培养基的配制方法

实验一培养基的配制

生科三班李林40608143 2008.9.16 周二上午

一.实验目的：

1.明确配制微生物培养基的原理；

2.掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤；

3.掌握是湿热灭菌法的原理和操作。

二.实验原理：

膏蛋白胨培养基是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经过蛋白酶水解后，中间产物，含有胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，再加入的NaCl为细菌所需的无机盐，加入的自来水可提供微量元素。

配置好的培养基用湿热灭菌法进行灭菌。

三.材料和仪器：

1.试剂：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，1mol/L NaOH,1mol/L HCl

2.器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，沙漏，试管，玻棒等

3.其他：PH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，沙绳，灭菌锅等。

四.实验步骤：

1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白胨3g，氯化钠 1.5g，琼脂条 4.5g,水

300mL,PH7.2~7.4。

2.称取药品：按培养基配方及配量分别称取各药品，取少量水于烧杯中，将各

培养基成分（除琼脂）逐一加入水中待溶。

3.加热溶解：将搪瓷杯放到电热炉上，用文火加热，病不断搅拌，促使各药品

快速溶解，然后补充水分至所需培养基的量。

4.调节PH:初配好的牛肉膏蛋白胨，培养液是微酸性的，故需用1mol/L NaOH

调PH7.2~7.4。

5.加琼脂：向调好的培养基中加入琼脂条。

6.加棉塞：用8层纱布纸杯成通气塞，灭菌前将方形纱布盖在瓶口，将其中间

部位用手指塞入瓶口内，再将四角折叠成塞子状后加纸套包扎好，然后灭菌。

7.包扎：在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放

中防止尘埃等污染。

8.灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于121℃灭菌20min.

五.实验结果：

按照实验方法配制的培养基透明但有些发黄，说明说有物质均完全溶解，基本符合实验要求，颜色有些发黄可能是因为加入牛肉膏，也可能是因为加入牛肉膏的时候所用火温较高，使牛肉膏粘底了，稍有烧糊或烧焦了，致使培养基较黄。一周以后观察, 配制的无菌牛肉膏蛋白胨固体培养基中,无菌落生成,说明配制的培养基符合要求.

六.思考题：配制牛肉膏蛋白胨斜面培养基有哪些操作步骤，哪几步易出差错?如何防止

答：配方及配量，称取药品，加热溶解，调PH，加琼脂，加棉塞，包扎，灭菌。易出差错的步骤：

（1）称药品的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴，

尤其是易吸潮的蛋白胨等更应注意及时盖紧瓶盖与旋紧瓶盖。

（2）调PH时要小心操作，尽量避免回调而带入过多的无机离子。

（3）包扎时，在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝冰直接粘湿棉塞。