免疫细胞标志和功能检测技术
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术传统的免疫细胞功能检测方法主要包括流式细胞术、细胞增殖试验和细胞毒性试验等。
其中，流式细胞术是一种常用的细胞表面标记物检测方法，可以通过检测细胞表面标记物的表达情况来评估免疫细胞的活性和状态。
细胞增殖试验可以评估免疫细胞的增殖能力，常用的方法包括MTT法和BrdU法等。
细胞毒性试验可以评估免疫细胞对靶细胞的杀伤能力，常用的方法包括细胞色素释放试验和细胞活性检测试剂盒等。
然而，传统的免疫细胞功能检测方法存在一些局限性。
首先，这些方法往往需要大量的细胞数目，且操作繁琐，不适用于临床应用。
其次，这些方法只能评估其中一方面的免疫功能，无法全面评估免疫细胞的整体功能状态。
此外，传统方法对于一些免疫细胞功能的检测灵敏度较低，无法满足一些特殊研究和临床需求。
近年来，随着生物技术的发展，一些新的免疫细胞功能检测技术逐渐崭露头角。
其中，高通量测序技术的应用为免疫细胞功能检测带来了革命性的突破。
高通量测序可以同时检测上千个基因的表达水平，可以用来评估免疫细胞的基因表达谱，并通过生物信息学方法分析不同样本的差异。
通过这种方法，可以全面了解免疫细胞的活性和功能状态。
另外，单细胞技术也是一种新兴的免疫细胞功能检测技术。
传统的免疫细胞功能检测方法通常是对大量细胞进行分析，无法检测到细胞群体中不同细胞的异质性。
而单细胞技术可以对单个细胞进行检测和分析，可以检测到不同细胞的功能差异，并研究细胞在群体中的相互作用。
单细胞技术可以通过扩增检测目标区域的方法，同时检测多个指标，可以全面评估免疫细胞的功能状态。
除了高通量测序和单细胞技术，还有一些新兴的免疫细胞功能检测技术值得关注。
例如，质谱技术可以定量检测细胞因子的分泌水平，可以评估免疫细胞的功能状态。
另外，光学显微镜技术可以直接观察免疫细胞的活动过程，可以评估细胞的运动能力和活跃度。
总而言之，免疫细胞功能检测技术的发展为了解免疫细胞的功能状态提供了新的手段。
高通量测序、单细胞技术、质谱技术和光学显微镜技术等新兴技术可以全面、准确地评估免疫细胞的功能状态，有望在临床和科研领域发挥重要作用。
免疫学研究中的新技术和方法
免疫学研究中的新技术和方法随着人们对健康的关注日益增加，医学研究也越来越重视免疫学领域的发展。
近年来，免疫学研究中出现了许多新的技术和方法，这些技术和方法对于研究免疫系统的功能机制和疾病的发生机理有着重要的作用。
下面，我们将针对免疫学研究中的新技术和方法进行阐述。
一、免疫细胞检测技术免疫细胞检测技术是一种比较成熟的方法，可以通过检测免疫细胞的表面标志物，对免疫系统的功能状态进行分析。
目前，免疫细胞检测技术已经涵盖了多种细胞类型，比如T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等。
免疫细胞检测技术的主要应用场景包括：免疫缺陷病理学、免疫治疗、肿瘤学、传染病学等。
在免疫细胞检测技术中，单克隆抗体成为了一种重要的研究工具。
单克隆抗体具有高度的特异性，可以识别并结合细胞表面的特定分子，从而帮助研究人员对细胞进行定量和定位的分析。
此外，现在也出现了一些快速检测方法，比如流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术等，这些方法可以大幅度提高细胞检测的精度和效率。
二、细胞之间交流的研究方法免疫系统中的细胞之间会通过分泌细胞因子来进行信息交流。
在疾病状态下，某些细胞的分泌因子水平与正常情况下有所不同，因此研究这些细胞因子的分泌机理和调控机制对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
一些新的技术和方法被用于免疫细胞因子的研究中。
比如，ELISA技术可以用于定量测定细胞因子的含量，从而帮助研究人员评估不同状态下免疫细胞因子的分泌情况。
此外，新型的多重分析技术，例如速率显微镜、质谱分析技术等，可以帮助研究人员探测细胞因子之间的相互作用和调节机制。
三、基因工程技术基因工程技术在免疫学研究中得到了广泛的应用。
研究人员可以通过改变细胞表面分子的表达，来探究这些分子在免疫功能中的作用。
为此，研究人员可以利用基因编辑技术，通过特定的剪切核酸或CRISPR技术来精确编辑特定基因的表达。
如此可以有效地改变免疫细胞的表面表现，从而实现抗肿瘤、抗病毒等免疫治疗的目的。
此外，基因芯片和RNA测序等技术也为研究人员提供了一种有效的分析工具。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在我们的身体中，免疫细胞就像是一支训练有素的“军队”，时刻守护着我们的健康，抵御着外界病原体的入侵。
为了更好地了解这支“军队”的战斗力，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术是一类用于评估免疫细胞在免疫反应中的活性、数量、表型以及功能状态的方法。
这些技术对于诊断免疫相关疾病、监测治疗效果、评估个体的免疫状态以及研究免疫系统的机制都具有重要意义。
其中，流式细胞术是一种常见且强大的免疫细胞检测技术。
它通过让单个细胞依次通过激光束，根据细胞所发出的荧光信号来分析细胞的表面标志物、细胞内的蛋白质以及细胞的大小和粒度等特征。
比如说，我们可以利用特定的荧光标记抗体来识别 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等不同类型的免疫细胞，并进一步了解它们的活化状态。
通过流式细胞术，医生能够快速准确地判断患者的免疫细胞是否存在异常，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
酶联免疫斑点法（ELISPOT）也是一项常用的技术。
它主要用于检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
想象一下，细胞因子就像是免疫细胞之间传递信息的“信使”，通过检测这些“信使”的分泌情况，我们就能了解免疫细胞的功能状态。
比如，在检测T 细胞对特定抗原的反应时，ELISPOT 可以准确地显示出分泌特定细胞因子（如干扰素γ）的 T 细胞的数量，从而反映出 T 细胞的免疫活性。
细胞增殖实验则能够评估免疫细胞的增殖能力。
当免疫细胞受到刺激时，它们会进行分裂和增殖以增强免疫反应。
通过使用特定的标记物或者检测细胞的代谢活性，我们可以确定免疫细胞是否能够有效地增殖。
这对于研究免疫细胞的活化和免疫应答的强度非常有帮助。
细胞毒性实验则用于检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力。
比如，NK细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）能够识别并杀伤被感染或恶变的细胞。
在实验中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过检测靶细胞的存活情况来评估免疫细胞的杀伤功能。
除了上述这些技术，还有一些其他的方法也在免疫细胞功能检测中发挥着重要作用。
免疫细胞标志与功能检测技术优秀课件
泛影葡胺生理盐水溶液。 比重：1.077±0.001(最佳)
齐齐哈尔医学院免疫
1.077±0.001的分层液可将细胞分离
红细胞：1.093 粒细胞：1.092 单个核细胞1.0齐7齐6哈—尔医1.学0院9免0疫
齐齐哈尔医学院免疫
免疫细胞标志与功 能检测技术
掌握：免疫细胞的分离; 淋巴细胞功能检测 熟悉：免疫细胞表面标志和功能检测的临床
应用;淋巴细胞表面标志及亚群分类； 了解：其他免疫细胞功能检测技术；检测的
临床应用。
齐齐哈尔医学院免疫
一、免疫细胞的分离
二、淋巴细胞标志及亚群分类
三、抗原提呈细胞的表面标志
四、淋巴细胞的功能检测
密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞纯度95%；细胞收率80%；淋巴细胞90%--95%
齐齐哈尔医学院免疫
二 、淋巴细胞分离
掌握
目的--去除单核细胞
1.贴壁粘附法 2.吸附柱过滤法: 将PBMC加入葡聚糖
凝胶SephadexG-10中，从柱上洗脱下 来的主要是淋巴细胞。 3.Percoll分离液法：经聚乙烯吡咯烷 酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
用分层液是（ C）
A 明胶
B 右旋糖酐
C Ficoll分层液 D Percoll分层液 E 葡聚糖
2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下
依次为（ C）
A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞
B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞
C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞
D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术嘿，咱今儿就来说说这免疫细胞功能检测技术。
你知道吗，咱身体里的免疫细胞那可真是一群了不起的“小战士”呀！它们时刻准备着和各种病菌、有害物质作战，保卫着咱们的身体。
那这免疫细胞功能检测技术呢，就像是给这些“小战士”来个大体检。
就好比咱去医院体检，能知道自己身体哪儿好哪儿不好，这检测技术也能让咱清楚免疫细胞的状态咋样。
你想想看，要是咱能清楚地知道这些“小战士”的战斗力强不强，是不是就能更好地了解自己的身体状况啦？要是检测出来它们有点弱，那咱就得想办法给它们加加油、鼓鼓劲呀！不然，敌人来了可咋办呢？这检测技术有很多种方法呢。
比如说，有一种可以检测免疫细胞的增殖能力。
你就理解成看看这些“小战士”能不能快速地增加数量，人多力量大嘛！要是它们增殖得快，那说明它们很有活力呀，咱就放心不少。
还有检测它们杀伤能力的。
这就好比看这些“小战士”能不能一下子就把敌人给消灭掉，要是它们的杀伤能力强，那咱身体里的那些坏家伙就不敢随便捣乱啦。
再比如说，检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
细胞因子就像是“小战士”们的秘密武器，能帮助它们更好地作战。
要是分泌得多，那它们打起仗来肯定更厉害呀！那这检测技术重要不？那可太重要啦！就好像你要去打仗，总得先知道自己手里的武器好不好使，自己的士兵厉不厉害吧？这检测技术就是帮咱了解免疫细胞这个“军队”的情况呀。
要是没有这个技术，咱就像蒙着眼睛走路一样，都不知道自己身体的免疫防线到底咋样。
万一有点啥问题，咱都不知道该怎么应对呢。
你说，这免疫细胞功能检测技术是不是很神奇？它就像是给咱身体里的免疫系统开了一扇窗，让咱能看到里面的情况。
而且，随着科技的不断进步，这检测技术肯定也会越来越先进，能检测的东西也会越来越多。
咱可得好好重视这个技术呀，毕竟身体是自己的，咱得对自己负责呀！别觉得这事儿离你很远，说不定哪天你就需要它来帮你了解自己的身体呢。
免疫细胞功能检测技术，真的是咱身体健康的好帮手呀！你说是不是呢？。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。
免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。
本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估免疫系统的健康状况。
其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常用于检测免疫细胞的表型和活性。
通过标记细胞表面的特定抗原和荧光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液中特定抗原或抗体的浓度。
通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，如干扰素、白细胞介素等。
细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。
以下是该技术在不同领域的应用举例：1. 免疫系统疾病诊断免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等。
通过评估免疫细胞的数量、活性和功能状态，可以辅助医生制定治疗方案和判断治疗效果。
2. 肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗是一种利用机体免疫系统增强对肿瘤细胞的攻击能力的治疗方法。
免疫细胞功能检测技术可以评估患者体内免疫细胞的活力和功能状态，为肿瘤免疫治疗方案的制定和疗效监测提供依据。
3. 个体化医疗免疫细胞功能检测技术还可以用于个体化医疗，根据不同个体的免疫细胞功能状况，制定相应的健康管理方案。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，免疫细胞功能检测技术正发挥着日益重要的作用。
免疫细胞如同人体的“卫士”，它们时刻监控并抵御着外界病原体的入侵，维持着身体的健康平衡。
而了解这些“卫士”的功能状态，对于疾病的诊断、治疗以及预防都具有关键意义。
免疫细胞主要包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞）、单核细胞、巨噬细胞等。
不同类型的免疫细胞在免疫反应中承担着不同的角色，因此检测它们的功能也就需要采用多样化的技术手段。
其中，流式细胞术是一种应用广泛的免疫细胞功能检测技术。
它通过让细胞单个地通过激光束，同时结合荧光标记的抗体，能够快速、准确地检测免疫细胞表面标志物的表达情况。
例如，通过特定的抗体标记，可以区分出不同亚型的 T 细胞，如辅助性 T 细胞（CD4+ T 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CD8+ T 细胞），进而了解它们的比例和功能状态。
此外，还能检测免疫细胞表面活化分子的表达，如 CD69、CD25 等，以此来反映免疫细胞的活化程度。
细胞增殖实验也是常见的检测方法之一。
免疫细胞在受到刺激后会发生增殖，通过检测细胞的增殖情况，可以间接评估免疫细胞的功能。
常用的方法有 3H胸腺嘧啶掺入法和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法。
3H胸腺嘧啶掺入法是将放射性标记的胸腺嘧啶掺入到正在分裂的细胞中，通过检测放射性强度来反映细胞的增殖情况。
CFSE 染色法则是利用一种可穿透细胞膜的荧光染料对细胞进行标记，随着细胞的分裂，荧光强度会逐渐减半，从而可以通过流式细胞术检测细胞的分裂代数来评估增殖能力。
细胞毒性检测对于评估免疫细胞的杀伤功能至关重要。
比如，自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CTL 细胞）能够直接杀伤肿瘤细胞或被病毒感染的细胞。
检测细胞毒性的方法包括铬释放法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法。
铬释放法是将靶细胞用放射性铬标记，当免疫细胞杀伤靶细胞后，铬会释放到上清液中，通过检测上清液中的放射性强度来判断细胞毒性。
免疫细胞标志和功能检测技术-四川大学
CD 抗原
鉴定与检测: 单克隆抗体（ McAb） CD抗原国际统一编号 目前已鉴定的CD分子达300多种，已
弄清130多种CD分子编码基因的核苷 酸序列及其染色体定位 很少通过单一CD抗原区分某一淋巴细 胞亚群
CD分组
T细胞相关CD B细胞相关CD 髓系细胞相关CD NK细胞相关CD 血小板相关CD 激活抗原 粘附分子 内皮细胞 细胞因子受体
CD8分子：细胞毒性T细胞标志
由α、β链借二硫键连接形成的异二聚体， 胞膜外结构属IgSF成员
α链V样区与MHCⅠ类分子非多态α3区域 结合
生物学功能：胞浆区可与p56lek激酶结合 参与信号传导
CD4和CD8分别是MHC-II类或MHC-I类分子
的受体，可加强和稳定T细胞表面TCR与抗原呈 递细胞或其它靶细胞表面非己抗原肽-MHC分子 复合物的结合，并有助于TCR-CD3信号传递。
CD2可与绵羊红细胞（SRBC）结合，故又称绵 羊红细胞受体（E受体）。 E花环试验: 测定外周血T细胞总数
外周血淋巴细胞 + SRBC
T淋巴细胞CD2-多个SRBC形成致密花环
计数外周血T细胞总数
（2）CD3：
表达于全部T细胞表面 T细胞表面标志 由γ、δ、ε、ζ和η五种链组成的跨膜多肽
第十五章
免疫细胞标志和功能检测技术
白杨娟
华西医院实验医学科临床免疫实验室
中枢免疫器官：胸腺、骨髓 免疫器官 外周免疫器官：淋巴结、脾脏等
免
疫
参与免疫应答或与
免疫细胞 免疫应答有关的各
淋巴细胞 单核巨噬细胞
系
种细胞
其他免疫细胞
统Hale Waihona Puke 免疫分子Ig、补体、细胞因子、黏附分 子、神经递质、CD抗原等
免疫细胞功能检测技术(最新)
免疫细胞功能检测技术一、前言免疫细胞功能检测技术是指通过检测免疫系统中不同类型的细胞及其功能状态来评估患者免疫系统的状态，以帮助医生诊断和治疗各种免疫性疾病。
随着免疫学研究的深入和免疫细胞功能检测技术的不断更新，现在已经出现了多种免疫细胞功能检测技术，包括流式细胞术、蛋白芯片技术、基于DNA分子杂交的检测方法等。
本文将介绍流式细胞术作为一种常用的免疫细胞功能检测技术，并详细讨论其原理、方法和应用。
二、原理流式细胞术是一种基于细胞单元分析的技术，其核心是流式细胞仪。
细胞单元分析是指将细胞单元通过高速液流分散后，在一个单元一个单元地、连续稀释、分离、悬浮状态下进行检测，获得各单元的信息。
每个单元被封装在流动液滴中，以便实现快速、准确和高通量的细胞计数和分析。
流式细胞仪通过衍射光、荧光信号及其它物理或化学性质将细胞单元分析并定量化。
流式细胞术技术可以用于对细胞表面标记、胞质内染色质、分泌物等各种指标的分析，因此适用于多种免疫细胞功能检测。
三、方法样本准备：样本的来源包括血液、脑脊液、淋巴结、脾等组织。
样本应避免受到污染和过多的处理，避免对细胞造成影响。
例如，在采血时，采用无菌针头和管道，减少离心时间，保持细胞完整。
细胞分离和染色：首先，需要将细胞从样本中分离出来，可采用离心、红细胞裂解等方法。
然后，在合适的荧光标记物和染色剂的作用下，标记或染色目标细胞。
流式细胞仪检测：样本标记后由流式细胞仪自动进样，并通过荧光激发和检测模块进行检测。
最终，获得含有多个参数的细胞单元分析结果。
四、应用免疫学研究：流式细胞术可以用于评估免疫系统中不同类型细胞及其数量、表面标记、功能状态等。
免疫性疾病诊断：如艾滋病、类风湿关节炎、自身免疫性疾病等免疫性疾病，流式细胞术可协助医生快速、准确地诊断和监测疾病的处理效果。
肿瘤治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤患者血液中的免疫细胞浸润情况，判断肿瘤对免疫系统的影响，从而指导肿瘤治疗。
五、总结流式细胞术作为一种常见的免疫细胞功能检测技术，具有高通量、多参数、准确度高等优点，在免疫学研究和临床应用中发挥着重要作用。
免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法免疫细胞表型检测是现代医学领域中的一项重要技术。
这项技术可以用来研究人体免疫系统中各种免疫细胞的数量、形态、分布和功能等方面的信息，以帮助医生和研究人员更好地理解免疫系统的工作原理。
在免疫细胞表型检测中，最常用的方法是流式细胞术。
这种技术可以快速、准确地检测出血液或组织中的不同类型免疫细胞，并确定它们的表型特征和功能状态。
流式细胞术通常涉及到以下几个步骤：第一步是样品处理。
在进行流式细胞术之前，需要将待检测的细胞样品进行处理。
对于血液样品，可以通过离心和裂解红细胞等方式将纯化的白细胞分离出来；对于组织样品，则需要进行细胞分离和制备。
第二步是标记物染色。
在进行细胞检测之前，需要将细胞表面的特定蛋白质标记出来，以便后续的检测。
这通常通过使用与蛋白质特异性结合的荧光染料或抗体来完成。
不同的标记物可以用来区分不同类型的免疫细胞。
第三步是细胞检测。
通过将标记物染色的细胞样品注入到流式细胞术仪器中，可以通过检测细胞表面标记物的荧光信号来识别和区分不同类型的细胞。
这项技术可以同时检测数千个细胞，从而提高检测的准确性和效率。
第四步是数据分析。
在进行流式细胞术之后，需要对检测到的细胞数据进行分析和解读。
这种分析通常涉及到利用计算机软件对数据进行处理，以确定不同类型的细胞的数量、分布和功能等信息。
总的来说，免疫细胞表型检测是一种非常重要的技术，它可以帮助医生和研究人员更好地理解和研究免疫系统的工作原理。
通过利用现代的流式细胞术技术，我们可以快速、准确地检测出不同类型的免疫细胞，并确定它们的表型特征和功能状态，为治疗和预防免疫系统相关疾病提供更多有价值的信息。
医学免疫学实验 免疫细胞及其功能检测技术
细胞免疫的体外检测
•大、小吞噬细胞 •大吞噬细胞－单核巨噬细胞 •小吞噬细胞－中性粒细胞
血涂片大吞噬细胞
大吞噬细胞吞噬实验（示教）
※ 观察示教，并作图
巨噬细胞吞噬作用
2、淋巴细胞的测定
（一）T细胞总数及亚群的测定 （二）T细胞功能的测定
1.淋巴细胞增殖试验 形态学方法、3H-TdR掺入法等。
2.细胞毒试验 3.细胞因子测定
T
+
T
T T
1）T细胞花环形成试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，形成花环。
计数200个淋巴细胞，结合3个SRBC或以上者的E 花环 阳性细胞数。
玫瑰花环试验
E-rosette formation test
正常范围：50%-80%
2. T细胞增殖试验（淋巴细胞转化试验）
医学免疫学实验
细胞免疫的体外检测
1.小吞噬细胞的吞噬作用（操作） 2.E-花环试验、淋巴细胞转化试验、大、
小吞噬细胞的吞噬现象（示教）
小吞噬细胞的吞噬作用
1. 抽取2ml血到抗凝管 2. 加入等量菌液，混匀 3. 37ºC反应30min 4. 加1小滴推片（制作血涂片） 5. 自然干燥 6. 加瑞氏染液以及等量蒸馏水反应10sec 7. 细水流冲洗 8. 吸干后油镜检查
免疫细胞检测技术
免疫细胞是泛指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前身，包括造血干细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞及其他抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞、肥大细胞等。
各种免疫细胞的分离、纯化及其功能测定对于了解其在免疫应答中的作用及相互关系有着重要意义。
免疫细胞的检测即是用体外试验对机体各种参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞进行分离、纯化鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断、疗效观察及预后判断等也有一定意义。
本综述将就免疫细胞的分离、免疫细胞功能的检测和细胞凋亡的检测三个方面主要方法的基本原理作简要介绍。
一．免疫细胞的分离免疫细胞包括多种细胞成分，例如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞等。
它们具有不同的形态和功能特性，这不仅是我们认识各种免疫细胞的依据，也是分离各种免疫细胞的基础。
细胞的形态特征反映在其物理性质上，如各种细胞的大小、比重、表面电荷和粘附能力等存在差异;而细胞的功能特征往往由该细胞膜表面的蛋白质(表面标记)来体现，例如各种免疫细胞执行特定功能必须表达的受体等。
根据不同形态和功能特征，可以将各种免疫细胞从混合细胞群体中分离出来。
免疫细胞分离原理基本上可以归纳为基于细胞物理性状的分离方法和基于细胞表面标记的分离方法。
基于细胞物理性状的分离方法(一)根据各种细胞比重的差异1.自然沉降法2.密度梯度离心法人外周血单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.00左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075左右。
利用密度在l.077万±0.001之间近于等渗的Ficoll-Hypque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。
血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层被的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大，故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液，故位于分层被界面上，这样就可获得PBMC o（如图1-1所示）图1-1 淋巴细胞分离示意图3.改变细胞密度法巨噬细胞能够吞噬铁粉，增加其比重，通过密度梯度离心或磁场将其分离;T 细胞能够与绵羊红细胞形成花环，形成的花环复合物比重大，借助密度梯度离心将T细胞分离。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域中，免疫细胞功能检测技术扮演着至关重要的角色。
这些技术不仅有助于我们深入了解免疫系统的运作机制，还能为疾病的诊断、治疗和预防提供关键的依据。
免疫系统就像是我们身体的“保卫部队”，而免疫细胞则是其中的“士兵”。
它们时刻警惕着外来病原体的入侵，并迅速做出反应来保护我们的身体。
然而，要想知道这些“士兵”的战斗力如何，就需要依靠免疫细胞功能检测技术。
其中一种常见的检测技术是淋巴细胞增殖试验。
淋巴细胞在受到特定刺激后会发生增殖反应。
通过在体外培养淋巴细胞，并加入刺激物，如植物血凝素、刀豆蛋白 A 等，然后观察细胞的增殖情况，就可以了解淋巴细胞的功能状态。
这种方法简单直观，但也存在一定的局限性，比如无法准确区分不同亚型淋巴细胞的反应。
细胞毒性 T 细胞杀伤试验也是重要的检测手段之一。
细胞毒性 T 细胞能够特异性地识别并杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞。
在检测中，通常会用放射性同位素标记靶细胞，然后与细胞毒性 T 细胞共同培养，通过检测放射性物质的释放来判断杀伤效果。
这一技术对于评估机体的细胞免疫功能具有重要意义，但操作较为复杂，对实验条件要求较高。
免疫细胞分泌细胞因子的检测也是必不可少的。
细胞因子是免疫细胞之间相互交流的“语言”，通过检测它们的分泌水平，可以了解免疫细胞的活化状态。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术。
ELISA 具有操作简便、成本较低的优点，但灵敏度相对较低。
流式细胞术则能够同时检测多种细胞因子，并对细胞进行分类分析，但设备昂贵，技术要求高。
此外，还有免疫细胞表面标志物的检测。
通过使用特异性抗体来识别免疫细胞表面的标志物，如 CD3、CD4、CD8 等，可以对不同类型的免疫细胞进行定量和定性分析。
这有助于了解免疫细胞的亚群分布和功能状态。
在实际应用中，免疫细胞功能检测技术为疾病的诊断和治疗提供了有力的支持。
例如，在免疫缺陷病患者中，通过检测免疫细胞的数量和功能，可以明确病因，制定个性化的治疗方案。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞大致可分为两类：一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等。
另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式递呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。
第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。
体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应。
一、T细胞功能检测（一）T细胞增殖试验1.原理T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞的代谢和形态发生变化，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，发生一系列增殖反应，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染色质疏松、核仁明显，并转化为淋巴母细胞。
2、刺激物体外刺激T细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素（PHA）、刀豆素A （ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌。
3.方法学检测T细胞增殖反应的方法有：（1）形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。
缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。
（二）T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验T细胞介导的细胞毒试验是细胞毒性T细胞的特性，凡致敏T细胞再次遇相应靶细胞抗原，可表现出破坏和溶解靶细胞，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。
免疫细胞及其功能检验技术
靶细胞
检测荧光强度、 cpm等
K562细胞为人NK细胞杀伤功能检测的常用靶细胞
教学目标
知识目标
1.掌握：单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化；T细胞及其亚群的表 面标志和功能检测方法；B细胞功能检测方法和原理；NK细胞的表面标志。 2.熟悉：NK细胞功能的检测方法和原理。 3.了解：中性粒细胞、巨噬细胞功能检测方法和原理。
（一）T细胞的数量检测
• 根据T细胞表面CD分子检测：
（1）间接荧光免疫法 （2）免疫组织化学法：
①酶标（ABC法、APAAP法） ②金标法（即IGSS法）
间接荧光免疫法
（二）T细胞功能检测
• T细胞增殖试验：形态学法、3H-TdR掺入法、MTT法 • CTL介导的细胞毒试验：51Cr释放法 • 抗原特异性T细胞定量检测：MHC-抗原肽四聚体技术 • 淋巴细胞内细胞因子检测：流式细胞术 • 体内试验：结核菌素试验、PHA皮肤试验
免疫细胞的分离与纯化
• 免疫细胞的分离方法很多，主要根据细胞表面标 志、理化性状和细胞功能等特征。
• 应根据实验目的、所分离的目的细胞群种类、数 量和纯度等要求选择分离方法。
• 所用的方法应力求操作简便、尽量保持细胞活性 兼顾细胞纯度和获得率。
一、白细胞的分离 （一）自然沉降法
加抗凝血于试管中
室温或37℃中静置 （30-60min）
（二）中性粒细胞吞噬功能检测
将细胞悬液与金黄色葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合， 温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察中性粒细胞对细 菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞噬和未吞噬细菌的中性 粒细胞数，并记录吞噬的细菌数。
吞噬率
吞噬细菌的中性粒细胞数 计数的中性粒细胞数
100%
免疫细胞及其功能检验技术—吞噬细胞功能检测(免疫学检验课件)
正常值： NBT阳性细胞率应7%~15%
二、巨噬细胞功能检测
• 炭粒廓清试验：主要用于动物实验 • 吞噬功能检测：（吞噬鸡红细胞或白假丝酵母等） • 促凝血活性测定：
（一）炭粒廓清试验
在受检者前臂屈侧中央3㎜范围内，搔刮皮肤后， 用盖玻片压紧固定，在第2，5，8，12，24，36小时 各取样一次，染色观察中性粒细胞聚集开始时间、 聚集程度等。健康正常人一般2～3小时后开始聚集， 达50～100个，6小时可达1000个以上。
体外法--Boyden小室法
Boyden 小室
体外法--琼脂糖平板法
液混合，温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察
中性粒细胞对细菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞
噬和未吞噬细菌的中性粒细胞数，并记录吞噬的细
菌数。
吞噬率
吞噬细菌的中性粒细胞数 计数的中性粒细胞数
100%
吞噬指数
吞噬的细菌总数 吞噬细菌的中性粒细胞数
100%
（三）中性粒细胞杀伤功能检测 硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验
正常小鼠肝中库普弗细胞可吞噬清除90％炭粒， 脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒。据此给小鼠静脉注 射定量印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取 静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓 清的速度，判断巨噬细胞的功能。
主要用于动物实验
（二）巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞
＋
鸡红细胞或 白假丝酵母
孵育
等），B细胞（增殖、分泌抗体能力），NK（杀伤）， 中性粒细胞（趋化、吞噬、杀伤），巨噬细胞（吞噬 功能--炭粒廓清、鸡红细胞吞噬实验）
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是当今医学研究和临床应用中一个至关重要的领域。
随着对免疫系统理解的深入，科学家们不断探索如何更有效地评估免疫细胞的功能状态，以便更好地应对各种疾病，尤其是癌症和自身免疫病。
一、免疫细胞的基本功能1.1 免疫细胞的种类和功能免疫系统中有多种类型的细胞，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和巨噬细胞等。
每种细胞都有其独特的功能。
T细胞主要负责识别和消灭感染细胞，而B细胞则通过产生抗体来中和病原体。
NK细胞则在抗肿瘤和抗病毒反应中发挥重要作用。
1.2 功能检测的意义通过检测这些细胞的功能，我们可以了解个体的免疫状态，帮助医生制定个性化的治疗方案。
比如，对于癌症患者，评估T细胞的活性可以判断肿瘤免疫治疗的效果，从而调整治疗策略。
二、常用的免疫细胞功能检测技术2.1 细胞因子测定细胞因子是免疫细胞之间交流的重要信号。
我们可以通过酶联免疫吸附测定（ELISA）等技术，定量分析血液或细胞培养液中的细胞因子水平。
这不仅能评估免疫细胞的活性，还能反映出机体的炎症状态。
2.2 细胞增殖测定细胞增殖是评估免疫细胞功能的另一种方法。
常见的技术有流式细胞术和MTS法。
这些方法能够检测细胞在特定刺激下的增殖能力，提供细胞对抗原或刺激物的反应能力的信息。
2.3 细胞毒性检测对于抗肿瘤免疫反应的评估，细胞毒性检测尤为重要。
通过检测NK细胞或细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤能力，我们能直观地了解免疫系统在抵御肿瘤时的表现。
常用的检测方法包括Cr51释放实验和LDH释放实验。
三、技术的局限与展望3.1 技术的局限性尽管目前的检测技术已经相当成熟，但仍存在一些局限性。
例如，细胞因子的测定可能受样本处理和保存条件的影响，从而导致结果的不稳定性。
此外，单一指标的检测往往难以全面反映免疫状态。
3.2 未来的发展方向未来的研究应朝着更加综合和精准的方向发展。
结合多种检测技术，可能会提升对免疫细胞功能的全面理解。
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用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞表面分化抗原（CD抗原）
适用于T、B细胞的分离 已知CD抗原细胞亚群的分离 未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）
不同细胞谱系，不同细胞分化阶段，细胞表面CD抗原不同
磁珠大小可以选择
免疫磁珠法细胞分选过程
计算菌落数
四、氮唑蓝(NBT)还原试验
原理
中性粒细胞杀菌 耗能
四氮唑蓝(淡黄色) 代谢 生成H+
操作
抗凝血+NBT应用液 温育 推片
甲簪(蓝黑色) 瑞士复染
五、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾 巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉 注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静 脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓 清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功 能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞 等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或 从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。
第一章 血液标本采集与处理
临床免疫学检验技术
第十五章 免疫细胞标志和功能检测技术
刘辉
目录
第一节 免疫细胞的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 第三节 抗原提呈细胞的表面标志 第四节 淋巴细胞的功能检测 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
第一节 免疫细胞的分离
体内试验
特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验
第五节 其它免疫细胞功能检测技术
吞噬细胞功能
趋化 吞噬 胞内杀灭作用
一、趋化功能检测
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
二、白细胞吞噬功能的检测
吞噬率(%) 吞噬细菌的白细胞数 100 计数的白细胞数
三、杀菌能力的检测
白细胞＋菌液
37℃培养
定时取定量菌液培养
二、B细胞表面标志
CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。 以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞分为B1（ CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个亚群。
三、NK细胞表面标志
NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94 、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。
第四节 淋巴细胞的功能检测
T淋巴细胞增殖试验
原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成
分化
母细胞
细胞变大 细胞浆扩大 核染色质疏松 核仁明显
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------ T细胞 ConA ------- T细胞 PWM ------- T、 B细胞 LPS ------- B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
荧光激活细胞分离仪分离法
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
一、Ｔ细胞表面标志及亚群
CD3+CD4+CD8-辅助性Ｔ细胞（help T cell,Th） CD3+CD4-CD8+细胞毒性Ｔ细胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL） CD4+CD25+ Foxp3+调节性Ｔ细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）
第六节 免疫细胞功能检测的临床应用
反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监 测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测 则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效 措施。
本章小结
淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜 下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和 观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的 检测。
目前多以CD3-、CD16+、CD56+ 作为NK细胞的典型标 志。
第三节 抗原提呈细胞的表面标志
抗原提呈细胞的表面标志
单核-吞噬细胞的典型的表面标志是CD14。 人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83 ，但不表达单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞的典 型的表面标志。
重点提示
外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T、B细胞和T细胞亚群的分离
细胞分选和基本原理
细胞分选和基本原理 不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同
不同细胞密度不同
人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.0761.090
利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数。
本章小结
免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。 免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性 、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。
本章小结
吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀 菌功能测定等。
了解方法学基本原理，可举一反三，根据需要选择或 设计相应试验。