猪源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的检测与分析
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定是一项重要的检测工作，这些药物残留的存在可能对人体健康产生一定的危害。
准确、快速地检测这些残留物的含量是非常必要的。
氯霉素类药物是一种广谱抗生素，常用于预防和治疗动物的感染病。
如果动物在屠宰前一段时间内使用了这些药物，残留物可能会在食品中存在。
对于人类来说，摄入这些残留物可能会引起过敏反应、中毒甚至诱发耐药菌株。
第一种是高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）。
该方法具有快速、准确、灵敏、选择性高等特点。
将样品进行提取，利用有机溶剂将残留物从食品中分离出来。
然后，使用HPLC将残留物进行分离，并通过串联质谱进行定性和定量分析。
该方法可以同时测定多种氯霉素类药物的残留，且可以达到非常低的检测限。
第二种是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
该方法是通过抗体与药物残留物结合来进行检测的。
将样品中的残留物与标记有酶的抗体结合，在搅拌的条件下进行反应。
然后，通过酶标仪检测残留物与酶的结合程度，从而确定残留物的含量。
由于该方法操作简便、快速，且具有较高的灵敏度和选择性，因此广泛应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定中。
测定动物源性食品中氯霉素类药物残留的方法有很多种，每种方法都有其优缺点。
在具体实验中，需要根据实际需要选择合适的方法进行测定，以确保结果的准确性和可靠性。
猪源性大肠杆菌的耐药性调查
292016年33卷第8期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学海外文摘OVERSEAS ABSTRACTS猪源性大肠杆菌的耐药性调查有机猪的生产在许多方面不同于传统猪的生产，表现在抗生素的使用、畜群结构、饲养制度、进入室外区域和每头猪的空间福利等诸多方面。
该研究调查的目的是确定是否这些差异降低了丹麦、法国、意大利和瑞典有机屠宰猪的抗生素耐药性。
试验样品取自结肠或粪便，并测定了10种抗生素对大肠杆菌分离株的最低抑菌浓度。
此外，对猪只结肠或粪便样本中四环素（TET）抗大肠杆菌的比例作了测定。
在这4个国家中，有机猪抗氨苄青霉素、链霉素、磺胺类药物或甲氧苄氨嘧啶的大肠杆菌含量显著降低。
在法国和意大利的有机猪中，抗氯霉素、环丙沙星、萘啶酸、庆大霉素的大肠杆菌分离株的比例也显著降低。
耐头孢噻肟的大肠杆菌在任何国家都没有发现。
耐四环素的大肠杆菌分离株的百分比以及四环素耐药大肠杆菌的比例显著低于传统的猪，除了在瑞典四环素抗性同样低的生产类型。
与法国和意大利相比，瑞典和丹麦的四环素耐药大肠杆菌的比例更低一些。
该项研究表明，相比于传统生产的猪，这四个国家的有机猪中肠道大肠杆菌的耐药性是不太常见的，但国家间不同生产类型猪只的大肠杆菌耐药性存在很大差异，这表明，地域和生产类型都会影响细菌的耐药性。
（编译自：/plosone/article?id =10.1371/journal.pone.0157049）母猪卵巢局部效应影响输卵管基因的转录输卵管在受精过程中起着决定性的作用。
此外，卵巢、输卵管和子宫之间局部功能的相互作用也至关重要。
然而，目前的研究主要集中于卵巢和子宫内膜之间的相互作用，而研究卵巢与输卵管的相互作用似乎已被忽视。
更好地了解卵巢和输卵管之间的相互作用可有助于我们在家畜繁殖方面取得进展，同时也会改善体外培养条件下使用的辅助繁殖技术。
已有研究表明，卵巢分泌的黄体酮浓度的微小变化会影响到输卵管分泌物如氨基酸和离子，所以可以预期，单侧卵巢切除（UO）将对输卵管产生重要影响，但该问题至今未被证实。
一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析的开题报告
一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析的开题报告题目：一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析研究背景：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于人和动物肠道中的肠道菌群中的细菌，有些菌株可以引起胃肠道疾病，甚至导致败血症等严重疾病，威胁人和动物的健康。
在畜牧业中，猪源大肠杆菌的感染病例频繁发生，引起了广泛关注。
而耐药性是目前猪源大肠杆菌感染治疗中最棘手的问题之一，因此研究一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析具有重要的现实意义。
研究内容：本研究将从猪的粪便样本中分离出一株大肠杆菌，并对其进行鉴定和耐药性分析。
具体包括以下几个方面：1. 猪粪便样本的采集、预处理以及大肠杆菌的分离纯化。
2. 大肠杆菌的生化特性、形态特征、生长特性等鉴定。
3. 大肠杆菌的16S rRNA基因测序和系统发育分析，确定其属于哪一个亚种。
4. 大肠杆菌对不同类型抗生素的敏感性测定，构建其耐药性谱。
5. 对该菌株的耐药机制进行初步探究，比如是否携带了耐药基因等。
研究意义：本研究可以为猪源大肠杆菌感染防控、耐药机制研究以及相关抗生素的合理使用提供参考依据。
同时，从分子生物学的角度深入了解猪源大肠杆菌的遗传多样性，为其分子分型、演化以及其在人和动物之间的传播提供理论依据。
研究方法：采用常规的分离和鉴定方法，包括粪便样本的采集和处理、菌落计数、生化鉴定、16S rRNA测序等；对大肠杆菌的耐药性谱的测定采用Kirby-Bauer法或MIC法。
预期结果：预计本研究将分离到一株猪源大肠杆菌，并确定其的生物学特性（包括形态、生长特性等）、分子生物学特性（包括16S rRNA 测序、系统进化分析等）以及其耐药性谱。
同时，初步探究其耐药机制，为日后开展相关研究提供参考依据。
参考文献：1. Zhu, B., Chen, Q., Chen, L., et al. (2017). Prevalence and antimicrobial susceptibility of Escherichia coli isolated from pig farms, slaughterhouses, and markets in Jiangxi province, China. Journal ofFood Protection, 80(7), 1183-1189.2. Jiang, W., Wu, H., Liu, Y., et al. (2019). Risk factors and molecular mechanisms associated with macrolide resistance in Escherichia coli isolated from pigs. BMC Microbiology, 19(1), 56.。
猪源大肠杆菌的分离 鉴定及耐药性监测
大肠杆菌是一种常见的人类和动物肠道病原菌，其中一些菌株已经对多种抗 生素产生了耐药性。因此，对大肠杆菌进行分离鉴定和耐药性分析对于防控细菌 性感染和合理使用抗生素具有重要意义。本次演示以一株猪源大肠杆菌为例，介 绍了其分离鉴定和耐药性分析的过程。
实验材料包括采样猪的粪便、大肠杆菌标准菌株、药敏试纸、培养基等。实 验方法包括细菌分离、纯化、鉴定和药敏试验。结果发现，该菌株属于大肠杆菌 O157:H7血清型，具有较高的耐药性，对多种抗生素如青霉素、氨苄西林、头孢 曲松、氟苯尼考等产生了耐药性。肠杆菌菌株分别接种在含有不同浓度抗菌 药物的培养基上。通过测量抑菌圈的直径，评估菌株对抗菌药物的敏感性。参照 国际抗菌药物敏感性试验委员会（NCCLS）制定的标准，分析耐药性水平及变化 趋势。
三、结果
1、分离与鉴定结果
经过分离和鉴定，共获得50株猪源大肠杆菌。这些菌株在培养基上呈现出典 型的圆形、湿润、半透明菌落，革兰氏染色阴性，具有典型的大肠杆菌形态特征。 分子生物学鉴定结果表明，所有菌株均含有16S rRNA基因，与大肠杆菌属的亲缘 关系较近。
需要注意的是，本次演示的研究成果对于指导临床合理用药和控制羊源大肠 杆菌的传播具有一定的实践意义，但仍需进一步扩大样本量、增加实验代表性以 及加强多学科联合研究，以提供更全面、准确的研究结论。在未来的研究中，我 们应注重对新型检测技术和治疗方法的研究与开发，以便更好地应对耐药性和致 病性问题。
谢谢观看
研究羊源大肠杆菌的耐药性与致病性对于指导临床合理用药、控制病情具有 重要意义。目前，耐药性大肠杆菌已成为一个全球性的问题，给治疗带来了很大 的困难。因此，我们需要更加深入地研究羊源大肠杆菌的耐药机制和致病机理， 寻找有效的解决方法。
本研究采用细菌培养、分子生物学等技术手段对羊源大肠杆菌进行分离鉴定， 并对其耐药性和致病性进行分析。首先，对临床疑似感染大肠杆菌的羊只进行细 菌分离培养，获得纯菌落。接着，采用基因测序、PCR等方法对菌落进行分子生 物学鉴定，确定其为大肠杆菌。
猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
何金娇;毛雪飞;孙国鹏;马萌萌;张灵;吴云舟
【期刊名称】《家畜生态学报》
【年(卷),期】2022(43)9
【摘要】旨在了解和掌握新乡市某规模化猪场大肠杆菌的耐药情况及耐药基因类型,为猪细菌病及其耐药性研究奠定基础。
本研究从该猪场采集样本,通过平板划线法进行大肠杆菌的分离纯化,采用K-B纸片法进行药敏试验,并对多种耐药性基因进行PCR检测。
试验共分离鉴定出15株大肠杆菌。
药敏试验结果表明,分离菌株对氨苄西林、万古霉素、复方新诺明、氯霉素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星等多种药物具有多重耐药性;PCR扩增结果显示,这些菌株携带有氯霉素类的floR基因(100%)、β-内酰胺类的blaTEM基因(80.0%)、四环素tetM的基因(26.7%)等耐药基因,可能是导致大肠杆菌对相应抗生素产生耐药的原因。
综上所述,这些猪源分离菌株大多为多重耐药大肠杆菌。
【总页数】5页(P58-62)
【作者】何金娇;毛雪飞;孙国鹏;马萌萌;张灵;吴云舟
【作者单位】新乡学院生命科学与基础医学学院;东北农业大学生命科学学院【正文语种】中文
【中图分类】S852.6
【相关文献】
1.河南省猪源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析
2.泉州地区猪源致病性大肠杆菌的分离鉴定血清型检测与耐药性分析
3.一株猪源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的\r 分离鉴定与耐药性分析
4.猪源性大肠杆菌的分离鉴定及菌株耐药性分析
5.烟台地区猪源大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析
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动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定动物源性食品是人们日常饮食中重要的一部分，然而其中可能存在着一些潜在的危险因素，比如动物体内的残留药物。
氯霉素类药物是一类广泛使用的抗生素，用于治疗动物的疾病。
大量使用氯霉素类药物可能导致其在动物体内残留，并通过食品链进入人体，对人体健康造成潜在威胁。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定是非常重要的。
目前，国内外对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法有很多种，常用的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、质谱联用技术等。
这些方法在检测灵敏度、准确性和可操作性等方面各有优势，但也存在一些局限性，例如部分方法需要昂贵的设备和专业的操作技能。
在选择合适的测定方法时需要根据具体的实验条件和需要进行综合考虑。
高效液相色谱法是一种目前应用较为广泛的氯霉素类药物残留测定方法。
该方法操作简便，准确度高，且可以同时测定多种氯霉素类药物的残留量。
其原理是利用高效液相色谱仪对样品中的氯霉素类药物进行分离和检测，通过比对标准曲线来计算出样品中的氯霉素类药物残留量。
但是该方法也存在一些局限性，比如需要使用高昂的仪器设备，操作技能要求较高等。
在选择合适的氯霉素类药物残留测定方法时，需要根据实际情况进行综合考虑。
对于一般的常规检测工作，可以选择高效液相色谱法或气相色谱法进行分析；对于对检测结果精度和灵敏度要求较高的情况，可以选择质谱联用技术进行分析。
在进行氯霉素类药物残留测定时，还需要严格按照标准操作程序，进行严格的质量控制和质量保证，确保检测结果的准确性和可靠性。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定是一项十分重要的工作。
尽管不同的测定方法各有优势和局限性，但在实际工作中需要根据具体情况选择合适的方法，并严格按照标准操作程序进行操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
只有这样，才能确保动物源性食品的安全性和健康性，保障人民群众的身体健康。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
氯霉素类药物是一种广泛用于家禽、家畜和水产养殖业的抗生素，它们能够有效地预防和治疗动物疾病。
但是，如果过度使用这些药物，会导致药物残留在动物体内，从而对人们的健康造成威胁。
因此，为了确保食品安全，需要对动物源性食品中氯霉素类药物残留量进行检测。
氯霉素类药物包括氯霉素、磺胺甲基异噁唑、三种青霉素等多个种类，它们对不同的细菌有着不同的危害作用，但都具有较强的药物残留性质。
因此，精确地测定它们的残留量是非常重要的。
测定氯霉素类药物残留量的方法有多种，其中包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等等，这些方法都具有高灵敏度、高准确性的特点。
在现代食品检验实验室中，常用的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
高效液相色谱法是一种常用的分离分析技术，它是一种基于液态固定相的分离技术，具有分离速度快、分离效果好、灵敏度高等多重优点。
利用高效液相色谱法可以分离出氯霉素类药物并进行定量分析。
该方法的样品处理步骤主要包括提取、纯化和分离，然后进行定量分析。
首先，将待测样品粉碎和混合，加入特定体积的溶剂进行提取，这样可以将样品中的氯霉素类药物提取出来。
然后，通过过滤和纯化净化样品，删除样品中的杂质，使得氯霉素类药物更加纯净。
接着，将样品注入高效液相色谱仪中进行分离和定量。
最后，根据所得的峰面积和对照品的峰面积计算出氯霉素类药物的含量。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定氯霉素是一种广谱抗生素，广泛用于畜禽养殖中的防治感染疾病。
然而，如果不严格控制其使用量和范围，就会引起动物食品中氯霉素类药物的残留，对人体健康造成潜在危害。
因此，准确测定动物源性食品中的氯霉素类药物残留量具有重要意义。
一、氯霉素类药物的一般检测方法氯霉素类药物的检测可以采用物理、化学和生物学等方法，其中生物学方法是最常用的方法之一。
常用的生物学方法包括免疫学方法和生物传感器。
1.免疫学方法免疫学方法分为单克隆抗体和多克隆抗体两种。
单克隆抗体方法具有灵敏度高、特异性强、重现性好、稳定性高等优点，但制备成本昂贵；多克隆抗体方法则具有费用低廉、制备简单的优点，但其灵敏度和特异性较低。
具体操作中，可先将样品提取，然后采用ELISA或放射免疫分析等方法进行检测。
2.生物传感器生物传感器是利用生物分子和传感器技术，实现对生物样品中目标组分的定量检测。
生物传感器通常分为生物化学传感器和生物电化学传感器两种。
生物化学传感器常用于固体或半固体矩阵样品中的氯霉素类药物残留检测，而生物电化学传感器则常常采用大肠杆菌等微生物作为生物感受器，对液态样品中的氯霉素类药物残留进行检测。
二、氯霉素类药物的样品处理1.采样对于不同的动物源性食品，采样的方法也略有不同。
一般来说，采样前应先摆布样品，保证样品中的氯霉素类药物均匀分布。
然后，可以根据样品的来源和性质，采用切割、挖取、抽样等方法进行采集。
2.样品提取样品提取是氯霉素类药物残留检测的重要环节之一。
通常，样品的提取方法可分为单一溶剂提取和溶剂萃取等方法。
单一溶剂提取指的是将样品加入一种溶剂中进行提取；溶剂萃取则是将样品和萃取溶剂进行反复混合，从而使目标物质移动到溶剂中。
在具体操作中，提取时间、溶剂种类和比例等因素都会影响提取效果，因此应根据需要进行合理的调整。
近年来，氯霉素类药物残留检测的技术不断发展，应用广泛。
其中，PCR技术、质谱技术和光谱技术都具有一定的优势。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定氯霉素是一种广泛用于兽药中的抗生素，然而这种药物易于残留在动物源性食品中，因此对于动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定显得格外重要。
氯霉素类药物的残留量分析方法有多种，常用的方法包括液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等。
其中，液相色谱法被广泛应用于氯霉素类药物残留的检测。
下面将详细介绍液相色谱法测定氯霉素类药物残留量的方法步骤。
一、试样提取试样提取是测定氯霉素类药物残留的第一步。
在本方法中，选择的提取溶剂是甲醇和水混合液。
首先将待测验样品加入试管中，加入适量的甲醇和水混合液，并进行加热和振荡，使样品中的氯霉素类药物趋向于甲醇层中。
然后，样品离心，将上清液过滤并注入色谱柱中。
二、液相色谱分离液相色谱分离是测定氯霉素类药物残留的第二步。
本方法中使用的是高效液相色谱仪，采用反相色谱柱进行分离。
在分离过程中，采用甲酸铵缓冲液-乙腈混合物为流动相，通过梯度洗脱实现对氯霉素类药物的分离。
三、荧光检测荧光检测是测定氯霉素类药物残留的最后一步。
荧光检测是本方法中采用的检测方法。
在荧光检测前，需要对色谱柱进行预洗和平衡。
同时，荧光检测需要在特定条件下进行，包括：激发波长为355nm，发射波长为476nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。
在完成以上步骤后，可以使用基于外标法或内标法的荧光检测方法确定样品中氯霉素类药物的残留量。
综上所述，液相色谱法是测定氯霉素类药物残留量较为常用的方法之一。
通过该方法，可以快速、准确地测定动物源性食品中的氯霉素类药物残留量，为保障食品安全提供了有效的技术手段。
猪源大肠埃希菌氯霉素类抗生素主要耐药基因的检测与分析
猪源大肠埃希菌氯霉素类抗生素主要耐药基因的检测与分析赵凤菊;关淼;李清竹;李井春;梁乔;顾贵波【摘要】为查明辽宁地区猪源大肠埃希菌氯霉素类耐药菌株主要耐药基因的流行及分布情况,为猪大肠埃希菌病的防控提供科学依据,采用聚合酶链反应(PCR)对25株氯霉素类耐药菌株进行cat1、cmlA基因检测,并对cat1和cmlA基因进行序列分析.通过对耐药基因的检测发现,cat1、cmlA基因的检出率分别为32%和84%,8株同时检出cat1和cmlA基因.因此,在辽宁地区cmlA基因在猪源大肠埃希菌耐药菌株中普遍存在,cmlA介导的泵出机制是辽宁地区氯霉素类抗生素产生耐药性的主要原因;其次为cat1基因,与氯霉素乙酰转移酶的灭活有关.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)007【总页数】3页(P49-51)【关键词】大肠埃希菌;氯霉素类抗生素;耐药基因;聚合酶链反应;猪【作者】赵凤菊;关淼;李清竹;李井春;梁乔;顾贵波【作者单位】辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164【正文语种】中文【中图分类】S852.612;S859.796大肠埃希菌是人类和动物肠道正常菌群的主要成员，也是一种常见的人畜共患病病原，具有携带抗性质粒和转移抗性的能力，在抗生素耐药细菌种群的生态环境中起着重要的作用，严重威胁着人类和动物健康[1]。
氯霉素类药物包括氯霉素、甲砜霉素及氟苯尼考，是一种广谱抗生素，吸收快、体内分布广泛，在兽医临床上发挥着重要的作用，特别对大肠埃希菌和沙门菌等革兰阴性菌有较强的抑菌作用[2]。
但由于氯霉素和甲岚霉素可以抑制哺乳动物线粒体蛋白质的合成，因此，包括中国在内的许多国家陆续禁止了它们在兽医临床上的使用[3-4]。
武鸣县猪源大肠杆菌对常用抗菌药物和消毒剂的耐药性检测分析
武鸣县猪源大肠杆菌对常用抗菌药物和消毒剂的耐药性检测分析凌丹;冯世文;李军【期刊名称】《广西畜牧兽医》【年(卷),期】2016(032)005【总页数】3页(P227-229)【作者】凌丹;冯世文;李军【作者单位】南宁市武鸣区动物疫病预防控制中心，南宁530199;广西兽医研究所，广西南宁530001; 广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁530001;广西兽医研究所，广西南宁530001; 广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁530001【正文语种】中文【中图分类】S855.189.769根据猪发病日龄和病原菌血清型的不同，猪源大肠杆菌在兽医临床上可引起仔猪黄、白痢和仔猪水肿病等。
随着养猪业的快速发展，猪大肠杆菌病发病情况越来越复杂，通常与病毒、其它病原菌以及寄生虫混合感染，给养猪业带来了严重的损害和经济损失[1]。
尽管有疫苗用于大肠杆菌病的防治，但在当前的临床上药物防治仍是首选。
然而抗菌药物的长时间和广泛使用，特别是不科学的使用，导致了严重的细菌耐药问题。
细菌耐药性日益加剧，阻碍了养殖业的健康发展，并有可能引发动物性食品的安全问题，应引起人类的广泛关注。
消毒剂主要用于猪场环境的日常消毒，为猪群的健康生长保驾护航，目前关于消毒剂耐药的文献报道比较少，但是消毒剂的长期不当使用也会引起细菌的耐药性，需引起人们的关注。
本试验从武鸣县中小规模养猪场和散养户共采集新鲜仔猪拉稀粪便40份，分离出致病性大肠杆菌38株，分离率95%。
对38株致病性大肠杆菌进行头孢曲松、恩诺沙星等常用抗菌药物体外敏感性试验，进行新洁尔灭消毒液等5种常用消毒剂的体外最小杀菌浓度(MBC)试验，现将报告如下。
1.1 样品来源样品采集自武鸣县中小规模养殖场和散养户的仔猪新鲜拉稀粪便，采样日期为2015年8月—12月。
1.2 主要试剂MHA培养基、MHB培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基，购自北京陆桥技术有限责任公司。
革兰氏染液和抗生素药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司。
多抗性猪源大肠杆菌的部分耐药性基因分析的开题报告
多抗性猪源大肠杆菌的部分耐药性基因分析的开题
报告
一、研究背景
随着抗生素长期、广泛的应用，致使细菌逐渐发展出抗药性，多抗性猪源大肠杆菌已成为全球范围内一个公共卫生威胁。
大肠杆菌耐药性基因的研究，不仅有助于指导临床治疗，还能为制定合理的治疗措施提供科学依据。
二、研究内容和目的
本研究基于多抗性猪源大肠杆菌耐药性基因的研究，旨在分析其部分耐药基因，为相关研究提供参考。
三、研究方法
1. 标本采集。
从不同农场采集多抗性猪源大肠杆菌标本。
2. 文献查阅。
收集并分析国内外多抗性大肠杆菌分子流行病学及耐药性基因研究资料，并确定所需的耐药性基因。
3. PCR扩增。
采用PCR扩增相关耐药性基因，并进行电泳检测。
4. 数据分析。
基于PCR扩增的结果，分析大肠杆菌的部分耐药性基因的分布频率，并对其在不同农场和地理位置的分布进行研究。
四、预期结果
通过对多抗性猪源大肠杆菌耐药性基因的分析，可以了解不同农场和地理位置的大肠杆菌的耐药性情况，为兽医学界提供指导性建议，预防和控制多抗性细菌的产生和传播。
五、研究意义
本研究可以为控制多抗性细菌传播提供参考，同时可以为开发新的治疗药物提供方向，推动多抗性大肠杆菌的防控工作，保障广大猪养殖从业者和消费者的健康。
猪源性大肠杆菌的分离鉴定及菌株耐药性分析
应该创建群众服务平台、意访信箱等方式，积极听取人民群众的意 见与建议，了解个体畜牧养殖户的实际需求，从而全方面、多层次 的确保乡镇畜牧兽医技术推广工作能够顺利的进行，并且具有一 定的民主性与先进性。
3 结语
综上所述，要想使我国畜牧兽医技术能够在我国各地乡镇顺 利开展推广工作，相关工作者就必须要了解所在乡镇地区的实际 经济发展状况与工作需求，然后进行详细的分析研究并有针对性 的制定推广实施方案，使国家和当地政府对畜牧产业的发展政策 落到实处，满足乡镇当地的养殖户与人民群众的合理需求，从而使 乡镇畜牧产业的经济效益得到最大程度的提升，促进我国农业经 济全面迅速的发展。█ 参考文献： [1] 王世雄.浅析加强乡镇畜牧兽医新技术推广体系的建设[J].农业与技术, 2018,38(2):81-82. [2] 康卓吉.乡镇畜牧兽医技术推广体系中存在的问题及措施[J].今日畜牧兽 医,2020,36(2):66. [3] 明冠勇.我国乡镇畜牧兽医技术推广中体系存在的问题及应对方案[J].吉 林畜牧兽医,2019,40(6):53+55.
的大肠杆菌耐药性具有一定的差异。P1 菌株对环 丙沙星抑菌圈直径为 19mm，提示对该药物高度敏感；而对氧氟沙 星、头孢噻吩中度敏感，抑菌圈直径显示分别为 15mm 和 11mm； 对四环素、磺胺嘧啶、庆大霉素具有耐药性，所测得的抑菌圈直径 均在 10mm 以下。P2 菌株对抗菌药物的敏感度则有很大差异，表 现出对萘啶酸和氧氟沙星中度敏感，抑菌圈直径分别为 15mm 和 13mm；而对四环素、环丙沙星和和氧氟沙星抑菌圈直径均在 8～ 9mm 之间，具有耐药性。
针对抗菌药物在铜仁市规模化养殖场耐药情况的相关研究报 道较为少见。因此，为了初步了解铜仁市养殖场大肠杆菌耐药情 况，本研究选取笔者服务的某猪场，分别采集成年猪和仔猪肛门拭 子，从中分离大肠杆菌，并选取常见治疗用药物，进行耐药性分析， 旨在为科学用药提供一定的指导。
猪源大肠杆菌的耐药性调查与对策
猪源大肠杆菌的耐药性调查与对策摘要：目前国内兽园临床上．猪源性大肠杆菌对常用抗菌药的耐药率相当高、耐药谱愈加复杂、多重耐药相当普遍，是目前大肠杆菌耐药的一个普遍现象。
针对国内近10年猪源性大肠杆菌的耐药现象。
作者提出了一些对策，为临床控制耐药性提供一些参考。
关键词：猪；大肠杆菌；耐药性；抗菌药；对策猪大肠杆菌病是兽医临床上的常见多发病，根据发病日龄和病原菌血清型的差异，猪大肠杆菌病可分为仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病。
近年来，猪大肠杆菌病流行趋势、临床症状和病理变化多样，常与病毒、球虫或其他细菌并发或混合感染，给养猪业造成了巨大的经济损失。
随着养猪业的发展，抗菌药得到广泛的应用，抗菌药物在疾病的防治过程中发挥了很大的作用。
然而，随着抗生素的不合理使用、滥用产生的细菌耐药性越来越严重，给养猪业的健康、可持续发展带来不利，细菌耐药性引发的食品安全问题亦引起人们足够的关注。
本文综述了近10年国内报道的猪源大肠杆菌抗菌药物耐药情况的调查研究，为从总体上了解我国猪源大肠杆菌耐药性和临床筛选有效的抗菌药物提供参考；同时给出了一些控制耐药现象产生的对策。
1我国猪源大肠杆菌耐药现象概览随着抗菌药在动物身上的广泛使用，在抗菌药的选择压力下滋生了对抗菌药具有抵抗力的新一代病菌——耐药菌，致使抗菌药难以维持有效的血药浓度，用药时间延长，作用力下降，抗菌药联合应用效果已大不如前，因而养殖的成本增加，疾病的防控难度加大。
尤其是近年来多重耐药大肠杆菌的出现，使得猪源性大肠杆菌耐药现象日益严重，耐药谱愈加复杂，常用药的耐药率相当高，对养猪业的健康、可持续发展带来了潜在的危害。
1．1 常用药物的耐药情况目前，兽医临床上常用的药物如D一内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氟喹诺酮类、氟苯尼考、泰妙菌素、多粘菌素等的耐药现象已经非常普遍而且耐药率高，没有一种兽用抗菌药物对所有报道的猪源大肠杆菌敏感。
2．1正确使用抗菌药2．1．1对症下药仔细诊断、确定病因，以药敏试验结果为参考选择有效的抗菌药物。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定随着人们对食品安全和健康的关注度越来越高，食品安全问题也逐渐成为社会关注的焦点。
动物源性食品中残留的药物成为了一个备受关注的问题。
氯霉素类药物的残留问题尤为突出。
氯霉素类药物是一类广泛应用于兽药领域的抗生素，它们具有很强的杀菌和抗菌作用，在畜牧养殖时常被用于预防和治疗动物疾病。
过量或长时间滥用氯霉素类药物都可能导致其在食品中残留，对人体健康造成一定的危害。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定成为了必要的工作。
一般来说，动物源性食品中氯霉素类药物的残留量主要通过色谱法、液相色谱法、光谱法等方法来进行测定。
通过这些方法可以确定食品中氯霉素类药物的含量，并依据国家相关法规标准对其残留量是否合格进行判定。
以下将对各种测定方法进行简要介绍。
色谱法是一种常用的氯霉素类药物残留测定方法。
通过色谱法，可以将样品中的氯霉素类药物分离开来，并通过检测器对其进行定量测定。
常用的色谱法有气相色谱法（GC）和液相色谱法（HPLC）。
气相色谱法适用于对氯霉素类药物进行脂溶性物质的分析，它具有分离效果好、灵敏度高等优点。
而液相色谱法则适用于对极性物质的分析，其分离效果也非常好。
借助色谱法，可以准确、快速地测定动物源性食品中氯霉素类药物残留的含量，确保食品的安全性。
光谱法也是一种常用的氯霉素类药物残留测定方法。
其原理是将样品中的氯霉素类药物溶解后，通过特定波长下，利用吸收、荧光、发射等光学现象进行分析。
光谱法具有快速、简便、无需特殊试剂等优点，适用于对动物源性食品中氯霉素类药物残留进行初步快速的检测。
除了以上介绍的方法外，近年来，还出现了一些新型的检测方法，如基于生物技术的检测方法、质谱法等。
这些新方法具有高灵敏度、高选择性、高准确性等优点，被广泛应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定。
尽管有这么多的测定方法，但是动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定仍然存在一定的挑战。
由于氯霉素类药物在动物体内代谢、分布等的复杂性，使得其在动物源性食品中的残留形式各异，因而样品制备方法的选择及操作条件相对更为复杂。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定随着人们生活水平的提高，动物源性食品（如肉类、奶制品等）已经成为我们日常生活中不可或缺的一部分。
随着养殖业的发展和饲料添加剂的应用，动物源性食品中药物残留物的问题也越来越受到人们的关注。
氯霉素类药物是一类常用的抗生素，常被用于动物饲料中，然而其残留量超标会对人体健康产生不良影响。
对动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定显得尤为重要。
一般来说，动物源性食品中的氯霉素类药物主要来源于养殖过程中对动物使用的抗生素，尤其是鸡、鸭、猪等禽畜。
这些抗生素在动物体内代谢不完全，因此会在动物的肌肉、脂肪等组织中残留。
若这些残留物进入人体，会对人体的免疫系统产生负面影响，对人体的肝肾功能、神经系统等产生损害，甚至可能引发过敏反应、中毒等疾病。
为了保障人们的食品安全，对动物源性食品中的氯霉素类药物残留量进行准确的测定显得尤为重要。
目前，常用的测定方法主要有生物学方法、物理化学方法和免疫分析法。
生物学方法是利用生物反应原理，通过动物的生物样品（如肌肉、血清等）与氯霉素类药物接触后出现的生物学反应来测定药物残留量。
这种方法的优点是灵敏度高、实验操作简便，也存在着实验时间长、结果不稳定等缺点。
免疫分析法是通过对动物生物样品中的化学成分进行一系列的抗体与抗原的反应来测定氯霉素类药物的残留量。
这种方法的优点是快速、灵敏度高，也存在着耗材昂贵、专业技能要求高等缺点。
不同的测定方法各有优劣，因此在实际的动物源性食品中，通常会采用综合利用多种方法的方式进行残留量的测定，以保证结果的准确性和可靠性。
在日常的食品监测中，也要配合政府部门的监督检查，加大对养殖业和饲料添加剂的管理力度，从源头上减少动物源性食品中氯霉素类药物的残留量。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定对于保障食品安全和人体健康有着重要的意义。
我们要注重食品安全意识，选择正规渠道购买食品，做到“从源头上保障食品安全”。
政府部门也应加大食品安全监管力度，加强对养殖业和饲料添加剂的管理，为人民提供更加安全、放心的食品。
猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
关键 词 大肠杆菌 耐药性 氟喹诺酮类
随 着抗 菌 药 物 的 广 泛 应 用 ，细 菌 耐 药 性 变 得越 来 越 严 重 。 究表 明 ［ ， 研 １ １ 细 菌 耐 药性 的 变 化 和 抗 菌 药 物 应 用 有 （ ） 量 生 化 反 应 管 ： 自杭 州 微 １微 购 生 物 试 剂 厂 ；２ 药 敏 纸 片 ： 氟 沙 星 （） 诺
（ Ｎ） Ｅ 、氨 苄 青 霉 素 （ Ｍ） Ａ 、头 孢 唑 啉
关 。一般情况下 ， 大肠杆菌作为条件性 致病菌 和常在菌往往显示 出细菌 的耐 药状况。近年来 。 喹诺酮类药物因其 氟 抗 菌谱广 、 菌活性 强 、 抗 口服 吸收好 、 组织分 布广 、与其他抗 菌药物无交叉
耐 药 等 优 点 而 得 到 广 泛 应 用 ， 已经 成
了大 肠 杆 菌 对 常 用 药 物 尤 其 是 氟 喹 诺
１． ． １分离培养 ： ３ 将肛拭 标本直接涂布
３５ 搞 清 我 区 猪瘟 流行 毒 株 ：应 进 一 ，５ ． 步 搞 清 我 区猪 瘟 流 行 毒 株 的 分 子 变 异
酮类药 物的耐药状况 。现将有关结果
报道如下：
于麦康 凯琼脂 分离 培养 ，挑取粉红色
素 （ Ｍ） Ｃ ，购 自北京 天坛生物技 术公 司 ；（ ） 养基 ： ３培 麦康凯 琼脂 、 营养琼
疫， 中和母源抗体与残余抗 体 ， 太大 但
剂 量可 能 产 生 免疫 麻 痹 和 免 疫 耐受 。 在
猪瘟疫 区和受威胁地 区， 仔猪 出生后未 吃初乳时即肌肉注射或 口服２ 头份猪瘟
为 人兽 医临床用 量最 大 的药物 之一 。
大肠杆菌氯霉素类耐药基因三重PCR检测试剂盒的研究与应用
大肠杆菌氯霉素类耐药基因三重PCR检测试剂盒的研究与应用杨鑫;王红宁;张安云;夏青青;曾博【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2009(045)002【摘要】本研究研制了大肠杆菌氯霉素类药物耐药基因cat1、flor、cmlA基因三重PCR检测试剂盒.结果显示,该试剂盒具有良好的重复性、灵敏度以及保存期长等特点.应用该试剂盒检测107株猪源鸡源大肠杆菌,cat1、flor、cmlA三种基因的检出率分别是41.1%、51.4%和36.4%.本试剂盒对氯霉素类药物耐药基因的传播、流行调查以及在临床用药方面具有重要的指导意义.【总页数】3页(P11-13)【作者】杨鑫;王红宁;张安云;夏青青;曾博【作者单位】四川大学生命科学学院,动物疾病防控生物工程研究中心,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院,动物疾病防控生物工程研究中心,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院,动物疾病防控生物工程研究中心,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院,动物疾病防控生物工程研究中心,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院,动物疾病防控生物工程研究中心,四川,成都,610064【正文语种】中文【中图分类】S855.1+2【相关文献】1.猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测试剂盒的研制 [J], 余波;杨莉;姜玲玲;徐景峨;周思旋;杨粤黔2.大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因blaTEM,blaSHV,blaCTX-M三重PCR检测方法建立 [J], 田国宝;王红宁;张安云;张毅;杨鑫;徐昌文3.狐源大肠杆菌中氯霉素类抗生素耐药基因的检测 [J], 冯涛;富景宁;薛原4.狐源大肠杆菌中氯霉素类抗生素耐药基因的检测 [J], 冯涛;富景宁;薛原5.常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测 [J], 张耀东;田明星;丁铲;于圣青;王少辉;朱红;AFAYIBODossêhJeanApôtre;王瑶;易正飞;信素华;陶程琳;李涛;祁晶晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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作者简介 ： 薛 原 （９ ８ ）女， １ ７ 一 ， 黑龙江饶河人 ， 讲师 ， 士， 博 主要从 事动物药理学与毒理学方面的研究． ｍ ｉ ｕ ｙａ－ ９ ８ ６ ． ｎ Ｅ ａ ｘ ｅ ｎ １７ ＠１３ ｏ — ｈ ｕ ｃ
中 图分 类 号 ：８２６ ＋ ￥５ ．１ ４ 文 献 标 志码 ：Ｂ 文章 编 号 ：０ ２ １５ （０ １０ — ０ １０ １ ０ — ９ ７２ １）３ ０ ７ — ２
氯霉素类 药物包括氯霉素 、 甲砜 霉素和氟苯 尼 的 片段 为 ３９ｂ ，ｍＡ 基 因 目的片 段 为 ６ ８ｂ 。 ９ ｐ ｃ ｌ ９ ｐ ．２ ２ Ｃ 考等。 此类药物抗菌谱广、 吸收快 、 内分布广泛 ， 体 在 １ ． 目的基 因序 列测 定 将 回收纯 化 的 Ｐ Ｒ产 兽医临床上发挥着 举足轻重 的作用 ，其 耐药性 也备 物与 Ｄ Ｄ ８ Ｔ载体进行连接反应后 ， Ｍ １一 转化大肠杆菌 受重视Ⅲ 因此 ， 。 本试验对 黑龙江省受试养殖场 ６ 株 Ｄ ５￣ ０ Ｈ ｃ感受态细胞 。碱裂解法提取质粒 ，经 Ｐ Ｒ初 Ｃ 临床分 离的猪源大肠杆 菌的 ｎ Ｒ和 ｃ Ａ基因进行 步 鉴 定 ，随 机选 取 ３ 阳性 质 粒委 托 北 京 六 合华 大 ｏ ｍｌ 个 分 子检 测 和 分 析 ， 旨在 为猪 源 大 肠 杆 菌 氯 霉 素 类 药 基 因科 技 股 份 有 限 公 司 进 行核 苷 酸 序 列 测 定 。 物耐药基 因的研究和分子流行病学调查提供试 验依 １ ． 目 的 基 因 序 列 分 析 首 先 利 用 Ｄ Ａ ｔ 中 ．３ ２ Ｎ Ｓｒ ａ 据 ，对临床 合理用药 以及控制细菌耐药性发展均具 ＭｅＡ ｉ ｇ ｌ ｎ软件 对测 定 的 目的基 因序 列进 行 比对分 ｇ 有重要意义。 析 ， 定 出 目 的基 因 的 优 势 序 列 ； 后 将 ｎ Ｒ 基 因 确 然 ｏ 的优势序列通过 Ｎ Ｂ 的 Ｂ Ａ Ｔ检索系统进行序列 ＣＩ ＬＳ １ 材 料 和方 法
１ 试 验 材料 ． １ １ ． 试 验 菌株 ．１ １
同源性 分析 。使用 Ｃｕｔ Ｘ ｌ ３软件与 从Ｇ ｎ ａ ｋ １ ａ ＿ ｓ１ ８ ｅＢ ｎ 药 敏质 控 菌 株 大肠 杆 菌 Ａ Ｃ 数据库中获得 的菌株序列进行多序列匹配 比对 。通 ＴＣ
２９ ２购 自中国兽医药品监察所 。 ５２ ， 试验用大肠杆菌， 过 Ｍｅａ． ｇ４ ０软件 采用 除权配对 法构建 系统进化树 ， ２１ ０ ０年 ５ １ 从 黑 龙 江 省 哈 尔 滨 市 周 边 地 区 ５ 采用 自举 分析进行置信度检测 。 — ２月 个规模化养殖场分离鉴定 出 ９ 株猪源大肠杆菌， ０ 随 ２ 结果 机选 取其 中 ６ 株 用于氯霉素类药物耐药基 因检测 。 ２１ ｃ Ａ、 ｏ ０ ． ｍｌ ｆ Ｒ基 因的检 测 结 果 ｌ １１ 药 品 普通琼脂、 ．２ ． 水解酪蛋 白琼脂培养基， 杭州 ６ 株猪源大肠杆菌 中，ｍ Ａ基因检 出的阳性数 ０ ｃｌ 天和微生物试剂有限公司生产；Ｍ ８Ｔ Ｄ Ｄ１－ 载体、ａ Ｄ Ａ Ｔｑ Ｎ 聚合酶、Ｎ Ｐ、ｕ ｅ Ｄ ００ ｒｅ等均为 Ｔ Ｋ Ｒ ｄ Ｔ ｓ ｆ ｒ Ｌ ｋｒ Ｂ 、 ５ ０ Ｍａ ａ ａａ 公司产品； Ｎ Ｄ Ａ胶回收试剂盒为 Ａ ｖｅ ｘｇｎ公司产品。 １ － 主要 仪 器 Ｐ Ｒ扩 增 仪 为德 国 Ｂｏ ｅ ａ 司 ．３ １ Ｃ ｉｍ ｒ 公 ｔ 产 品；凝胶 成像 分析系统 为美 国 Ａｐ ａｌ ｇｒ２ ０ １ ｈ ｍａｅ２ ０ 公司 产 品 。
２ １ 第 ３期 ０１
养 猪 Ｓ Ｎ Ｒ Ｄ ＴＯ ＷＩ Ｅ Ｐ Ｏ ＵＣ Ｉ Ｎ
７ １
猪源大肠杆菌 中氯霉素类药 物耐药基 因的检测与分析
薛 原 陈建 飞。张 秀英 华育 平 ， ， ，
（． 北 林业 大 学野 生动 物 资源 学 院 ， 龙 江 哈 尔 滨 １０ ４ ； １ 东 黑 ５００ ２中国农业科学 院哈尔滨兽医研究所 ， ． 哈尔滨 １０ ０ ； ． ５ ０ １ ３东北农业大学动物医学学院， 哈尔滨 １０ ４ ） ５ ０ ０
１ ． 试 验 方 法 ２
为３ ０例 ，阳性率为 ５ ％加ｏ ０ Ｒ基因检出的阳性数 为 ４ 例 ，阳性率为 ８ ％。扩增 的 ｃ ｌ ｆ Ｒ基因片段 ８ ０ ｍ Ａ、０ ｌ 大 小与预期相符 ；部分菌株 的 目的基因扩 增结果如
图 １ 图 ２所 示 。 、
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
１ ． 目的基因扩增 Ｐ Ｒ扩增 的模板 为菌株质 粒 ．１ ２ Ｃ Ｄ Ａ和菌落。引物序列引 自参考文献ｆ 由上海英骏 Ｎ ２ ｉ ， 生物 技术有 限公司 合成 。采 用 ２ ＬＰ Ｒ扩增 体 ５Ｉ Ｃ ｘ 系 ： 板 ２ｔ ，Ｏ Ｂ ｆ ｒ ． Ｉ ，Ｎ Ｐ２ Ｉ ， 、 模 Ｌ ｌ ｘ ｕ ｅ ５ ｘ ｄ Ｔ Ｌ 上 下 ｘ ２ Ｌ ｘ 游 引 物 各 ０５ Ｌ Ｔ ｑＤ Ａ 聚 合 酶 ０２ Ｌ 加 灭 菌 ． ， ａ Ｎ ． ｕ， ５ 双蒸水至 ２ Ｌ 反应条件 ：４℃预变性 ５ｍ ｎ９ ５ 。 ９ ｉ；４℃ 变性 １ｍ ｎ 退 火 １ｍ ｎ 退 火温度 随扩增 的基 因不 ｉ， ｉ， 同而 异 ，ｍＡ 基 因 为 ５ ｃｌ ４℃ ，ｏ ｌ ｆ Ｒ基 因 为 ５ ，２ｃ ２ｃ ７ 二 ｃ 【 延伸 １ ｉ， ３ ｎ 共 ０个循环 ；２℃延伸 ５ｒ ｎ Ｃ ａ ｒ ７ ｉ。Ｐ Ｒ扩 ａ 增产物用 １ ％琼脂糖凝胶 电泳进行分析 ，ｏ ｎ Ｒ基 因 目
收 稿 日期 ：０ １ ０ — ６ ２ １ － ５ ０ 基金项 目： 中央高校基本科研 业务 费专项资金（ Ｌ ９ Ａ ０ ） Ｄ ０ Ａ ０ ５ 资助
６ ８ｂ ９ ｐ
注： Ｍ为ＤＬ ０ ５００Ｍａｋｒｌ４ ｒｅ，￣ 为部 分检测菌株 扩增结果 ，为 阴性 对照。 ５
图 １ ｃ Ａ基 因 Ｐ Ｒ 扩增 结 果 ｍｌ Ｃ