士研究生，预防兽医学专业；翟颀，男，助理研究员，主要从事动物疫病诊断技术研究 通信作者：温肖会，E-mail：*******************；魏文康，E-mail：**************犬细小病毒河南方城株分离及VP2基因序列分析林瑜婷1,2，翟 颀2，翟少伦2，吕殿红2，周秀蓉2，贾春玲2，霍 玮2，温肖会2，魏文康1,2,3（1.仲恺农业工程学院动物科技学院，广州510225；2.广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室 农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站，广州510640；3.广东省农业科学院农业生物基因研究中心，广州510640）2023,31(3):54-61Abstract: In order to investigate the prevalence and variation of Canine parvovirus, 8 fecal samples were collected from dogs suspected of CPV infection from Fangcheng county, Henan province. Five CPV isolates were obtained based on PCR amplifi cation, growth on CRFK cells, transmission electron microscopy and virus titration. The TCID 50 titers of these isolates were 10-4.22/0.1 mL (China-HN-01 strain), 10-3.56/0.1 mL (China-HN-02 strain), 10-3.78/0.1 mL (China-HN-05 strain), 10-4.47/0.1 mL (China-HN-06 strain) and 10-4.4/0.1 mL· 55 ·林瑜婷等：犬细小病毒河南方城株分离及VP2基因序列分析第31卷第3期犬细小病毒病是由细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus ）的犬细小病毒（Canine parvovirus, CPV）感染犬只引起的致命性传染病[1]，该病常以出血性肠炎、白细胞含量显著减少、腥臭血便和严重脱水等为主要临床特征，部分表现为突然死亡的急性心肌炎型[2]。
吉林省犬细小病毒流行毒株的分离及VP2基因序列分析
核苷酸 同源性为 ９ ８ ． ９ ％～ ９ ９ ． ９ ％， 与国外分离株核苷酸 同源性为 ９ ８ ． ３ ％一 ９ ９ ． ７ ％。遗传进化树 结
果表明， ６株分 离株 分 属 ４个分 枝 ： 儿 一Ｃ Ｃ １ 、 儿 一Ｌ Ｙ、 Ｊ Ｌ—Ｓ Ｙ 与 山东 、 辽 宁分 离株 同属 １个 分 枝 ， Ｊ Ｌ— Ｃ Ｃ ２ 与 黑龙江分 离株 同属 １个 分枝 ， 儿 一Ｊ Ｔ与 吉林分 离株 同属 １个 分 枝 ， 儿 一儿 与 ２ ０ １ ３年 吉
ＺＨＡＮＧ Ｓ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ， ＹＩ Ｓ ｈ ｕ—ｓ ｈ ｕ ａ ｉ ， Ｗ ＡＮＧ Ｙｉ—ｍｉ ｎ ｇ ， ＧＵＯ Ｍｅ ｎｇ—ｒ ｕ ， Ｌ Ｉ Ｘｉ ａ ｎ ｇ ， ＨＵ Ｇｕｉ —ｘ ｕ ｅ
（ １ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆＡ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎＡ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ ，１ ３ ０ １ １ ８ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｓ ｏ ｎ ｇ ｙ ｕ ａ ｎ Ｅ ｎ ｔ ｒ ｙ—Ｅ ｘ ｉ ｔ Ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｑ ｕ ａ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｎ ｅ Ｂ ｕ ｒ ｅ ａ ｕ ， Ｓ ｏ ｎ ｇ ｙ ｕ ａ ｎ ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ ， １ ３ ８ ０ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
林、 辽源 、 松原 、 九 台地 区采集就 诊 犬肛 门拭子 ７ ３份 ， 采 用胶 体 金 快速检 测 试 剂盒 检 测 后 ， 阳性样 品 １ ５份。选 取具 有代表 性 的 ６份 病料使 用 Ｆ ８ １细胞 进行 病毒 的分 离 ， 成 功分 离到 ６株病 毒 （ 暂命 名 为 Ｊ Ｌ— Ｃ Ｃ １ 、 Ｊ Ｌ—Ｃ Ｃ ２ 、 Ｊ Ｌ一儿 、 儿 一Ｓ Ｙ、 Ｊ Ｌ—Ｊ Ｔ 、 儿 一Ｌ Ｙ） ， 经 通 用 引物 鉴定 均 为 犬 细 小病 毒 。Ｖ Ｐ ２基 因 序列分 析结 果 显示 ， ６株 Ｃ Ｐ Ｖ分 离株 之 间的核 苷 酸 同源 性 为 ９ ９ ． ３ ％ ～１ ０ ０ ％， 与近 年 来 国 内分 离株
犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析
犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析张立媛;高旭;陈海迪;于清洋;方爽【摘要】[目的]为分离犬细小病毒(CPV).[方法]采集疑似CPV感染病死犬的组织病料,用胎猫肾细胞(F81)进行病毒分离,并对分离的病毒进行回归动物试验、间接免疫荧光(IFA)及VP2基因PCR扩增鉴定.[结果]经盲传3代后FS1出现明显细胞病变(CPE),分离病毒可导致2～3月龄犬出现典型犬细小病毒病(CP)的临床症状和特征性病理变化,通过IFA观察到特异性的绿色荧光,PCR扩增到VP2基因全长为1 755 bp,编码584个氨基酸.它与国内外具有代表性的18株CPVVP2基因的核苷酸同源性为98.0％～ 99.8％,氨基酸同源性为96.1％～99.8％.[结论]用F81细胞成功分离到1株强毒CPV,命名为YBYJ株.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)027【总页数】4页(P9370-9372,9401)【关键词】犬细小病毒;VP2基因;分离鉴定;序列分析【作者】张立媛;高旭;陈海迪;于清洋;方爽【作者单位】延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000;延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000;延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000;延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000;延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5犬细小病毒病(Canine parvovirus infection，CP)是由犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)引起犬的一种急性接触性传染病［1］，临床常表现高热稽留、剧烈呕吐、腹泻等症状，病犬以急性出血性胃肠炎或心肌炎为主要病理变化。
该病具有发病急、死亡率高等特点，给养犬业带来了巨大的危害。
1977年，Eugster 和Naira在患出血性腹泻病的犬粪便中首次发现细小病毒粒子;1978年，Kelly等［2］从患肠炎的病犬体内首次分离到CPV;1982年，梁士哲等［3］首次报道我国存在CPV感染。
犬细小病毒的分离鉴定、序列分析及VP2基因的融合表达的开题报告
犬细小病毒的分离鉴定、序列分析及VP2基因的融合表达
的开题报告
犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）是一种致命性疾病的病毒，它感染犬只
的肠道，导致呕吐、腹泻、脱水等症状，最终可能导致死亡。
为了控制该病毒的传播，需要深入研究其分子生物学特征。
本研究将从分离鉴定、序列分析、VP2基因的融合表达三个方面对犬细小病毒进行研究。
具体内容如下：
1. 分离鉴定
从犬只腹泻、呕吐等症状明显的个体中获取病毒样本，并通过PCR扩增VP2基因，用于后续的序列分析和VP2基因的融合表达。
2. 序列分析
对VP2基因进行序列测定和比较分析，包括构建进化树、计算进化距离等，探究不同地区、不同时间点、不同毒力类型的犬细小病毒之间的基因组变异性、遗传漂变
等特征。
3. VP2基因的融合表达
通过重组DNA技术，将不同地区的VP2基因序列融合，并构建质粒表达载体。
将该载体转染CHO细胞，并利用蛋白印迹等技术对重组VP2蛋白进行鉴定和定量分析，探究其免疫原性和保护性等特征。
本研究将深入探究犬细小病毒的分子生物学特征，为该病毒的防控提供理论基础和技术支持。
犬细小病毒荆州株的分离鉴定及VP2基因序列分析
犬细小病毒荆州株的分离鉴定及VP2基因序列分析张含露;刘诗雨;赵梦杉;赵懿侔;邱实;吕熙;杨丰利;万春云【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2022()4【摘要】研究旨在了解荆州地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的流行变异情况。
试验对CPV进行分离鉴定,并对该毒株进行病毒滴度测定、病毒VP2基因测序鉴定及VP2基因序列分析。
结果显示,成功分离到1株CPV,将其命名为CPV-JZ2020,且该分离株可使F81细胞出现明显的细胞病变。
第5代病毒在F81细胞上的TCID50为105.0/mL。
通过PCR扩增出1755 bp的VP2基因;将CPV-JZ2020株VP2基因(VP2-JZ1)与国内外CPV毒株VP2基因比对,核苷酸同源性为98.39%~99.83%,氨基酸同源性为97.56%~100.00%,申请GenBank登录号为MW495851。
研究表明,VP2-JZ1属于CPV-2c型,是目前国内较为多见的一种基因型,但与传统疫苗株的亲缘性较低,可能是造成目前临床上出现免疫失败的原因之一。
【总页数】6页(P1-6)【作者】张含露;刘诗雨;赵梦杉;赵懿侔;邱实;吕熙;杨丰利;万春云【作者单位】长江大学动物科学学院小动物疾病研究中心【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析2.犬细小病毒西宁分离株的分子鉴定及VP2基因序列分析3.犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析4.犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定5.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬细小病毒临床分离株vp2基因进化分析
犬细小病毒临床分离株VP 2基因进化分析温峰琴1,项海涛1,郝宝成2,邢小勇1,包世俊1,胡永浩1(1.甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,甘肃兰州730050)㊀㊀摘要:为了对犬细小病毒临床分离株的VP 2基因进行遗传变异分析,了解本地区犬细小病毒流行的优势型别及病毒变异情况㊂采集2例患犬细小病毒病的动物粪便,提取病毒基因组,设计特异性引物,PCR 扩增VP 2基因,对扩增产物测序,对序列结果与同属其他毒株VP 2基因序列用MEGA 7和MegAlign 进行同源性分析和遗传进化分析㊂同时比较其氨基酸变异情况㊂结果显示,PCR 扩增出VP 2基因,测序结果显示大小为1755bp,2株病毒VP 2基因NCBI 序列登录号分别为MH155192和MH155193,MH155192与MF467233.1和JQ743891.1的核苷酸同源性为99.9%,MH155193与KY937651.1㊁KP260509.1㊁KY937641.1核苷酸同源性为99.8%㊂MH155192主要位点氨基酸分别为为267Y,324I,370Q,426D,440A㊂MH155193主要位点氨基酸分别为267Y,324I,370R,426E,440T㊂且2株病毒297位均为A㊂表明分离到的2株病毒分别为新CPV-2b 和CPV-2c 型㊂关键词:犬细小病毒;VP 2基因;新CPV-2b ;CPV-2c ;序列分析中图分类号:S855.3㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:05296005(2019)12004105㊀㊀Evolutionary and Genetic Analysis of Canine Parvovirus VP 2Gene in LanzhouWEN Feng-qin 1,XIANG Hai-tao 1,HAO Bao-cheng 2,XING Xiao-yong 1,BAO Shi-jun 1,HU Yong-hao 1(1.Veterinary Medicine College ,Gansu Agricultural University ,Lanzhou 730070,China ;nzhou Institute of Animal and Veterinary Pharmaceutics Science ,Chinese Academy of Agriculture Science ,Lanzhou 730050,China)Abstract :To analyze the genetic variation of VP 2gene of canine parvovirus clinical isolates and to understand the predominanttypes and virus mutations of canine parvovirus epidemics in this region.The feces of 2dogs with canine parvovirus disease were col-lected and viral DNA were extracted.Then,specific primers were designed to amplify VP 2by PCR,and the amplified products were sequenced.MEGA 7and MegAline were performed for homology analysis and genetic evolution analysis with the VP 2gene sequencesof isolated strains and those of other strains belong to the same genus.At the same time,the amino acid variation was compared.The sequencing result showed that the VP 2gene was 1755bp.The NCBI sequence accession numbers of the two strains were MH155192and MH155193.The nucleotide homology of MH155192with MF467233.1and JQ743891.1was 99.9%.The nucleotide homology of MH155193with KY937651.1,KP260509.1,and KY937641.1was 99.8%.The main amino acids of MH155192were 267Y,324I,370R,426D,440A.The main amino acids of MH155193are 267Y,324I,370Q,426E and 440T,respectively.Both strainswere A at position 297.The two isolates were new CPV-2b and CPV-2c.Key words :Canine parvovirus ;VP 2gene;CPV-2b ;CPV-2c ;Sequence analysis Corresponding author :HU Yong-hao ,E-mail:yhh0817@收稿日期:20180410基金项目:盛彤笙科技创新基金(GSAU-STS-1521);甘肃农业大学动物医学院教研产学支持计划(JYCX-KX014)作者简介:温峰琴(1980),女,讲师,硕士,从事兽医相关工作,E-mail:46292083@通讯作者:胡永浩,E-mail:yhh0817@㊀㊀犬细小病毒感染是由犬细小病毒(Canine par-vovirus,CPV)引起的犬的一种急性传染病,特征为出血性肠炎或非化脓性心肌炎,多发生于幼犬,病死率10%~50%[1]㊂CPV 属于细小病毒科细小病毒亚科的Protopar-vovirus 属,与猫细小病毒(FPV),水貂肠炎病毒(MEV)和浣熊细小病毒(RaPV)均为食肉动物原细小病毒1的变种[2]㊂CPV 是一类结构简单的单链线状DNA 病毒,病毒颗粒直径约为25nm,无囊膜,呈二十面体[3]㊂病毒基因组全长为5323nt,含有2个ORF ,5ᶄ端主要编码早期转录的调节蛋白NS1和NS2,3ᶄ端编码晚期转录的结构蛋白,即病毒衣壳蛋白VP1和VP2,VP2是衣壳蛋白的主要成分,具有较强的免疫原性,可用于制备亚单位疫苗或DNA 疫苗[4]㊂由于犬细小病毒,尤其是VP 2基因容易发生变异,且在同一动物体有时能够检测到几种病毒变体,即共同感染[2],对VP2序列的扩增和分析有助于了解流行毒株的抗原和基因变异情况㊂由于VP2的突变和重组影响宿主范围和受体结合的亲和力,因此对毒株VP2基因的监测有助于了解流行株与疫苗株的关系及CPV的进化模式,本试验对兰州分离的2例犬细小病毒VP2进行遗传进化分析及氨基酸变异分析,为犬细小病毒病的分子流行病学调查及防控提供了数据㊂1㊀材料与方法1.1㊀病料㊀2例犬细小病毒病患病犬粪便均来自兰州某宠物医院,采集时间分别为2017年4月和2017年6月㊂1.2㊀试剂㊀2ˑTaq PCR Master Mix㊁病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒,购自TIANGEN公司;胶回收试剂盒,购自OMEGA公司;DL-2000 DNA Marker,购自生工生物工程(上海)股份有限公司;pMD19-T Vector,购自TaKaRa公司; IPTG㊁X-gal㊁DH5α,购自北京全式金生物技术有限公司㊂1.3㊀方法1.3.1㊀引物设计㊀参照NCBI数据库犬细小病毒VP2基因保守区设计扩增全长的引物,引物序列包含酶切位点,由金唯智生物科技有限公司合成㊂引物序列如下:VP2-forward:5ᶄATA CATATG AGTGATGGAGCAGTTCAACC3ᶄVP2-reverse:5ᶄTAT GGATCC TTAATATAATTTTCTAGGTG3ᶄ1.3.2㊀病毒基因组DNA提取㊀2017年4月分离的病毒株命名为CPV/canine/LZ/1/2017,2017年7月分离的病毒命名为CPV/canine/LZ/2/2017,按照TIANGEN病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒说明书进行㊂1.3.3㊀VP2基因的扩增㊀PCR反应体系:2ˑTaq PCR Master Mix25μL,ddH2O23μL,上游引物1μL,下游引物1μL,模板1μL,总体积50μL㊂PCR反应条件:95ħ预变性5min;95ħ1min, 53ħ40s,72ħ90s,30次循环;72ħ10min㊂扩增后的产物进行琼脂糖凝胶电泳㊂电泳后切取目的条带,用胶回收试剂盒进行纯化回收㊂1.3.4㊀连接与转化㊀胶回收产物与pMD19-T载体连接㊂连接体系为10μL,其中SolutionI5μL; pMD19-T载体2μL;胶回收产物3μL;16ħ连接30min㊂连接产物转化100μL感受态大肠杆菌DH5α㊂冰浴30min,42ħ热激45s,冰浴2min㊂在上述感受态细胞中加入950μL不含抗生素的LB 液体培养基37ħ震荡培养1h㊂用移液器吸取100μL培养液涂布含有IPTG㊁X-gal和氨苄青霉素的LB平板培养基,37ħ培养12-16h㊂1.3.5㊀阳性重组质粒的鉴定㊀挑取平板中的白斑(阳性)于含氨苄青霉素的LB肉汤中37ħ摇床中培养8h至菌液浑浊;吸取少量菌液进行菌液PCR扩增,PCR产物经1%琼脂糖凝胶(含溴化乙锭)电泳,观察是否出现目的条带㊂取出现目的条带的菌液1mL,离心,弃上清,送金唯智生物科技有限公司测序㊂1.3.6㊀序列测定与分析:将临床分离株VP2基因序列与NCBI中的24株犬细小病毒及3株猫细小病毒VP2基因序列用MEGA7.0进行比对分析,并绘制遗传进化树㊂用MegAlign软件分析核苷酸同源性,同时分析氨基酸变异情况㊂2㊀结果2.1㊀PCR扩增结果㊀PCR扩增产物大小约为1700bp,与预期一致,如图1所示㊂图1㊀犬细小病毒VP2基因PCR产物电泳1:CPV/canine/LZ/1/2017VP2基因;2:CPV/canine/LZ/2/2017VP2基因;M:DL-2000DNA Marker2.2㊀核苷酸遗传进化及同源性分析㊀测序结果显示,2株病毒VP 2基因大小为1755bp,CPV /canine /LZ /1/2017VP 2基因NCBI 登录号分别为MH155192,CPV /canine /LZ /2/2017VP 2基因MH155193㊂遗传进化分析显示,猫细小病毒和犬细小病毒明显位于不同的进化分支上,MH155192与MF467233.1㊁JQ743891.1和KY937659进化关系较近,位于同一进化分支㊂MH155193与KY937651.1㊁KP260509.1㊁KY937641.1进化关系较近,位于另一独立的进化分支上,如图2所示㊂核苷酸同源性分析显示,MH155192与MF467233.1和JQ743891.1的核苷酸同源性最高,均为99.9%,与MG264078.1同源性较低(99%)㊂MH155193与KY937651.1㊁KP260509.1㊁KY937641.1核苷酸同源性均为99.8%,与KF149967.1同源性较低(99.1%),MH155192和MH155193同源性为99.3%,如表1所示㊂图2㊀犬细小病毒临床分离株VP 2基因系统发育树2.3㊀氨基酸变异分析㊀MH155192在易发生变异的位点氨基酸分别为5A,80R,87L,93N,101T,103A,178D,212F,232I,267Y,297A,300G,305Y,322T,323N,324I,370R,373D,426D,440A,564S,568G㊂各毒株之间氨基酸差异明显的位点主要在267㊁324㊁370㊁426㊁440位,如表2所示㊂MH155192和MH155193共有13个核苷酸差异,其中的10个核苷酸的变化仅造成同义突变,而3个核苷酸突变导致氨基酸改变,分别位于370㊁426和440位残基㊂总体来看,在24株犬细小病毒中,中国分离株267位均为Y,324位均为I,与美国㊁厄瓜多尔分离株差异明显,370位中国分离株为Q 或R㊂CPV-2c 分离株440位均为T㊂表1㊀犬细小病毒临床分离株VP2基因同源性分析12345678910111213141516171819 1-99.599.899.599.499.999.799.49999999999.399.399.299.199.199.198.9 20.5-99.599.699.599.499.599.599.299.299.399.299.399.399.399.299.299.299.1 30.20.5-99.499.499.799.799.498.998.99998.999.299.299.199.299.299.198.9 40.50.40.6-99.599.499.599.799.199.199.299.199.599.599.499.499.499.499.2 50.60.50.60.5-99.399.599.49999999999.299.299.199.199.199.198.9 60.10.60.30.60.7-99.599.398.998.998.998.999.199.199.199.1999998.8 70.30.50.30.50.50.5-99.49999999999.399.399.299.399.399.198.9 80.60.50.60.30.60.70.6-99.399.399.399.399.899.899.899.799.799.799.3 910.8 1.10.91 1.110.7-99.999.999.899.399.399.399.299.299.299.8 1010.8 1.10.91 1.110.70.1-99.899.999.399.399.399.299.299.299.8 1110.710.81 1.110.70.10.2-99.799.499.499.399.399.399.399.8 1210.8 1.10.91 1.110.70.20.10.3-99.399.399.399.299.299.299.7 130.70.70.80.50.80.90.70.20.70.70.60.7-10099.999.999.999.999.4 140.70.70.80.50.80.90.70.20.70.70.60.70-99.999.999.999.999.4 150.80.70.90.60.90.90.80.20.70.70.70.70.10.1-99.899.899.899.3 160.90.80.80.60.90.90.70.30.80.80.70.80.10.10.2-99.999.899.3 170.90.80.80.60.910.70.30.80.80.70.80.10.10.20.1-99.899.3 180.90.80.90.60.910.90.30.80.80.70.80.10.10.20.20.2-99.3 19 1.10.9 1.10.8 1.1 1.2 1.10.70.20.20.20.30.60.60.70.70.70.7-注:1,KF149985.1;2,KF149967.1;3,KF149973.1;4,KJ813864.1;5,KJ813850.1;6,MG264078.1;7,MG264076.1;8,KX198141.1; 9,KY937651.1;10,KP260509.1;11,KY937641.1;12,KY937650.1;13,MF467233.1;14,JQ743891.1;15,KY937659.1;16,KU983491.1; 17,GQ379047.1;18,MH155192;19,MH155193表2㊀VP2蛋白氨基酸变异情况序号毒株位置267324370426440基因型宿主时间国家1GQ379047.1Y I Q N A2a犬2009泰国2KF149973.1F Y Q N S2a犬2012厄瓜多尔3KF149985.1F Y Q D S2b犬2012厄瓜多尔4KF149967.1F Y Q E T2c犬2012厄瓜多尔5MG264078.1F Y Q D S2b斗牛犬2017厄瓜多尔6KJ813882.1F Y Q D T2b浣熊2012美国7KJ813881.1F Y Q D T2b灰狼2012美国8KJ813884.1F Y Q E T2c郊狼2012美国9KJ813892.1F Y Q D T2b郊狼2013美国10KJ813835.1F Y Q N T2a渔貂2013美国11KJ813864.1F Y Q D T2b美洲狮2013美国12KJ813850.1F Y Q D T2b短尾猫2013美国13KX198141.1F I Q D A2b犬2016伊拉克14KX618915.1Y I Q N A2a椰子狸2016新加坡15JQ743891.1Y I Q D A2b斗牛犬2010中国16KP260509.1Y I R E T Novel2c犬2014中国17MF467233.1Y I Q D A New2b犬2015中国18KY937641.1Y I R E T2c犬2016中国19KU983491.1Y I Q N A2a犬2016中国20KY937650.1Y I Q E T2c犬2016中国21KY937651.1Y I R E T2c犬2017中国22KY937659.1Y I Q D A2b犬2017中国23MH155192Y I Q D A2b犬2017中国24MH155193Y I R E T2c犬2017中国3 讨论犬细小病毒,为将其与抗原无关的犬科动物微小病毒(MVC或CPV1)区分开来,也称为CPV2,1978年出现在美国,并迅速蔓延在世界各地的狗群中引起居高不下发病率[5]㊂在1979年和1984年,CPV-2a和2b两种新抗原类型分别取代了原来的CPV-2,获得了在猫中高效复制的能力㊂CPV-2a和CPV-2b至少在VP2衣壳蛋白上有5个或6个氨基酸与最初的CPV2不同㊂在CPV-2a和CPV-2b中VP2第297位(SerңAla)的额外氨基酸改变产生了 新CPV-2a 和 新CPV-2b ㊂此外,在2000年报道了另一种抗原变体,其特征在于氨基酸替代426-AspңGlu㊂这种CPV-2c随后在全球范围内被报道,并与严重的临床病程相关,死亡率较高[6]㊂CPV-2a(Met87Leu,Ile101Thr, Ala300Gly,Asp305Tyr,Asn375Asp,和Val555Ile氨基酸变体)和CPV-2b(Asn426Asp),CPV-2c (Asp426Glu)仅有1个氨基酸位置不同(VP2426残基)[7]㊂VP2的426和297位氨基酸在空间上分别接近衣壳表面上三倍体突起的残基97和300㊂结构研究表明,该区域与宿主细胞的转铁蛋白受体(TFR)相互作用以介导感染,限制宿主范围,并且具有很高的抗原性[6]㊂近年来中国分离株CPV-2a, CPV-2b,CPV-2c三种类型都有㊂在本文氨基酸分析的24株病毒中,除KJ813835.1第297位为Ser 外,其余菌株都为Ala,故认为CPV/canine/LZ/1/ 2017和CPV/canine/LZ/2/2017分别是新CPV-2b 和CPV-2c㊂尤其CPV-2c甚至能引起成年犬的严重疾病,应引起重视㊂一般氨基酸替换发生于K80R,K93N, V103A,D323N,N564S和A568G,在本文的氨基酸序列分析中发现,不同毒株之间的主要突变发生在F267Y,Y324I,Q370R,N426D或D426E, T440A㊂这些突变可能会导致病毒通过抗原漂移免疫逃避和随之而来的疫苗失败㊂在非同义突变中,氨基酸残基267未暴露于衣壳表面,因此在这个位置的替代可能不会影响病毒的抗原性㊂Y324I突变常见于亚洲国家特别是中国和南美㊂该突变可能对细小病毒宿主范围有影响,且由于Y324I突变发生在潜在的重要的抗原表位区域,这个替代可能对病毒生物学有直接影响㊂T440A突变对于CPV也很重要,因为残基440位于衣壳表面VP2的3倍体突起的顶部,主要的病毒抗原位点㊂因此导致其他抗原性变体出现[8]㊂台湾CPV-2c毒株VP2蛋白也存在Q370R的替代,突变Q370R在中国的大熊猫和中国的CPV-2c株中观察到㊂370残基位于残基359和375之间(它是衣壳蛋白的表面环),毗邻双Ca2+结合位点,这些对于病毒感染性是必不可少的,这些位点的改变与病毒凝集红细胞的能力相关[9]㊂因此,Q370R变异是否导致抗原变化仍有待调查㊂总的来说,进一步研究犬细小病毒流行毒株的基因变异情况,以及变异引起的生物学特性的变化对于该病的防控有重要意义㊂参考文献:[1]㊀蔡宝祥.家畜传染病学[M].4版.北京:中国农业出版社,2001:354[2]㊀Cotmore S F,Mavis A M,Chiorini J A,et al.The family Parvoviri-dae[J].Archives of Virology,2014,159(5):12391247. [3]㊀董江丽,李淑芬,张鹤龄.犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析[J].中国病毒学,2000,15(4): 379387.[4]㊀王微,李秀锦,仲飞,等.犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达及特性[J].微生物学报,2009,49(5): 648652.[5]㊀Giudici S D,Cubeddu T,Giagu A,et al.First molecular charac-terization of canine parvovirus strains in Sardinia,Italy[J].Ar-chives of Virology,2017,162(11):34813486. [6]㊀Vieira F V,Hoffmann D J,Fabri C U F,et al.Circulation of ca-nine parvovirus among dogs living in human-wildlife interface in the Atlantic forest biome,Brazil[J].Heliyon,2017,3(12): e00491.㊀[7]㊀Ahmed N,Riaz A,Zubair Z.et al.Molecular analysis of partialVP-2gene amplified from rectal swab samples of diarrheic dogs in Pakistan confirms the circulation of canine parvovirus genetic vari-ant CPV-2a and detects sequences of feline panleukopenia virus (FPV)[J].Virology Journal,2018,15(1):45.[8]㊀Li G R,Ji S L,Zhai X F,et al.Evolutionary and genetic analysisof the VP2gene of canine parvovirus[J].BMC Genomics,2017, 18(1):534.[9]㊀Lin Y C,Chiang S Y,Wu H Y,et al.Phylodynamic and GeneticDiversity of Canine Parvovirus Type2c in Taiwan[J].Internation-al Journal of Molecular Sciences,2017,18(12):2703.。
犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析
ANTU-1株、WH02/06株及BJ01株亲缘关系最近，位于进化树的同一簇。本研究对监测CPV的遗传变异趋势及
疫苗的研制具有重要意义。
关键词：犬细小病毒(CPV)；分离；鉴定;VP2基因
中图分类号：S852. 65+5
文献标识码：A
Doi： 10. 16431/j. cnki. 1671-7236. 2019. 01. 024
1期
赵屹钦等：犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析
207
showed that the nucleotide homology with the attenuated vaccine Intervet/vaccine/06 and Pfizer/ vaccine/06 were both 98. 7% ;The sequence homology was 98. 2% to 99. 5% , which had the high est homology with ANTU-1 and WH02/06 strains. It was closely related to ANTU-1 strain, WH02/06 strain and BJ01 strain, and was located in the same cluster of evolutionary tree. This study was of great significance for monitoring the genetic variation trend of CPV and the develop ment of vaccines. Key words: canine parvovirus (CPV) ； isolation ； identification ； VP 2 gene
犬细小病毒西宁分离株的分子鉴定及VP2基因序列分析
48卷第3期Vol.48,No. 3青海畜牧兽医杂志Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary Sciences1 6/2018犬细小病毒西宁分离株的分子鉴定及VP2基因序列分析简莹娜张学勇赵海龙3,李秀萍王戈平刘振伟王光华蔡其刚马利青1>2*(1.青海省畜牧兽医科学院，西宁，810016; 2.青海大学畜牧兽医科学院省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室，西宁，810016; 3.青海省西宁市野生动物园，西宁,810001)摘要:本研究首次对地处青藏高原地区的西宁的犬细小病毒分离株（命名为C P V -X N1)进行了 V P2基因的克 隆、测序,并与我国以及我国周边国家地区的流行株，以及参考株进行了核苷酸同源性比对和进化分析。
V P2基因分子 鉴定结果显示，该分离株为C P V-2b亚型株，V P2基因核苷酸序列全长1755bP，蛋白长度为584个氨基酸，分子量大小 约为64. 58 k D a，V P2蛋白为稳定蛋白，总体亲水性较高，可溶于水，V P2蛋白的二级结构以无规则卷曲为主;V P2基因 的T- B细胞共同表位为序列的97 - 105位点，其序列为A L D D T H A Q I,位点286 - 294，序列为G L P P F L N S L。
西宁分离 株与我国各地区流行株的核苷酸序列同源性和氨基酸同源性均在99%以上;C P V- X N1分离株V P2基因氨基酸序列中 的非同义突变位点有1处，在78位氨基酸处;V P2基因进化树分析发现：C P V - X N1分离株与C P V -2b北京分离株 (K T162024)和C P V-2b兰州分离株（JQ268284)组成一个微小分支，并与其它C P V -2b分离株处于同一个大支上，从 进化角度上鉴定此研究分离株应属C P V-2b株。
因此，本实验对青海西宁C P V- X N1分离株的V P2基因抗原表位分 析和系统进化的探讨结果，有望为我国C P V分子流行病学调查提供一定的数据参考依据。
犬细小病毒山东分离株VP2基因的克隆与遗传变异分析
了依 据 。
关键 词 ： 犬细 小病毒 ； Ｖ Ｐ ２： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ 文献 标志码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ５ ２ ９ — ６ ０ ０ ５ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ８ — ０ ０ １ Ｏ － ０ ４
Ｃｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎｄ ｇ ｅ ｎｅ ｔ ｉ ｃ ｄ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ＶＰ２ ｇ ｅ ｎｅ ｏ ｆ ｃ ａ ｎｉ ｎｅ ｐａ ｒ ｖ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｓｈ ａ ｎｄｏ ｎｇ
于永 乐 ， 张 传 美 ， 张 倩 。， 杨 海 燕 ， 杨 瑞 梅 ，张 洪 亮 ， 单 虎
（ １ ． 青岛农 业大 学动 物科技 学 院 ，山东 青 岛 ２ ６ ６ １ ０ ９； ２ ． 山东 省黄 岛 出入境 检验检 疫局 ，山东 青 岛 ２ ６ ６ ５ ５ ５ ）
摘要 ： 为 了解 山东 省 犬 细 小病 毒 （ Ｃ Ｐ Ｖ） 流 行 毒 株 的遗 传 变异 情 况 及 其 与犬 细 小 病毒 病 的分 子流 行 病 学关 系 ， 对 ２ ０ １ ３ 年 分离 到的 ｌ ２ 株 山东 Ｃ Ｐ Ｖ流行 毒株 进行 了 Ｖ Ｐ ２ 基 因 克隆测 序与 同源性 分析 ， 绘制 系统 进化 树 。结 果表 明 ， 获 得 的
犬细小病毒BJ5株分离和VP2序列分析
犬细小病毒BJ5株分离和VP2序列分析王洪林;谭斌;陈微晶;王秀东;武华【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2009(031)002【摘要】从北京地区疑似犬细小病毒感染的病死犬血样粪便中分离1株犬细小病毒并进行VP2基因扩增和序列分析,命名为CPV-BJ5株.应用CrFK细胞分离病毒,经2次传代后出现稳定的血凝特性(HA);免疫荧光试验表明,感染分离毒的细胞与抗CPV单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光;试验犬接种分离病毒后14d内均表现为体温升高、食欲减退、腹泻及血便等典型发病症状;序列测定结果表明分离病毒的VP2基因与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株的核苷酸相似性分别为99.2%、99.5%、99.1%、99.9%,氨基酸相似性分别为99.5%、100%、100%、99.3%;与CPV-Northern、CPV-39株的VP2基因核苷酸相似性为98.9%、98.1%,氨基酸相似性为98.8%、99.5%.表明该分离病毒与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株在基因型上同属于CPV-2a毒株.【总页数】5页(P8-11,16)【作者】王洪林;谭斌;陈微晶;王秀东;武华【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5【相关文献】1.犬细小病毒西宁分离株的分子鉴定及VP2基因序列分析 [J], 简莹娜;张学勇;赵海龙;李秀萍;王戈平;刘振伟;王光华;蔡其刚;马利青2.犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析 [J], 赵屹钦;曾梦颖;郭娟;张迪;高洪;严玉霖3.犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定 [J], 周宏专;苏霞;林路路;齐颀;张进;徐福洲;杨兵4.14株北京地区犬细小病毒分离毒株的VP2、NS1基因序列分析 [J], 李少晗;由欣月;范君文;徐一;郝雲峰;崔尚金;秦彤5.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 陈延宗;钱晶;王晶宇;赵航;毕振威;夏兴霞;诸玉梅;芮荣;王永山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
种优 势 ， 尽管不 如育肥性 能 明显 。商品 肉兔 半净膛 率和 全净膛率分别 为５ ． Ｉ ３４ ５６ ］ ． ％￣ ５ ％，后腿 比例 高达 ３ ． ９１ ％，显
示 出较 高 的产 肉 能 力 。 在 肉品 质 方 面 ，Ｉ 和 商 品 代 的 熟 Ｉ 系 肉率 高 于Ｉ ， 说 明 保 水 性好 ；剪 切力 值 较 小 ， 肉较 嫩 。 系
；＾：Ｊ：
ｍ
＾：Ｊ： ：Ｊ １
５７ 。Ｉ Ｉ 交 商 品 兔 在 产 肉性 能 上 也 有 一 定 程 度 的 杂 ． ％ ＸＩ杂
装 的加 工。而皮 板品质指标的变异系数均在 ｌ％以下 ，说 Ｏ 明不 同皮张质量 的一致性较高 。
表３ 商品 兔皮 板质 量评 定结 果 （ｍ、分 ） ｃ
６
２１ 年第 １ （ ０１ 期 总第 １８ ） ６期
毒 ，定名为Ｂ Ｙ２ ０ 。对其ＶＰ 基因进行 了扩增测序 ，初 Ｊ ０６ ２
步 确 定 为２ 亚 型 。 对 该 病 毒 的遗 传 特 性 与 演 化 进 行 了研 ａ
显 的细 胞病 变 ，病 变发 生 在接 种后 ５ｈ，表现 为细 胞 圆 ０
山
３ ２
一
株 犬细 小病毒 的分离及Ｖ ２ 因序 列分析 Ｐ基
杨龙峰① 李英 杰① 艾萍萍① 肖胜 南① 韩 柳② 焦万亮① 王建芬① 张延光① 刘月焕
（ 北京 市延 庆县 农业局 １２０ ② 北 京诚安 动物 医院 ① ０ １０
摘要
⑧ 北京 市农 林科 学 院畜牧 兽 医研 究所 ）
中图分类号 ：￥ ５ ． ８ ２ ５５ ６
１７ 年 ，犬 细小 病毒（ａ ｉｅ ｐｒｏ ｉ ｓ Ｐ 同 时从 ９８ ｃｎｎ ａｖ ｖｒ ， ｖ） ｕｃ 加拿大（ ｈｍｓｎ 、澳 大利亚（ ｌ ） Ｔ ｏ ｏ 等） Ｋｅｙ 患肠炎 的病犬 中分 ｌ 离获得【。Ｃ Ｖ可 引起 犬的出血性肠 胃炎和心肌 炎，并使 ‘ Ｐ 】 白细胞 大量减 少 ，在 幼犬 中的发病 率和死 亡率 都很高 ， 症 状 与猫 泛 白细 胞 减少 症 相似 。本 病 虽 出现 的时 间不
采集病 犬的粪便 ，经处理后接 种狗 肾传代 细胞 系（ ＭＤＣ ） Ｋ ，培 养９ ｈ ６ 无任何细胞病 变，盲传 到第３ 时细胞 系 代
出现 明显 的细胞脱落 ，核 圆缩 ，形成Ｃ Ｅ（ ｔ ａ ｉ ｅ ｅｔ Ｐ ｃ ｏ ｔｃ ｆ ｃ 。继续传代 到ｇ７ ｙｐｈ ｆ ） 代。第 ｌ 代 的细胞培养物 不能凝集猪的红 、２ 细胞 ，第３ 以后 的细胞 培养物可 以凝 集猪 的红细胞 采用Ｐ Ｒ 术，在各代次 的培 养物 中均能扩增得 到特异性 的Ｄ Ａ 代 Ｃ技 Ｎ 片断，经序 列测定后鉴定 为犬细小病毒 ，定名 为Ｂ Ｙ ６ Ｊ ０ 。为进一 步研 究该 分 离株的遗传演化 情况 ，扩增得到 了 Ｐ 基 因 Ｖ２
质 ：而毛 的长度 评分２ 分，说 明毛较 短，非常适合毛 皮服
［】徐 立德 ．家兔 生产 学［ ． 京 ：中 国农业 出版 社，９ ４ １ Ｍ】 北 １９ ．
（］张沅， 家畜育种学［ ．北京： ２ 等． Ｍ】 中国农业大学出版社， ０ １ ２０ ．
（ 收稿 日期 ：２ １－ １ １ ） ０ １ｏ— １
９ ．％ ～ｌ Ｏ 。 ７１ Ｏ％
关键 词 犬细小病毒
病毒分 离 鉴 定 Ｐ Ｒ Ｐ 序列分析 Ｃ Ｖ ２
文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１０ ．７３２ １）１０ ０ ．３ ０ ７１３ （０ １０ ．０ ６０ 长 ，但 目前 已扩散 到世 界各地 ，几 乎所有 养犬 的地方都 有本病的存在ｔ。１８ 年 １ 月，我国报道在暴发传染性 出 ２ ９２ ０ Ｊ 血性腹 泻 的病 犬 的粪便提 取物 中发现 细小病 毒 ，随后 ， 在我国各地 陆续 有本 病发生的报道 。 本 试验 从临床 发病 犬 的粪 便 中分离 到一株 犬细 小病
表２ 纯系 兔及 配套 商品 兔的产 肉性 能 与肉品 质 （ 、％） ｇ
３ 小 结
杂交试 验 的结果显 示 了两个专 门化 品系 良好 的杂交 效果 ，达到 了多个 经济性状 在 不同 品系分散 选育 ，然后 在 杂种 中进行综合的 目的。预期两系配套杂种在低遗传力
注 ：８ 龄每组 屠 宰２ ４日 Ｏ只 。
缩 、 颗 粒 增 多 ， 胞 核 浓 缩 ， 脱 落 ， 拉 网 ， 病 变 逐 日严
究 ， 以期 为更 好 地 为预 防 和控 制 犬 细 小 病毒 病 提 供 资 料 。同时为大范 围的对Ｃ Ｖ进行流行病学调查提供可行的 Ｐ
的繁殖性状上 的杂种优势应更显著 ，但 限于两系配套 ，繁 ８ ４日龄商 品兔 屠宰后对 板皮 的
殖 性 状 上 的杂 种 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 势不 能得 到 有 效利 用 。
参 考 文献
２３ 商品 兔的板皮质 量 ．
品质进 行了评定 （ ） 由表３ 表３ 。 可知 ，商 品兔 具有较大的
皮板面积 （ ４ ｍ 。密度 、光泽度 、平整度 、含绒率的 ８ ８ｃ ） 评 分均 在３３ 以上 ，评 分较 高 ，显 示 出较 好 的 毛皮 品 ．分
＋ 通讯 作者
； ，；－ ｌ：１ｊ ：Ｊ： － ●：● ： ： ： ● ； ；－：● Ｊ： ：●： ； Ｊ ｍ ；ｌ： ：ｌ：－； Ｉ － Ｊ ： ；山 ； ： 一
； － 一 ；
； 一
Ｊ：－ 山 ；
； ● ：
：Ｊ：
ｊ●：ｍ
＾ － ： ：
：＾：＾： ： ＾ ｍ
的全序 列。经序列 测定，用Ｄ ＮＳａ软件分析表 明Ｂ Ｙ０ 毒株 为Ｃ Ｖ ２ ： 型 ， 所得 到的Ｖ ２ 因全长 １５ ｂ ，含有 完整 Ａ ｔ ｒ Ｊ ６ Ｐ －ａ － ． ￣ Ｐ基 ７５ ｐ 的 阅读 框 架 ，编 码 ５ ４ 氨 基 酸 。 与 其 它 亚 型 的 毒 株 相 比较 核 苷 酸 的 同 源性 为 ９ ． ９ ． 。氨 基 酸 同 源 性 为 ８个 ８３ ９６ ％～ ％