HCY生化检测试剂方法比较培训课件
合集下载
同型半胱氨酸(HCY)检测试剂方法学比较
同型半胱氨酸(hcy)检 测试剂方法学比较
目录
Contents
• 同型半胱氨酸(Hcy)简介 • 同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂的种
类 • 各种Hcy检测试剂的比较 • Hcy检测试剂的应用场景 • Hcy检测试剂的发展趋势和展望
01 同型半胱氨酸(Hcy)简介
Hcy的生理功能
参与蛋氨酸循环
同型半胱氨酸是蛋氨酸循环的重要中 间产物，参与细胞内甲基化反应，对 维持细胞功能具有重要作用。
电化学检测法
总结词
电化学检测法是一种快速、简便的检测方法，适用于临床常 规检测。
详细描述
电化学检测法利用电化学原理，通过测量同型半胱氨酸在电 极上的氧化还原反应产生的电流来定量检测同型半胱氨酸的 浓度。该方法具有快速、简便、准确度高等优点，适用于临 床常规检法是一种高灵敏度的检测方法，具有较好的稳定性和准确性。
详细描述
随着人们对Hcy认识的深入，对Hcy检测的灵敏度和特异性 要求越来越高。高灵敏度检测技术的研究和应用，能够更 准确地检测低浓度Hcy，避免漏检和误检，提高临床诊断 的准确性。
多指标联合检测的研究
总结词
多指标联合检测是Hcy检测试剂的另一个重 要发展方向，能够同时检测多种与Hcy相关 的指标，提供更全面的诊断信息。
04 Hcy检测试剂的应用场景
临床诊断
01
辅助诊断心血管疾 病
同型半胱氨酸(Hcy)水平升高与 心血管疾病风险相关，Hcy检测 试剂可用于辅助诊断相关疾病。
02
预测脑卒中风险
03
评估肾脏功能
高Hcy水平与脑卒中风险增加有 关，通过检测试剂可预测个体脑 卒中风险。
Hcy水平与肾脏功能有关，检测 试剂可用于评估肾脏功能状况。
目录
Contents
• 同型半胱氨酸(Hcy)简介 • 同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂的种
类 • 各种Hcy检测试剂的比较 • Hcy检测试剂的应用场景 • Hcy检测试剂的发展趋势和展望
01 同型半胱氨酸(Hcy)简介
Hcy的生理功能
参与蛋氨酸循环
同型半胱氨酸是蛋氨酸循环的重要中 间产物，参与细胞内甲基化反应，对 维持细胞功能具有重要作用。
电化学检测法
总结词
电化学检测法是一种快速、简便的检测方法，适用于临床常 规检测。
详细描述
电化学检测法利用电化学原理，通过测量同型半胱氨酸在电 极上的氧化还原反应产生的电流来定量检测同型半胱氨酸的 浓度。该方法具有快速、简便、准确度高等优点，适用于临 床常规检法是一种高灵敏度的检测方法，具有较好的稳定性和准确性。
详细描述
随着人们对Hcy认识的深入，对Hcy检测的灵敏度和特异性 要求越来越高。高灵敏度检测技术的研究和应用，能够更 准确地检测低浓度Hcy，避免漏检和误检，提高临床诊断 的准确性。
多指标联合检测的研究
总结词
多指标联合检测是Hcy检测试剂的另一个重 要发展方向，能够同时检测多种与Hcy相关 的指标，提供更全面的诊断信息。
04 Hcy检测试剂的应用场景
临床诊断
01
辅助诊断心血管疾 病
同型半胱氨酸(Hcy)水平升高与 心血管疾病风险相关，Hcy检测 试剂可用于辅助诊断相关疾病。
02
预测脑卒中风险
03
评估肾脏功能
高Hcy水平与脑卒中风险增加有 关，通过检测试剂可预测个体脑 卒中风险。
Hcy水平与肾脏功能有关，检测 试剂可用于评估肾脏功能状况。
同型半胱氨酸ppt课件
蛋氨酸
CH 3
蛋氨酸是最重要的甲基供体，参与绝大多数 人体代谢过程中的甲基化反应，它将甲基转 移后形成Hcy属于蛋氨酸的循环中间产物。
来源：主要是饮食中的蛋氨酸 去路：从新甲基化为蛋氨酸
转硫化途径，结合成胱硫醚。 直接释放到细胞外
HOOC
NH 2
CH CH 2 CH 2 SH
同型半胱氨酸
NH 2
HOOC CH CH 2 S
生活方式
-预期的相关浓度范围
怀孕 补充叶酸 早期的糖尿病 (I型) 甲亢 酒精 (少量摄入) 锻炼
酒精 (多量摄入) 咖啡 >6 杯/天 吸烟
增殖性疾病 甲低 糖尿病 (II型) 肾衰竭
维生素 B6 缺乏 叶酸缺乏 TT, C677T MTHFR (与叶酸缺乏联合) 维生素 B12 缺乏
胱硫醚-β-合成酶缺乏(另一种严重的遗 传性酶缺乏)
• 血栓、动脉粥样化形成：
可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C和凝血因子，血小板内前列腺素合成增加，从而 促进血小板的粘附和聚集。
• 干扰谷胱甘肽合成：
谷胱甘肽是一种高氧化剂能防止很多细胞成分氧化的相互作用，对血管形成保护。
• 影响体内转甲基化反应
HCY浓度升高会影响体内很多物质的甲基化过程，如核算，蛋白质等甲基化过程都会受 到影响，甲基化降低会影响细胞成分的发育和分化直接形成致病的因素。
酒精 (多量摄入) 咖啡 >6 杯/天 吸烟
增殖性疾病 甲低 糖尿病 (II型) 肾衰竭
维生素 B6 缺乏 叶酸缺乏 TT, C677T MTHFR (与叶酸缺乏联合) 维生素 B12 缺乏
胱硫醚-β-合成酶缺乏(另一种严重的遗 传性酶缺乏)
1
10
终末期肾病患者Hcy浓度显著升高， 同时发生心血管病危险大大增强
CH 3
蛋氨酸是最重要的甲基供体，参与绝大多数 人体代谢过程中的甲基化反应，它将甲基转 移后形成Hcy属于蛋氨酸的循环中间产物。
来源：主要是饮食中的蛋氨酸 去路：从新甲基化为蛋氨酸
转硫化途径，结合成胱硫醚。 直接释放到细胞外
HOOC
NH 2
CH CH 2 CH 2 SH
同型半胱氨酸
NH 2
HOOC CH CH 2 S
生活方式
-预期的相关浓度范围
怀孕 补充叶酸 早期的糖尿病 (I型) 甲亢 酒精 (少量摄入) 锻炼
酒精 (多量摄入) 咖啡 >6 杯/天 吸烟
增殖性疾病 甲低 糖尿病 (II型) 肾衰竭
维生素 B6 缺乏 叶酸缺乏 TT, C677T MTHFR (与叶酸缺乏联合) 维生素 B12 缺乏
胱硫醚-β-合成酶缺乏(另一种严重的遗 传性酶缺乏)
• 血栓、动脉粥样化形成：
可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C和凝血因子，血小板内前列腺素合成增加，从而 促进血小板的粘附和聚集。
• 干扰谷胱甘肽合成：
谷胱甘肽是一种高氧化剂能防止很多细胞成分氧化的相互作用，对血管形成保护。
• 影响体内转甲基化反应
HCY浓度升高会影响体内很多物质的甲基化过程，如核算，蛋白质等甲基化过程都会受 到影响，甲基化降低会影响细胞成分的发育和分化直接形成致病的因素。
酒精 (多量摄入) 咖啡 >6 杯/天 吸烟
增殖性疾病 甲低 糖尿病 (II型) 肾衰竭
维生素 B6 缺乏 叶酸缺乏 TT, C677T MTHFR (与叶酸缺乏联合) 维生素 B12 缺乏
胱硫醚-β-合成酶缺乏(另一种严重的遗 传性酶缺乏)
1
10
终末期肾病患者Hcy浓度显著升高， 同时发生心血管病危险大大增强
HCY
HCY (血同型半胱氨酸、Homocysteime HCY1．检测原理同型半胱氨酸在胱硫醚β-合成酶催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚。
L-胱硫醚在胱硫醚β-分解酶催化下又生成HCY、酮和NH3。
该循环反应生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下与NADH+反应，生成的NAD+的速率与样品中的HCY含量成正比。
340nm测定NADH+降低率速可以测得HCY的含量。
2．测试参数方法：酶循环速率法，下降反应波长：主：340nm 副：404nm温度： 37℃样品：新鲜无溶血现象的血清或血浆检测范围： 1.0-50µmol／L3.主要组成成份试剂1：乳酸脱氢酶＞800 KU/L丝氨酸 1.3 mmol/LNADH 1 mmol/L试剂2：胱硫醚β-合成酶＞20 KU/L胱硫醚β-分解酶＞10 KU/L稳定剂适量4.储存条件及有效期开瓶后2～8℃可稳定4周。
密封，2～8℃避光冷藏储存，不可冷冻结冰。
在原包装未打开情况下，可稳定至包装所示日期。
5.适用仪器东芝120全自动生化分析仪6.样品要求样品为空腹血清、血浆（EDTA，肝素、抗凝）。
样品应在低温条件下运输保存，样品采集后需冷藏并迅速离心，样本密封2～8℃下可保存48h。
如果检测延后需冷藏血清。
7.参考值血清4.0-15.4µmol／L8.检验结果的解释同型半胱氨酸在临床上的应用主要作为心血管疾病，尤其是冠状动脉粥硬化和心肌梗塞的危险指标，它的浓度升高程度与疾病的危险性成正比。
另外，根据同型半胱氨酸的代谢特点，维生素B12、叶酸缺乏症以及遗传性N5甲基四氢叶酸转甲基酶、胱硫醚等可得到诊断。
9.检验方法的局限性溶血对测定有干扰，操作过程中要尽量避免溶血样品放置时间对结果也有影响10.产品性能指标线性：本法线性范围为1.0-50µmol／L（r≥0.990）。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：4稀释，重新测定，结果乘以5。
【2024版】生化检验基础知识-PPT课件
2. 血液标本的采集
生化检验用的血液标本可来自于静脉、 动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本， 静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采 血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。
（1） 采血前准备
为了使实验室结果有效地用于临床，实验室 应了解在收集标本前和收集标本时，所有会 影响实验室的非患者内在疾病因素。采取各 种措施，提出对患者采集标本前以及采集时 的要求，称之为患者准备。
（2） 注意事项 收集尿液标本的容器必须清洁干燥， 最
好是一次性使用的容器。若容器反复使用， 则须用洗涤液和自来水清洗， 再用蒸馏水冲 洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、 精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集 后应 12 时内送检，以免细菌作用和化学成分 分解。若不能及时检验（如收集 24 小时尿 液），将标本置冰箱保存，若加入防腐剂， 保存效果更佳。
对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红 素血，应在检验报告上注明，供医生参考。
尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取 上清液进行分析
Байду номын сангаас
分离后的标本若不能及时检测或需保留以备 复查时，一般应放于4℃冰箱，某些检测项 目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存 放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。
3.尿液标本的采集
尿液标本的采集 （1） 采集方法 尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及 24 小时尿， 根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析 多收集 24 小时尿液， 24 小时尿标本采集方法如 下：
嘱病人在早晨 8 时排尿弃去，以后每次排尿均 收集于一大容器内，至次日早晨 8 时最后一次尿亦 收集于容器内。测量并记录 24 小时尿液总量，然 后混匀尿液，取适量尿液送检。
通常用量为0．5 ～1．0ml 浓盐酸／100 ml 尿液，适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草 扁桃酸（V M A）、17 －羟皮质类固醇和 17 －酮类固醇等定量测定。
H型高血压PPT课件
详细描述
H型高血压是指同时患有高血压和高同型半胱氨酸血症（Hcy）的人群。Hcy是 一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物。H型高血压具有遗传和环境因素的 共同作用，其发病机制较为复杂。
H型高血压的危害
总结词
H型高血压对心脑血管系统具有较大的危害，可导致脑卒中、心肌梗死等严重后果。
详细描述
H型高血压患者发生心脑血管事件的风险较高，如脑卒中、心肌梗死等。高同型半胱氨酸血症可损伤血管内皮细 胞，促进动脉粥样硬化的发生发展，增加血栓形成的风险。因此，H型高血压患者需特别关注心脑血管疾病的预 防和治疗。
H型高血压 PPT 课件
目录
• H型高血压概述 • H型高血压的病因与病理机制 • H型高血压的诊断与评估 • H型高血压的治疗与管理 • H型高血压的预防与控制 • H型高血压的研究进展与展望
01 H型高血压概述
定义与特点
总结词
H型高血压是一种特殊类型的高血压，其特点是同时伴有高同型半胱氨酸血症。
02 H型高血压的病因与病理 机制
病因分析
高同型半胱氨酸血症
其他因素
H型高血压的主要病因是高同型半胱 氨酸血症，与MTHFR基因突变导致酶 活性降低有关。
年龄、性别、肥胖、糖尿病等也可能 与H型高血压发病相关。
饮食习惯
高盐饮食、缺乏叶酸和维生素B6、 B12等营养素与H型高血压发病风险 增加有关。
其他药物
根据患者的具体情况，医生可能 会开具其他药物治疗，如降脂药、
抗血小板聚集药物等。
非药物治疗
健康饮食
适量运动
遵循低盐、低脂、低糖、高纤维的饮食原 则，增加富含叶酸的食物摄入，如绿叶蔬 菜、豆类等。
根据自身情况选择合适的运动方式，如散 步、慢跑、游泳等，每周进行至少150分钟 的中等强度有氧运动。
H型高血压是指同时患有高血压和高同型半胱氨酸血症（Hcy）的人群。Hcy是 一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物。H型高血压具有遗传和环境因素的 共同作用，其发病机制较为复杂。
H型高血压的危害
总结词
H型高血压对心脑血管系统具有较大的危害，可导致脑卒中、心肌梗死等严重后果。
详细描述
H型高血压患者发生心脑血管事件的风险较高，如脑卒中、心肌梗死等。高同型半胱氨酸血症可损伤血管内皮细 胞，促进动脉粥样硬化的发生发展，增加血栓形成的风险。因此，H型高血压患者需特别关注心脑血管疾病的预 防和治疗。
H型高血压 PPT 课件
目录
• H型高血压概述 • H型高血压的病因与病理机制 • H型高血压的诊断与评估 • H型高血压的治疗与管理 • H型高血压的预防与控制 • H型高血压的研究进展与展望
01 H型高血压概述
定义与特点
总结词
H型高血压是一种特殊类型的高血压，其特点是同时伴有高同型半胱氨酸血症。
02 H型高血压的病因与病理 机制
病因分析
高同型半胱氨酸血症
其他因素
H型高血压的主要病因是高同型半胱 氨酸血症，与MTHFR基因突变导致酶 活性降低有关。
年龄、性别、肥胖、糖尿病等也可能 与H型高血压发病相关。
饮食习惯
高盐饮食、缺乏叶酸和维生素B6、 B12等营养素与H型高血压发病风险 增加有关。
其他药物
根据患者的具体情况，医生可能 会开具其他药物治疗，如降脂药、
抗血小板聚集药物等。
非药物治疗
健康饮食
适量运动
遵循低盐、低脂、低糖、高纤维的饮食原 则，增加富含叶酸的食物摄入，如绿叶蔬 菜、豆类等。
根据自身情况选择合适的运动方式，如散 步、慢跑、游泳等，每周进行至少150分钟 的中等强度有氧运动。
同型半胱氨酸(HCY)检测试剂方法学比较
直接法优点
➢ 原理设计
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的 设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚 时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而 恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水 平非常高（可高达>300μmol/L，大部份< 20μmol/L)。 间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的 是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称 为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同 引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还 可引起血栓素（TXB2）的形成。
同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随 后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成， 从而引起临床上常见的梗塞性疾病。
同型半胱氨酸（Hcy）简介
直接法优点
➢ 目前国际市场上，能够在生化分析仪器上使用的 Hcy试剂有两种，都是循环酶法。一种为直接法 （水解酶循环酶法），另一种为间接法（胱硫醚 循环酶法）。
➢ 水解酶循环酶法，该法特异性高、抗干扰力强、 适用于各种生化仪，该类产品被国际大公司(如 罗氏， 奥林帕斯等)广泛采用。
如何区分两种方法学的试剂
参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学， 2010，11（24）：2334-2337
直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 •间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于50 μmol/L的样本 中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可 能只报告出30μmol/L或更低。
同型半胱氨酸(HCY)检测试剂方法学比较概述
参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学， 2010，11（24）：2334-2337
直接法测定Hcy原理
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+
关于直接法试剂的几个问题
3、间接法为何在国内也有市场 – 虽然Hcy的终端销售价格相同，但考虑到国内医 药体制的特殊情况，间接法试剂（只用到两种 主要酶）具有生产成本更低的优势，有能力给 销售渠道出让更多的利润； – 也有采用2酶或者3酶的直接法试剂，其成本大 大降低，但其检测灵敏度以及抗干扰物质的能 力都受到了极大的影响； – 综合来看，5酶直接法是目前美国FDA及AACC认 可的生化试剂中检测Hcy方法中特异性最高，最 可靠，最准确的方法，虽然生产成本相对较高， 但仍为罗氏 、雅培 、贝克曼等国际品牌所采 用。
生化技能培训内容PPT课件
应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、 C 、APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab 过量 ，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加 而递增 ，光散/透射射强度与抗原量成正比。
2019/12/30
8
免疫比浊法
优点： 方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测
缺点：抗体用量大 达平衡时间长
2019/12/30
21
2019/12/30
22
2019/12/30
23
2019/12/30
24
2019/12/30
25
2019/12/30
26
人员培训 质控品的选择 质控物的正确使用及保存 确定质量目标
2019/12/30
27
绘制质控图
Levey-Jennings质控图
临床生化技能
基层医疗机构临床检验专业人员培训 阜阳市人民医院检验科 王伟
2019/12/30
1
主要内容
全自动生化分析仪原理及基本结构 生化分析常用的分析方法 生化分析仪的实验操作 生化分析仪的日常维护和保养 生化检验的全程质量控制 实验室信息管理系统实际工作中的应用
2019/12/30
2
全自动生化分析仪原理及基本结构
全自动生化分析仪基本原理 1、比色法：被测物质吸光度与它的浓度成 正比。A=KC 2、透射比浊法：基于抗原抗体反应，多用 终点法。 3、离子选择性电极法：
2019/12/30
3
全自动生化分析仪原理及基本结构
生化分析仪的基本结构 1、加样系统：样品转盘（轨道）、试剂仓 、 试剂针、样品针、搅拌棒等 2、比色系统：光源、比色杯、单色器、检 测器等 3、恒温系统、清洗系统、水处理系统。 4、数据处理系统
2019/12/30
8
免疫比浊法
优点： 方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测
缺点：抗体用量大 达平衡时间长
2019/12/30
21
2019/12/30
22
2019/12/30
23
2019/12/30
24
2019/12/30
25
2019/12/30
26
人员培训 质控品的选择 质控物的正确使用及保存 确定质量目标
2019/12/30
27
绘制质控图
Levey-Jennings质控图
临床生化技能
基层医疗机构临床检验专业人员培训 阜阳市人民医院检验科 王伟
2019/12/30
1
主要内容
全自动生化分析仪原理及基本结构 生化分析常用的分析方法 生化分析仪的实验操作 生化分析仪的日常维护和保养 生化检验的全程质量控制 实验室信息管理系统实际工作中的应用
2019/12/30
2
全自动生化分析仪原理及基本结构
全自动生化分析仪基本原理 1、比色法：被测物质吸光度与它的浓度成 正比。A=KC 2、透射比浊法：基于抗原抗体反应，多用 终点法。 3、离子选择性电极法：
2019/12/30
3
全自动生化分析仪原理及基本结构
生化分析仪的基本结构 1、加样系统：样品转盘（轨道）、试剂仓 、 试剂针、样品针、搅拌棒等 2、比色系统：光源、比色杯、单色器、检 测器等 3、恒温系统、清洗系统、水处理系统。 4、数据处理系统
同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒（酶循环法）说明书
同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒（酶循环法）说明书【产品名称】同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒（酶循环法）【包装规格】a)试剂1：1×18mL试剂2：1×5mLb)试剂1：1×33mL试剂2：1×9mLc)试剂1：2×66mL试剂2：2×18mLd)试剂1：1×66mL试剂2：1×18mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中同型半胱氨酸的含量。
高HCY水平可导致动脉血管壁内皮片状脱落，同时刺激平滑肌细胞增生，引起血管损伤，出现类似动脉粥样硬化性病理改变。
测定同型半胱氨酸常用于冠心病、中风、高血压、老年痴呆等疾病的辅助诊断[1]。
【检验原理】同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，同时产生腺苷。
腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化率成正相关。
【主要组成成分】试剂1主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM）0.1mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）0.2mmol/L 三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP）0.5mmol/L α-酮戊二酸 5.0mmol/L 修饰化的HCY甲基转移酶（HMTase） 5.0KU/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH）10.0KU/L ProClin300适量试剂2主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L 修饰化的S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶 3.0KU/L 腺苷脱氨酶（ADA） 5.0KU/L ProClin300适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。
2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECTc8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/ CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/ BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。
Hcy培训-PPT
1） 遗传因素 主要由于HCY代谢过程中几种关键酶基因突变或其活性受损所致， 如编码亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的基因或参与维生素B12甲 基化合成酶及胱硫醚-β合成酶(CBS)合成的基因缺陷[1]，均可引起高 HCY血症。 2 ） 营养因素 各种原因引起HCY代谢所需的维生素辅助因子（叶酸、维生素B6、
血机制；增加血栓形成引起心脏病发作及中风 。
高胱氨酸尿症患者尸检病理可见动脉内膜纤维性斑块，弹力层破坏， 疏松结缔组织增生，间质细胞部分溶解，线粒体破坏。同型半胱氨酸 水平升高引起动脉粥样硬化和冠心病的作用机制可能有以下几种。
血凝块
脂肪物质
斑块 动脉血栓 病变部位
基础知识
同型半胱氨酸水平的致病机理
三） hHCY与糖尿病、肾病的关系 研究显示2 型糖尿病患者血HCY浓度高于正常对照，且与空腹血糖 HbA1c和糖尿病病程显著相关[1]；胰岛素对HCY 代谢具有重要的调节
作用，它可通过调节肝转硫基酶活性调节血HCY 浓度。
尿毒症时肝脏蛋氨酸腺苷转移酶活性升高，导致S-腺苷蛋氨酸水平 升高，进而使HCY水平升高，而HCY转化为半胱氨酸的过程未受影响， 故引起HCY的堆积，肾功能下降使HCY代谢的必需产物——丝氨酸合成 减少，导致HCY代谢受抑制。
基础知识
血浆同型半胱氨酸的浓度
空腹血浆总Hcy水平正常值为5~15umol/L 理想值<10umol/L 高于15umol/L被认为是高同型半胱氨酸血症（HHcy） 将HHcy分为轻、中、重度，其空腹血浆浓度分别为15~30、31~100及 大于100umol/L
基础知识
影响同型半胱氨酸水平的因素
4) 药物 如甲氨蝶呤、异烟肼、NO等可通过影响叶酸、维生素B6、维生素 B12的代谢而有升高HCY的作用，青霉胺可降低血HCY水平。 5) 疾病 心血管系统疾病、神经系统疾病、糖尿病及肾病患者，血浆中 Hcy水平会升高 。
血机制；增加血栓形成引起心脏病发作及中风 。
高胱氨酸尿症患者尸检病理可见动脉内膜纤维性斑块，弹力层破坏， 疏松结缔组织增生，间质细胞部分溶解，线粒体破坏。同型半胱氨酸 水平升高引起动脉粥样硬化和冠心病的作用机制可能有以下几种。
血凝块
脂肪物质
斑块 动脉血栓 病变部位
基础知识
同型半胱氨酸水平的致病机理
三） hHCY与糖尿病、肾病的关系 研究显示2 型糖尿病患者血HCY浓度高于正常对照，且与空腹血糖 HbA1c和糖尿病病程显著相关[1]；胰岛素对HCY 代谢具有重要的调节
作用，它可通过调节肝转硫基酶活性调节血HCY 浓度。
尿毒症时肝脏蛋氨酸腺苷转移酶活性升高，导致S-腺苷蛋氨酸水平 升高，进而使HCY水平升高，而HCY转化为半胱氨酸的过程未受影响， 故引起HCY的堆积，肾功能下降使HCY代谢的必需产物——丝氨酸合成 减少，导致HCY代谢受抑制。
基础知识
血浆同型半胱氨酸的浓度
空腹血浆总Hcy水平正常值为5~15umol/L 理想值<10umol/L 高于15umol/L被认为是高同型半胱氨酸血症（HHcy） 将HHcy分为轻、中、重度，其空腹血浆浓度分别为15~30、31~100及 大于100umol/L
基础知识
影响同型半胱氨酸水平的因素
4) 药物 如甲氨蝶呤、异烟肼、NO等可通过影响叶酸、维生素B6、维生素 B12的代谢而有升高HCY的作用，青霉胺可降低血HCY水平。 5) 疾病 心血管系统疾病、神经系统疾病、糖尿病及肾病患者，血浆中 Hcy水平会升高 。
同型半胱氨酸HCYppt课件
3、致血栓作用： Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列 腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。
;.
13
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱： Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤 维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成： 谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对 血管产生保护作用。Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害 。
基四氢叶酸为甲基
供体，发生再甲基
化，重新合成蛋氨
酸。
8
2）转硫途径：
血浆中的同型半胱氨酸存在形式
血浆中的同型半胱氨酸分两种形
式存在：
1）氧化型同型半胱氨酸和还原型
同型半胱氨酸。2）还原型同型半
胱氨酸中游离的巯基具有高度活
性，其容易氧化，从而形成二硫
化物的形式，
氧化型是同型半胱氨酸在血浆中
的主要存在形式，以二硫化物形
6、影响体内的转甲基化反应： Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，如核酸（DNA和RNA）、蛋 白质、髓磷脂、多糖、胆碱和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响 细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。
;.
14
高同型半胱氨酸血症的病理生理学
;.
15
• 肾功能不全、不健康的生活方式和营养不良、B族维生素缺乏以及遗传因素是 导致同型半胱氨酸升高最常见的因素。在各种遗传病因中，多态性所占比例 最大，而罕见的突变使酶重度缺陷导致的高同型半胱氨酸血症仅见于极少数 病例。而Hcy的升高可以引起或影响多种疾病，如：氧化应激，内皮功能障碍， 静脉血栓，心血管疾病，冠心病，外周血管疾病。学者们公认同型半胱氨酸 浓度升高是心血管病变的发生原因之一
;.
13
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱： Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤 维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成： 谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对 血管产生保护作用。Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害 。
基四氢叶酸为甲基
供体，发生再甲基
化，重新合成蛋氨
酸。
8
2）转硫途径：
血浆中的同型半胱氨酸存在形式
血浆中的同型半胱氨酸分两种形
式存在：
1）氧化型同型半胱氨酸和还原型
同型半胱氨酸。2）还原型同型半
胱氨酸中游离的巯基具有高度活
性，其容易氧化，从而形成二硫
化物的形式，
氧化型是同型半胱氨酸在血浆中
的主要存在形式，以二硫化物形
6、影响体内的转甲基化反应： Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，如核酸（DNA和RNA）、蛋 白质、髓磷脂、多糖、胆碱和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响 细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。
;.
14
高同型半胱氨酸血症的病理生理学
;.
15
• 肾功能不全、不健康的生活方式和营养不良、B族维生素缺乏以及遗传因素是 导致同型半胱氨酸升高最常见的因素。在各种遗传病因中，多态性所占比例 最大，而罕见的突变使酶重度缺陷导致的高同型半胱氨酸血症仅见于极少数 病例。而Hcy的升高可以引起或影响多种疾病，如：氧化应激，内皮功能障碍， 静脉血栓，心血管疾病，冠心病，外周血管疾病。学者们公认同型半胱氨酸 浓度升高是心血管病变的发生原因之一
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HCY生化检测试剂方法比较
提纲
同型半胱氨酸（Hcy）简介
常用Hcy测定方法：直接法与间接法
目录 直接法测定Hcy原理
3
直接法优点及如何区分两种方法学的试剂
间接法的缺陷
关于直接法试剂的几个问题
HCY生化检测试剂方法比较
2
同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 功能特点：Hcy是一个含硫氨基酸，是蛋氨酸代 谢的中间产物。
•肾脏疾病非常普遍，如果有实验室想要使用间接法试剂来测试Hcy，那
么他们将不得不同时进行肌酐的检测来确认实验的结果是Hcy的，而不是
由于肾脏疾病而产生的胱硫醚HCY的生化。检测试剂方法比较
12
直接法优点
➢原理设计
2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 •间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于50 μmol/L的样本 中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可 能只报告出30μmol/L或更低。
Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同 引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还 可引起血栓素（TXB2）的形成。
同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随 后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成， 从而引起临床上常见的梗塞性疾病。
HCY生化检测试剂方法比较
HCY生化检测试剂方法比较
14
直接法优点
➢干扰项目
2、间接法试剂会受到铁试剂的干扰
•若在仪器上同时做铁项目，那么间接法试剂就不能在该仪器 上使用。美国Carolina州液体化学（实验室）做了铁试剂对 间接法试剂与直接法试剂的干扰实验，结果发现间接法试剂 检测的Hcy水平很低，而直接法的Hcy结果却相当准确。 为此FDA对间接法试剂也发出了警告提示
3
同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 同型半胱氨酸（Hcy）致血管病变机制
致血管内皮细胞损伤和功能异常 对血管平滑肌细胞(VSMCS)的影响
刺激血管平滑肌增殖 对凝血系统的影响
增加血液中血小板的黏附性 对血脂的影响
HCY生化检测试剂方法比较
4
常用Hcy测定方法
常用方法
色谱法： HPLC、GC-MS
荧光偏振免疫检测 （FPLA） 酶联免疫
化学发光
优缺点
具有很高的准确度和稳定性，缺点是处理标本的 能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员， 常作为同型半胱氨酸检测的参考方法； 成本高，需专用仪器。
灵敏度高特异性强，但精密度差，耗费人力，操 作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本。 成本高，需专用仪器
HCY生化检测试剂方法比较
7
如何区分两种方法学的试剂
➢ 很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完 全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以 简易的区分两者：
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（R2）是 淡黄色的！
• 水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（R2）是 无色的！
HCY生化检测试剂方法比较
• 水解酶循环酶法（简称直接法）不受上述干扰。此项数据 结果发表在AACC杂志上。这也是一些国际知名公司拒绝使 用胱硫醚循环法Hcy试剂的原因。
HCY生化检测试剂方法比较
11
直接法优点
➢原理设计
1、间接法存在内源性胱硫醚的假阳性干扰
•罗氏和雅培公司的医学部检测专家甚至声称间接法试剂是很好的检测胱 硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
HCY生化检测试剂方法比较
15
直接法优点
美国FDA对间接法Hcy试剂发出的警告信
• 见链接： /ICECI/EnforcementActions/WarningLetters/2 005/ucm075355.htm，详见论文1
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
HCY生化检测试剂方法比较
6
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+
循环酶法： 直接法、间接法
可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准 确可靠，且可和其他参数进行同时分析，目前最 为常用的临床检测方法；
参考文献：同型半胱氨（24）：2334-2337 HCY生化检测试剂方法比较
5
直接法测定Hcy原理
9
直接法优点
原理设计 1 干扰项目 2
直循间环接接酶法法法
3 市场选择 4 试剂性能
HCY生化检测试剂方法比较
10
直接法优点
➢ 原理设计
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的 设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚 时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而 恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水 平非常高（可高达>300μmol/L，大部份< 20μmol/L)。 间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的 是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称 为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
•为此，贝克曼公司曾给用户发出忠告文件，详见参考文献:
Selhub J. Homocysteine metabolism. Ann Rev Nutr, 1999, 19:217-46
HCY生化检测试剂方法比较
13
直接法优点
➢干扰项目
1、间接法试剂会受到脂肪酶试剂的干扰
•如果间接法Hcy试剂与脂肪酶试剂在同一台仪器上使用，那 么其结果将受到脂肪酶试剂的严重干扰。间接法试剂厂家同 样对客户发出了忠告性文件称如果同时使用脂肪酶试剂，请 务必仔细清洗。
提纲
同型半胱氨酸（Hcy）简介
常用Hcy测定方法：直接法与间接法
目录 直接法测定Hcy原理
3
直接法优点及如何区分两种方法学的试剂
间接法的缺陷
关于直接法试剂的几个问题
HCY生化检测试剂方法比较
2
同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 功能特点：Hcy是一个含硫氨基酸，是蛋氨酸代 谢的中间产物。
•肾脏疾病非常普遍，如果有实验室想要使用间接法试剂来测试Hcy，那
么他们将不得不同时进行肌酐的检测来确认实验的结果是Hcy的，而不是
由于肾脏疾病而产生的胱硫醚HCY的生化。检测试剂方法比较
12
直接法优点
➢原理设计
2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 •间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于50 μmol/L的样本 中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可 能只报告出30μmol/L或更低。
Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同 引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还 可引起血栓素（TXB2）的形成。
同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随 后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成， 从而引起临床上常见的梗塞性疾病。
HCY生化检测试剂方法比较
HCY生化检测试剂方法比较
14
直接法优点
➢干扰项目
2、间接法试剂会受到铁试剂的干扰
•若在仪器上同时做铁项目，那么间接法试剂就不能在该仪器 上使用。美国Carolina州液体化学（实验室）做了铁试剂对 间接法试剂与直接法试剂的干扰实验，结果发现间接法试剂 检测的Hcy水平很低，而直接法的Hcy结果却相当准确。 为此FDA对间接法试剂也发出了警告提示
3
同型半胱氨酸（Hcy）简介
➢ 同型半胱氨酸（Hcy）致血管病变机制
致血管内皮细胞损伤和功能异常 对血管平滑肌细胞(VSMCS)的影响
刺激血管平滑肌增殖 对凝血系统的影响
增加血液中血小板的黏附性 对血脂的影响
HCY生化检测试剂方法比较
4
常用Hcy测定方法
常用方法
色谱法： HPLC、GC-MS
荧光偏振免疫检测 （FPLA） 酶联免疫
化学发光
优缺点
具有很高的准确度和稳定性，缺点是处理标本的 能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员， 常作为同型半胱氨酸检测的参考方法； 成本高，需专用仪器。
灵敏度高特异性强，但精密度差，耗费人力，操 作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本。 成本高，需专用仪器
HCY生化检测试剂方法比较
7
如何区分两种方法学的试剂
➢ 很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完 全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以 简易的区分两者：
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（R2）是 淡黄色的！
• 水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（R2）是 无色的！
HCY生化检测试剂方法比较
• 水解酶循环酶法（简称直接法）不受上述干扰。此项数据 结果发表在AACC杂志上。这也是一些国际知名公司拒绝使 用胱硫醚循环法Hcy试剂的原因。
HCY生化检测试剂方法比较
11
直接法优点
➢原理设计
1、间接法存在内源性胱硫醚的假阳性干扰
•罗氏和雅培公司的医学部检测专家甚至声称间接法试剂是很好的检测胱 硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
HCY生化检测试剂方法比较
15
直接法优点
美国FDA对间接法Hcy试剂发出的警告信
• 见链接： /ICECI/EnforcementActions/WarningLetters/2 005/ucm075355.htm，详见论文1
同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 间接法（胱硫醚法）
数据来源：www.kegg.jp
直接法（水解酶法）
HCY生化检测试剂方法比较
6
直接法测定Hcy原理
① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+
循环酶法： 直接法、间接法
可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准 确可靠，且可和其他参数进行同时分析，目前最 为常用的临床检测方法；
参考文献：同型半胱氨（24）：2334-2337 HCY生化检测试剂方法比较
5
直接法测定Hcy原理
9
直接法优点
原理设计 1 干扰项目 2
直循间环接接酶法法法
3 市场选择 4 试剂性能
HCY生化检测试剂方法比较
10
直接法优点
➢ 原理设计
• 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的 设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚 时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而 恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水 平非常高（可高达>300μmol/L，大部份< 20μmol/L)。 间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的 是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称 为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。
•为此，贝克曼公司曾给用户发出忠告文件，详见参考文献:
Selhub J. Homocysteine metabolism. Ann Rev Nutr, 1999, 19:217-46
HCY生化检测试剂方法比较
13
直接法优点
➢干扰项目
1、间接法试剂会受到脂肪酶试剂的干扰
•如果间接法Hcy试剂与脂肪酶试剂在同一台仪器上使用，那 么其结果将受到脂肪酶试剂的严重干扰。间接法试剂厂家同 样对客户发出了忠告性文件称如果同时使用脂肪酶试剂，请 务必仔细清洗。