BCA蛋白浓度测定-酶标仪法

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酶标仪BCA法测定蛋白浓度-一、药品500次酶标仪，碧云天），含以下成分：BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，1. 100ml，碧云天），室温保存试剂A（P0012-1，a)BCA ，碧云天），室温保存P0012-2试剂B（，3mlb)BCA 度保存P0012-3，1ml，碧云天），-20c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（二、仪器和试剂最佳），水浴锅酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm1. 孔单条可拆酶标板（平底）2.96 1个（准备BCA工作液用）3.15 ml 离心管个（准备蛋白标准品工作液用） 1.5 ml 离心管14. 道移液器（排枪）和枪头5.单道移液器和枪头，8PBS 6. 三、操作步骤℃。1.水浴锅调至37℃冰箱中取出，）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-202.蛋白标准品工作液（1 mg/ml倍，即配μl PBS，即稀释5完全溶解并混匀。取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240 成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。BCA。2×1.1（标准品和样本均需测复孔）BCA计算工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×3.

BCA需充分混匀。50:1），体积的BCA试剂B配制（即试剂工作量按50体积的BCAA加上1 24工作液室温小时内稳定。

S0~S7），充分摇匀。4.按下表配制8个蛋白标准液（

0.2 20 D 80S3

0.3 S4 7030E

0.4 S5 F 40 600.5 G 50 50S6

1.0

0S7

100H

5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。

（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。（此时蛋白样本的稀释比1 / 2

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时。如预计蛋白浓度太高或太低，可适当10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml为调整稀释比例）个蛋白标准液S0~S7）中加入上面配制的8）（2再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（。

A B C D E F G

H

6.（注意：①每次测定时必须都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则每次都做标准曲线。②如果浓度较低，可适当地延长孵育时间或在较高温度孵育。）

7.用酶标仪测定562nm下标准品和样本的吸光度。

8.用标准蛋白质量为横座标，用吸光度值A562为纵座标，做标准曲线，用线形回归计算公式Y=A X + B。根据样本的吸光度，计算待测样本的蛋白浓度（注意待测样本的稀释倍数）。9.按WB实验的要求，稀释为2.5mg/ml，分装为每支100μl。

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