液相色谱法优秀课件

液固色谱（LSC, liquid-solid adsorption chromatography）
固 定 相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较 常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。
流 动 相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；
（2）应用和缺点
应用：用于分离相对 分子量中等的油溶性 物质，另用于分离不 同官能团的化合物和 异构体。 缺点：非线性等温吸 附常引起峰的拖尾现 象
2.2 进样系统
作用：把分析试样有效地送入色谱柱 进样方式：微量注射器；进样阀（耐高压的六
通阀：自动化进样、重现性好）
2.3 分离系统（色谱柱）
作用： 实现组分的分离 性能：直形（由不锈钢制成）；内径：2~6mm；长度：10~50cm
2.3 检测系统
作用：检测并收集各组分 类型：溶质型检测器和总体检测器两种
同极性的溶液为流动相，通过不断改变它们之间的 比例，从而使流动相的强度、极性、pH或离子强 度相应的改变，从而使各组分以它们的最佳k’值通 过色谱柱， 达到高的分离效果。
分类：内梯度和外梯度
（内梯度）
（外梯度）
LC梯度洗脱与GC程序升温的比较 a、 弱溶剂时，k’大的组分未流出； b、强溶剂时，k’小的组分分不开； c、中等强度溶剂时，k’小的组分1，2分不开； d、梯度洗脱，各组分得到良好的分离
操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压
二、高效液相色谱仪
高效液相色谱仪简单流程图
2.1 高压输液系统
贮液器：贮存流动相，由玻璃、不锈钢或氟塑料作成（0.5~2L） 高压泵：
作用：将贮液器中的流动相以高压（150～350×105 Pa）形式连 续不断地送入柱系统
性能：高压、恒流、压力变化小、流量范围可调、耐腐蚀、密 封性好
液相色谱法优秀课件
第十章 高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography, HPLC 一、HPLC概述 二、高效液相色谱仪 三、高效液相色谱法的类型
一、高效液相色谱法概述
气相色谱：流动相为气体 液相色谱：流动相为液体，70年代以后，在高压下输送流动相，
脲的取代物与氨基甲酸酯的高速分离
硝基苯胺异构体在10m氧化铝上的LSC分离
液液分配色谱（LLPC)
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极
性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶
为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但 需要注意的是，C18使用的pH值通常为2.5~7.5。
太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。
正相色谱法
1.极性固定相 聚乙二醇、氨基与腈基键合相 2.相对非极性流动相 正已烷、环已烷 3.极性调节剂 乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷 4.分离中等极性和极性较强化合物. 酚类、胺类、羰基类及氨基酸类 5.组分流出顺序 极性小先洗出
固定相分类： 承受压力：刚性固体（可承受高压，以二氧化硅为基质，表面键合 各种官能团，成化学键合固定相）；硬胶（承受压力低，由聚苯乙烯 和二乙基苯交连而成） 孔隙深度：表面多孔型和全多孔型
流动相要求： 流动相纯度高 不使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 能溶解样品，但不与样品发生反应 粘度小，以此提高柱效 与所选用的检测器匹配
主要类型：往复式Байду номын сангаас塞泵（恒流）
当柱塞推入缸体时，泵头出口（上部） 的单向阀打开，同时，流动相进入的 单向阀（下部）关闭，这时就输出少 量的流体。反之，当柱塞向外拉时， 流动相入口的单向阀打开，出口的单 向阀同时关闭，一定量的流动相就由 其储液器吸入缸体中。
梯度洗脱置（程序升温装置）： 概念：在分离过程中使用两种或两种以上的不
（ 可调波长） 检测池：很小，（1mm × 10mm ，容积 小于10μL）； 接收元件：光电倍增管
二极管阵列检测器（DAD)：可 得到所有波长上的色谱信号
紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器： 计算机快速处理，三维立 体谱图，如图所示。
美国惠普公司—1100型液相色谱仪
三、HPLC的主要类型及分离原理
（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
化学键合相色谱（CBPC)
固定相：将固定液化学键合于载体（硅胶）表面形成固定相 固定相类型： 极性固定相：正相色谱
以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等 键合在硅胶表面制成的 非极性固定相：反相色谱
反相色谱法最常用的固定相是C18 （十八烷基硅烷）、 C8 （辛烷 基）和苯基键合相的填料。 固定相使用条件：
称之为高效液相色谱（高压液相色谱），简称为HPLC。
HPLC与GC主要差别： 分析对象差别
GC（20％）：能气化、热稳定性好且沸点较低的样品， HPLC（80％）：溶解后能制成溶液的样品，分子量大、难气化、热稳 定性差及高分子和离子型样品均可检测
流动相差别 GC：流动相为惰性气体；组分与流动相无作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体（种类多，另可选用不同比例的多种液体作为流 动相）；流动相与组分间有亲合作用力，柱选择性好、分离效果佳
溶质型检测器：对被分离组分的物理或物理化学性质有响应，例： 紫外、DAD、荧光、电化学检测器等 总体检测器：对试样和洗脱液总的物理或物理化学性质有响应，例： 示差折光、介电常数检测器等
紫外检测器：应用最广，可用于梯度洗脱，对大部分有机化合物有响应 光源：低压汞灯，254或280nm（固定波长）；氢灯、氘灯，200-400nm
反相色谱法
1.非极性固定相 C18（简称ODS）、C8 2.极性流动相 水或缓冲液 3.极性调节剂 甲醇、乙腈、四氢呋喃 4.分离非极性和极性较弱化合物 占整个HPLC应用的80%左右 5.组分流出顺序 极性大先洗出