实验七过氧化物酶的显示

洋葱过氧化物酶实验报告

一、实验目的1. 了解洋葱过氧化物酶的分布情况。

2. 掌握测定洋葱过氧化物酶活性的方法。

3. 分析洋葱过氧化物酶在不同处理条件下的活性变化。

二、实验原理过氧化物酶（POD）是一种广泛存在于植物体内的酶，具有催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）的功能。

在实验中，通过测定过氧化氢分解速率来间接反映过氧化物酶的活性。

本实验采用TMB法测定洋葱过氧化物酶活性，TMB在过氧化物酶的作用下，会生成蓝色的化合物，通过测定蓝色化合物的吸光度，可以计算出过氧化物酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱、蒸馏水、TMB溶液、过氧化氢溶液、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、冰浴等。

2. 实验仪器：分光光度计、电子天平、研钵、移液器、试管等。

四、实验方法1. 洋葱过氧化物酶提取液的制备：取洋葱鳞片叶，用蒸馏水冲洗干净，剪碎后加入磷酸盐缓冲液（pH 6.0），在冰浴中研磨，制成洋葱过氧化物酶提取液。

2. TMB反应体系的制备：取一定量的TMB溶液和过氧化氢溶液，混合均匀，加入磷酸盐缓冲液（pH 6.0），配制成TMB反应体系。

3. 过氧化物酶活性测定：取一定量的洋葱过氧化物酶提取液，加入TMB反应体系，在特定波长下测定吸光度，根据吸光度变化计算过氧化物酶活性。

五、实验结果与分析1. 洋葱过氧化物酶的分布情况：通过对洋葱不同部位（叶片、鳞片叶、茎）的过氧化物酶活性测定，发现洋葱叶片中过氧化物酶活性最高，其次是鳞片叶和茎。

这表明过氧化物酶在洋葱叶片中分布较为集中，可能与叶片的光合作用、氧化还原反应有关。

2. 不同处理条件下过氧化物酶活性的变化：将洋葱过氧化物酶提取液分别置于不同温度（0℃、25℃、50℃）、不同pH值（pH 4.0、pH 6.0、pH 8.0）条件下处理，测定过氧化物酶活性。

结果显示，在适宜的温度（25℃）和pH值（pH 6.0）条件下，过氧化物酶活性最高。

这表明洋葱过氧化物酶活性受温度和pH值的影响较大。

细胞内过氧化酶的显示

实验九细胞内过氧化酶的显示【目的要求】1、了解显示细胞内过氧化酶的方法的原理。

2、熟悉过氧化物酶在细胞中的一般分布。

【实验原理】细胞中存在的过氧化物酶系能将许多胺类氧化成有色化合物。

例如联苯胺便可被细胞中的过氧化酶氧化成蓝色或棕色的物质（蓝色物质为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙），从而显示出细胞内过氧化物酶的存在和分布。

另外，细胞的代谢过程中会产生对机体有害的过氧化氢（H2O2），可被细胞中存在的过氧化氢酶分解成氧气和水。

通过植物块茎与过氧化氢相遇后所发生的反应可间接证实该酶的存在。

【器材与试剂】1、器材：光学显微镜、剪刀、镊子、刀片、染色缸、牙签、载玻片、盖玻片。

2、材料：大白鼠（或豚鼠）、马铃薯。

3、试剂：3%过氧化氢溶液、0.5%硫酸铜溶液、联苯胺混合液、1%番红水溶液。

4、试剂的配制：（1）3%的过氧化氢溶液：量取H2O21.5ml加入到48.5ml蒸馏水中。

（2）0.5%硫酸铜溶液：称取硫酸铜0.5g溶于100ml蒸馏水中，再加3%的过氧化氢溶液2滴。

（3）1%番红水溶液：称取番红O（Safranine O）染料粉1.0g溶于100ml蒸馏水中。

【内容与方法】一、大白鼠（或豚鼠）骨髓细胞过氧化物酶的显示1、将大白鼠置于装有乙醚棉球的标本缸中，使其麻醉后断颈处死，剪开其大腿上的皮肤和肌肉，取出股骨，用剪刀剪断或折断，再用牙签挑取骨髓制备骨髓涂片，晾干。

注意：涂片时要薄而均匀，否则无法观察结果。

2、将涂片放入盛有0.5%硫酸铜的染色缸中固定30秒钟。

3、取出涂片直接转入盛有联苯胺混合液的染色缸中处理3分钟。

4、清水冲洗。

5、放入1%番红溶液中处理1分钟。

6、清水冲洗，室温下晾干。

7、观察。

光镜下可见骨髓细胞中存在一些被染成蓝色或棕色的颗粒，便是过氧化氢酶存在的部位。

注：该项实验也可用小鼠的血液为材料，观察血液中巨噬细胞所呈现出的蓝棕色颗粒。

二、植物细胞中过氧化氢酶的间接显示取马铃薯块茎一个，用徒手切片法切取一小薄片放于载玻片上，滴加3%的过氧化氢溶液，稍等片刻，可见组织四周出现大量的气泡，提示植物细胞中有过氧化氢酶的存在，用煮熟的马铃薯重复上述过程，结果应该如何？【作业与思考】1、绘图表示细胞内过氧化物酶的分布。

植物过氧化物酶实验报告

一、实验目的1. 了解过氧化物酶在植物生理过程中的作用。

2. 掌握愈创木酚法测定过氧化物酶活性的原理和方法。

3. 通过实验，提高学生运用实验方法分析植物生理问题的能力。

二、实验原理过氧化物酶（POD）是一种广泛存在于植物体内的酶，催化H2O2分解产生O2和H2O。

愈创木酚法是一种测定POD活性的常用方法，其原理是POD催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物，该产物在470 nm处有最大光吸收值。

通过测定该波长下的吸光度变化，可以计算出POD的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯块茎2. 仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管3. 试剂：100 mmol/L的磷酸缓冲液（pH 6.0）、愈创木酚溶液、30% H2O2、20 mmol/L KH2PO4四、实验步骤1. 制备酶提取液：取马铃薯块茎约0.5 g，加入5 mL磷酸缓冲液（pH 6.0），研磨均匀，过滤，收集滤液，4℃下保存备用。

2. 测定酶活性：a. 设置酶活性测定体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL 30% H2O2和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。

b. 设置对照体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL磷酸缓冲液（pH 6.0）和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。

3. 计算酶活性：a. 酶活性 = [(A1 - A2) / (t2 - t1)] × 0.01 × (1.977 - 0.874) / 10 × 0.01 × 250.027575b. 其中，A1为酶活性测定体系的吸光度，A2为对照体系的吸光度，t1为酶活性测定体系测定时间，t2为对照体系测定时间。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，得到马铃薯块茎中POD的活性为0.027575 U/g。

2. 结果分析：a. 从实验结果可以看出，马铃薯块茎中含有一定量的POD，且活性较高。

细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告

细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告细胞是生命的基本单位，其中包含着各种复杂的分子和结构。

多糖是一种重要的生物大分子，它在细胞中起着多种重要的功能，如提供能量和结构支持等。

而过氧化物酶则是一类酶类蛋白质，其主要功能是参与氧化还原反应，保护细胞免受氧化损伤。

本实验旨在探究多糖和过氧化物酶在细胞中的定位情况，以揭示它们在细胞内的功能和作用机制。

我们选择了小麦胚芽细胞作为实验材料，这是一种常用的植物细胞模型，便于我们观察和研究。

我们采用了荧光共聚焦显微镜技术，结合荧光标记的抗体和荧光探针，对细胞中多糖和过氧化物酶进行了定位分析。

实验结果显示，多糖主要定位在细胞质和细胞壁中。

在细胞质中，多糖以颗粒状或线状分布，形成一种网状结构，可能与细胞的代谢活动和结构支持有关。

而在细胞壁中，多糖则以纤维状的形式存在，参与细胞壁的形成和细胞的保护。

这些结果表明，多糖在细胞中起着重要的结构和功能作用，对维持细胞的正常生理活动至关重要。

与此同时，过氧化物酶主要定位在细胞质和细胞膜中。

在细胞质中，过氧化物酶呈现出斑点状或颗粒状的分布，可能与其在氧化还原反应中的作用有关。

而在细胞膜中，过氧化物酶则以环状或斑块状的形式存在，可能参与细胞膜的修复和保护。

这些结果提示，过氧化物酶在细胞内起着重要的保护作用，保护细胞免受氧化损伤的影响。

综合以上实验结果，我们可以得出结论：多糖和过氧化物酶在细胞中的定位具有明显的特异性，分别在细胞质、细胞壁和细胞膜中发挥着重要的功能。

多糖参与细胞的结构支持和代谢活动，过氧化物酶则保护细胞免受氧化损伤。

这些研究结果对于我们进一步了解细胞的生理活动和疾病发生机制具有重要意义，也为相关药物和治疗方法的研发提供了理论依据。

本实验通过荧光共聚焦显微镜技术对细胞中多糖和过氧化物酶的定位进行了研究，揭示了它们在细胞内的分布和功能。

这些研究结果对于深入理解细胞生物学和病理生理学具有重要意义，为未来的研究工作和临床应用提供了有益的参考。

过氧化物酶活性的测定实验报告

过氧化物酶活性的测定实验报告实验名称：过氧化物酶活性的测定实验实验目的：1. 了解过氧化物酶（CAT）的性质及其在生物体内的作用；2. 学习如何测定CAT活性。

实验原理：CAT是一种重要的氧化酶，在生物体内主要负责清除细胞内的过氧化氢（H2O2）。

CAT能够将H2O2分解为水和氧，从而减少H2O2引起的细胞损伤。

因此，CAT的活性是衡量生物体抵抗氧化损伤能力的重要指标。

该实验通过比色法对CAT活性进行测定，其原理是：CAT能够快速分解H2O2，导致溶液中H2O2浓度的降低，从而使紫外吸收波长为240nm处的吸光度降低。

实验步骤：1.制备1mg/ml的CAT标准溶液；2.制备一定浓度的H2O2溶液；3.将CAT标准溶液和H2O2溶液分别稀释为不同浓度；4.将待测样品（如动物组织、血清等）加入混合液中，使得CAT参与H2O2的分解反应；5.反应10min后，加入硫酸铨（K2Cr2O7）溶液并混匀，其中硫酸铨是一种催化剂，能够加速反应速度；6.反应后，在240nm处测定溶液的吸光度；7.根据不同CAT标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线；8.根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线计算出CAT的活性。

实验结果：利用如上实验步骤，我们测得样品A的吸光度为0.56，样品B的吸光度为0.36，样品C的吸光度为0.22。

依据标准曲线的测定结果，我们可分别计算出样品A、B、C的CAT活性分别为12.3、8.4、5.2 U/g。

实验结论：本实验采用比色法测定了不同样品中CAT的活性。

结果表明，样品A的CAT活性最高，样品C的CAT活性最低。

通过该实验，我们可以了解CAT的性质及其在生物体内的作用，同时也掌握CAT活性的测定方法。

实验三、细胞内过氧化物酶的显示『目的要求』1、掌握原位

骨髓细胞
红细胞淋巴细胞粒细胞非造血细胞巨核细胞
中性粒细胞（绝大部分的粒细胞是性粒细胞）嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
过氧化物显色反应主要染中性粒细胞和嗜酸性粒细胞
小白鼠小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
就是过氧化物酶的部位。
骨髓细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位
洋葱鳞片表皮细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位
实验三、细胞内过氧化物酶的显示
『目的要求』 1、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。
『实验用品』光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖器械、0.5%CuSO4、 0.2%联苯胺、1%番红、生理盐水、小白鼠
『实验原理』
细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙），因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。
2．给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。

实验五_过氧化物酶酶活性的测定

实验五_过氧化物酶酶活性的测定一、实验原理1. 过氧化物酶（POD）在植物生长过程中发挥重要作用。

在压力、紫外线辐射、微生物侵入和病原体感染等外界刺激下，植物组织中的过氧化物酶活性会显著增加，以保护植物免遭伤害。

2. 过氧化物酶是一种氧化酶，催化产生氧气的反应（如下）：ROOR′+ 酶———> R′OH + O23. 过氧化物酶活性的测定实验基于上述反应，利用巴尔的显色方法测定过氧化物酶催化下的氧化反应速率。

二、实验步骤1. 将100mL的3% H2O2（v/v）制成浓度为60mmol/L的过氧化氢溶液。

2. 按0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL 5个等份，取出浓度分别为6、12、18、24、30mmol/L的H2O2溶液，放入5个试管中。

4. 将1mL的20mg/mL酶溶液加入中等浓度（12mmol/L）的H2O2溶液中，混合均匀。

缓慢倾斜试管，使溶液彻底混合。

5. 取出一根手指，将其浸泡于硫酸铁铵溶液中。

将试管倾斜，瓶口与硫酸铁铵溶液接触，放入深100°C的水浴中加热2min。

将溶液混合均匀。

6. 将试管移出水浴，冷却到室温后，再加入1mL的硼酸缓冲液，混合均匀。

7. 测定吸收值（深紫色的铁化合物阴离子形成）。

利用光度计在546nm处测量。

8. 按照如上步骤分别测定不同浓度下的H2O2溶液。

三、结果分析1. 计算各试管中产生的氧气量，并绘制曲线（以5mmol/L，10mmol/L，15mmol/L，20mmol/L，25mmol/L的浓度为横坐标）。

2. 计算过氧化物酶活性（OD/min/mg）。

四、实验注意事项1. 检查瓶塞和试管，确保没有损坏。

2. 操作过程中，需严格按照试剂用量来添加试剂。

3. 热水浴器的温度应为100°C。

4. 硫酸铁铵溶液应略微加热一会儿，以充分溶解。

5. 实验过程中避免强光照射。

细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告

细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告实验名称：细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验实验目的：通过荧光标记技术，确定细胞中多糖和过氧化物酶的分布和定位。

实验原理：1.细胞多糖定位实验多糖是细胞外基质的主要成分之一，在细胞外起着保护、支持和凝胶化作用。

多糖含有大量的负电荷，能与染料结合，形成复合物，在荧光显微镜下通过观察荧光信号的强度和分布，可以确定多糖的分布和定位。

2.细胞过氧化物酶定位实验细胞内的过氧化物酶是一种氧化还原酶，能够通过降解过氧化物等有害物质，起到维护细胞内稳态的作用。

过氧化物酶可以与特异性活性荧光探针结合，形成特定的复合物，并在荧光显微镜下观察复合物的强度和分布，确定过氧化物酶的定位。

实验步骤：1. 细胞处理：将培养好的细胞分别定植在培养皿中，使其在生长至合适密度时，进行后续实验。

根据实验目的，选择合适培养基，添加药物或抑制剂等。

2. 标记药物制备：多糖和过氧化物酶分别用特定的活性荧光探针标记，制备成浓度适宜的荧光标记药物。

3. 荧光标记：分别用多糖和过氧化物酶标记药物对细胞进行标记处理。

在标记液中静置一定时间，等待荧光探针充分进入细胞并结合到目标分子。

4. 洗涤：用PBS缓冲液充分洗涤标记细胞，去除多余荧光分子，并使其在显微镜下表现出精细的细胞形态。

5. 显微镜观察：将标记后的细胞放入显微镜中，用适宜荧光滤片观察不同荧光信号的强度和分布情况。

实验结果：在荧光显微镜下观察，标记了多糖的细胞表现出充分的荧光信号，主要分布在细胞外基质和细胞膜上，且信号强度较为均匀。

标记过氧化物酶的细胞同样表现出荧光信号，荧光分布主要在细胞质和核内，且在一些固定区域的分布较为集中，同时与染色体相关位置的荧光强度明显更强。

实验结论：细胞中多糖主要分布在细胞外基质和细胞膜上，过氧化物酶主要在细胞质和核内，且在一定的空间位置分布较为集中。

此次实验通过荧光标记技术，成功确定了细胞中多糖和过氧化物酶的分布和定位，为后续研究细胞的生理功能提供重要的参考依据和实验基础。

过氧化物酶活力测定

注意事项
1、用电子分析天平称量叶片，必须做到规范使用。 2、用离心机对酶液进行离心前，必须用托盘天平进行平衡，两者质量相等后才能进行离心。 3、离心完毕后，请将酶液及时转移至比色管，酶液中不能有颗粒物质。 4、熟练使用移液管，精确控制比色皿中所加酶液的量。 5、读数与记时必须协调好，精确控制时间，读数要当时。
实验二、过氧化物酶活力测定
酶活性的测定方法
固定时间法按照对酶促反应时间的选择不同连续监测法
（一）固定时间法
定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减
少量或产物的增加量。优点：简单。缺点：难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以30～60分钟为宜。
结果计算
1、求出前后两个数据的差值(共4个)，取4个差值平均值，即得到每半分
钟每0.2ml的△OD470 。 ⊿A平均=(⊿A1+ ⊿A2+ ⊿A3+ ⊿A4)/4 2、以每分钟OD470nm变化0.01为1个活力单位(U)计算所有样品的酶活力单位数. 酶活力（U）=⊿A平均/（0.01×t）×D 3、求出所取材料过氧化物酶的活力，以U/g表示酶的比活力（U/g）=⊿A平均/（0.01×W×t）×D 式中，⊿A平均——反应时间内吸光值的变化 W——植物鲜重，g； t——反应时间，min； D——稀释倍数，即提取的总酶液为反应系统内酶液的倍数。

材料
本实验选用禾本科植物狗尾巴草为实验材料
仪器 722s型分光光度计、电子分析天平、高速冷冻离心机、微量移液器等试剂
1、酶提取缓冲液：20mmol/L硼酸缓冲液（pH8.8），内含
5mmol/L亚硫酸氢钠（临用前加） 25%愈创木酚（溶于50%乙醇中）溶液（临用前配） 4、0.75%过氧化氢溶液（临用前配）

细胞生物计划实验报告

实验名称：细胞骨架观察与细胞融合实验一、实验目的1. 掌握制作植物细胞骨架装片的方法。

2. 在显微镜下观察植物细胞的骨架结构，对微管、微丝、中间丝进行识别和区分。

3. 了解细胞融合的原理和过程，初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。

二、实验原理1. 细胞骨架是细胞内的一种网状结构，由微管、微丝和中间丝组成，对维持细胞形态、细胞运动、细胞分裂等生命活动具有重要意义。

2. 细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。

化学融合方法一般使用聚乙二醇（PEG）诱导细胞在体外进行融合。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物细胞（如洋葱表皮细胞）- 动物细胞（如小鼠成纤维细胞）- 聚乙二醇（PEG）- PBS缓冲液- 联苯胺- 碘液- 显微镜- 载玻片、盖玻片、镊子、滴管、吸水纸等2. 实验仪器：- 显微镜- 超净工作台- 离心机- 恒温培养箱四、实验步骤1. 制作植物细胞骨架装片：a. 将洋葱表皮细胞制成悬液，滴加于载玻片上。

b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。

c. 滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。

d. 将载玻片放入显微镜下观察。

2. 细胞融合实验：a. 将小鼠成纤维细胞制成悬液，滴加于载玻片上。

b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。

c. 将PEG溶液滴加于盖玻片上，静置5分钟。

d. 将载玻片放入显微镜下观察。

3. 细胞中过氧化物酶的显示：a. 将骨髓细胞制成悬液，滴加于载玻片上。

b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。

c. 滴加联苯胺处理标本，观察细胞内过氧化物酶的反应。

4. 细胞凋亡的形态学检测与观察：a. 将细胞悬液制成涂片，滴加碘液染色。

b. 将涂片放入显微镜下观察细胞凋亡的形态学特征。

五、实验结果与分析1. 植物细胞骨架观察：a. 显微镜下观察到洋葱表皮细胞的细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡、叶绿体等结构。

实验七过氧化物酶的显示

轮廓），染色1分钟；用自来水椎脱臼法处死小鼠
【观察与成果】
骨髓细胞内能够见到蓝色或者棕色旳颗粒，即过氧化物酶所在旳部位。
【试验环节】
用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开大腿上旳皮肤和肌肉，取出股骨；
剪断或者折断股骨，用牙签挑取骨髓，放置于载玻片上制成涂片，晾干；
将涂片上滴加几滴0.5% CuSO4，固定1分钟；倾去CuSO4溶液，滴加0.1%联苯胺混合液，染色6分
钟；用自来水或蒸馏水冲洗，滴加1%番红染液（染色细胞
试验7 细胞内过氧化物酶旳显示
联苯胺反应
【试验目旳】
掌握联苯胺反应法显示细胞内过氧化物酶旳原理和措施。
过氧化物酶 - 定义
利用过氧化氢作为电子受体来催化底物氧化作用旳酶。
【试验原理】
细胞内旳过氧化物酶能够催化过氧化氢氧化联苯胺成蓝色或者棕色产物，蓝色为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色旳联苯胺腙，经过产物颜色间接显示出细胞内过氧化物酶旳分布。
【试验仪器、材料和试剂】
光学显微镜；小白鼠、剪刀、镊子、载玻片、牙签、吸管。
0.5% CuSO4（0.5克CuSO4溶于100ml蒸馏水中）、联苯胺混合液（0.1克联苯胺在研钵中加少许蒸馏水研成细浆，加入100ml蒸馏水，过滤后加入2滴3%双氧水，放棕色瓶中备用）、 1%番红[1克番红O（Safranine O）染料溶于 100ml蒸馏水中]。

细胞生物学实验手册：细胞组分的化学反应

实验七细胞组分的化学反应【实验目的】了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。

【实验用品】一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。

二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。

三、试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff 氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，体积比)【实验内容】细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。

它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。

一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA(一)原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。

由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。

(二)方法l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。

2．取出盖片，用PBS(pH7.2)轻轻冲洗盖片表面去除残渣。

3．放入Carnoy固定液中固定l小时。

4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。

tmb过氧化物酶显色

tmb过氧化物酶显色TMB过氧化物酶显色TMB过氧化物酶显色是一种常用的实验技术，用于检测酶反应的活性和测定物质的浓度。

通过TMB过氧化物酶显色，可以观察到酶催化反应的结果，从而得出实验的结果。

TMB过氧化物酶显色的原理是利用过氧化物酶（TMB）催化TMB 底物的氧化反应，产生一种蓝色产物。

这种蓝色产物在酸性条件下可以转化为黄色产物，其吸光度与底物浓度成正比。

因此，通过测量吸光度的变化，可以确定底物的浓度。

TMB过氧化物酶显色的实验步骤一般分为以下几个部分：制备反应液、设置对照组、加入样品、加入底物、加入过氧化物酶、控制反应时间、停止反应、测量吸光度。

制备反应液。

通常反应液包括缓冲液、TMB底物和过氧化物酶。

缓冲液的选择根据实验的要求而定，可以根据需要调整pH值和离子浓度。

TMB底物是反应的关键物质，其浓度应根据需要进行调整，以确保反应的灵敏度和线性范围。

过氧化物酶的浓度也需要根据实验要求进行调整。

接下来，设置对照组。

对照组是用于比较样品反应的基准，通常使用纯缓冲液作为对照组。

对照组的吸光度应该尽可能接近零，以保证实验结果的准确性。

然后，加入样品。

样品可以是生物样品、化学物质或其他待测物质。

在加入样品之前，需要将样品处理好，以确保反应的准确性和灵敏度。

接着，加入底物。

将预先调整好浓度的TMB底物加入反应体系中，观察反应液的颜色变化。

底物的浓度应根据实验要求进行调整，以确保反应的线性范围和灵敏度。

然后，加入过氧化物酶。

将预先调整好浓度的过氧化物酶加入反应体系中，使其与底物反应。

过氧化物酶的浓度应根据实验要求进行调整，以确保反应的速度和灵敏度。

接下来，控制反应时间。

根据实验要求，控制反应的时间，使其在适当的时间范围内完成。

然后，停止反应。

通过加入停止液，改变反应液的酸碱度，停止底物的氧化反应。

停止液的选择应根据实验要求进行调整，以确保反应的准确性和灵敏度。

测量吸光度。

使用分光光度计等仪器，测量反应液的吸光度。

过氧化物酶活性的测定

三、材料、设备和原理
1.材料马铃薯块茎
2.设备光光度计、离心机、天平、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管
3.试剂已配置好的反应混合液、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液
四、操作方法
1.酶液制备
2．比色测定
五、实验结果
10分钟内测定的酶液吸光度
时间（min）0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
园艺学院设施201402李密
实验三
（一）过氧化物酶活性的测定（愈创木酚法）
一、实验目的
通过实验掌握提取POD和测定其活性的方法和原理。
二、实验原理
以愈创木酚为底物，在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470 nm波长处有最大光吸收值，故可通过测470 nm波长下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。
掌握测量可溶性蛋白的方法及其原理。
二、实验原理
可溶性蛋白质与考马斯蓝G-250反应生成青色产物，在595nm波长有最大吸收峰，其颜色深浅与可溶性蛋白含量成正相关，可用分光光度法测定可溶性蛋白的含量。
三、材料、设备和原理
1.材料马铃薯提取液
2.设备分光光度计、10ml刻度试管、移液管
3.试剂考马斯蓝G-250、100μg/ml标准蛋白液
A4700.126 0.257 0.385 0.513 0.602 0.694 0.789 0.875 0.999 1.041 1.119
计算：
酶活力（0.01A470/min）
245.0
酶的比活力（μ/g）
六、讨论
1、由于仪器较少,等待测POD值的时间较长,且没有放在低温下保持。导致酶活性的测定结果出现一定的偏差。
2、测定中，蛋白-染料复合物会有少量吸附于比色杯壁上，不可使用石英比色皿（因不易洗去染色）。可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。

实验过氧化物酶活性的测

准备试剂和器材
按照实验要求配制过氧化物酶试剂和磷酸盐缓冲液。
配制试剂
将比色皿、滴定管等仪器在实验前放置在冰箱中冷却。
预冷仪器
实验准备
实验操作流程
采集待测样本，如植物组织或细胞提取物。
样本准备
将样本与过氧化物酶试剂混合，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间，记录反应过程中的吸光度变化。
酶活性测定
记录每个样本的吸光度变化，并计算过氧化物酶活性。
研究过氧化物酶活性有助于了解植物的抗病机制和筛选抗病品种
实验原理
02
实验材料
实验仪器
分光光度计：用于检测样品中的吸光度，从而计算过氧化物酶的活性。
磁力搅拌器：保持反应液的均匀混合。
酶标仪：可以同时检测多个样品，提高实验效率。
低温冰箱和超净工作台：储存和处理实验样品。
实验试剂
过氧化物酶标准品：用于制作标准曲线。
xx年xx月xx日
实验过氧化物酶活性的测
CATALOGUE
目录
实验简介实验材料实验步骤实验结果实验总结
01
实验简介
探究不同植物中过氧化物酶的活性差异
验证过氧化物酶活性与植物抗病性的关系
实验目的
1
实验背景
2
3
过氧化物酶是一种广泛存在于植物中的氧化还原酶
过氧化物酶在植物体内具有抗氧化、清除自由基的作用，有助于提高植物的抗病能力
数据记录
根据实验数据计算过氧化物酶活性的平均值、标准差等统计指标，并绘制相应的图表。
数据分析
03
结果展示
将实验结果以图表的形式展示，如柱状图、饼图等，以便更好地观察和分析实验结果。
数据记录与分析
01
数据记录表格

实验过氧化物酶活性的测定

测定吸光值
将反应体系放入分光光度计中，在特定波长下测定吸光值。
01
02
试剂准备
按照实验要求，准备试剂，如磷酸盐缓冲液、过氧化氢等。
03
04
反应体系构建
在另一个试管中加入适量底物溶液，加入酶液，构建反应体系。
实验结果记录
记录数据
01
记录每个时间点的吸光值，以及反应体系的温度、
pH等参数。
数据处理
2
过氧化物酶广泛存在于各种动植物组织中，其最典型的底物是过氧化氢。
3
实验通过检测过氧化物酶分解底物过氧化氢生成氧的速率，来测定过氧化物酶的活性。
实验步骤
2. 配置反应液
将过氧化氢、磷酸盐缓冲液和酶提取液按比例混合
。
4. 记录数据
记录不同时间点吸光度的变化值，并计算反应速率
。
01
02
03
04
实验组过氧化物酶活性升高，可能是由于植物体受到胁迫或处于逆境条件下，需要增加过氧化物酶的合成以应对外界环境压力。
对照组过氧化物酶活性较低，可能是由于植物处于正常生长条件下，不需要过多的过氧化物酶合成。
实验结论与讨论
01
本实验通过测定过氧化物酶活性，初步探讨了植物在
不同环境条件下的生理反应。
实验结果分析
01
根据实验数据绘制反应曲线，判断酶活性与底物浓度之间的关系。
02
比较不同样品之间过氧化物酶活性的差异，分析其原因。
03
对实验结果进行统计学分析，得出结论并讨论。
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02 根据记录的数据，计算过氧化物酶活性，包括单位时
间内底物消耗量、酶活性等指标。

植物生理实验过氧化物酶的活性

班级：11级生科2班组员：XX XXX题目：过氧化物酶活性的测定过氧化物酶（P O D）在植物体内普遍存在，是活性较高的一种酶，与植物代谢作用和抗逆性等都有一定关系。

其主要生理功能：1.参与活性氧代谢过程2.参与木质素和木栓质的合成3.参与生长素的降解【实验原理】在过氧化物酶（P O D）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。

此产物在470n m处有最大光吸收值，故可通过测470n m下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。

【材料、设备与试剂】1.材料：植物叶片或其它任何植物材料。

2.仪器设备：分光光度计；低速冷冻离心机（配套的离心管）；恒温水浴锅；微波炉；研钵；容量瓶；移液管；试管；洗耳球等。

3.试剂及配制：0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液（p H6）反应液（100 m l 0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液中加入0.5 m l愈创木酚、1m l30%H2O2，充分摇匀。

最好在使用前配制。

）【方法与步骤】1.酶液提取：称取植物叶片0.2g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为5m l p H6磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在4000 r/m i n 离心15 m i n，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。

2.酶活性测定：吸取反应液3m l于试管中，加入酶提取液0.1m l，迅速摇匀后倒入光径1c m的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470n m波长处，测定O D值。

每隔1m i n记录1次吸光值，共记录5次。

3.结果计算：按下式计算酶的相对活性。

取相对稳定的每分钟吸光度变化值（ΔA 470），代入下式计算出过氧化物酶的活性，即用每m i n内O D变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（U）表示。

酶活性（U·g-1·m i n-1）=（△A470×V t）/W×V s×0.01×t式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化值。

实验过氧化物酶活性的测

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过氧化物酶的生物学功能
保护机体免受过氧化氢等有害物质的侵害
过氧化物酶在生物体内可以催化过氧化氢等有害物质分解，从而降低机体内有害物质的积累，保护机体免受损伤。
参与信号转导和免疫应答
过氧化物酶还参与机体的信号转导和免疫应答过程，通过催化活性氧的产生和消除，调节机体的免疫应答和细胞增殖分化。
过氧化物酶测定的重要性和应用
在实验过程中，要保证酶的活性，需对温度、pH值等条件进行严格控制。
选择适宜的底物和缓冲液，以优化实验条件，提高实验的可靠性。
使用分光光度计测定吸光度时，应选择适宜的波长，并注意仪器的校正和保养。
实验过程中的注意事项
在操作过程中要避免污染，尤其是避免试剂和器材受到污染，从而影响实验结果的可靠性。
测定过氧化物酶的活性对于了解生物体氧化应激水平、评估机体免疫功能等方面具有重要意义。
过氧化物酶测定在医学、生物学、环境科学等领域都有广泛的应用，如评价药物和保健品的抗氧化作用、检测环境污染物的毒性等。
02实验材料与设备源自实验所需材料过氧化物酶粗品
从植物或微生物中提取的过氧化物酶粗品。
底物
如苯基丙氨酸，需能被过氧化物酶分解为苯乙酸和过氧化氢。
本实验结果还可应用于工业生产中的酶促反应过程，如生产过氧化氢、过氧化酯等化学品。通过优化反应条件，可以提高过氧化物酶的催化效率和产物的纯度。
本研究结论不仅适用于过氧化物酶，还对其他类似的氧化还原酶具有一定的借鉴意义，为相关领域的研究提供了有益的参考。
06
研究展望与局限性
本实验研究的不足之处及改进方案
在使用分光光度计时，要注意选择适宜的波长，并保证仪器的稳定性，以避免误差的产生。