过氧化物酶染色法
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1. 检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。
2. 检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾MPO染色法，安全、实用，其原理未明。
一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化KI析出碘，碘与W-G结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。
3. 性能特征无。
4. 标本要求4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。
凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。
4.2 标本类型：骨髓。
4.3标本容器：洁净载玻片。
4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。
4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。
4.5 标本运输:室温条件下运输。
4.6 标本拒收标准：参照《采集手册》。
5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。
5.2试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加30% H202 50～100 ul，储存于棕色瓶，备用。
5.2.2过氧化物酶染色液：100 μl碘化钾溶液和1 ml磷酸盐缓冲液混和。
（1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水50 ml，储存于棕色瓶，备用。
5.3 试剂来源：自配试剂。
6. 环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
7. 检测前准备在玻片头端贴上标签编号。
8. 校准/定标无。
9. 质量控制无。
10. 标本检测10.1在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色1-2分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。
dab显色原理
dab显色原理
DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一，能被催化生成水不溶性的棕黄色产物，能直观地观察到，适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。
建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒，试剂盒里的选色液都是配置好直接用的，可以根据实验需要选择不同的颜色DAB:3，3-二氨基联苯胺，该溶液显色后阳性反应产物呈棕褐色。
是HRP常用的电子供体，电子供体被氧化后，迅速改变颜色，通过聚合等反应，生成不溶性有色颗粒，并就地原位沉淀。
DAB显色为褐色。
HRP显色反应原理：HRP＋H2O2+DAB（电子供体）------HRP＋H2O ＋电子供体（氧化型）；这里DAB在被氧化后，通过具体行程棕褐色的沉淀，在原位上显示颜色。
DAB显色液主要用于过氧化物酶法（如酶标法、PAP法等），其终产物可直接在普通环境下观察。
但有几点需注意：DAB溶解要完全，否则未溶解的颗粒沉积于标本上影响观察；DAB浓度不易过高，否则显色液呈棕色，增加背景染色，另外DAB有致癌作用，故操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色2011年03月02日老三届极品居认真做事，低调做人。
记住该记住的，忘记该忘记的，改变能改变的，接受不能改变的。
一、概述细胞化学是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。
在细胞形态学的基础上，运用化学反应的原理对血细胞内的各种生化组成及其代谢产物（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。
细胞化学染色临床上主要用于：①辅助判断白血病的细胞类型。
白血病的诊断以形态学为基础，但有时仅采用瑞式染色是难以判断白血病细胞的类型的。
不同的细胞系列，其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。
因此根据细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。
因此临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。
②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。
在病理情况下，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。
如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
③观察疾病的疗效和预后。
当病理状况纠正后，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变。
④发病机制的研究。
细胞化学染色的基本步骤为固定、显示及复染。
1、固定为了保持细胞结构及化学成分的不变，需要对细胞进行固定。
根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖等变成不溶性物质。
固定的方法有物理法和化学法，临床常用化学法固定。
物理法包括干燥和火焰固定，化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。
采用蒸气或液体固定。
（1）蒸气固定：甲醛是常用的固定剂，极易挥发、氧化，常用40％甲醛蒸气固定。
方法为在封闭的玻璃器皿中加入40％甲醛，将涂片血膜朝下，固定5～10分钟。
（2）液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可将两种或两种以上固定液混合，如10％甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等。
过氧化物酶(POX)染色
过氧化物酶(POX)染色[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。
受体被氧化成联苯胺蓝。
再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。
[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。
贮于棕色瓶中，可保存数月。
工作时应小心溶液污染皮肤。
2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。
[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。
(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。
(3)涂片用流水冲洗。
待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。
[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。
阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。
弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。
阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。
相当于(++)。
强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。
相当于(+++）。
[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。
嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。
嗜碱性细胞为阴性。
(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。
(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。
FAB分型规定前者阳性率＜3％。
编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。
(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。
(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。
双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。
涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。
细胞化学染色
【注意事项】
1．过氧化氢必须新鲜配制。过氧化氢的最适 浓度是0．05mol／L左右，浓度过高，反 而抑制酶作用。一般采用5ml蒸馏水，加3 ％过氧化氢一滴。若用30％的过氧化氢时 ，只能在100ml蒸馏水中加1～2滴。涂片 中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色 或绿色，即示过氧化氢过浓。若过氧化氢 加于血片上不产生气泡，则示无效。
2．2g／L核固红-硫酸铝溶液 取硫酸铝2g溶于 100ml蒸馏水中，再加入核固红 (Emerk出品 )0.2g。置37℃水浴中1h并随时振荡，使溶解， 过滤后使用。
【步骤和方法】
1.选骨髓小粒丰富的骨髓片，用甲醇固定 10min，待干。
2．玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，染色 30min(可置37℃环境)
3．水洗时勿在水流下猛冲，以免髓粒脱 落。
3．用于诊断铁粒幼红细胞性贫血 这时能 找到数量不等的环型铁粒幼红细胞，并多 见粗颗粒的Ⅲ型与Ⅳ型铁粒幼红细胞。
【注意事项】
1．玻璃片需经无铁处理 将新片经清洁液 浸泡24h，取出反复水洗后浸入95%酒精 中24h，晾干，再浸泡在5％盐酸中24h， 用双重蒸馏水反复浸洗玻片，取出烤干后 备用。
2．酸性亚铁氰化钾液须新鲜配制。
1．急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原 始粒细胞呈阳性反应，阳性率可>30%， 在分化较差的白血病，如AML-M0和未分 化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞 的POX染色也可呈阴性。
2．急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强 阳性反应。
3．急性淋巴细胞呈阴性反应，FAB分型规定 POX阳性率<3％。
(++)：有较多的铁颗粒和小珠。
(+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小 块状。
过氧化物酶染色液(联苯胺法)
南京森贝伽生物科技有限公司 网址：/第1页 仅供科研版本号：171024过氧化物酶染色液(联苯胺法)【产品组成】【保存条件】4℃,避光 ,6个月【产品概述】过氧化物酶(Peroxidase ，简称POX 或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH 推荐采用的POX 染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3,3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX 所在部位。
该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX 活性部位呈棕黄色。
【使用方法】1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA 固定液，4℃固定30～60s ，稍水洗。
2、滴加配制好的POX 孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min ，水洗2min 。
3、滴加WG 染色液，孵育30～60s 。
4、直接滴加等量WGbuffer ，染色10～15min 。
5、水洗、晾干、镜检。
【染色结果】粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。
浆细胞及巨核细胞均为阴性。
嗜酸性粒细胞和Auer 小体呈强阳性反应。
阳性反应强度的判断：【临床意义】1、急性粒细胞白血病晚期的原粒细胞呈阳性，颗粒较少且大。
2、急性单核白血病细胞呈阴性或弱阳性，颗粒小且稀疏。
3、单核急性白血病呈阴性或弱阳性。
4、急性早幼粒白血病呈强阳性，某些早幼粒细胞呈阳性，恶性组织细胞呈阴性。
5、急性淋巴细胞白血病呈阴性。
【注意事项】1、血液或骨髓涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2、POX孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
过氧化物酶染色
【目的】指导过氧化物酶染色检查。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
【用途】急性白血病的鉴别诊断，急非淋（粒细胞，单核细胞）阳性，急淋呈阴性反应。
【染色原理】当存在过氧化物酶之活性时，可以将基质（过氧化氢）分解，而产生新生态的氧，此新生态氧进而使无色联苯胺氧化为蓝色的联苯胺。
联苯胺是一种不稳定的中间产物，它可以进一步氧化变成棕色的化合物。
【分布】1．粒细胞系：原粒细胞为阴性，白血病时副原粒细胞可呈阳性反应。
中性粒细胞：自早幼粒细胞起，随细胞成熟而阳性强度也递增。
其阳性颗粒为圆形，规则，直径与嗜苏丹黑颗粒相仿，而比瑞氏染色的特殊颗粒为大。
嗜酸粒细胞：为阳性反应，其颗粒比中性粒细胞的大，着色也深。
嗜碱粒细胞：为阴性反应，但在慢粒白血病时可出现阳性反应。
在粒细胞系统中，过氧化物酶颗粒的出现和逐渐增多，与特殊颗粒的出现和增多有平行关系。
2.单核细胞系：呈弱阳性反应，颗粒数少，细小，着色较浅。
在白血病时可见强阳性。
3．组织细胞（网状细胞）：一般呈阴性反应，部分细胞有不同强度的阳性反应。
4. 其他细胞：均为阴性反应。
【试剂配制】一、3%联苯胺酒精溶液配制: 联苯胺0.3g+碱性品红0.1g+95%乙醇99ml全溶后加入亚硝基铁氰化钠饱和水溶液（36%）1。
此液可保存1-2年。
一、过氧化氢溶液配制: 3%过氧化氢1滴+蒸馏水5ml。
每次用需新鲜配制。
【染色步骤】1. 将新鲜之血或骨髓涂片，滴加0.3%联苯胺酒精溶液4—8滴，盖满涂膜约1分钟。
2.1分钟后，立即加入过氧化氢等量与上液混匀。
3.4—5分钟后，一出现蓝色，立即冲洗，否则颗粒变黑。
4.立即再用瑞氏染色法复染，时间应稍长【结果判断】阳性反应为蓝色或蓝棕色颗粒，定位于胞浆中。
【临床意义】1.急性粒细胞白血病呈阳性反应。
2.单核细胞白血病呈弱阳性反应，但有些病例可呈强阳性反应，故不能与急性粒细胞白血病鉴别，尚需作其他检验。
酵母菌的染色原理
酵母菌的染色原理1. 引言酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中，对于食品工业、医药工业、生物燃料等领域具有重要的应用价值。
为了更好地研究和观察酵母菌的生物学特性，科学家们发展了多种染色方法，使得酵母菌在显微镜下能够呈现出特定的颜色和形态，从而方便了对其结构和功能的研究。
染色是一种将染料应用于细胞或组织的技术，通过与细胞或组织中的特定结构或成分相亲和，使其呈现出明暗对比，以便于观察、分类和研究。
酵母菌的染色方法主要包括生理染色和化学染色两种，本文将重点介绍这两种染色方法的基本原理。
2. 生理染色生理染色即以自然存在于酵母菌细胞中的化学物质为染料，通过特定条件下的显现反应，使酵母菌细胞呈现出特定的颜色。
常用的生理染色方法有电子显微镜术(Electron Microscopic Autoradiography)和酶组化术(Enzyme Histochemistry)等。
2.1 电子显微镜术电子显微镜术是一种应用于酵母菌细胞的高分辨率显微镜术，可以观察到细胞内的超微结构。
在电子显微镜术中，常用的生理染色方法有无抑制性DNA合成的放射性核苷酸(3H-thymidine)标记法和过氧化氢酶(Horseradish Peroxidase, HRP)染色法。
2.1.1 3H-thymidine 标记法在3H-thymidine标记法中，向培养酵母菌细胞的培养基中加入3H-thymidine这一放射性核苷酸。
细胞在生长过程中会吸收并利用3H-thymidine合成DNA，而3H-thymidine的放射性可以用于追踪和定位DNA。
具体操作步骤如下：1.培养酵母菌细胞至合适的生长阶段。
2.向细胞培养基中加入一定浓度的3H-thymidine放射性标记物。
3.孵育一段时间，使细胞摄取3H-thymidine并合成DNA。
4.收集细胞，进行固定和封片。
5.利用放射自显影液使3H-thymidine的放射性信号显现。
实验细胞化学染色POX
M7 PAS(+)
（3）巨核细胞和Sternberg细胞鉴别
巨核细胞PAS强阳性，Sternberg细胞为阴 性或弱阳性。
（4）戈谢氏细胞强阳性，尼曼-皮克细胞阴 性或弱阳性。
（5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴细胞的糖 原积分增高；一般的病毒感染，糖原积分 在正常范围内。
四、中性粒细胞碱性磷酸酶染色
AML-M1
M1 - POX(+)
×Байду номын сангаас
二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
▪ 【试剂】 ▪ 1. 10%甲醛液。 ▪ 2. 苏丹黑B乙醇溶液
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
注意事项
1. 涂片应新鲜制作、厚薄适宜。 2. TMB 配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90
％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向 胞内渗入而使显色反应减弱或消失。 3. 过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。 涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表 示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示 无效。 4. 染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 <5.0会出现假阳性结果。 5. 试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。 6. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则 同一片子上细胞染色情况不一致。
（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
常用血细胞化学染色原理及应用
常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶（peroxidase，POX）能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化，显棕色四甲基苯醌二胺，再加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内酶所在的部位。
[临床意义]临床上主要用于急性白血病类型的鉴别：急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞POX染色均呈阴性反应；急性粒细胞白血病原粒细胞POX 染色呈局灶分布的阳性反应；急性早幼粒细胞白血病颗粒增多的早幼粒细胞POX染色呈强阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义[原理] 过碘酸-雪夫（Pexiodic acid-schiff，PAS）染色又称糖原染色。
胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（Periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫（Schiff）试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。
该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。
[临床意义]1）急性白血病类型的鉴别红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。
2）各类贫血的鉴别 MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。
细胞化学染色检验
失染 。 色 液 适 宜 p H 值 应 为 5 . 5 ， 若
度与加入量不能随意更改。涂片
pH值 <5.0会出现假阳性结果。
中粒细胞看不见阳性颗粒，红细
胞呈棕色或绿色，即表示过氧化
氢过浓。若过氧化氢加于血片上
不 产 生 气 泡试，剂则应示置无于效低。温 暗 处 ， 防 止 光 线 照 射 失 效 。
1. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分
混匀，否则同一片子上细胞染色情况不一致。
临床意义
POX染色是鉴别急性粒细胞白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)、急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia, AMOL)、 急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia, ALL)的重要细 胞化学染色方法。AML时白血病细胞可呈阳性反应, 阳性颗粒一般较 多， 较粗大，常呈局限性分布；ALL时白血病细胞呈阴性反应； AMOL时白血病细胞呈阴性或弱阳性反应，阳性时颗粒稀少、细小， 呈弥散分布。
阴 性：无颗粒。 弱阳性：颗粒小，分布稀疏。 阳 性：颗粒略粗，分布较密集。 强阳性：颗粒粗大，密布于整个胞质中。
注意事项
涂片应新鲜制作、厚薄适宜。
TMB 配制在85％～88％的乙
醇溶液中染色效果较好，勿用
过氧化物酶染色实验
注意事项：
1. 标本应及时固定； 2. 标本未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂等； 3.每次应设阴、阳性对照。
临床意义：
主要用于鉴别急性白血病的类型 1. 急粒：原粒细胞呈阳性反应(+) ~ (+++) 2. 急淋：呈阴性反应(–) 3. 急单：呈弱阳性，急粒单中的原粒、
早幼粒呈强阳性，幼单呈弱阳性。
不同而产生棕黑色颗粒沉着于细胞内。
试剂：
1. Ⅰ液：乙醇、二氨基联苯胺、亚硝基铁 氰化钠、稳定剂等
2. Ⅱ液：H2O2
操作方法：
1. 新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴，室温放置1分 钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后 室温放置5分钟，流水冲洗；
2. 瑞氏染色复染20分钟，流水冲洗后油 镜观察结果。
结果判断：
过氧化物酶染色 实验要求： 1. 掌握过氧化物酶染色的原理、操作、注意
事项、结果判断； 2. 熟悉正常细胞、病理细胞的染色反应及临
床意义。
过氧化物酶染色 (peroxidase pox)
原 理：
血细胞内的过氧化物酶能将底物H2O2 氧化释出新生态氧，后者氧化联苯胺，使之
变成联苯胺蓝，后者显色情况随pox的活力
1. 阴性：胞质内无沉淀物（无色）； 2. 阳性：胞质内出现棕黄或蓝黑色沉淀物； 3. 强阳性
1. 粒系：原粒(–) →早幼粒(+) →成熟中性粒 (阳性 渐强) ；嗜酸粒(+++) ，其颗粒粗大，有 折光性；嗜碱粒(–)；
2. 单核系：原单(–)；幼单、成熟单(±)； 3. 其他：淋巴系、红系、巨核C系、浆C系均(–)。
免疫组化dab与过氧化物酶反应后的生成物
免疫组化dab与过氧化物酶反应后的生成物主要是棕褐色沉淀。
这种反应常用于免疫组化染色中，以检测特定抗原在细胞或组织中的表达情况。
在免疫组化染色过程中，过氧化物酶与DAB反应产生棕褐色沉淀，这种沉淀物会定位在抗原所在的位置，从而显示出抗原的分布和表达情况。
这种染色方法具有较高的灵敏度和特异性，因此在生物医学研究中得到了广泛应用。
需要注意的是，DAB与过氧化物酶反应产生的棕褐色沉淀物的颜色深浅与抗原的表达量有关，表达量越高，颜色越深。
因此，通过观察和比较不同组织或细胞中DAB染色的深浅程度，可以初步判断抗原的表达水平和分布情况。
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项目名称：碱性磷酸酶染色法检验标本：外周血涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：在PH9.5时，底物被白细胞的酶水解，释出磷酸根和芳香萘胺，后者与偶氮盐偶合，形成有色沉淀。
试剂：1.固定液（保存于4℃）冰箱2. 0.05缓冲液（PH9.4~9.6）保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤：1.血片或髓片放置4C固定液中30秒，流水冲洗，空气晾干2.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后，倒入缓冲液中（2）再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中，置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗，晾干7.直接油镜观片结果：酶活动处呈亮红颗粒正常参考值：积分10～100分/100个中性分叶核细胞意义：NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。
NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。
注意事项：1.外周血涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：过氧化物酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色检验原理：过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧，氧化联苯胺，引起在过氧化酶活性处，沉积棕黑色的化合物。
试剂：1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液（3%H2O2+蒸馏水5ml）操作步骤：1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后，加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后，流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗，晒干结果：酶活力处呈棕黑色。
意义：急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。
急淋POX呈阴性反应，FAB分型规定阳性率＜3%。
急非淋呈阳性反应，阳性率≥3%。
注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即染色。
2. H2O2需新鲜配制，浓度要适中，过浓、过稀都不可。
项目名称：酸性磷酸酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：同硷性磷酸酶，区别在于底物不同。
最重要的是反应时PH值不同，因而捕获剂（偶氮盐）液不同试剂：1.固定液（保存于4℃冰箱）2. 0.1M醋酸缓冲液PH5.03.底物4.二甲基甲酰胺5.盐酸副品红6.亚硝酸钠操作步骤：1.涂片置于4C固定液中30秒2.混合等量亚硝酸钠与副品红溶液（六偶氮化副品红）约一分钟后用3.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后倒入缓冲液中（2）将六偶氮化副品红加入上述溶液中4.涂片放入工作液中，置37℃水温箱90分钟5.流水洗，晾干6.1%甲基绿复染7.水稍洗8.晾干9.直接油镜晾干结果：酶活力处呈桔红色意义：毛细胞性白血病细胞呈阳性，并抗酒石酸注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：非特异性脂酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：同硷性磷酸酶，仅底物用醋酸盐试剂：1.固定液2.0.1M磷酸缓冲液PH6.83.底物4.丙酮5.乙烯丙二醇6.坚固蓝BB操作步骤：1.涂片用1-2滴固定液蒸气固定5分钟2.水稍洗，晾干3.工作液（1）用丙酮及乙烯丙二醇溶解底物后倒入缓冲液中4.将涂片放入工作液中，置37℃水温箱1小时5.流水洗6. 1%中性红溶液复染7.水洗，晾干8.直接油镜涂片结果：酶活力处呈蓝色意义：区别粒系及单核细胞系（用于M4及M3），单核细胞呈阳性反应。
但被NaF抑制注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：氯醋酸酯酶检验标本：骨髓涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：同硷性磷酸酶，但底物不同试剂：1.固定液2. 1/15M磷酸盐缓冲液PH7.43.底物4.二甲基甲酰胺5.盐酸副品红6.亚硝酸钠操作步骤：1.涂片用1-2滴固定液蒸气固定5分钟2.混合等量副品红和亚硝酸钠，约一分钟后偶合成六偶氮化副品红3.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后倒入缓冲液中（2）将六偶氮化副品红放入上述溶液中4.涂片放入工作液中，置37℃水温箱30分钟5.流水洗，晾干6. 1%甲基绿复染7.水洗，晾干8.直接油镜观片结果：酶活力处呈红色意义：中性粒细胞呈阳性反应，用以证实粒系白血病注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：糖元染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色原理：过碘酸能使细胞内乙2醇基氧化成二醛，醛基和雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合呈红色反应，沉着含糖元的细胞结构上。
标本上所能显红色的糖类主要为多糖包括糖元，糖蛋元，粘蛋白，粘多糖和糖脂等试剂：1.固定液2.过碘酸溶液3.雪夫氏溶液操作步骤：1.涂片滴加固定液固定3-5分钟，水洗，晾干2.滴加过碘酸于涂片上氧化10分钟，水洗，晾干3.放入雪夫氏溶液中，置37℃水温箱5~10分钟。
4.取出后流水冲洗10～20分钟，晾干，镜检。
5.可用1%甲绿或苏木精复染结果：PAS阳性物呈红色颗粒状或弥散状，定位于细胞浆中。
红色的深度因所含糖元的量有关，量少呈淡红色，量多呈深红色。
意义：1.粒细胞系统自早幼粒阶段以下均可呈阳性，且随细胞分化而加强2.单核细胞系统可呈弥散状弱阳性伴细颗粒状3.淋巴细胞系统可呈块状或粗颗粒状阳性4.巨核细胞系统（血小板）可呈粗块状或团块状阳性5.红细胞系统正常情况下呈阳性，当某些疾病时可呈阳性，如：MDS，AML-MB时。
注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：骨髓铁染色检验标本：骨髓涂片收费标准： 30元检验方法：细胞化学染色原理：含铁血黄素的铁离子在盐酸环境中与低铁氰化钾作用，生成蓝色的低铁氰化铁，既普鲁士蓝反应。
试剂：1.200g/L亚铁氰化钾溶液（AR）2.浓盐酸操作步骤：1.在染缸中加入亚铁氰化钾溶液，再将浓盐酸慢慢滴入，边滴边摇，直到出现白色沉淀为止，然后再滴入亚铁氰化钾溶液至白色沉淀消失为止。
2.将含有较多骨髓小粒的骨髓涂片放入染缸中，37℃水温箱中1小时，取出，流水冲洗。
3.石碳酸复红复染1分钟结果：外铁：骨髓小粒内可见蓝色铁粒或铁小珠。
内铁：有核红细胞内可见蓝色铁颗粒。
正常参考值：外铁：“+”-“++”内铁：30% - 90%意义：1.减少：缺铁性贫血细胞2. 增加：铁粒幼细胞性贫血、再障、溶血性贫血等。
注意事项：1.必需用质量好的试剂。
2.所用的器材必须去铁处理。
3.需用含骨髓小粒多的涂片。
项目名称：蛇毒因子溶血试验检验标本：静脉血收费标准：40元检验方法：细胞免疫法原理：CoF试剂是从中华眼镜蛇毒中提取的活性组份，能特异性活化血清中的补体，使对活化补体异常敏感的阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）红细胞破裂溶血，因而可特异性检测PNH。
试剂：1.CoF试剂每瓶用生理盐水1ml溶解2.AB血清每瓶用生理盐水0.6ml溶解操作步骤：1.采静脉血4.5ml，加入置有6-8颗小玻璃珠的烧杯中，轻轻摇动5-10分钟，倒出脱纤维血，2000rpm离心5min，分离红细胞，用生理盐水洗涤，2000rpm离心5min，如此2-3次，至上清液澄清为止。
用生理盐水配成2%红细胞悬液（可取悬液0.1ml加蒸馏水4.3ml，混匀，415nm处比色，如吸光度为0.8—0.9即可）。
2.按下表操作管号 1管 2管 3管 4管2%红细胞悬液 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1mlAB血清 0.1ml 0.1mlCoF试剂 0.2ml 0.2ml37℃温育1小时，其间摇动一次生理盐水 4.0ml 4.2ml 4.1ml蒸馏水 4.3ml2000rpm离心5min，取上清液在415nm处比色，以3管调零注：临床可用生理盐水调零3.计算：溶血度=（A1-A2）/A4 *100%（A1、A2、A4分别为1、2、4管的吸光度）结果及意义：1. 溶血度＞10%，为阳性，可诊断PNH；2．溶血度5-10%，为可疑阳性，结合其它指标作出诊断；3. 溶血度＜5%，为阴性，可排除PNH注意事项： 1.CoF试剂及AB血清系冻干制品，置4℃下保存两年。
2.CoF溶液在4℃下保存1个月。
3.AB型血清溶解后必须2小时之内用。