植物组织培养 第三章 植物器官和组织培养

蝴蝶兰腋芽萌发
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
三、叶培养
• 以叶器官为外植体进行的离体培养。 • 叶器官包括：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、 叶肉、子叶。 • 再生成植株的方式： • 直接诱导形成芽， • 先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化 成植株。
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
植物的茎
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
茎段培养 过程
去叶片用自来水冲洗 健康植株上选健壮的枝梢
0.1%升汞 75%酒精1分钟 再生
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
MS培养基
1%次氯酸钠
1．叶形
椭圆形
扇形 心形
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
叶的器官培养
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
• 方法：
• 1）外植体消毒：幼嫩叶片冲洗干净 用70％酒精 10s 饱和漂白粉液浸3～15min（或在0．1％L汞 中浸3-5min） 无菌水冲洗3～4次 无菌干滤纸 吸干 待用。 • 2）接种：灭菌过的叶组织切成约0．5cm见方小块或薄片 (如叶柄和子叶) 接种在MS或其他培养基上 • 3)培养基：MS ＋ BA1-3mg／L ＋ NAA0．25mg／L • 4)培养： 叶接种后培养条件为每天10-12h光照，光强 1500-30001x。
• 什么是组织培养（即狭义的）？
• 包括分生组织、表皮组织、薄壁组织等及产生的愈 伤组织的培养
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
第一节 器官和组织培养基本程序
• 包括以下几方面： • 无菌外植体的获得 • 初代培养物的建立 • 形态发生和植株再生 • 培养物的观察记录。
陈传红 制作
二、 植物茎段培养
• 茎段培养指不带芽和带1个以上定芽或不定芽。 • 包括：块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。 • 主要目的：快繁；其次也可探讨茎细胞的生理特 点，以及进行育种上的筛选突变体的过程。 • 优点：培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生 芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一； 解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖 问题等。
第四章 植物的器官和组织培养
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
• 本章内容提要：
• 一、器官和组织培养基本程序 • 二、植物营养器官培养 • 三、植物繁殖器官培养 • 四、植物组织培养
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
概念
• 什么是器官培养？
• 是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行 离体培养技术 • 分为：营养器官和繁殖器官培养。 • 包括:根、茎、叶、花、果实、种子。
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
一、无菌外植体的获得
• 1、茎尖、茎段、叶片的灭菌
• 茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗 75%酒精浸泡10-20min 无菌水洗2-3次或 Naclo或升汞泡10-15min 无菌水洗3-4次
• 2、根、块茎、鳞茎的灭菌（灭菌较困难）
• 自来水冲洗 纯酒精漂洗 10min或2%Naclo液浸10-15min
2、影响离体根发生和生长的因素
• a 培养基的种类 多采用MS，½ MS，B5，White等基本培养基 • b 生长调节剂 多使用NAA IBA • c 植物材料 同植物、不同基因型、不同部位、不同年龄 • d 培养方式 固体、固—液培养基 • e 光照和温度 • f pH
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
• 2、规范操作 • 3、条件合适
• 培养基种类、 激素种类与浓 度、其他附加 物、外植体类 型等要合适。
无菌操作
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
三、 形态发生和植株再生
体细胞胚
• 外植体 愈伤组织 植株
具根茎器官 器官分化 单极器官
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
二、 初代培养物的建立
• 1、无菌环境
• 外植体处理：表面灭菌 + 抗生素 • 环境要清洁。 • 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体， 或经其它物理的或化学灭菌方法处理过后的物体， 是无菌的。 • 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
陈传红 制作
先茎后根 先根后茎
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
•
陈传红 制作
四、培养物的观察记录
• 1、愈伤组织诱导率（%） 产生愈伤组织的外植体数 / 外植体总数 • 2、胚状体的诱导率（%） 产生胚状体的外植体数 / 外植体总数 • 3、芽的诱导率——芽分化率（%） 产生芽的外植体数 / 外植体总数 • 4、根诱导率（%） 发根芽数 / 培养芽数
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
第二节
植物营养器官培养
一、根段培养
• 是以根为外植体进行的离体培养
• 1、根无性系的建立
• • • • • •
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
根的直接增殖 根的数量增加，形成主根与侧根之分 根的间接增殖 愈伤组织 植株再生 根的形成过程 以不定根的方式进行
待用。
升汞浸5无菌水洗3次，
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
• 3、花蕾的灭菌
• 自来水冲洗 70%酒精浸泡数秒钟 洗2-3次 漂白粉上清液浸10min 洗2-3次，待用。 无菌水 无菌水
• 4、果实、种子的灭菌
• 果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min 酒精漂洗 2%Naclo液浸10min 2-3次 取出种子培养，待用。 70% 无菌水
• 茎段培养在适当条件下可能形成：
• • • • • • •
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
单苗 丛生芽 愈伤组织 完整植物 生长素 / 分裂素的比值 高 有形成愈伤组织的趋势 低 易形成丛生芽
• 茎段能否增殖受到以下情况影Hale Waihona Puke Baidu：
月季花
茎段培养
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5