食品添加剂乳铁蛋白的质量规格要求生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验
质量规格要求、生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明
4. 质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明一、质量规格要求(一)食品添加剂产品标准的文本（包括鉴别、主要技术指标要求及相应的检验方法）食品添加剂胭脂树橙企业标准一、范围本标准规定了食品添加剂胭脂树橙的要求、试验方法、检验规则。
本标准适用于从胭脂树(Bixo orellana L.，亦称红木)的种籽假种皮中提取的一种食用天然黄橙色素，分为水溶性胭脂树橙和油溶性胭脂树橙，商业化的胭脂树橙产品通常是两者的混合。
二、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 5009.75 食品添加剂中铅的测定GB/T 5009.76 食品添加剂中砷的测定GB 5009.17 食品安全国家标准食品中总汞及有机汞的测定GB 1886.76 食品安全国家标准食品添加剂姜黄素三、术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1胭脂树橙annatto胭脂树橙是从胭脂树(Bixa orellana，又称红木)的种籽假种皮中提取的一种食用天然黄橙色素，分为水溶性胭脂树橙和油溶性胭脂树橙。
3.2水溶性胭脂树橙norbixin水溶性胭脂树橙的主要成分红木素水解产物降红木素的钠盐或钾盐；是用碱类（氢氧化钠或钾）水溶液萃取胭脂树种子表皮而得，或用有机溶剂萃取种子表皮，除去溶剂后在碱类（氢氧化钠或钾）水溶液中水解而得。
经喷雾干燥则得粉末制品。
3.3油溶性胭脂树橙bixin油溶性胭脂树橙是红至褐色溶液或悬浮液。
主要色素成分为红木素。
红木素为橙紫色晶体，是用食品级植物油萃取种子表皮而得。
或用有机溶剂萃取种子表皮，再除去溶剂后，经喷雾干燥则得粉末制品。
四、分子式、结构式和相对分子质量2.1分子式水溶性胭脂树橙：C25H28O4油溶性胭脂树橙：C25H30O42.2结构式水溶性胭脂树橙：R1=R2=H油溶性胭脂树橙：R1=H，R2=CH32.3相对分子质量水溶性胭脂树橙：380.48油溶性胭脂树橙：394.49五、技术要求3.1感官要求感官要求应符合表1的规定。
食品添加剂的质量规格要求生产使用工艺和检验方法
食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明一达瓦树胶的质量规格要求产品企业质量规格要求如下，符合日本《食品添加剂公定书》（第9版）中达瓦树胶的相关要求，日本《食品添加剂公定书》（第9版）达瓦树胶的日文资料及中文译文附后。
1.1感官要求感官要求应符合表1的规定。
表1感官要求1.2鉴别试验鉴别试验应符合表2的规定。
表2 鉴别试验1.3理化指标理化指标应符合表3的规定。
表3 理化指标1.4 微生物指标微生物指标应符合表4的规定。
表4 微生物指标二生产使用工艺2.1 达瓦树胶的生产工艺添加剂达瓦树胶是以从君子科宽叶榆绿木（Anogeissus latifolia）树干获得的胶状分泌物为原料，经物理加工制得的添加剂。
2.2 达瓦树胶的使用工艺（特殊膳食用食品中使用工艺） 2.2.1 工艺流程图2.2.2 生产工艺说明①称量：按照配方表记载量称量经确认合格的各种原料（麦芽糊精、大豆蛋白酶分解物、胶原蛋白加水分解物、植物油、中链脂肪酸甘油酯、酵母、海带提取物、增粘剂（增粘多糖类，含果胶和达瓦树胶）、赖氨酸、焦磷酸钠、氯化钾、酸味料、磷酸钙、维生素C、氢氧化钾、亮氨酸、颉氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、微晶纤维素、氧化镁、色氨酸、组织胺、香料、维生素E、烟酸、焦磷酸铁、泛酸钙、维生素B6、维生素B1、维生素B2、维生素A、叶酸、维生素K2、维生素D、维生素B12）。
②水处理：去除无机物和异物，制成符合食品卫生法的原料水。
③原料溶解、调配和均质化：加适量的水到溶解罐中，加入上述原料，充分均匀搅拌后，进行均质化处理，制成乳液。
④冷却：将乳液冷却至20～25℃。
⑤调配液完成：将乳液倒入调配罐，加入维生素B1和维生素C，充分搅拌均匀，然后加水至全量成调配液。
⑥调配液检查：对调配液进行pH、Brix检查。
⑦容器制袋和印字：进行容器制袋，打印保质期限。
⑧充填：将调配液按规定量灌入塑料袋，封口。
食品中乳铁蛋白的测定
食品中乳铁蛋白的测定
乳铁蛋白是一种可溶性的铁结合蛋白，广泛存在于哺乳动物的乳汁和食品中。
测定食品中的乳铁蛋白含量可以采用以下方法：
1. 免疫学方法：使用特异性抗体与乳铁蛋白结合，形成免疫复合物，然后通过测定复合物的特定信号（如光学信号或荧光信号）来确定乳铁蛋白的含量。
这种方法可以采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光法等。
2. 蛋白质测定方法：通过测定样品中总蛋白质的含量，然后通过计算乳铁蛋白在总蛋白质中的比例来估算乳铁蛋白的含量。
常用的蛋白质测定方法包括比色法（如Lowry法、Bradford 法）、生物素标记法等。
3. 分离和纯化方法：将样品中的乳铁蛋白分离和纯化，然后通过测定纯化后的乳铁蛋白的含量来确定样品中的乳铁蛋白含量。
这种方法可以采用柱层析、电泳等技术进行分离和纯化。
需要注意的是，不同的食品可能会有不同的适用方法，因此在具体测定之前需要选择适合的方法，并针对特定食品样品进行优化和验证。
此外，在进行测定时，还需要考虑如何避免其他物质的干扰，提高测定的准确性和精确性。
乳铁蛋白含量标准
乳铁蛋白含量标准
乳铁蛋白是一种重要的营养成分，它对人体健康有着重要的作用。
乳铁蛋白含量标准是指乳制品中乳铁蛋白的含量符合国家标准
的要求，保证产品质量和安全。
本文将介绍乳铁蛋白的作用、标准
要求以及检测方法，希望能对相关人士有所帮助。
首先，乳铁蛋白是一种重要的铁载体蛋白，它能够帮助人体吸
收铁元素，增强免疫力，促进生长发育，对婴幼儿和孕妇尤为重要。
因此，乳制品中乳铁蛋白的含量标准受到了广泛关注。
根据国家标准，乳制品中乳铁蛋白的含量应当符合一定的要求。
具体来说，牛奶中乳铁蛋白的含量应当不低于每升80mg，奶粉产品
中乳铁蛋白的含量应当不低于每100g 4mg。
这些标准的制定是为了
保证乳制品中乳铁蛋白的含量达到营养需求，确保产品质量和安全。
那么，如何检测乳制品中乳铁蛋白的含量呢？目前，常用的检
测方法主要包括免疫测定法、色谱法和质谱法等。
其中，免疫测定
法是一种常用的快速检测方法，通过专门的试剂盒可以快速准确地
检测出乳制品中乳铁蛋白的含量，具有操作简便、准确性高的特点。
在生产过程中，生产企业应当严格按照国家标准要求，对乳制
品中乳铁蛋白的含量进行检测，并确保产品符合标准要求。
同时，
消费者在购买乳制品时，也应当注意查看产品标签，选择符合标准
要求的产品，以保证乳铁蛋白的摄入量符合营养需求。
总之，乳铁蛋白含量标准是保证乳制品质量和安全的重要依据，对于生产企业和消费者来说都具有重要意义。
希望本文所介绍的内
容能够对相关人士有所帮助，促进乳制品行业的健康发展。
乳铁蛋白的执行标准
乳铁蛋白的执行标准乳铁蛋白是一种高分子蛋白质，在食品和医药领域中具有广泛的应用和开发前景。
为了确保乳铁蛋白的质量和安全，执行标准非常重要。
以下是有关乳铁蛋白执行标准的详细信息。
一、乳铁蛋白的定义和性质乳铁蛋白是一种酸性蛋白，主要存在于哺乳动物的乳汁中。
乳铁蛋白的分子量约为80 kDa，其主要成分是铁、钙、锌等微量元素。
乳铁蛋白作为一种天然保健品，具有多种功能，如增强人体免疫力、提高血红蛋白水平和促进骨骼生长等。
二、乳铁蛋白的执行标准乳铁蛋白的执行标准主要有以下两种：1. 食品乳铁蛋白执行标准根据国家标准GB5413.14-2010《食品安全国家标准食品卫生标准饮品中乳铁蛋白的测定》，食品中乳铁蛋白的检测标准应符合以下要求：(1)食品中乳铁蛋白的检测方法：使用氮吹法或微波消解法测定食品中乳铁蛋白的含量。
(2)乳铁蛋白的质量要求：食品中乳铁蛋白的含量应符合生产厂家自行制定的质量标准。
(3)食品标签标注：如若食品中含有乳铁蛋白还需在食品标签上标注含有乳铁蛋白。
2. 医药乳铁蛋白执行标准根据国家药典2015年版，医用乳铁蛋白的执行标准与食品中乳铁蛋白的质量标准有所不同。
医药乳铁蛋白主要用于医治慢性病、肿瘤、免疫系统功能异常等疾病，其执行标准应包含以下内容：(1)纯度：应符合国家药典规定的医药乳铁蛋白的纯度要求。
(2)微生物限度：医药乳铁蛋白的微生物限度需符合国家药典规定的标准。
(3)重金属、有害物质含量：医药乳铁蛋白中重金属、有害物质的含量需符合国家药典的标准。
三、乳铁蛋白的应用领域乳铁蛋白作为一种纯天然的蛋白质，其应用范围非常广泛，包括以下方面：1.婴幼儿配方奶粉：乳铁蛋白在婴幼儿配方奶粉中应用广泛，能够促进幼儿生长发育。
2.保健品：乳铁蛋白被广泛应用于保健品中，通过增强人体免疫力、促进大脑发育、缓解疲劳等作用，被越来越多的人使用。
3.医药领域：乳铁蛋白作为一种天然药物，在医药领域中具有非常重要的应用。
乳铁蛋白标准
乳铁蛋白标准乳铁蛋白是一种存在于乳制品中的重要蛋白质，它不仅具有营养保健作用，还对人体健康有着重要的影响。
乳铁蛋白标准的制定和执行，对于保障消费者权益、促进乳制品行业的发展具有重要意义。
本文将就乳铁蛋白标准的相关内容进行探讨。
首先，乳铁蛋白标准应当包括对乳铁蛋白的定义和分类。
乳铁蛋白是一种铁结合的糖蛋白，主要存在于哺乳动物的乳汁中，具有免疫调节、铁离子运输等功能。
根据来源的不同，乳铁蛋白可以分为乳清中的乳铁蛋白和乳粉中的乳铁蛋白，标准应当对不同类型的乳铁蛋白进行分类和定义，以便进行监管和管理。
其次，乳铁蛋白标准应当包括对产品质量的要求。
乳铁蛋白作为一种营养保健成分，其纯度、稳定性、活性等指标对产品的质量起着决定性作用。
标准应当规定乳铁蛋白产品的生产工艺、贮存条件、包装要求等方面的具体要求，确保产品质量稳定可靠。
另外，乳铁蛋白标准还应当包括对产品安全性的要求。
作为食品添加剂，乳铁蛋白必须符合食品安全的相关法律法规和标准要求，不得含有有害物质，不得对人体健康造成危害。
标准应当明确乳铁蛋白产品的安全使用标准，确保产品使用过程中不会对消费者造成安全隐患。
最后，乳铁蛋白标准应当包括对产品标识和包装的要求。
产品标识是产品质量和安全的重要体现，标准应当规定乳铁蛋白产品标识的内容和形式，使消费者能够清晰地了解产品的相关信息。
同时，标准还应当规定乳铁蛋白产品的包装要求，确保产品在运输、储存和销售过程中不受污染，保持良好的品质。
在制定乳铁蛋白标准的过程中，应当充分考虑行业实际情况和科学研究成果，确保标准的科学性和实用性。
同时，标准的执行和监管也是保障标准有效性的关键，相关部门应当加强对乳铁蛋白产品的监督检查，严厉打击违法违规行为，保障市场秩序和消费者权益。
总之，乳铁蛋白标准的制定和执行对于促进乳制品行业的健康发展、保障消费者权益具有重要意义。
只有制定科学合理的标准，并加强执行和监管，才能够推动乳铁蛋白产品的质量提升，促进行业的可持续发展。
食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明
四、食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明（一）、聚苯乙烯的质量规格要求、检验方法：参照GB 31635-2014，具体内容如下：1范围本标准适用于由苯乙烯单体经聚合反应合成的食品添加剂聚苯乙烯2.化学名称、结构式、分子式2.1化学名称聚苯乙烯2.2结构式2.3分子式3技术要求3.1感官要求应符合表1 的规定。
表1 感官要求项目要求检验方法色泽无色透明有光泽取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态，并嗅其气状态粉末或颗粒味。
气味无味3.2理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标检验方法A.1警示本标准的检验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，操作时应采取适当的安全和防护的措施。
A.2一般规定本标准所用试剂和水灾没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。
试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3鉴别试验取少量试样于燃烧匙中，置燃烧匙于酒精灯火焰中燃烧。
试样易燃烧，火焰为橙黄色，试样离开火焰，试样继续燃烧，火焰为橙黄色并冒出黑烟，试样起泡、软化、产生少量的松节油气味，火焰熄灭后，燃烧匙内的试样能拉成长长的透明细丝。
A.4挥发性有机物的测定A.4.1方法提要试样经干燥后，于90°C干燥24小时失去的质量即为挥发性有机物质。
A.4.2试剂和材料液氮A.4.3仪器和设备研磨仪：配有48µm钛制筛网。
A.4.4分析步骤A.4.4.1试样制备颗粒试样置于液氮中冷冻数分钟，取出用研磨仪研磨，过74µm和37µm标准筛，取通过74µm标准筛留在37µm标准筛上的试样备用。
粒径小于74µm粉末试样通过74µm和37µm标准筛，取通过74µm标准筛留在37µm标准筛上的试样备用。
乳铁蛋白标准
乳铁蛋白标准
乳铁蛋白是一种存在于乳制品中的重要营养物质，它不仅具有良好的营养价值，还对人体健康有着重要的保健作用。
因此，乳铁蛋白的质量标准成为了乳制品行业关注的焦点之一。
本文将就乳铁蛋白的标准进行探讨，以期为相关研究和生产提供参考。
首先，乳铁蛋白的标准应当包括其成分和含量的要求。
乳铁蛋白主要由铁和乳
蛋白组成，因此其成分的含量应当符合相关的国家标准，以保证其营养价值。
同时，乳铁蛋白的含量也是衡量其质量的重要指标之一，高含量的乳铁蛋白更具有营养保健的作用，因此标准中应当对其含量进行明确规定。
其次，乳铁蛋白的质量标准还应当包括其生产加工的要求。
乳铁蛋白的生产加
工直接影响着其最终的品质，因此标准中应当对生产加工过程中的卫生条件、操作规范等方面进行详细规定，以保证乳铁蛋白的质量安全。
另外，乳铁蛋白的标准还应当包括其储存和运输的要求。
在乳铁蛋白的储存和
运输过程中，如果条件不当，就会导致其质量受损，影响其营养价值和保健功效。
因此，标准中应当对乳铁蛋白的储存条件、包装要求、运输方式等方面进行规定，以保证其质量不受影响。
最后，乳铁蛋白的标准还应当包括其质量检测的方法和要求。
质量检测是保证
乳铁蛋白符合标准要求的重要手段，因此标准中应当对乳铁蛋白的质量检测方法进行规定，并对质量检测的结果进行评定，以确保乳铁蛋白的质量符合标准要求。
综上所述，乳铁蛋白标准应当全面、详细地规定其成分和含量、生产加工、储
存和运输、质量检测等方面的要求，以保证乳铁蛋白的质量安全和营养保健功能。
希望通过本文的探讨，能够为乳铁蛋白标准的制定和相关研究提供一定的参考和帮助。
乳铁蛋白执行标准
乳铁蛋白执行标准
乳铁蛋白是由牛奶中的乳铁蛋白基因经基因重组技术制备的、具有铁载体功能的蛋白质。
在国内，乳铁蛋白的执行标准主要包括以下几个方面：
1. 产品质量标准：乳铁蛋白的质量标准包括外观要求、理化性质、微生物指标、重金属和有害物质指标等。
例如，外观要求中要求乳铁蛋白为白色或类白色颗粒状，不含可见异物；理化性质中要求乳铁蛋白的蛋白质含量、铁含量、pH值等符合规定要求。
2. 检测方法和技术要求：乳铁蛋白的检测方法主要包括氨基酸分析、蛋白质含量分析、铁含量分析等。
相关的技术要求包括所使用的仪器设备、试剂的要求等。
3. 食品安全要求：乳铁蛋白需要符合食品安全的相关法规和标准，不得含有对人体健康有害的物质，不得有微生物污染。
4. 标签和包装要求：乳铁蛋白的标签和包装需要符合国家相关标准要求，包括产品名称、成分表、净含量、生产日期、保质期、厂名厂址、使用方法和注意事项等。
需要注意的是，乳铁蛋白的执行标准可能因国家或地区的不同而有所差异，以上仅为一般情况。
具体的执行标准可以参考相关法规和标准文件。
食品添加剂乳铁蛋白的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验
资料四乳铁蛋白食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或相关情况说明内蒙古伊利实业集团股份有限公司一、乳铁蛋白质量规格要求（一）感官指标（二）理化指标（三）微生物、污染物及真菌毒素指标二、检验方法（一）用反相高效液相层析法测定乳铁蛋白的纯度1. 样品准备对粉状乳铁蛋白，称出20 mg乳铁蛋白样品，用MilliQ水配成20 mL，1mg/mL的乳铁蛋白溶液，再通过0.2 μm的乙酸纤维素膜进行过滤。
2. 材料和试剂（1）MilliQ水（超纯水18 megohm resistivity）（2）95%的乙腈(氰化甲烷)（HPLC 级）（3）1%的三氟乙酸（TFA）2.1 缓冲液准备（1）缓冲液A：100% MilliQ水把1 L MilliQ水装在1 L 的SCHOTT瓶中。
（2）缓冲液B：95%的乙腈分别量取50 mL MilliQ水和950ml乙腈。
把二者混合，通过0.45 μm的滤膜进行过滤。
储存在1 L的SCHOTT瓶中。
（3）缓冲液C：1%的三氟乙酸用移液管量取25 mL三氟乙酸放入200 mL MilliQ水中，用MilliQ水补至250 mL。
转移到250 mL的SCHOTT瓶中储存。
3. 仪器设备（1）水基线体系控制和获得数据的设备（Empower）（2）水2695分离组件和2487双λ吸收检测器（3）反相高效液相层析柱---Alltech prosphere C4 300A 150mm × 4.6mm,with Alltech All-guard Guard 7.5 × 4.6mm.4. 高效液相层析的测量方法4.1 注射体积50 μL已过滤的乳铁蛋白样品或空白液注入柱中供分析。
4.2 梯度表4.3 温度柱子温度=35°C样品温度=10°C4.4 检测在波长280 nm处检测乳铁蛋白，乳铁蛋白的洗脱时间大约9.7分钟。
食品添加剂维生素B1的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验
食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明1 维生素B1的质量规格要求质量规格要求符合日本《食品添加物公定书》中维生素B1的相关要求：【注1】确认试验：（1）在本品水溶液（1→500）1ml加入醋酸铅试液1ml及氢氧化钠溶液(1→10)1ml时，溶液呈黄色。
在水浴中加温，溶液变为褐色，放置后，会生成黑褐色的沉淀。
（2）在本品水溶液（1→500）5ml加入氢氧化钠溶液(1→25)2.5ml及新调制的铁氰化钾溶液(1→10)0.5ml后，再加入异丁醇5ml，剧烈振摇2分后放置分层，在紫外线下观察，异丁醇层显青紫色荧光。
此荧光加酸成酸性时消失，加碱成碱性时又出现。
（3）本品显氯化物反应。
【注2】纯度试验·溶液性状：称取本品1.0g，加水溶解，配成10ml液体。
此液体澄明，颜色不比以1/60mol/L重铬酸钾溶液1.5ml加水配成的1000ml溶液的颜色深。
【注3】纯度试验·PH值：为2.7～3.4（1.0g，水100ml）。
【注4】纯度试验·硫酸盐：以SO4计0.011%以下（1.5g，对照液0.005mol/L 硫酸0.35ml）。
【注5】纯度试验·重金属：以Pb计20μg/g以下（1.0g，第1法，对照液铅标准液2.0ml）。
【注6】水分：5.0%以下（0.5g，直接滴定）。
【注7】灼烧残渣：0.2%以下。
【注8】含量：将本品换算成无水物后，含有盐酸硫胺（C12H17ClN4OS・HCl）98.0～102.0%。
2 维生素B1的生产使用工艺2.1维生素B1因其具有良好的水溶性因此可以添加到各类型食品中作为营养强化剂来使用。
目前GB 14880及其公告中液态饮料类只有饮液、乳饮料类及风味饮料（限果汁（果味）型饮料）中可以添加维生素B1，本次预申请其在“果蔬汁类”饮料中来使用。
2.2 添加了维生素B1的果蔬汁饮料生产工艺将称量好的原料1投入有离子交换水的搅拌罐中溶解、搅拌均匀将称量好的原料2、原料3投入搅拌罐中，混合搅拌均匀将称量好的原料4和各种维生素及矿物质加入搅拌罐中，混合搅拌均匀将称量好的原料5加入搅拌罐中，混合搅拌均匀3 维生素B1的检验方法3.1分别精确称取待测样品与盐酸硫胺标准品（预先与以维生素B1同样的方法测定水分）0.1g ，各自加入与流动相同一组成成分的溶液使之溶解，准确定容至50ml 。
乳制品及其相关食品中乳铁蛋白常用检测方法
分析与检测T logy科技随着经济的快速发展，人们对食物营养的需求日益旺盛。
乳铁蛋白因具有抗菌、抗氧化、抗癌、促进肠道发育、促进铁吸收，以及调节免疫系统等功能，故在乳制品及相关的婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品、特殊膳食食品、保健食品等生产中均有不同程度的添加。
随着“国家优质乳工程”的实施，众多企业对巴氏杀菌乳工艺进行改进，从而保留了更多天然活性乳铁蛋白。
然而，我国尚未建立完善的乳制品及相关食品中乳铁蛋白添加量与保留量的统一检测标准，导致生产者、监管者和消费者无法在同一尺度上进行衡量判别。
本文通过对乳制品及相关食品中乳铁蛋白现有的常用检测方法进行汇总，对不同检测方法的适用样本及检测性能进行分析，提出了不同乳制品及相关食品中乳铁蛋白检测方法的建议，旨在为乳制品及相关食品中乳铁蛋白检测的标准化提供思考与建议。
1 乳铁蛋白的检测需求乳铁蛋白（lactoferrin，LF）是哺乳动物乳汁中存在的一种天然非血红素铁结合糖蛋白，具有强大的生物功能——抗菌、抗氧化、抗癌、促进肠道发育和铁吸收，以及调节免疫系统等。
因乳铁蛋白具有优质生物功能，免疫力较低的人群、患有感染性疾病的人群、具有骨质疏松风险的人群，以及缺铁性贫血人群均对于乳铁蛋白的补充有所需求。
以婴幼儿和儿童为例，现有的研究证据表明，牛乳铁蛋白对婴幼儿和儿童腹泻、新生儿坏死性小肠结肠炎、新生儿呼吸道疾病、新生儿败血症、儿童幽门螺旋杆菌感染等均有一定的预防和辅助治疗作用，且对婴幼儿贫血具有改善作用，并对婴幼儿生长发育有促进作用。
母乳是婴幼儿获得乳铁蛋白的主要来源，而无法正常进行母乳哺育的婴幼儿和其他人群获得乳铁蛋白的主要来源则为其他乳制品及相关食品。
因为牛乳铁蛋白和人乳铁乳制品及其相关食品中乳铁蛋白常用检测方法□ 张君超 胡素丽 北京美正生物科技有限公司40 食品安全导刊 2020年7月分析与检测Jul 2020 CHINA FOOD SAFETY41蛋白的氨基酸序列同源性达69%，且具有相似的生物活性，所以是目前最易获取的乳铁蛋白来源之一。
资料4质量规格要求生产工艺和检验方法食品中该添加剂的检测
一、产品质量规格要求项目指标色泽白色或淡黄色性状粉末状甜菊糖苷，% ≥80.0葡萄糖，% ≤20.0灰分，% < 1.0铅（缩写Pb），mg/kg < 1.0砷（缩写As），mg/kg < 0.5水银（缩写Hg），mg/kg < 0.05二、生产使用工艺1. 将干燥甜菊糖叶片以1:10 的比例浸泡在水中（温度50 摄氏度，时间1 小时），且对该混合物进行生物分离处理以期获得含有溶解糖苷的滤液。
糖苷从RO （逆渗透）水中分离出来。
本阶段不使用其它溶剂。
该过程在连续逆流提取器中实施。
2. 含有溶解糖苷的滤液使用凝聚剂【Ca（OH）2 2.5% 重量】进行处理，以期沉淀多糖、蛋白质和色素。
凝聚剂处理操作应在30 分钟内在室温下实施。
然后该混合物进行过滤，以期获得含有溶解糖苷的纯净滤液。
过滤应在“板框”式压滤机上实施。
这种压滤机与制糖所使用的压滤机类似。
3. 纯净滤液：通过活性炭进行脱色（0.2% 重量）。
活性炭（食品级）是作为脱色剂应用于某些食品和药物生产过程中，其中包括制糖。
将活性炭添加到纯净滤液中，并在50 摄氏度下培养混合物一小时后，通过“板框”式压滤机转移活性炭，以期获得脱色滤液。
4. 脱色滤液流过装有食品级离子交换树脂的塔器（安伯来特FPC 23 或以氢离子形式存在的同类物质，以及安伯来特FP A 51 或以氢氧根离子存在的同类物质）。
离子交换树脂用于转移无机盐和有机离子。
阳离子通过安伯来特FPC 23（氢离子）转移，而阴离子通过安伯来特FP A 51（氢氧根离子）转移。
去离子步骤应在室温下实施。
溶液应以每小时0.5BV 的速度输送至塔器。
本步骤产生去离子滤液。
5. 去离子滤液流过装有大孔吸附树脂的塔器（甲醛系树脂HP20 或同类物质，室温，速度为每小时0.5BV）。
大孔吸附剂广泛应用于食品和药物生产中：从植物提取物中分离有价值的化合物、从发酵液中提取抗生素媒介、分离缩氨酸或食品添加剂、脱苦柑桔汁等。
反相高效液相色谱法测定食品添加剂乳铁蛋白
反相高效液相色谱法测定食品添加剂乳铁蛋白张林田;陈小雪;魏建华;张冬辉;陈建伟【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2010(046)007【摘要】建立了反相高效液相色谱法测定食品添加剂乳铁蛋白方法.样品采用0.5 mol·L-1氯化钠溶液溶解,稀释至适当浓度,过滤后供液相色谱仪测定,采用CAPCELL SG300 C18色谱柱分离.用两种不同配比的0.5 mol·L-1氯化钠溶液、乙腈及三氟乙酸的混合液作为流动相,梯度淋洗,在280 nm波长处检测,保留时间其特征紫外吸收光谱为乳铁蛋白定性的依据,外标法峰面积作定量测定.乳铁蛋白的质量浓度在10.0～100.0 mg·L-2范围内与其对应的峰面积呈线性,测定下限(10S/N)为5.0 mg·kg-1.【总页数】3页(P765-766,771)【作者】张林田;陈小雪;魏建华;张冬辉;陈建伟【作者单位】汕头出入境检验检疫局,汕头,515041;汕头出入境检验检疫局,汕头,515041;汕头出入境检验检疫局,汕头,515041;汕头出入境检验检疫局,汕头,515041;汕头出入境检验检疫局,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】O652.63【相关文献】1.反相高效液相色谱法检测食品添加剂乳铁蛋白 [J], 张林田;陈小雪;魏建华;张冬辉;陈建伟2.反相高效液相色谱法同时测定九种食品添加剂 [J], 吴光斌;吕禹泽;陈发河3.反相高效液相色谱法测定婴儿奶粉中乳铁蛋白的含量 [J], 王飞;窦文渊;石燕丽;农云军;苏流坤4.8种食品添加剂的反相高效液相色谱法测定 [J], 刘素娟;邵艳秋;崔术新;盛琦5.反相高效液相色谱法对果蔬汁饮料中14种常见食品添加剂的快速测定 [J], 汪辉;曹小彦;李林;胡朝晖;沈腊三;解晓红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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资料四乳铁蛋白食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或相关情况说明内蒙古伊利实业集团股份有限公司一、乳铁蛋白质量规格要求（一）感官指标（二）理化指标（三）微生物、污染物及真菌毒素指标二、检验方法（一）用反相高效液相层析法测定乳铁蛋白的纯度1. 样品准备对粉状乳铁蛋白，称出20 mg乳铁蛋白样品，用MilliQ水配成20 mL，1mg/mL的乳铁蛋白溶液，再通过0.2 μm的乙酸纤维素膜进行过滤。
2. 材料和试剂（1）MilliQ水（超纯水18 megohm resistivity）（2）95%的乙腈(氰化甲烷)（HPLC 级）（3）1%的三氟乙酸（TFA）2.1 缓冲液准备（1）缓冲液A：100% MilliQ水把1 L MilliQ水装在1 L 的SCHOTT瓶中。
（2）缓冲液B：95%的乙腈分别量取50 mL MilliQ水和950ml乙腈。
把二者混合，通过0.45 μm的滤膜进行过滤。
储存在1 L的SCHOTT瓶中。
（3）缓冲液C：1%的三氟乙酸用移液管量取25 mL三氟乙酸放入200 mL MilliQ水中，用MilliQ水补至250 mL。
转移到250 mL的SCHOTT瓶中储存。
3. 仪器设备（1）水基线体系控制和获得数据的设备（Empower）（2）水2695分离组件和2487双λ吸收检测器（3）反相高效液相层析柱---Alltech prosphere C4 300A 150mm × 4.6mm,with Alltech All-guard Guard 7.5 × 4.6mm.4. 高效液相层析的测量方法4.1 注射体积50 μL已过滤的乳铁蛋白样品或空白液注入柱中供分析。
4.2 梯度表4.3 温度柱子温度=35°C样品温度=10°C4.4 检测在波长280 nm处检测乳铁蛋白，乳铁蛋白的洗脱时间大约9.7分钟。
5. 过程与计算5.1 用Empower软件，用样品的层析谱减去空白溶液。
5.2 结合整个样品的层析谱，算出全部蛋白的含量。
然后结合乳铁蛋白的高峰区算出乳铁蛋白的百含量（以蛋白质为基数）。
5.3 用下面的计算公式计算乳铁蛋白的百分含量（干重）：乳铁蛋白的百分含量(干重)=[蛋白含量/(100 - 水分)]×乳铁蛋白的百分含量其中：蛋白含量是用凯氏定氮法测定的蛋白含量乳铁蛋白的百分含量是用高效液相层析法测定的乳铁蛋白含量（二）乳铁蛋白铁饱和度的测定1. 原理通过向乳铁蛋白水溶液中逐渐加入等分量的三价铁离子溶液直至乳铁蛋白铁饱和。
该过程中乳铁蛋白铁饱和度的变化在465 nm分光光度计下进行检测，当吸光值不再变化的时候说明乳铁蛋白已经完全饱和。
2. 试剂2.1 FeCl3.6H2O2.2 NTA (氨三乙酸)2.3 NaH2PO4.H2O2.4 Na2HPO4.12H2O2.5 NaHCO32.6 NaOH2.7 NaCl3.溶液的配置3.1 配置含有10 mM氯化铁和0.1 M HCl的溶液：（1）在100 mL容量瓶中分别加入：- 0.83 mL 37%的HCl- 0.270 g的FeCl3.6H2O (准确称量)（2）加蒸馏水至100 mL刻度处3.2 配置40 mM Na-NTA溶液：在100 mL容量瓶中分别加入:- 0.764 g的NTA- 加入大约20 mL去离子水- 缓慢加入1 M的NaOH溶液来溶解NTA粉末(以形成可溶的NTA钠盐)- 将1M的NaOH逐滴加入，每加入一滴并充分混合直至NTA完全溶解3.3 配置含有5mM FeCl3.6H2O和20 mM NaNTA的溶液- 将等量（各20 mL）的3.1和3.2溶液混合- 用10 M的NaOH溶液将溶液的pH值调至4-6之间（例如：4.5），但要注意尽可能少的将溶液稀释）3.4 0.1M NaHCO3的配置将8.401 g的NaHCO3加入1升蒸馏水中。
3.5 2%乳铁蛋白水溶液的配置- 将0.8 g乳铁蛋白粉末溶解于40 mL蒸馏水中- 搅动直至完全溶解4.铁饱和度的测量可以用所配置溶液来测定pH值和在600 nm时的透光率，溶液必须经过0.45 μm millipore过滤器过滤- 将1mL乳铁蛋白溶液注入比色皿- 加入1.5 mL 0.15M NaCl和200 μL的0.1 M的NaHCO3溶液- 在465 nm下测量溶液的吸光值- 加入10 μL等量的溶液3.3。
每加一次，充分混合并在465 nm下测量吸光值，直到吸光值变为恒定，也就是说乳铁蛋白趋于饱和。
5.结果的表达以纵坐标为吸光值，横坐标为等量三价铁离子浓度作图。
直线(1)为当乳铁蛋白趋于饱和时的吸光值。
直线(2)为以初始乳铁蛋白吸光值为原点到铁饱和时吸光值的连线。
将直线(2)反向延长使其与横坐标交汇。
乳铁蛋白初始铁饱和度可以通过以下两种方法计算得出：（1）通过465 nm 下最初的吸光值(b1)与饱和时溶液的吸光值(b2)的比值计算得出：1%1002b b =⨯乳铁蛋白铁饱和度（） （2）通过初始乳铁蛋白中三价铁离子的微摩尔数(a1)和饱和乳铁蛋白中三价铁离子的微摩尔数(a)的比值得出：a %=100⨯1乳铁蛋白铁饱和度（）a备注：一等份也就是每10 μL 的三价铁离子溶液=0.05 μm ol Fe 3+ 6. 乳铁蛋白浓度测定考虑到1 mol 的乳铁蛋白可以结合2摩尔的三价铁离子，因此溶液中乳铁蛋白的摩尔数应该是铁离子摩尔数的二分之一。
μmol 乳铁蛋白= 0.5×μmol Fe 3+ 乳铁蛋白分子量= 77,000因此，77,000×μmol 乳铁蛋白×10-6= 检测溶液中乳铁蛋白的质量（g ）。
（三）乳制品中乳铁蛋白含量的检测第一部分 高效毛细管电泳测定乳制品中乳铁蛋白含量A.1 适用范围本方法适用于乳粉和乳铁蛋白原料中乳铁蛋白的定性和定量分析。
A.2 原理试样经处理后进入毛细管中，在毛细管中充入缓冲溶液，两端加高电压，毛细管中形成电场。
样品中带电粒子在电场中以不同速度运动，流经检测器被检测，得到分离谱图，根据峰面积和浓度成正比的关系，计算不同成分的含量。
A.3 试剂A.3.1 实验配制所用水均为超纯水。
A.3.2 乳铁蛋白标准品（Fluka ）。
A.3.3 氢氧化钠：1 moL/L 溶液。
A.3.4 硼酸（sigma）。
A.3.5 CsOH（50 %水溶液，北京百灵威化学技术有限公司）。
A.3.6 冰乙酸（优级纯）。
A.3.7 十二烷基硫酸钠(SDS，Sigma-Aldrieh，货号:L3771)。
A.3.8 羟乙基纤维素(HEC，Sigma-Aldrieh，货号:54290)。
A.3.9 HEC储备液的配制：HEC是一种淡黄色粉末状固体，首先准确量取100 mL超纯水置于试剂瓶中，将其放置在60 ℃水浴中加热，将准确称量的4 g HEC 逐步加入，涡旋混匀，待其完全溶解即配制成40 g/L的HEC储备液，放入4 ℃冰箱备用。
A.3.10 运行缓冲液：0.3 moL/L硼酸，其中含20 mmoL/L SDS和8 g/L HEC。
首先分别准确称取1.855g硼酸和0.577 g SDS放入100 mL容量瓶中，加入70 mL的超纯水，超声使其溶解，然后再加入20 mL质量浓度为40 g/LHEC储备液，涡旋混匀后用1 moL/L的CSOH调节pH值到8.80，最后用超纯水定容到刻度线，室温放置备用。
A.3.11 样品缓冲液：0. 05 moL /L HAC。
准确移取 1.437 mL冰醋酸置于500 mL 容量瓶中，用超纯水定容到刻度，放入4 ℃冰箱备用。
A.4 仪器A.4.1 毛细管电泳仪（带有紫外检测器）。
A.4.2 电子天平。
A.4.3 pH计。
A.4.4 超声振荡器。
A.4.5 高速离心机A.5 操作步骤A.5.1 样品的前处理分别称取一定质量的的样品于10 mL容量瓶中，加入适量样品缓冲液，涡旋混匀后，再用样品介质稀释定容到刻度，于9000 r/min离心10 min，取上清液分析。
A.5.2 测定A.5.2.1 标准曲线的绘制准确称取10 mg乳铁蛋白标准品于l mL样品管中，加入1.5 mL样品介质涡旋混匀后，制得10000 mg/L的乳铁蛋白标准储备液，放入4 ℃冰箱备用。
工作液由储备液经0. 05 mol/L HAc 稀释后制得。
准确移取10、20、40、80、160 mg/L质量浓度为5000 mg/L的Lf标准储备液于l mL样品管中，再分别加入990、980、960、920、840 mg/L样品缓冲液，混匀后即得50、100、200、400、800mg/L的工作液。
峰面积(A)与质量浓度(C，mg/L)在50~800 mg/L范围内具有良好线性关系，检出限(LOD)为15 mg/L。
A.5.2.2 试样测定测定条件毛细管(50 um×57 cm，有效长度:50 cm，河北永年锐沣色谱配件有限公司)；分离电压:20kV；检测波长:214 nm；操作温度:25 ℃；进样压力：0.5 psi；进样时间:20 s。
每次实验完毕后，用运行缓冲溶液洗3 min，用1 moL/L氢氧化钠洗10-30 min，水洗3 min，抬高盖板使冷凝液回流后，关机。
使用新换的毛细管柱需要用水洗10 min，用1 moL/L氢氧化钠清洗30 min，水洗10 min，进行柱子的活化。
然后可以进行样品的测定。
(清洗压力均为20 psi) A.6 分析结果的计算计算公式: X = C * N/m式中：X——样品中乳铁蛋白的含量mg/kg；C——从标曲中查得相应乳铁蛋白的含量mg/L；M——称取试样的质量g；N——稀释倍数×定容体积。
第二部分酶联免疫法A.7 原理本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被牛乳铁蛋白（LF）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中牛乳铁蛋白（LF）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中牛乳铁蛋白（LF）含量。
A.8 试剂盒组成及试剂配制A.8.1 酶联板：一块（96孔）A.8.2 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1 mL，盖好后静置10 min以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成100 ng/mL,50 ng/mL,25 ng/mL,12.5 ng/mL,6.25 ng/mL,3.12 ng/mL,1.56 ng/mL其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL，临用前15 min内配制。