细胞融合和单克隆抗体
细胞融合和单克隆抗体制备
C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成
D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
变式训练 1、完成步步高243页第2题
2.单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广 泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下 图所示：
体验高考 1、完成步步高244页第3题
B.没经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是 D
A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 D
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成
考纲要求
2.2.2细胞融合与单克隆抗体
细胞融合与单克隆抗体
Ⅱ
Ⅰ： 对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的 相对简单的情境中识别和使用它们。 Ⅱ： 理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别， 并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理 和评价。
回顾： 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？
既能分泌抗体 又能无限增殖
诱导细胞融合需 要什么技术？
杂交瘤细胞
动物细胞培养技术
大量的化学性质单一的抗体
动物细胞融合
原理？
细胞膜的流动性
诱导的手段？
灭活病毒、PEG、电激 等
融合成功的标志：细胞核 融合
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交
融合原理 细胞膜的流动性、 细胞的全能性
1.克隆单一的B淋巴细胞，形成B 细胞群，需要用到什么技术？
细胞融合
Animal cell engineering
动物细胞工程
单克隆抗体
●二、单克隆抗体技术 二
◕B淋巴细胞不能在体外无限增殖。1975年 淋巴细胞不能在体外无限增殖。 淋巴细胞不能在体外无限增殖 年 Köehler和Milstein利用杂交瘤技术，使绵羊红 利用杂交瘤技术， 和 利用杂交瘤技术 细胞(SRBC)免疫后小鼠的 淋巴细胞和小鼠的 免疫后小鼠的B淋巴细胞和小鼠的 细胞 免疫后小鼠的 骨髓瘤细胞融合，建立产生抗SRBC单抗的杂 骨髓瘤细胞融合，建立产生抗 单抗的杂 交细胞株。它既具有B淋巴细胞产生特异性抗 交细胞株。它既具有 淋巴细胞产生特异性抗 体的能力， 体的能力，又具有肿瘤细胞在体外无限增殖的 特点，可不断在细胞培养上清液中产生单抗。 特点，可不断在细胞培养上清液中产生单抗。
Animal cell engineering
动物细胞工程
◑1B) 后天免疫反应的四个阶段： 后天免疫反应的四个阶段：
◔ 遭遇： 巨噬细胞把抗原分解成小片段，专一地表现给 TH 遭遇： 巨噬细胞把抗原分解成小片段， 细胞。 细胞。 ◔ 动员： TH 细胞动员 TK（TC）细胞及 B 细胞，后者生产 动员： 细胞， 专一性抗体。 专一性抗体。 ◔ 扫荡： 抗体及 TK 细胞攻击入侵的抗原。 扫荡： 细胞攻击入侵的抗原。 ◔ 休止： 完成清除抗原后，免疫细胞休息。 休止： 完成清除抗原后，免疫细胞休息。
Animal cell engineering
动物细胞工程
细胞融合
●二、细胞融合的意义 二
◕ 细胞融合能把亲缘关系较远，甚至毫无亲缘 细胞融合能把亲缘关系较远， 关系的生物体细胞融合在一起， 关系的生物体细胞融合在一起，打破了仅仅依 赖有性杂交重组基因创造新种的界限，扩大了 赖有性杂交重组基因创造新种的界限， 遗传物质的重组范围。 遗传物质的重组范围。是改善细胞遗传物质的 有力手段。 有力手段。
动物细胞融合和单克隆抗体(终极版)
癌细胞
3、你认为有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？
细胞融合
２、实验原理：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
柯勒
单克隆 动物细胞培养技术 杂种细胞 动物细胞融合 抗体 既能产生特异性抗 体，又能大量繁殖 创始人：米尔斯坦
⑵.诱导方式：
二醇（PEG）
生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒
3.意义和应用：
打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；
重要用途：制备单克隆抗体。
知识回顾
1、抗体是由何种细胞产生的？
三、单克隆抗体 浆细胞（效应B细胞）
2、抗体是如何产生的？
B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞
浆 细胞 骨髓瘤细胞 选出能产生 特定抗体的 细胞群继续 培养
细胞融合 筛选
杂交 瘤细胞
细胞培养
体外培养
从培养液或小 鼠腹水中取出 单克隆抗体
体内培养
练习：
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ A、融合的原理 C、融合的诱导手段 ）
B、融合的优点 D、融合的过程
2.制备过程：
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
1.在制备单克隆抗体的过程中，选用 哪两种细胞进行融合？为什么选择这 两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限 增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不 能产生单一抗体。
人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第2章 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
知识点一
知识点二
[归纳提升]
1.血清抗体与单克隆抗体的比较
比较项目 产生
特点
血清抗体 由B淋巴(浆)细胞分泌 产量低、纯度低、特异性差
单克隆 由杂交瘤细胞分泌 抗体
能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗 原发生特异性结合,并且可以大量制备
知识点一
知识点二
(2)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选:B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经诱导剂处理后,会出现多种细胞, 如B—B细胞、瘤—瘤细胞、B—瘤细胞、B淋巴细胞、骨髓瘤细胞等,因 而要用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞(即B—瘤细胞)。用特定的培养基 筛选,未融合的和融合的具有同种核的细胞死亡,只有杂交细胞才能生长。 第二次筛选:B淋巴细胞有多种,与骨髓瘤细胞融合后产生多种杂交瘤细 胞,因而需要对杂交瘤细胞作进一步的筛选。通常用“有限稀释法”,将杂交 瘤细胞稀释,用多孔培养板培养,使每孔中的细胞不超过一个,培养增殖后, 检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,以确定是不是所需要的杂交瘤细胞。 (3)杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质,不仅具有B淋巴细胞产生特异性抗 体的能力,还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力,从而可以 克服单纯B淋巴细胞不能无限增殖的缺点,大量生产单克隆抗体知。识点一 知识点二
知识点一
知识点二
2.下列关于植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,正确的是( ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法 也完全相同 B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离,突破有性杂交的局限,使远缘杂交 成为可能 C.利用植物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开 辟了新途径 D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具 有两个物种遗传物质的超级植物,并使它们的性状全部得以体现 答案:B
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)第一章：动物细胞融合概述1.1 动物细胞融合的定义与意义1.2 动物细胞融合的方法1.3 动物细胞融合的应用第二章：细胞融合的诱导方法2.1 物理方法2.1.1 电融合法2.1.2 超声波融合法2.2 化学方法2.2.1 聚乙二醇(PEG)融合法2.2.2 灭活病毒融合法2.3 生物方法2.3.1 细胞表面分子的诱导2.3.2 细胞内信号传导途径的诱导第三章：单克隆抗体的制备与鉴定3.1 杂交瘤技术的原理及流程3.1.1 杂交瘤技术的原理3.1.2 杂交瘤细胞的筛选与克隆化3.1.3 单克隆抗体的生产与纯化3.2 单克隆抗体的性质鉴定3.2.1 抗体特异性鉴定3.2.2 抗体亲和力鉴定3.2.3 抗体效价测定第四章：单克隆抗体的应用4.1 诊断方面4.1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)4.1.2 免疫荧光技术4.1.3 免疫组化技术4.2 治疗方面4.2.1 抗体药物4.2.2 抗体介导的免疫治疗4.2.3 抗体工程第五章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究进展5.1 重组抗体技术5.1.1 重组抗体的制备方法5.1.2 重组抗体的应用5.2 抗体的人源化5.2.1 人源化抗体的制备方法5.2.2 人源化抗体的优势及应用5.3 抗体生物制药的发展趋势5.3.1 抗体药物的联合应用5.3.2 纳米抗体技术5.3.3 抗体药物的个性化治疗第六章：细胞融合的效率与优化6.1 影响细胞融合效率的因素6.1.1 细胞类型与状态6.1.2 诱导方法的选择与优化6.1.3 融合条件与时间的控制6.2 提高细胞融合效率的策略6.2.1 细胞预处理技术6.2.2 融合诱导剂的浓度与处理时间6.2.3 融合过程中的物理和化学条件控制第七章：杂交瘤细胞的筛选与克隆化7.1 筛选杂交瘤细胞的方法7.1.1 选择性培养基的筛选7.1.2 HAT选择性培养基的原理与应用7.1.3 筛选过程中的计数与纯度评估7.2 克隆化培养技术7.2.1 有限稀释法7.2.2 显微镜手工分离法7.2.3 自动化克隆化技术第八章：单克隆抗体的生产与纯化8.1 单克隆抗体的生产8.1.1 体外培养体系的设计8.1.2 培养条件的优化8.1.3 细胞株的生产能力评估8.2 单克隆抗体的纯化8.2.1 纯化方法的选择8.2.2 蛋白质A/G纯化法8.2.3 离子交换色谱和凝胶过滤色谱第九章：单克隆抗体的特性分析与质量控制9.1 抗体特异性分析9.1.1 抗原结合实验9.1.2 交叉反应分析9.1.3 抗体竞争实验9.2 抗体亲和力测定9.2.1 生物素-亲和力实验9.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)9.2.3 表面等离子共振(SPR)技术9.3 抗体质量控制9.3.1 抗体产量与纯度的控制9.3.2 抗体稳定性的评估9.3.3 抗体生物安全性检测第十章：实验操作指南与常见问题解析10.1 实验操作指南10.1.1 实验材料与设备准备10.1.2 实验步骤与操作流程10.1.3 实验结果记录与分析10.2 常见问题解析10.2.1 细胞融合失败的原因10.2.2 杂交瘤细胞筛选困难的原因10.2.3 单克隆抗体产量低的原因10.2.4 抗体质量问题的排查与解决第十一章：动物细胞融合与单克隆抗体的实验设计11.1 实验目的与意义的确定11.2 实验步骤的设计与优化11.3 实验条件的控制与调整11.4 实验数据的采集与分析第十二章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究案例分析12.1 案例一：治疗性抗体的研发与应用12.1.1 案例背景与问题陈述12.1.2 实验设计与方法12.1.3 结果分析与讨论12.2 案例二：诊断用单克隆抗体的开发12.2.1 案例背景与问题陈述12.2.2 实验设计与方法12.2.3 结果分析与讨论第十三章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的拓展应用13.1 抗体偶联药物(ADCs)13.1.1 ADCs的制备与性质13.1.2 ADCs的应用与挑战13.2 免疫调节剂的研究13.2.1 免疫调节剂的类型与作用机制13.2.2 免疫调节剂的应用前景13.3 疫苗研发与免疫预防13.3.1 疫苗设计与制备13.3.2 疫苗的临床试验与评价第十四章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的未来趋势14.1 基因编辑技术在抗体研究中的应用14.1.1 CRISPR/Cas9技术在抗体基因克隆中的应用14.1.2 基因编辑技术在抗体亲和力增强中的应用14.2 与高通量技术在抗体发现中的应用14.2.1 在抗体设计中的应用14.2.2 高通量筛选技术在抗体筛选中的应用14.3 细胞治疗与组织工程中的应用14.3.1 利用抗体技术促进细胞治疗的发展14.3.2 抗体技术在组织工程中的应用第十五章：教学总结与评价15.1 教学目标的回顾与评估15.2 学生反馈与教学改进15.3 教学资源的整合与优化15.4 课程考核与评价标准重点和难点解析本文主要介绍了动物细胞融合与单克隆抗体的相关知识，重点包括细胞融合的方法、诱导手段、单克隆抗体的制备与鉴定、应用以及研究进展。
动物细胞融合技术与单克隆抗体
《第2章细胞工程》第2节动物细胞工程二动物细胞融合技术与单克隆抗体必会知识考点梳理拓展延伸易错警示必会知识一动物细胞融合技术1．动物细胞融合技术：是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
细胞融合的实质是核融合。
2．原理：动物细胞融合的基本原理为细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法(1)化学方法：PEG融合法。
(2)物理方法：电融合法。
(3)生物方法：灭活病毒诱导法。
4．过程：具有不同遗传信息的两个或多个细胞杂交。
5．结果：形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。
6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
这一技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
如利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
必会知识二单克隆抗体及其应用1．传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。
(2)缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。
2．单克隆抗体的制备：单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。
(1)制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。
②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。
③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。
(2)制备过程①制备产生特定抗体的B淋巴细胞：用特定的抗原对小鼠进行免疫处理，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。
②培养骨髓瘤细胞。
③将小鼠的骨髓瘤细胞与从脾中得到的B淋巴细胞融合。
④用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。
⑤克隆化培养和抗体检测：对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
细胞融合和单克隆抗体
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细胞融合和单克隆抗体
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一、动物细胞融合（细胞杂交）
细胞融合技术最大的优点是什么？
动物细胞融合技术的应用
什么叫动物细胞融合？
促进细胞融合的方法有哪些 ?
动物细胞融合的过程？
植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些异同？
1、动物细胞融合概念： 2、促进细胞融合的方法：
物理、化学、 生物方法
获得完整植株
主要用于制备 单克隆抗体
细胞融合技术最大的优点：
6、动物细胞融合技术的应用：
利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
添加标题
提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？
一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖
杂交瘤细胞
既能分泌一种特异性抗体
又能无限增殖
1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：
米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。
2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A． ②④ B．①③⑤ C． ①②③④ D．②③
4. 1975年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。
第5章细胞融合与单克隆抗体(共114张PPT)
×100％
细胞融合(cell fusion)
细胞融合基本过程
1. 去除细胞壁以获得大量的原生质体
2. 诱导细胞融合形成杂种细胞
细胞相互靠近
形成细胞桥 – 最关键的一步
胞质渗透 细胞核融合
3. 筛选,培养,促进细胞分裂,分化,
4. 从细胞团,愈伤组织到最后成株
细胞融合(cell fusion)
动物细胞融合基本过程
硫由酸淋铵 巴沉器淀官法、组织–、细中胞共枢同构免成疫。 器官：骨髓、胸腺、（鸟、禽）法氏囊
电融合诱导法原理示意图
细胞融合(cell fusion)
电融合优点： 融合效率高，可达50～80％ 产生杂交细胞的频率高，是PEG法的100倍。
操作简便、稳定，但需设备。 对细胞无毒害作用。
可在显微镜下观察操作。
细胞融合(cell fusion)
融合率
融合率=
融合细胞的细胞核总数
视野内全部细胞的细胞核总数
细胞融合(cell fusion)
融合过程：
1. 病毒颗粒附着细胞膜上起搭桥作用，使细胞粘着成堆，在4℃冰
浴中细胞紧密靠近，但不发生融合。 2. 37 ℃温浴后，粘结部位的细胞膜破坏，形成通道，细胞质流通、融汇。
3. 病毒颗粒进入细胞质，此时两个细胞合并、变圆，完成融合，全过程 约15～30分钟。
膜融合过程大体概括为两大阶段：首先是两膜脂相互聚合和 接触，其次是接触部位的局部脱水，形成不稳定中间结构，使 膜脂发生混合而最终导致膜的融合。
显微镜下细胞融合 过程
细胞融合(cell fusion)
细胞融合(cell fusion)
初步分析 可能是由于带有大量负电荷的PEG分子和原生质体表面的负电荷
细胞融合-与-单克隆抗体课件
4.22 杂种 细胞 (zázhǒng)
在植物育种中的应用
杂种细胞是一条新的育种途径，
可以产生新经济性状的良种。 科学家已经在禾本科、茄科、豆
科、十字花科等植物中得到了杂 种再生植株。 一些近亲(jìnqīn)植物、有性不亲和 的组合，如马铃薯×番茄等都得 到了再生植株。
细胞融合-与-单克隆抗体
第十九页，共六十二页。
2）营养互补筛选系统：细胞在缺乏一种 或几种营养成分时，不能生长(shēngzhǎng)繁殖， 即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营 养互补作用原理可以筛选杂种细胞。
亲本A：色氨酸缺陷型
亲本B：苏氨酸缺陷型 杂种细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培
细胞融合-与-单克隆抗体
第十页，共六十二页。
甜菜(tiáncài)原生质体电融合过程
1）在高频电流电场 下的相互接触(jiēchù)。 2）脉冲刺激后30s 3)50秒后 4）1.5分钟后 5）6分钟后 6）15分钟后，原生质
体融合完成。
细胞融合-与-单克隆抗体
第十一页，共六十二页。
注意事项
1）对介质要求高，一般用高纯度的蒸馏水 并选用(xuǎnyòng)适当的非电介质溶液，如甘露 醇等配制等渗性介质。
稳定区（C区）
细胞融合-与-单克隆抗体
第三十页，共六十二页。
人体内的五种 抗体 (wǔ zhǒnɡ)
细胞融合-与-单克隆抗体
第三十一页，共六十二页。
4.32单克隆抗体(kàngtǐ)的制备
单克隆抗体(monoclonal antibody，简称
McAb)：将能够产生抗体的B淋巴细胞和具 有无限增殖力的骨髓瘤细胞融合在一起， 形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体 外快速生长，又能持续分泌成分单一的 特异性抗体。这种单一类型的只针对(zhēnduì) 某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单 克隆抗体。
细胞融合与单克隆抗体
41
二、单克隆抗体技术：
1. 免疫动物
2. 脾细胞分离
3. 骨髓瘤细胞的准备 4. 细胞融合 5. 融合细胞的筛选与 克隆
6. 单克隆抗体的大量 制备
42
1. 免疫动物：
▶ 免疫动物的目的是希望B细胞在抗原刺 激下分化增殖，使之有利于融合成杂交 瘤细胞，尤其是能分泌特异性抗体的杂 交瘤融合细胞频率增加。 ▶ 动物选择应与骨髓瘤细胞来源相同的同 一品系动物，多为BALB/c小鼠。
• 融合率高，可达50%~80%；
• 可用于细胞数量很少的融合；
• 可定向诱导细胞融合;
• 有利于融合细胞的挑选。
26
电融合的不利之处：
• 融合仪价格昂贵； • 两细胞大小差异较大时，电压较难选择； • 融合膜成分不同时细胞较难融合
27
二、融合细胞的筛选
▶ 在细胞融合过程中，不仅两类不同细胞间发
异核细胞、尤其双核异核细胞会存活。并 通过有丝分裂使两个不同亲本细胞的染色 体合并在一个细胞核中，形成杂交细胞。
▶ 利用酶缺陷型、营养缺陷型、温度敏感性、
形态和行为等标志，建立了多种选择选择 系统，最常用的是酶缺陷型HAT选择培养 法。
29
1. HAT选择系统（酶缺陷型）
• HAT系统为次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 和胸腺嘧啶核苷(T)的缩写。它是根据嘌 呤和嘧啶生物合成途径设计的分离杂种 细胞特殊的培养基。
第三章
细胞融合与
单克隆抗体
1
第一节 细胞融合
2
细胞融合(cell fusion)：又称体细胞
杂交(somatic hybridization)或细胞杂交
细胞融合和单抗
第56天 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水）
第61天 细胞融合
单抗制备过程
免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细
胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方
案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官， 刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细 胞。 细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿 内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾 细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下， 各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
基因工隆抗体，是全球第1 个上市的单克隆抗体药 物。利妥昔单克隆抗体是抗体类药物中的主要品种，占据了全球抗体 市场份额的30%，该品由Genentech 公司与罗氏公司共同开发上市， 商品名为“美罗华”，年销售额超过33 亿美元，主要用于治疗复发性、 顽固性低度或滤泡性非何杰金淋巴瘤，目前该药也被批准用于类风湿 性关节炎。
(2)体外培养法 将杂交瘤细胞臵于培养瓶中进行培养。在培养过程中， 杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细 胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗 体量有限。近年来，各种新型培养技术和装臵不断出现，大大提高 了抗体的生产量。
单抗制备相关技术
细胞融合方法 细胞融合的方法有物理法，如电融合、激光融合，化学融合法和生 物融合法，如灭活的仙台病毒，此处例举化学融合法中的一种即聚 乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量为200～700时，呈无 色、无臭的粘稠状液体，分子量大于1000时，呈乳白色蜡状固体， 能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂，对热稳定，与许多化学药品 不起作用。用作细胞融合剂的聚乙二醇一般选用分子量为4000者， 常用浓度为50%，pH8.0～pH8.2（用10%NaHCO3调整），分子量 小的PEG，融合效应差，又有毒性，分子量过大，则粘性太大，不 易操作。50%浓度，pH偏碱时融合效应最高。也有采用30%～50% 浓度的PEG加上10%二甲亚砜。
细胞融合与单克隆抗体
优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过
程直观； 整合率高
缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性
2、胚胎干细胞（ES细胞）法
ES细胞是早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜 能细胞系。
1．核受体细胞的准备 去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。 卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进行超排处理， 从输卵管冲出体内成熟的卵母细胞。二是从屠宰场收集卵巢，吸出 滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受 体。
2．核供体细胞的准备 在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，
该细胞必须保持有供体动物完整的基因组； 其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细
胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成 从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。
供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供 体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。
3．细胞核移植 常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质
细胞融合和单克隆抗体 胡丽芳
一、细胞融合
细胞融合，又称体细胞杂交或细胞杂交，是指在离体条件 下用人工方法将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞 通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信 息的细胞。 细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。
广泛应用于单克隆抗体制备、生物的远缘杂交、新品种培 育等。
体外培养 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
单抗的制备过程要点：
1. 动物特异性免疫 2. 分离B淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞
细胞融合与单克隆抗体课件
二、单克隆抗体 抗体
单个 细胞 无性 繁殖
什么是抗体？抗体用在医学上有何作用？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗 原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗体存在于生物体的什么部位？ 血清、组织液及外分泌液中。 血清 传统方法如何得到抗体？ 反复向动物体内注射抗原，从血清中分离抗体。
这样得到的抗体在产量如何？纯度高吗？特异 性如何？ 产量低、纯度低、特异性差。 什么细胞能产生抗体？每一个这样的细 胞能产生几种抗体？ 如何产生大量的单克隆抗体？
细胞A
物理法 化学法
细胞B
灭活的病毒
杂交细胞
灭活的病毒诱导细胞融合的原理是什么？ 灭活的含义是什么？（52页资料）
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仙台病毒
紫外线
丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合）
3、过程：
为何要用灭活的病毒？
动物细胞融合成功的 标志是什么？
此时细胞的核型特点？
特异性强，灵敏度高，化学性质单一。 3、应用： （1）临床诊断 准确、高效、简易、快速。
（2）用于治疗疾病和运载药物 比如“生物导弹”
能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是 Ａ．组织培养 Ｂ．细胞融合 Ｃ．胚胎移植 Ｄ．细胞核移植
动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中， 正确的是 Ａ．诱导融合的方法完全相同 Ｂ．所用的技术手段完全相同 Ｃ．所采用的原理完全相同 Ｄ．都能形成杂种细胞
思考题 1.克隆动物是指？
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2.核移植的一般操作过程？
2.2.2
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细胞融合与单克隆抗体
一、动物细胞融合
1、概念：
也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结 合形成一个细胞的过程。 形成的细胞称杂交细胞
人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第2章 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
3.[教材P51拓展应用]假如你掌握了动物细胞融合技术,你想用这种技术来 解决哪些问题?解决这些问题的大致思路是怎样的?这样做会有什么风险? 提示 可以利用动物细胞融合技术培育多倍体胚胎,研究其发育机制,甚至 可能培育出新的物种。但是,目前相关技术还不成熟,存在融合率低、胚胎 死亡率高等问题,并且还可能带来一些伦理方面的问题。
视角2动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 2.下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,描述正确的是( D ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法也 完全相同 B.动物细胞培养可用于检测有毒物质,茎尖培养可用于植物抗病毒 C.动物细胞融合后,可以通过体外适宜条件培养获得新物种 D.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基的物理性质不同
A.ADC中的抗体能特异性识别并杀伤肿瘤细胞 B.ADC进入肿瘤细胞的过程需要蛋白质参与并消耗能量 C.含ADC的小泡与溶酶体融合后,溶酶体裂解释放药物引起细胞坏死 D.利用放射性同位素或荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤、心血管 畸形等疾病
答案 BD
解析 由题干信息可知,抗体—药物偶联物(ADC)能借助其中抗体的作用特 异性识别肿瘤抗原从而将细胞毒素类药物带入肿瘤细胞,实现了对肿瘤细 胞的选择性杀伤,A项错误;ADC进入肿瘤细胞的方式是胞吞,该过程需要消 耗肿瘤细胞代谢产生的ATP,并且需要蛋白质的参与,B项正确;含ADC的小 泡与溶酶体融合后,溶酶体裂解诱导ADC解体,释放药物引起肿瘤细胞凋 亡,C项错误;利用放射性同位素或荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤、 心血管畸形等疾病,该过程利用抗原—抗体特异性结合原理实现,D项正确。
专题动物细胞融合与单克隆抗体
细胞A、B ↓融合
杂交细胞
↓ 杂种细胞
↓有丝分裂 多个相同杂交细胞
↓植物组,织培养 杂种植株
植物体细胞杂交
动物细胞融合
相关酶
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
融合方 物理法：离心、电激、振动； 除物理法和化学法外还
法 化学法：聚乙二醇等试剂诱导 可以用灭活的病毒诱导
结果
杂种植株
杂交细胞
意义
突破了有性杂交方法的 克服了远缘杂交的不亲和性，
提示：(1)每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但 不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。 若将两种细胞融合在一起，既能产生一种特异性抗体又能快速 增殖。
(2)未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B－B融 合细胞、瘤－瘤融合细胞、B－瘤融合细胞。
(3)第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步筛选的 目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。
[跟随名师·解疑难] 1．血清抗体与单克隆抗体的比较
名称产生特点 Nhomakorabea一般从血清中分离，产量 血清抗体 由B淋巴细胞分泌
低、纯度低、特异性差
特异性强、灵敏度高，能 单克隆抗体 由杂交瘤细胞分泌
大量制备
2．制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同 (1)第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及 B—B融合、瘤—瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出杂 交瘤细胞。 (2)第二次筛选是将产生特定抗体的B—瘤细胞通过细胞培 养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B 淋巴细胞时会取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以 需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融 合，其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现 出细胞膜具有一定的流动性。
第2章 第2节 动物细胞融合技术与单克隆抗体 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体课标内容要求核心素养对接1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
1.生命观念：以细胞结构与功能为基础，理解动物细胞融合的内涵。
2．科学思维：结合具体实例，以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。
3．社会责任：说明单克隆抗体的特点及应用。
一、动物细胞融合技术1．概念使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．诱导原理和结果(1)诱导原理：细胞膜的流动性。
(2)诱导结果：形成杂交细胞。
3．诱导方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
4．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．动物细胞融合技术的应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制备单克隆抗体。
二、单克隆抗体1．制备原理(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种特异性抗体。
(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖。
(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能无限增殖又能产生大量特定抗体。
2．制备过程3．单克隆抗体的优点能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。
4．单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核的融合。
(√) 2．与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒。
(×) 提示：动物细胞融合特有的诱导因素为灭活的病毒。
3．用特定的抗原对小鼠进行免疫后，从小鼠脾脏中只能得到一种B淋巴细胞。
(×) 提示：免疫后的小鼠从脾脏中获取的是多种B淋巴细胞。
4．单克隆抗体是单个B淋巴细胞增殖并产生的抗体。
生物-动物细胞融合技术与单克隆抗体
动物细胞融合技术与单克隆抗体[高中生物] 1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。
2.概述单克隆抗体的制备过程。
一、动物细胞融合技术1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．原理：细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法Error!4．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制造单克隆抗体。
判断正误(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒( ) (2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构( ) (3)二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞( )答案 (1)× (2)√ (3)×探讨点 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较1．19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。
如何解释这一现象？提示 病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
2．比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？提示 动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
(2)两者在方法上有什么异同？提示 都可用聚乙二醇(PEG)融合法和电融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活病毒诱导法诱导细胞融合。
(3)两者在最终结果上有什么不同？提示 动物细胞融合最终得到的是杂交细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。
核心归纳 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再经植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca 2＋—高pH 融合法、电融合法、离心法PEG 融合法、电融合法、灭活病毒诱导法结果形成杂种植株形成杂交细胞，以生产细胞产品意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能1．下列关于动物细胞融合的说法，不正确的是( )A ．常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法、紫外线照射等B ．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的细胞称为杂交细胞C ．动物细胞融合就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程D ．细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能答案 A解析 常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法，A 错误。
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温故而知新
1、下列与细胞工程技术相关的表述中，不正确的是（）
A: 植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍
B: 动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同
C: 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同
D: 植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性
2、关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述,错误的是( )
A. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B. 烟草叶片离体培养能产生新个体,小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
C. 动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质,茎尖培养可用于植物脱除病毒
3、如图为白菜—甘蓝杂种植株的培育过程。
下列说法正确的是（）
A: 图示白菜—甘蓝植株不能结籽
B: 愈伤组织的代谢类型是自养需氧型
C: 上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂
D: 白菜—甘蓝杂种植株具有的性状是基因选择性表达的结果
4、下表为动、植物细胞工程的有关内容比较,你认为错误的是
( )
项目植物细胞工程动物细胞工程
特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理制细胞悬浮液
融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法
典型应用人工种子、杂种植物单克隆抗体的制备
培养基区别麦芽糖是离体组织赖以生长的成分一般需要加动物血清
A. 0处
B. 1处
C. 2处
D. 3处
5、科学家把天竺葵的原生质体和香茅草的原生质体进行诱导融合，培育出的驱蚊草含有香茅醛，能散发出一种特殊的达到驱蚊且对人体无害的效果。
下列关于驱蚊草培育的叙述中，错误的是( )
A、驱蚊草的培育属于细胞工程育种，其优点是能克服远源杂交不亲和的障碍
B、驱蚊草培育过程要用到纤维素酶果胶酶、PEG等试剂或离心、振动、电激等方法
C、驱蚊草培育过程是植物体细胞杂交，不同于植物组织培养，无愈伤组织和试管苗形成
D、驱蚊草不能通过天竺葵和香茅草杂交而获得是因为不同物种间存在生殖隔离
6、科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株,为了便于杂种细胞的筛选和鉴定,科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质,其培育过程如图所示。
(1)植物体细胞杂交依据的生物学原理有_________________________________。
(2)过程①常用的酶是____________________,细胞融合完成的标志是_________________ 。
(3)植物原生质体融合过程常利用化学试剂______________诱导融合,在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察,根据细胞膜表面的荧光的不同可观察到_______种不同的原生质体(只考虑
两两融合),当观察到______________时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
(4)过程③和过程④依次为___________________,过程④中的培养基常添加的植物激素是___________________。
(5)若番茄细胞内有m条染色体,马铃薯细胞中含n条染色体,则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含____ 条染色体。
若杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体,则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_______ 植株。
细胞融合和单克隆抗体
1、关于动物细胞融合的说法不正确的是（）。
A: 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
B: 动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C: 常用的诱导动物细胞融合的手段有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射
D: 细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
2、下列有关利用动物细胞工程生产单克隆抗体的叙述,错误的是( )
A. 单克隆抗体制备使用的主要生物材料是骨髓瘤细胞和浆细胞
B. 单克隆抗体制备的原理之一是一个浆细胞可以产生多种特异性抗体
C. 筛选能分泌所需抗体的杂交瘤细胞运用了抗原一抗体特异性反应原理
D. 单克隆抗体具有纯度高、产量大、灵敏度高等优点
3、下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较，正确的是（）。
A: 两者应用的原理都是高度分化的细胞具有全能性
B: 两者都可用聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合
C: 两者最终都能获得杂种生物
D: 两者都已用于大量生产分泌蛋白
4、很多生物工程技术都需要进行“筛选”,下列与之相关的叙述中正确的是( )
A. 目的基因导入受体细胞后,需要筛选,以确保目的基因已经成功导入
B. 植物体细胞杂交过程中需要筛选出杂种植株,以获得新类型
C. 动物细胞融合后要进行筛选,选择出杂种细胞进行细胞培养
D. 单克隆抗体制备的第一次筛选,要选择出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
5、植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是( )
A、纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性
B、植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性
C、原生质体融合和动物细胞融合——生物膜的流动性
D、紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂
6、下列说法不正确的是( )
A. 体细胞融合技术可用于制备单克隆抗体
B. B淋巴细胞与肿瘤细胞融合,杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因
C. 利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制,培育远缘杂种
D. 用动、植物成体的体细胞进行离体培养,都须用液体培养基
7、下列关于细胞工程的叙述，不正确的是（）
A、植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
B、动物细胞融合的过程包括杂交细胞形成杂交新个体
C、细胞融合包括质融合和核融合，细胞壁形成是质融合完成的标志
D、二倍体生物细胞融合后，遗传物质为二个细胞遗传物质的组合
8、下列是应用动物细胞工程获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，其中对单克隆抗体制备的相关叙述错误的是（）。
①从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞
②将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞
③将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养④筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞
⑤利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞⑥从小鼠腹水中提取抗体
⑦利用促细胞融合因子促使细胞融合
A: 实验顺序应该是①②⑦⑤④③⑥B: ③过程产生多个杂交瘤细胞的过程称为克隆C: ⑦过程获得的细胞均可无限增殖
D: 利用细胞融合生产单克隆抗体过程中通常要经过两次筛选
9、如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程,有关叙述错误的是( )
A. 图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原
B. 利用聚乙二醇、灭活的病毒和电激等方法可诱导细胞融合获得乙
C. 用特定的选择培养基对乙筛选,融合细胞均能生长,未融合细胞均不能生长
D. 丙需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁
10、下列关于细胞工程的叙述,正确的是( )
A. 细胞的全能性是植物组织培养和动物细胞培养的理论基础
B. 进行植物组织培养,需先用酶解法去掉细胞壁
C. 要获取单克隆抗体只能将杂交瘤细胞注入小鼠体内培养
D. 动物细胞培养可作为检测有害物质的有效手段
11、下图表示单克隆抗体的制备过程，请回答下列问题：
（1）图中小鼠需经过___________________________才能用于单克隆抗体生产。
（2）细胞A具有产生___________的功能。
细胞B的突出特点是__________________。
A、B细胞融合的诱导因素通常是___________或聚乙二醇，融合后具有______________特征的细胞是符合要求的。
（3）若细胞A基因型为HH，细胞B基因型为SS，生产的目标是基因型为_____________的细胞。
在两两融合后的众多细胞中，基因型还可能有_____________ 。
可通过特定的____________培养基将所需的融合细胞筛选出来。
（4）培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有____________ 。
细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞的增多，需要定期地用______________处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，以便于分装到更多的培养瓶中继续培养。
（5）单克隆抗体与常规抗体相比，最大的优越性是________________________________。
（6）淋巴细胞是由动物__________中的__________________分化发育而来的。
12、如图是单克隆抗体制备流程阶段示意图.
(1)________________技术是单克隆抗体技术
的基础.
(2)根据培养基的用途分类,图中培养基属于
________________培养基.
(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比.最大
的优越性是__________________________．
(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体
融合常用诱导剂外,还可以采用___________________．
(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的____________特点,又具备淋巴细胞的___________________特点.
(6)淋巴细胞是由动物体________ 中的___________________细胞分化、发育而来.
(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是___________________．。