固体培养基

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微生物培养方法

微生物培养方法微生物培养是一种用于研究微生物生理生化特性、生长繁殖规律及其与环境条件的关系等的重要技术手段。

以下是一些常见的微生物培养方法：1、固体培养基培养法固体培养基是在培养液中加入凝固剂，使培养基成为凝固状态的培养基。

这种培养基具有良好的稳定性，可以防止培养液中的微生物在培养过程中流失，同时也可以使微生物在固体表面生长繁殖，方便观察和检测。

固体培养基一般用于细菌、放线菌、酵母菌等微生物的培养。

2、液体培养基培养法液体培养基是一种不添加凝固剂的培养基，使培养基呈液体状态。

液体培养基中，微生物在培养液中自由悬浮生长繁殖，可以充分接触培养液中的营养物质，有利于微生物的生长繁殖。

液体培养基一般用于工业生产中的微生物培养，如发酵工业中制备各种发酵产品。

3、半固体培养基培养法半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂，使培养基成为半凝固状态的培养基。

这种培养基可以固定培养液中的微生物，同时也可以使微生物在半固体表面生长繁殖。

半固体培养基一般用于观察微生物的运动和生长情况。

4、厌氧培养法有些微生物需要在无氧或低氧分压条件下生长繁殖，因此需要采用厌氧培养法。

厌氧培养法一般采用密闭容器或厌氧手套箱中进行，可以提供无氧或低氧环境。

在厌氧培养法中，需要使用专门的厌氧培养基和厌氧菌株，以保证微生物的生长繁殖。

5、富集培养法富集培养法是一种常用的分离高浓度微生物的方法。

该方法是通过在培养基中添加一些特殊成分，如高浓度营养物质、抑制剂等，以抑制其他微生物的生长繁殖，从而增加目标微生物的数量和浓度。

富集培养法一般用于从自然界或工业生产中分离特定种类的微生物。

微生物培养方法有很多种，每种方法都有其特定的适用范围和特点。

在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的培养方法，以达到最佳的培养效果。

还需要注意无菌操作、环境控制等方面的技术细节，以保证微生物生长繁殖的良好环境和条件。

微生物的分离培养方法微生物的分离培养是微生物研究中常用的技术之一，它能够将目标微生物从复杂的微生物群体中分离出来，并进行纯培养。

固体培养基和液体培养基

固体培养基和液体培养基
在一般培养温度下呈固体状态的培养基都称固体培养基。

固体培养基可以分为两类：一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基；另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。

这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。

固体培养基的凝固剂一般不是微生物的营养成分，只起固化作用。

理想的凝固剂应具备以下条件：不会被微生物分解利用；不会因高温灭菌而受到破坏；在微生物生长的温度范围内保持固体状态；对微生物及操作人员均无毒害作用；透明度好、凝固力强；价格低廉，配制方便。

常用的凝固剂是琼脂。

琼脂的主要成分是硫酸半乳聚糖，绝大多数微生物都不能分解利用它。

琼脂的熔点为96℃，凝固点为40℃，因此，在一般的培养条件下都呈固体状态，而且透明度强。

正是这些优良特性，使琼脂取代了早期使用的明胶而成为常用的凝固剂。

呈液体状态的培养基，叫液体培养基或培养液，发酵液。

液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。

半固体培养基是指在培养液中加入少量的凝固剂(如0.2％～0.5％的琼脂)而制成的培养基。

这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。

固体培养法

固体培养法
固体培养法是一种在固态培养基上进行微生物培养的方法。

在该方法中，营养物质和水分被固定在培养基中，使微生物能够在表面或内部生长。

固体培养方法首先由勒贝格发明，其优点是可以产生单一的微生物菌落，在细菌分类和鉴定中有很大的帮助。

该方法可以使细菌、真菌和酵母等微生物在固体表面上形成单一的菌落或菌株，使其形态特征更加明显，有助于对微生物的形态、生理和生化特性进行研究。

固体培养法也是一种常用的微生物保存方法。

通过将微生物菌株保存在固体培养基上，可以长期保存微生物，保持其特性不变。

尽管固体培养法具有许多优点，但也存在一些缺点。

例如，通常需要较长时间才能得到菌落，需要较大的培养基表面积。

此外，该方法可能会产生交叉污染，因为微生物可能会从一个菌落传播到另一个菌落。

总的来说，固体培养法是一个简单而有效的微生物培养方法，有助于微生物鉴定、分类和保存。

天然的固体培养基

（三）理化条件适宜
1．pH值细菌
放线菌
最适pH 范围 7～8 7.5～8.5 常用的缓冲物质: 磷酸盐、碳酸钙
2．渗透压 3. 氧化还原电位
酵母菌 3.8～6.0
霉菌 4.0~5.8
（四）经济节约
遵循以粗代精，以野代家，以废代好，以简代繁，制
• 加水
比较项目单纯扩散促进扩散主动运输基团移位特异载体蛋白平衡时内外浓度内外相等内外相等内部高内部高能量消耗不需要不需要需要需要运送前后溶质分子不变不变不变改变运送对象举例氨基酸乳糖葡萄糖碱基四种运送营养方式的比较将有机物分解新陈代谢同化作用合成代谢吸收能量合成反应将营养物质转化为细胞物质异化作用分解代谢将细胞内有机物分解放出能量分解代谢能量代谢是新陈代谢的核心问题最初能源有机物化能异养微生物光能营养微生物还原态无机物化能自养微生物通用能源atpatp的生成方式由光照引起的电子传递与磷酸化作用相偶联而生成atp的过程称光合磷酸化
微生物的生理
生理
• 生理——生命活动机理 • 生命活动——营养、呼吸 • 营养物及其获取方式——营养 • 营养物质的代谢 ——呼吸
• 营养物的种类、用途及营养物的吸收方式
• 水、盐、“粮食” • 异养－自养；吸收方式—四种（酶起主要作用）
• 如何代谢？不同代谢类型的细菌分类
• 光能—化能；好氧—厌氧；（酶起主要作用）
所需要的能量；以无机物如H2、H2S、S等作为供氢体或电子供体，使CO2还原为细胞物质；能够在完全无机的环境中生长。
例如，藻类及蓝细菌等和植物一样，以水为电子供体（供氢体），进行产氧型的光合作用，合成细胞物质。
CO2+ 2H2O
光能叶绿素 [ CH2O] + O2

大肠杆菌固体培养基生长现象描述

大肠杆菌固体培养基生长现象描述
大肠杆菌固体培养基是一种用于培养大肠杆菌的培养基，通常含有乳糖和其他营养成分，使大肠杆菌能够生长和繁殖。

在固体培养基上，大肠杆菌会形成明显的菌落，通常呈圆形、光滑、透明、边缘整齐，表面没有明显的纹理或斑点。

当大肠杆菌在固体培养基上生长时，它们会产生乳糖发酵反应，导致培养基中产生气体，使培养基变得膨胀、鼓起，并且有气泡产生。

此外，大肠杆菌的生长和繁殖还会导致培养基的颜色发生变化，通常变为粉红色或红色。

这是因为大肠杆菌分解乳糖产生酸，酸会使培养基中的中性红指示剂变色。

总之，大肠杆菌固体培养基的生长现象特征是菌落圆形、光滑、透明、边缘整齐，表面没有明显的纹理或斑点，同时培养基中出现气体、膨胀、气泡和颜色变化等反应。

培养基的种类

培养基的种类由于各种微生物所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。

据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理性质以及不同的使用目的等而分成若干类型。

1.按照培养基的化学成分分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。

(1)合成培养基。

合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。

这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。

如高氏一号合成培养基、察氏培养基等。

主要用于工业生产。

(2)天然培养基。

由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。

这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。

(3)半合成培养基。

在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

2.按照培养基的物理性质分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。

(1)固体培养基。

是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。

固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。

(2)液体培养基。

液体培养基中不加任何凝固剂。

这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。

(3)半固体培养基。

是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。

可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。

3.按照培养的微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。

常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。

培养基的类型及应用

培养基的类型及应用培养基种类繁多,依据其成份、物理状态和用途可将培养基分成多种类型。

1．按成份不同划分(1) 天然培养基(complex medium)这类培养基主要以化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物组成,牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。

基因克隆技术中常用的LB(Luria-Bertani)培养基也是一种复合培养基,其组成见表4-10。

常用的天然有机营养物质包含牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表4-11)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡罗卜汁、椰子汁等,嗜粪微生物(coprophilous microorganisms)可以利用粪水作为营养物质。

复合培养根本钱较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。

(2) 合成培养基(synthetic medium)合成培养基是由化学成份完全了解的物质配制而成的培养基，也称化学限定培养基(chemically defined medium),高氏1号培养基和查氏培养基就属于此种类型。

配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其本钱较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。

2．依据物理状态划分依据培养基中凝固剂的有无及含量的多少,可将培养基划分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种类型。

(1) 固体培养基(solid medium)在液体培养基中参加肯定量凝固剂即为固体培养基。

理想的凝固剂应具备以下条件:1.不被所培养的微生物分解利用;2.在微生物生长的温度范围内保持固体状态。

在培养嗜热细菌时,由于高温简单引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;3.凝固剂凝固点温度不能太低,否则将不利于微生物的生长;4.凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;5.凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;6.透明度好,粘着力强;7.配制方便且价格低廉。

固体培养基的配制及灭菌

实验二固体培养基的配制与灭菌一、目的要求1、通过实验的准备工作，掌握培养皿、三角瓶等器皿的洗涤技能；2、通过固体培养基的配制，掌握配制固体培养基的基本技能；3、掌握培养基的灭菌方法与分装方法。

二、仪器与用具1、仪器：各类天平、电炉、高压灭菌锅；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、三角瓶、标签、pH试纸、报纸或牛皮纸；3、试剂：0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，各类培养基母液，琼脂粉，蒸馏水。

三、方法步骤（一）相关器皿的洗涤1、将使用完毕的培养器皿中的培养基残渣清除干净（倒入垃圾桶而非下水道中）2、用洗衣粉或肥皂水浸泡培养器皿后进行清洗3、用清水冲洗培养器皿3遍4、用蒸馏水冲洗1-3遍5、将清洗干净的培养器皿倒扣于铺好报纸的桌面上或试管架上晾干备用。

（二）培养基的配制1、将培养基母液按照以下次序摆放于试验台上：大量、微量、铁盐、有机、生长调节物质2、取适量蒸馏水放入容器3、按需要量依次取母液（若使用移液管，需专管专用，不可混用；若用量筒，已取出的多余母液严禁倒回原试剂瓶中）4、加入蔗糖（30g/L）溶解5、加入蒸馏水，使溶液体积比最终体积略少6、调节PH值（pH=5.8）7、加入琼脂（6-10g/L）8、定容至终体积（三）培养基的分装与灭菌1、用三角瓶培养（1）将上述培养基煮开2-3min，使琼脂溶化均匀（2）趁热将培养基分装入洗净晾干的三角瓶中（3）扎好瓶口（4）高压灭菌（5）将灭菌后的培养基摆放于平面上，待凝固后存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用2、用培养皿培养（1）将培养基进行高压灭菌后趁热取出（2）趁培养基凝固之前，在超净工作台上将灭菌后的培养基分装至无菌培养皿中（3）将分装好的培养皿平置于超净工作台上，待其凝固，并吹干培养皿盖上的水汽（4）将凝固吹干后的培养基用干净的保鲜膜包好，存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用。

（四）高压灭菌方法1、用牛皮纸或报纸等将玻璃器皿和金属器械包扎好2、在高压灭菌锅内装一定量的蒸馏水，水必须淹没电热丝，严禁干烧3、把分装好培养基的培养瓶、包扎好的玻璃器皿和金属器械、装有蒸馏水的玻璃瓶等物品放入高压灭菌锅内（注意带盖的密封试剂瓶不要拧太紧，要留有一定的缝隙防止因热胀冷缩而造成的瓶体破裂或变形），盖好高压锅盖，成对拧好锅盖上的螺帽，打开排气阀，开启电源（严禁对易燃易爆易挥发的物品进行高温高压灭菌）4、当排气阀开始放气时计时3-5分钟，待排出的气体呈持续均匀的白色蒸汽时关闭排气阀（关闭排气阀时注意防止蒸汽烫伤）5、当高压灭菌锅显示锅内温度达到121℃时开始计时，使温度稳定在121℃以上（锅内压力严禁超过0.165 M Pa），保持15-20min6、切断电源，让高压灭菌锅自然冷却，必须等压力降到0.05 M Pa以下时打开排气阀（无论何种情况下，严禁在压力超过0.05 M Pa时开排气阀），待压力指针降到零，锅内外压力一致后方可打开锅盖，取出锅内物品（永远记得要先开排气阀，再开高压灭菌锅锅盖）。

培养基的种类

培养基的种类繁多;因考虑的角度不同,可将培养基分成以下一些类型：一根据所培养微生物的种类作分类根据微生物的种类可分为：细菌、放线菌、酵母菌和霉菌培养基;常用的异养型细菌培养基为牛肉膏蛋白胨培养基,常用的自养型细菌培养基是无机的合成培养基,常用的放线菌培养基为高氏一号合成培养基,常用的酵母菌培养基为麦芽汁培养基,常用的霉菌培养基为察氏合成培养基;二根据对培养基成分的了解程度作分类1. 天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括用其提取物制成的培养基,这是一类营养成分既复杂又丰富、难以说出其确切化学组成的培养基;例如牛肉膏蛋白胨培养基;天然培养基的优点是营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉；缺点是化学成分不清楚、不稳定;因此,这类培养基只适用于一般实验室中的菌种培养、发酵工业中生产菌种的培养和某些发酵产物的生产等;常见的天然培养基成分有：麦芽汁、肉浸汁、鱼粉、麸皮、玉米粉、花生饼粉、玉米浆及马铃薯等;实验室中常用牛肉膏、蛋白胨及酵母膏等;2. 合成培养基又称组合培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基;例如高氏一号培养基、察氏培养基等;合成培养基的优点是成分精确、重演性高；缺点是价格较贵,配制麻烦,且微生物生长比较一般;因此,通常仅适用于营养、代谢、生理、生化、遗传、育种、菌种鉴定或生物测定等对定量要求较高的研究工作中;3. 半合成培养基又称半组合培养基,指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基;例如培养真菌的马铃薯蔗糖培养基等;严格地讲,凡含有未经特殊处理的琼脂的任何合成培养基,实质上都是一种半合成培养基;半合成培养基特点是配制方便,成本低,微生物生长良好;发酵生产和实验室中应用的大多数培养基都属于半合成培养基;三根据培养基的物理状态作分类1. 液体培养基呈液体状态的培养基为液体培养基;它广泛用于微生物学实验和生产,在实验室中主要用于微生物的生理、代谢研究和获取大量菌体,在发酵生产中绝大多数发酵都采用液体培养基;2. 固体培养基呈固体状态的培养基都称为固体培养基;固体培养基有加入凝固剂后制成的；有直接用天然固体状物质制成的,如培养真菌用的麸皮、大米、玉米粉和马铃薯块培养基；还有在营养基质上覆上滤纸或滤膜等制成的,如用于分离纤维素分解菌的滤纸条培养基;常用的固体培养基是在液体培养基中加入凝固剂约2％的琼脂或5％～12％的明胶,加热至100℃,然后再冷却并凝固的培养基;常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶等;其中,琼脂是最优良的凝固剂;现将琼脂与明胶两种凝固剂的特性列在表4-4中;固体培养基在科学研究和生产实践中具有很多用途,例如用于菌种分离、鉴定、菌落计数、检测杂菌、育种、菌种保藏、抗生素等生物活性物质的效价测定及获取真菌孢子等方面;在食用菌栽培和发酵工业中也常使用固体培养基;3. 半固体培养基半固体培养基是指在液体培养基中加入少量凝固剂如0.2％～0.5％的琼脂而制成的半固体状态的培养基;半固体培养基有许多特殊的用途,如可以通过穿刺培养观察细菌的运动能力,进行厌氧菌的培养及菌种保藏等;4. 脱水培养基又称脱水商品培养基或预制干燥培养基,指含有除水以外的一切成分的商品培养基,使用时只要加入适量水分并加以灭菌即可,是一类既有成分精确又有使用方便等优点的现代化培养基;四根据培养基的功能作分类1. 选择性培养基一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某些物理、化学因素的抗性而设计的培养基,具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能,广泛用于菌种筛选等领域;混合菌样中数量很少的某种微生物,如直接采用平板划线或稀释法进行分离,往往因为数量少而无法获得;选择性培养的方法主要有两种,一是利用待分离的微生物对某种营养物的特殊需求而设计的,如：以纤维素为唯一碳源的培养基可用于分离纤维素分解菌；用石蜡油来富集分解石油的微生物；用较浓的糖液来富集酵母菌等；二是利用待分离的微生物对某些物理和化学因素具有抗性而设计的,如分离放线菌时,在培养基中加入数滴10％的苯酚,可以抑制霉菌和细菌的生长；在分离酵母菌和霉菌的培养基中,添加青霉素、四环素和链霉素等抗生素可以抑制细菌和放线菌的生长；结晶紫可以抑制革兰氏阳性菌,培养基中加入结晶紫后,能选择性地培养G－菌；7.5％NaCl可以抑制大多数细菌,但不抑制葡萄球菌,从而选择培养葡萄球菌；德巴利酵母属中的许多种酵母菌和酱油中的酵母菌能耐高浓度18％～20％的食盐,而其他酵母菌只能耐受3％～11％浓度的食盐,所以,在培养基中加入15％～20％浓度的食盐,即构成耐食盐酵母菌的选择性培养基;2. 鉴别培养基一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基;最常见的鉴别培养基是伊红美蓝乳糖培养基,即EMB培养基;它在饮用水、牛奶的大肠菌群数等细菌学检查和在E.coli的遗传学研究工作中有着重要的用途;EMB培养基中的伊红和美蓝两种苯胺染料可抑制G＋细菌和一些难培养的G－细菌;在低酸度下,这两种染料会结合并形成沉淀,起着产酸指示剂的作用;因此,试样中多种肠道细菌会在EMB培养基平板上产生易于用肉眼识别的多种特征性菌落,尤其是大肠杆菌,因其能强烈分解乳糖而产生大量混合酸,菌体表面带H ＋,故可染上酸性染料伊红,又因伊红与美蓝结合,故使菌落染上深紫色,且从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光,其他几种产酸力弱的肠道菌的菌落也有相应的棕色;属于鉴别培养基的还有：明胶培养基可以检查微生物能否液化明胶；醋酸铅培养基可用来检查微生物能否产生H2S气体等;选择性培养基与鉴别培养基的功能往往结合在同一种培养基中;例如上述EMB培养基既有鉴别不同肠道菌的作用,又有抑制G＋菌和选择性培养G－菌的作用;3. 种子培养基种子培养基是为了保证在生长中能获得优质孢子或营养细胞的培养基;一般要求氮源、维生素丰富,原料要精;同时应尽量考虑各种营养成分的特性,使pH在培养过程中能稳定在适当的范围内,以有利菌种的正常生长和发育;有时,还需加入使菌种能适应发酵条件的基质;菌种的质量关系到发酵生产的成败,所以种子培养基的质量非常重要;4. 发酵培养基发酵培养基是生产中用于供菌种生长繁殖并积累发酵产品的培养基;一般数量较大,配料较粗;发酵培养基中碳源含量往往高于种子培养基;若产物含氮量高,则应增加氮源;在大规模生产时,原料应来源充足,成本低廉,还应有利于下游的分离提取;。

培养基的用途

培养基的用途培养基是微生物学中的一种重要实验工具，它是一种含有营养物质的液体或固体介质，用于培养和繁殖微生物。

培养基的种类繁多，不同的培养基适用于不同的微生物，具有不同的用途。

一、常见的培养基及其用途1.营养琼脂培养基：是一种常用的固体培养基，适用于大多数细菌和真菌的培养。

它含有蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖等营养物质，可以提供微生物生长所需的营养物质和固体支撑。

营养琼脂培养基可以用于分离和鉴定微生物，也可以用于制备纯菌培养。

2.血琼脂培养基：是一种含有动物血液的固体培养基，适用于许多细菌的培养。

它可以提供微生物生长所需的营养物质和血液中的生长因子，有助于微生物的生长和繁殖。

血琼脂培养基可以用于分离和鉴定血液中的致病菌，也可以用于制备纯菌培养。

3.选择性培养基：是一种含有特定抑制剂的培养基，适用于分离和鉴定特定的微生物。

选择性培养基可以抑制其他微生物的生长，使目标微生物得以生长和繁殖。

例如，大肠杆菌选择性培养基可以用于分离和鉴定大肠杆菌，而抑制其他细菌的生长。

4.富集培养基：是一种含有特定营养物质的培养基，适用于富集某些微生物。

富集培养基可以提供微生物所需的特定营养物质，促进目标微生物的生长和繁殖。

例如，硝酸盐富集培养基可以用于富集硝酸盐还原菌，而促进其他微生物的生长。

5.固氮培养基：是一种含有固氮菌生长所需的营养物质的培养基，适用于固氮菌的培养。

固氮培养基可以提供微生物所需的营养物质和固氮因子，促进固氮菌的生长和繁殖。

固氮菌可以将空气中的氮气转化为植物可吸收的氨基氮，对植物生长有益。

二、培养基的制备方法1.液体培养基的制备方法：将所需的营养物质加入适量的水中，加热至溶解，调节pH值，然后进行高压灭菌。

液体培养基可以用于微生物的液体培养和发酵。

2.固体培养基的制备方法：将所需的营养物质加入适量的水中，加热至溶解，加入琼脂或者琼脂糖，调节pH值，然后进行高压灭菌。

固体培养基可以用于微生物的固体培养和分离。

培养基的物理状态分类

培养基的物理状态分类1. 按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。

2.根据培养基的物理状态，培养基按其物理状态可分为三种:固体培养基、液体培养基和半固体培养基。

3. 按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。

4. 按照培养基用途分培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。

具体的：(1)合成培养基。

合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。

这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。

如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。

(2)天然培养基。

由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。

这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。

(3)半合成培养基。

在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

2.按照培养基的物理状态培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类.购买培养基就到【莱耀生物】。

(1)固体培养基。

是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。

固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。

(2)液体培养基。

液体培养基中不添加凝固剂。

这种培养基成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的营养物质，适合于生理研究。

因其发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。

(3)半固体培养基。

它是在液体培养基中加入少量凝固剂而成的半固态。

它可以用来观察细菌的运动，鉴定菌株和确定噬菌体的滴度。

3.按照微生物的种类培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。

常用25种培养基详细配方

常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方：1. LB培养基（Luria-Bertani medium）-天然培养基：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.0。

- 固体培养基：添加15g agar。

2. TSA培养基（Tryptic Soy Agar）-17g蛋白胨，3g酵母提取物，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.3-7.5- 固体培养基：添加15g agar。

3. NB培养基（Nutrient Broth）-8g蛋白胨，2g胰蛋白胨，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.4 - 固体培养基：不添加agar。

4. R2A培养基（Reasoner's 2A medium）- 0.5g peptone，0.5g casein hydrolysate，0.5g yeast extract，0.5g glucose，0.5g soluble starch，0.3g dipotassium phosphate，0.05g magnesium sulfate，0.3g sodium pyruvate，10μg m anganese sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至7.2-7.4- 固体培养基：添加15g agar。

5. BHIS培养基（Brain Heart Infusion with 20% Sucrose）- 37.5g BHIS培养基，10g sucrose，添加适量蒸馏水，pH值调至7.5- 固体培养基：添加15g agar。

6. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）-200g马铃薯，20g葡萄糖，添加适量蒸馏水，pH值调至5.6- 固体培养基：添加20g agar。

7. MRS培养基（de Man Rogosa Sharpe medium）- 10g peptone，10g beef extract，4g yeast extract，20g glucose，5g sodium acetate，2g dipotassium phosphate，0.02g magnesium sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至6.2-6.6- 固体培养基：添加20g agar。

固体培养基琼脂含量

固体培养基琼脂含量
半固体培养基主要用于观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。

半固体培养基，如果
把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。

以琼脂为例，它的用量在0.2~0.7%之间。

醋酸铅半固体培养基(用于硫化氢试验)：成分：ph7.4的牛肉膏蛋白胨半固体琼脂ml，硫代硫酸钠0.25g，10%醋酸铅水溶液lml。

制法：将牛肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基ml
加热溶化，待冷至60℃时加人硫代硫酸钠0.25g，调ph7.2，分装于三角瓶中，0.07mpa
灭菌20min后，待冷至55~60°c，加入1ml无菌的10%醋酸铅水溶液，混匀后，倒入灭菌
试管中。

德国细菌学家科赫发明了固体培养基

主要用于微生物的分离、计数等
需加入凝固剂，如琼脂
固体培养基
液体培养基
主要用于工业生产
半固体培养基
主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等
1、研究微生物，利用微生物，需要培养微生物。我们怎样培养微生物？培养微生物，需要提供哪些物质？
2、各种微生物的代谢类型不同，生长过程所需要的物质是不同的。怎样根据微生物代谢方式的差异选择培养基中的物质？
若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起，我们配置什么样的培养基可以将三种微生物分离？
微生物的分离：科赫的稀释—划线分离培养法
19世纪后期，德国细菌学家科赫发明了固体培养基，将微生物样品稀释后，用针尖沾取少量的稀释菌液在固体培养基上划线，不久培养基的表面就会长出多种菌落。
科赫推断相同特征的菌落来自同一个种，于是，就挑选某一种菌落的微生物，经过几次相同的培养过程后，就得到了纯种。
应用固体培养基，科赫分离出了炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、结核杆菌等。 1905年，科赫因结核杆菌的研究成果而获诺贝尔生理学及医学奖。
细菌学家科赫
用稀释划线法获得的不同细菌的菌落
巩固练习
1.下列说服不正确的是
D
A.微生物最常用的氮源是氨盐和硝酸盐
B.氨既是硝化细菌的氮源,又是能源
C.蛋白胨既要作碳源,又要作氮源,还可作生长因子
思考题:如何利用伊红---美蓝培养基对自来水中的鉴别大肠杆菌是否超标进行测?P81
选择培养基
• 加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌
• 加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌
• 不加氮源的无氮培养基分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物

常见微生物培养基

常见微生物培养基培养基Medium是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐包括微量元素以及维生素和水等。

有的培养基还含有抗菌素和色素。

按所用原料不同可分为两类应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的称为天然培养基应用化学药品配成并标明成分的称为合成培养基或综合培养基。

化学试剂中的培养基大多为合成培养基。

由于液体培养基不易长期保管现在均改制成粉末。

培养基由于配制的原料不同使用要求不同而贮存保管方面也稍有不同。

一般培养基在受热、吸潮后易被细菌污染或分解变质因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。

对一些需严格灭菌的培养基如组织培养基较长时间的贮存必须放在2~6。

C的冰箱内。

常见培养基有1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克蛋白胨1.0克氯化钠0.5克琼脂 1.5克水100毫升在烧杯内加水100毫升放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠用蜡笔在烧杯外作上记号后放在火上加热。

待烧杯内各组分溶解后参加琼脂不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里加棉花塞用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基取新鲜牛心除去脂肪和血管250克用刀细细剁成肉末后参加500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号煮沸转用文火炖2小时。

过滤滤出的肉末枯燥处理滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内参加10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心灭菌备用。

配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解然后分别参加其他组分搅拌使溶解后分装灭菌备用。

2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基高氏培养基可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里用5毫升水调成糊状后倒入95毫升水搅匀后参加其他药品使它溶解。

固体培养的名词解释

固体培养的名词解释
固体培养是一种微生物学实验技术，用于培养和繁殖细菌、真
菌或其他微生物。

在固体培养中，培养基被凝固成固体，通常使用
琼脂或琼脂糖等物质来实现。

这种培养方法有助于微生物在表面上
形成单独的克隆，使得观察和分离不同类型的微生物变得更加容易。

固体培养的过程通常包括以下步骤，首先，将培养基加热至液
态状态，然后将其倒入培养皿中，待其凝固成固体后，使用棒状工
具在表面上划出一条直线或网格状图案。

接下来，取一根无菌的棉
签或环形接种针，从待检样品中取一小部分，然后在培养基表面上
进行划线或点式接种。

最后，将培养皿倒置放置在恒温箱中，通常
在适宜的温度下培养一段时间，直到观察到所需的微生物生长。

固体培养在微生物学研究中起着重要作用，因为它可以帮助科
学家们分离和纯化微生物，观察它们的生长特性和形态学特征，进
行生物学鉴定以及进行抗生素敏感性测试等。

此外，固体培养还可
以用于保存微生物菌种，以备将来使用。

总的来说，固体培养是一种常见的微生物培养方法，通过在凝
固的培养基表面上进行接种，有助于微生物的单独生长和观察，是微生物学研究中不可或缺的重要技术手段之一。

MS固体培养基的配制

MS固体培养基的配制一、实验目的通过实验实训，掌握MS固体培养基的配制技术及操作技能。

二、材料与用具配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、电饭煲、全自动高压灭菌器、pH试纸、0.1mol/L 的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔等。

三、方法与步骤（一）按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量（150-200ml）纯净水的量筒中。

母液一 30ml/L母液二 15ml/L母液三15ml/L母液四 15ml/L母液五30ml/L母液六7.5ml/L1-8组4人配1L，9-10组3人配1L。

（二）加入植物生长调节物质加入的具体调节物质与量视培养物不同而异（本次实验不加生长调节剂）。

（三）定容加纯净水定容至1000ml。

（四）倒入预先用铅笔标好刻度的电饭煲中。

（五）加糖、加热：加入蔗糖20g/L并开始加热。

（六）加琼脂粉12g/L：在电饭煲中给培养基加温至冒热气时均匀缓慢地加入琼脂粉，用玻璃棒不断搅拌至全部熔解并煮沸。

（七）调节pH值：煮沸后，用试纸测试pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.6—5.8；加水至预先标注的刻度处，煮沸1-2分钟。

（八）培养基分注把配置好的培养基用烧杯分注到培养瓶中，分注前用量筒量取30ml水倒入培养瓶测试，每瓶装30ml（3瓶/100 ml）左右。

分注后立即加盖，贴上标签，注明培养基的名称、配制时间、配制人姓名。

（九）培养基灭菌，无菌水、无菌瓶、无菌纸片制作。

1.将蒸馏水注入灭菌腔，直至水流进入水位板中间的水位指示器。

2.将待灭菌的物品放入提篮中，将提篮放入灭菌腔中。

3.插上电源，打开开关。

4.旋紧“排汽旋钮”，关闭灭菌腔盖，直至指示灯“LOCKED”亮起。

5.选择灭菌程序，按“SET/ENT”键设置温度为121℃，保温时间20min。

6.长按“START”键开始灭菌。

细菌在培养基中的生长情况

细菌在培养基中的生长情况
(1)固体培养基：细菌经分离培养成菌落，根据菌落特点，分为三型：1.光滑型菌落(S型菌落)：新分离的细菌大多为光滑型菌落，表面光滑、湿润，边缘整齐。

2.粗糙型菌落(R型菌落)：菌落表面粗糙、干燥、有皱纹，有时呈颗粒状，边缘多不整齐。

3.黏液型菌落(M型菌落)：多见于肥厚荚膜或黏液层的细菌，菌落表面黏稠、有光泽，似水珠样。

(2)半固体培养基：多用于检查细菌的动力和保存细菌。

有鞭毛的细菌可由穿刺线向四周运动弥散，培养后穿刺线模糊不清，呈羽毛状或云雾状混浊生长;无鞭毛细菌，不能运动，仅沿穿刺生长，穿刺线以外的培养基仍透明澄清。

(3)液体培养基：细菌成长呈3种状态：
1.混浊生长。

菌液呈混浊状态，见于多数细菌。

2.沉淀生长。

细菌沉于管底形成沉淀，培养液上清较清。

3.菌膜生长。

多为专性需氧菌，在培养液表面生长，形成菌膜。

例题(中公卫生人才网整理)：
A.半固体培养基
B.液体培养基
C.两者均是
D.两者均不是
1.观察细菌动力可用
2.增菌培养可用
正确答案：A;B。