液相色谱串联质谱测定动物肠衣中残留苯乙醇胺A
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ｍｉ， 声提取 ２ｍｉ，７ ｎ超 ｎ ３ ℃下避光水浴 振荡 １ 。 ６ｈ １ ３ ３ ２ 净 化 酶 解 液 冷 却 后 以大 于 等 于 ８ ０ ０ ． ． ． ０ ｒｍｉ ／ ｎ离心 １ ｎ 将上 清 液 过滤 至 ５ ０ｍｉ ， ＯｍＬ具 塞 离
心 管 内 ， 入 １ 加 ５ｍＬ正 己 烷 ， 力 振 摇 ２ｍｉ 后 以 大 用 ｎ 于 等 于 ８ ０ ０ ｒｍｉ ０ ／ ｎ离 心 ｌ ｎ 吸 去 正 己 烷 层 。 Ｏｍｉ ，
１ ３ ３ １ 酶解 ．．．
准确称取 ２ｇ（ 精确 到 ０ ０ ）猪肠 ． １ｇ
衣 ／ 肠 衣 样 品 于 ５ 羊 ＯｍＬ 具 塞 离 心 管 内 ， 人 ２ ． 加 ００
ｍＬ乙酸铵缓 冲溶液 （ Ｈ 值 一５ ２ ， 萄糖 苷酸 酶／ ｐ ． ） 葡 芳基 硫 酸 酯 酶 ４ Ｌ均 质 混 匀 １ｍｉ ， 旋 提 取 ５ ０ ｎ涡
柱 ，Ｏｍｇ ３ｍＬ， 国 Ｗ ａｅｓ 司 。 甲 醇 、 腈 、 ６ ／ 美 ｔｒ 公 乙 甲
下层 清液 做 备用 液 。 ＭＣ 固相 萃 取 柱 依 次 用 甲醇 、 各 ３ ｍＬ 活 Ｘ 水
化 ， 备用 液 全部 过柱 ， 滤液 速度 小于 等于 ２ｍＬ 取 过 ／ ｍｉ ， ｎ 接着 依 次用水 、 甲醇 各 ３ｍＬ淋 洗 ， ５ｍＬ氨 水一 乙腈 洗脱 并且 收集 。洗 脱液 在 ４ ℃氮 气 吹干 。用 １ ５ ｍＬ的 ０ １ 甲 酸／ 溶 解 残 渣 ， １ｍＬ正 己 烷 用 ． 水 加 力 振摇 ， 层液 体过 ０ ２ ｍ 膜 过滤 ， 下 ． ２“ 上机 测 定 。
中 图分 类 号 ： ８ ９ ８ ￥５．４ 文 献 标 识码 ： Ｂ 文 章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ２ ０ — ０ ３０ ０ ２ ０ ５ ２ １ ） ８０ ７ — ３
近 年来 ， 断 出现 的“ 肉精 事 件 ” 及 饲 料 中检 测 出 了
中国兽医杂志 ２１ ０ ２年 （ ４ 第 ８卷 ） ８期 第
７ ３
液 相 色谱 串联 质 谱 测 定 动 物 肠 衣 中残 留苯 乙醇胺 Ａ
刘 谦 ，颜 红
（ 定 出 入 境 检 验 检 疫 局 ， 北 保 定 ０ １５ ） 保 河 ７ ０ １ 摘 要 ： 立 了高 效 液 相 色 谱 一 建 串联 质 谱 （ Ｌ ／ ／ ） 定 肠 衣 中 的 苯 乙 醇 胺 Ａ 残 留 的 方 法 。 肠 衣 样 品 经 乙 酸 铵 溶 液 ＨＰ Ｃ ＭＳ ＭＳ 测 提 取 酶 解 ， Ｘ 固 相 萃 取 柱 净 化 ， 动 相 溶 解 后 ＨＰ Ｃ ＭＳ ＭＳ进 行 检 测 。苯 乙 醇 胺 Ａ 标 准 曲 线 线 性 关 系 良好 （ 一０ ９ ９ ； ＭＣ 流 Ｌ ／ ／ ｒ ． ９ ） 回收 率 ８ ． ～ ９ ． ， 对 标 准 偏 差 为 ３ ２ ～８ ４ ； 出 限 ０ ２￣ ／ ｇ 定 量 限 ０ ２ ｇ ｋ 。 ７Ｏ ３５ 相 ． ． 检 ． ｇｋ ， ． ５￣ ／ ｇ 关键 词 ： 效 液 相 色 谱一 高 串联 质 谱 ； 乙 醇 胺 Ａ； 衣 苯 肠
酸水 溶 液 ， 速 ０ ３ ｍＬ ｍｉ， 度 洗 脱 ； 样 体 积 流 ． ／ ｎ 梯 进
１ Ｌ； 温 ３ ℃ 。 ０ 柱 ５
１ ３ ２ 质谱 条件 ．．
离子 源 Ｅ Ｉ 电喷雾 离 子源 ） 扫 Ｓ（ ；
是一 种人工 合成 的化 学 物质 ， 农 业部 第 １ １ 被 ５ ９号 公 告列 为禁止 在饲料 和动物饮水 中使用 的物质 。 目前 有 关 瘦 肉精 类 残 留检 测 的研 究 很 多 ， 关 相
２４ （一 基 苯 基 ） 基一一 基 氨 基 一一 氧 基 苯 乙 醇 ， —一４硝 丁 ２羟 １甲
１ ３ １ 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Ｘｂ ｉｇ １ ． ． ｒ ｅ Ｃ ８柱 ， ｄ
５肚 ｍ，２ １ｍｍ × １ ０ｍｍ ； 动 相 为 乙 腈 一． 甲 ． ５ 流 ０１
的检测 标 准 有 农 业 部 １ ２ ０ ５号 公 告 ， ０ ３号 公 告 ， １６
描 方式 正离 子扫 描 ； 检测 方 式 ＭＲ Ｍ（ 多反 应监 测 ） ； 离 子源 温度 １ ０ ； 化 气 温 度 ３ ０Ｃ； 细 管 电压 ２℃ 雾 ５。 毛
３ ２ｋ 锥 孔 电 压 ２ ． Ｖ； ０ Ｖ。
的液相 色谱 一 串联 质谱 检 测 方法 ， 便 、 捷 ， 敏度 简 快 灵 和 准确 度 高 ， 测 限达 ０ ２ｔ ／ ｇ 检 ． ｇ ｋ 。 ￣
１ 材 料 与 方 法
１ １ 仪 器 与试剂 高效 液 相 色谱一 ． 串联 质谱 联 用 仪 （ Ｌ ＨＰ Ｃ ＴＱＤ ， 国 Ｗａｅｓ 司 。ＭＣ 固相 萃 取 ）美 ｔｒ 公 Ｘ
（） ２ 标准 工作 溶 液 的配 制 ： 移取 储 备 液 适 量 ， 甲醇 用
稀 释成 ２ ｇ ｍＬ。密封 ， ℃冷藏 。 ０ｎ ／ ４
１ ３ 方 法 ．
苯 乙醇 胺 Ａ， 为新 增 的瘦 肉精 品种 。苯 乙醇 胺 与其 他 瘦 肉精 品种 如莱 克 多 巴胺 等 相 比 ， 同样 可 使 生猪 长 速加 快 、 皮红 毛 亮 、 肉率 高 。人 吃 了含 这种 瘦 肉 瘦 精 的猪 肉后 ， 诱 发高 血压 、 脏病 等 。 可 心 苯 乙醇胺 Ａ又 称 为克伦 巴胺 ， 克仑 巴胺 ， 名 为 学
１ ３ ３ 样 品 前 处 理 ．．
ＧＢ Ｔ ２ ９ １２ ０ ， ／ １ １ －０ ７等 ， 究 对 象 ／ １ ８ —０ ８ ＧＢ Ｔ ２ ３ ３２ ０ 研 有猪 肉组织 Ｌ ， 物 尿 液 ｌ ， 肝 脏 和 猪 肌 肉［ ， １ 动 ］ ２ 猪 ］ ３ 毛 ］ 发Ｉ 等 ， ４ 但是 关 于动 物源 性 食 品 中苯 乙醇 胺 Ａ 的研 究很 少 。本 文 建 立 了动 物 肠 衣 中苯 乙 醇 胺 Ａ 残 留
心 管 内 ， 入 １ 加 ５ｍＬ正 己 烷 ， 力 振 摇 ２ｍｉ 后 以 大 用 ｎ 于 等 于 ８ ０ ０ ｒｍｉ ０ ／ ｎ离 心 ｌ ｎ 吸 去 正 己 烷 层 。 Ｏｍｉ ，
１ ３ ３ １ 酶解 ．．．
准确称取 ２ｇ（ 精确 到 ０ ０ ）猪肠 ． １ｇ
衣 ／ 肠 衣 样 品 于 ５ 羊 ＯｍＬ 具 塞 离 心 管 内 ， 人 ２ ． 加 ００
ｍＬ乙酸铵缓 冲溶液 （ Ｈ 值 一５ ２ ， 萄糖 苷酸 酶／ ｐ ． ） 葡 芳基 硫 酸 酯 酶 ４ Ｌ均 质 混 匀 １ｍｉ ， 旋 提 取 ５ ０ ｎ涡
柱 ，Ｏｍｇ ３ｍＬ， 国 Ｗ ａｅｓ 司 。 甲 醇 、 腈 、 ６ ／ 美 ｔｒ 公 乙 甲
下层 清液 做 备用 液 。 ＭＣ 固相 萃 取 柱 依 次 用 甲醇 、 各 ３ ｍＬ 活 Ｘ 水
化 ， 备用 液 全部 过柱 ， 滤液 速度 小于 等于 ２ｍＬ 取 过 ／ ｍｉ ， ｎ 接着 依 次用水 、 甲醇 各 ３ｍＬ淋 洗 ， ５ｍＬ氨 水一 乙腈 洗脱 并且 收集 。洗 脱液 在 ４ ℃氮 气 吹干 。用 １ ５ ｍＬ的 ０ １ 甲 酸／ 溶 解 残 渣 ， １ｍＬ正 己 烷 用 ． 水 加 力 振摇 ， 层液 体过 ０ ２ ｍ 膜 过滤 ， 下 ． ２“ 上机 测 定 。
中 图分 类 号 ： ８ ９ ８ ￥５．４ 文 献 标 识码 ： Ｂ 文 章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ２ ０ — ０ ３０ ０ ２ ０ ５ ２ １ ） ８０ ７ — ３
近 年来 ， 断 出现 的“ 肉精 事 件 ” 及 饲 料 中检 测 出 了
中国兽医杂志 ２１ ０ ２年 （ ４ 第 ８卷 ） ８期 第
７ ３
液 相 色谱 串联 质 谱 测 定 动 物 肠 衣 中残 留苯 乙醇胺 Ａ
刘 谦 ，颜 红
（ 定 出 入 境 检 验 检 疫 局 ， 北 保 定 ０ １５ ） 保 河 ７ ０ １ 摘 要 ： 立 了高 效 液 相 色 谱 一 建 串联 质 谱 （ Ｌ ／ ／ ） 定 肠 衣 中 的 苯 乙 醇 胺 Ａ 残 留 的 方 法 。 肠 衣 样 品 经 乙 酸 铵 溶 液 ＨＰ Ｃ ＭＳ ＭＳ 测 提 取 酶 解 ， Ｘ 固 相 萃 取 柱 净 化 ， 动 相 溶 解 后 ＨＰ Ｃ ＭＳ ＭＳ进 行 检 测 。苯 乙 醇 胺 Ａ 标 准 曲 线 线 性 关 系 良好 （ 一０ ９ ９ ； ＭＣ 流 Ｌ ／ ／ ｒ ． ９ ） 回收 率 ８ ． ～ ９ ． ， 对 标 准 偏 差 为 ３ ２ ～８ ４ ； 出 限 ０ ２￣ ／ ｇ 定 量 限 ０ ２ ｇ ｋ 。 ７Ｏ ３５ 相 ． ． 检 ． ｇｋ ， ． ５￣ ／ ｇ 关键 词 ： 效 液 相 色 谱一 高 串联 质 谱 ； 乙 醇 胺 Ａ； 衣 苯 肠
酸水 溶 液 ， 速 ０ ３ ｍＬ ｍｉ， 度 洗 脱 ； 样 体 积 流 ． ／ ｎ 梯 进
１ Ｌ； 温 ３ ℃ 。 ０ 柱 ５
１ ３ ２ 质谱 条件 ．．
离子 源 Ｅ Ｉ 电喷雾 离 子源 ） 扫 Ｓ（ ；
是一 种人工 合成 的化 学 物质 ， 农 业部 第 １ １ 被 ５ ９号 公 告列 为禁止 在饲料 和动物饮水 中使用 的物质 。 目前 有 关 瘦 肉精 类 残 留检 测 的研 究 很 多 ， 关 相
２４ （一 基 苯 基 ） 基一一 基 氨 基 一一 氧 基 苯 乙 醇 ， —一４硝 丁 ２羟 １甲
１ ３ １ 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Ｘｂ ｉｇ １ ． ． ｒ ｅ Ｃ ８柱 ， ｄ
５肚 ｍ，２ １ｍｍ × １ ０ｍｍ ； 动 相 为 乙 腈 一． 甲 ． ５ 流 ０１
的检测 标 准 有 农 业 部 １ ２ ０ ５号 公 告 ， ０ ３号 公 告 ， １６
描 方式 正离 子扫 描 ； 检测 方 式 ＭＲ Ｍ（ 多反 应监 测 ） ； 离 子源 温度 １ ０ ； 化 气 温 度 ３ ０Ｃ； 细 管 电压 ２℃ 雾 ５。 毛
３ ２ｋ 锥 孔 电 压 ２ ． Ｖ； ０ Ｖ。
的液相 色谱 一 串联 质谱 检 测 方法 ， 便 、 捷 ， 敏度 简 快 灵 和 准确 度 高 ， 测 限达 ０ ２ｔ ／ ｇ 检 ． ｇ ｋ 。 ￣
１ 材 料 与 方 法
１ １ 仪 器 与试剂 高效 液 相 色谱一 ． 串联 质谱 联 用 仪 （ Ｌ ＨＰ Ｃ ＴＱＤ ， 国 Ｗａｅｓ 司 。ＭＣ 固相 萃 取 ）美 ｔｒ 公 Ｘ
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稀 释成 ２ ｇ ｍＬ。密封 ， ℃冷藏 。 ０ｎ ／ ４
１ ３ 方 法 ．
苯 乙醇 胺 Ａ， 为新 增 的瘦 肉精 品种 。苯 乙醇 胺 与其 他 瘦 肉精 品种 如莱 克 多 巴胺 等 相 比 ， 同样 可 使 生猪 长 速加 快 、 皮红 毛 亮 、 肉率 高 。人 吃 了含 这种 瘦 肉 瘦 精 的猪 肉后 ， 诱 发高 血压 、 脏病 等 。 可 心 苯 乙醇胺 Ａ又 称 为克伦 巴胺 ， 克仑 巴胺 ， 名 为 学
１ ３ ３ 样 品 前 处 理 ．．
ＧＢ Ｔ ２ ９ １２ ０ ， ／ １ １ －０ ７等 ， 究 对 象 ／ １ ８ —０ ８ ＧＢ Ｔ ２ ３ ３２ ０ 研 有猪 肉组织 Ｌ ， 物 尿 液 ｌ ， 肝 脏 和 猪 肌 肉［ ， １ 动 ］ ２ 猪 ］ ３ 毛 ］ 发Ｉ 等 ， ４ 但是 关 于动 物源 性 食 品 中苯 乙醇 胺 Ａ 的研 究很 少 。本 文 建 立 了动 物 肠 衣 中苯 乙 醇 胺 Ａ 残 留