雷公藤甲素
雷公藤甲素药理作用研究新进展
雷公藤甲素药理作用研究新进展雷公藤甲素是中药雷公藤的主要活性成分。
目前雷公藤甲素已被用作多种疾病的治疗，包括：狼疮，肿瘤，类风湿性关节炎，肾病综合征等。
雷公藤甲素的主要药理作用包括：抗炎、抗肿瘤、免疫抑制等，近期研究表明雷公藤甲素对心血管疾病及骨质疏松均有保护作用。
该文以近期雷公藤甲素的研究进展为基础，对雷公藤甲素的药理作用进行综述。
标签：雷公藤甲素；药理作用；肿瘤；炎症；骨质疏松[Abstract]Triptolide is an active component in traditional Chinese medicine Tripterygium wilfordii Currently，triptolide has been used to treat various diseases，including lupus，cancer，rheumatoid arthritis and nephritic syndrome Its main pharmacology efficacies include antiinflammation，antitumor，and immunity suppression Recent studies have also demonstrated triptolide′s protective effect on cardiovascular diseases and osteoporosis This paper summarizes the pharmacological efficacy of triptolide based on the advance in studies of triptolide[Key words]triptolide；pharmacological activity；tumor；inflammation；osteoporosis雷公藤Tripterygium wilfordii Hook f属于卫矛科雷公藤属植物，是一种传统中药。
雷公藤甲素的提取方法总结
雷公藤甲素的提取方法总结1 雷公藤甲素简介雷公藤甲素（Triptolide, TPL）又称雷公藤内酯、雷公藤内酯醇，是从卫矛科植物雷公藤的根、叶、花及果实中提取的一种环氧二萜内酯化合物，与雷公藤碱、雷公藤次碱、雷公藤晋碱、雷公藤春碱、雷公藤增碱和雷公藤明碱等生物碱构成了雷公藤提取物的主要活性成分，白色针状晶体，难溶于水，易溶于甲醇、二甲基亚砜、无水乙醇、乙酸乙酯、氯仿等。
CAS #38748-32-2分子式：C20H24O6分子量：360.4保存: -20℃2 雷公藤及雷公藤甲素价格雷公藤8-10元/kg；雷公藤提取物5000-9000/g，雷公藤甲素含量不同价格不同；雷公藤甲素对照品800元/20mg（国产）2380元/10mg（进口）3 雷公藤提取分离方法3.1 回流法萃取药材粉末加入95%乙醇或石油醚加热回流提取三次，提取液回收溶剂得浸膏，浸膏用氯仿或者乙酸乙酯萃取，雷公藤甲素提取率0.00099%。
3.2 水提醇沉药材粉末加水回流提取，提取液加乙醇沉淀除杂质，回收乙醇得水溶液用乙酸乙酯萃取，得到粗总萜提取物。
3.3 超临界萃取雷公藤生药粉末，按1.0 mL /g 生药的比例加入乙醇作为夹带剂，混合均匀，将混合好的物料装入萃取釜中。
通过往复泵把二氧化碳加入到萃取釜中，使萃取釜的压力达到 30 MPa，温度40 ℃，维持 1 h。
收集物在40−50℃条件下，除去夹带剂乙醇溶液，并把得到的浸膏在真空干燥箱中充分干燥。
使用超临界CO2萃取技术提取雷公藤有效成分，甲素的得率为0.00115-0.00168 %。
3.4 液-液三相萃取柱层析采用乙醇回流提取雷公藤粉末后，在乙醇和磷酸二氢钠水溶液刚好出现两相时用乙酸乙酯/石油醚（V/V）为2∶8的体系做萃取剂来萃取雷公藤甲素。
乙酸乙酯萃取乳化很严重，且得到的浸膏杂质多，不利于后续处理。
此法改善了乙酸乙酯萃取的不足。
粗提浸膏进行硅胶柱层析，采用乙酸乙酯及石油醚洗脱，流出液浓缩，反复重结晶得雷公藤甲素。
雷公藤甲素致大鼠横纹肌溶解的实验研究
雷公藤甲素致大鼠横纹肌溶解的实验研究中药雷公藤药材及其制剂在临床广泛用于类风湿性关节炎、肾病综合征、银屑病、湿疹样皮炎及其他自身免疫性疾病的治疗，而雷公藤甲素（雷公藤内酯醇，triptolide，TP）是从雷公藤根皮中提取的一种具有松香烷结构的三环氧二萜内酯类化合物，具有多种生物活性[1]。
现代研究表明，TP不仅有抗类风湿性关节炎作用，还有抗癌、抗排异、抗糖尿病肾病、抗足细胞损伤诱导肾病综合征、抗肺炎、抗脊髓损伤、抗帕金森氏病、抗溃疡性结肠炎、抗免疫性肠病以及抗人骨髓增殖性疾病等广泛的药理作用，其中尤以抗癌活性最为突出[2-7]。
但其毒不良反应也不容忽视，研究表明，TP存在明显的肝毒性、肾毒性、生殖毒性和心肌毒性[8]。
本实验通过对TP干预后大鼠骨骼肌组织及血清生化指标的研究，探讨横纹肌溶解毒性的产生与TP的相关性，为临床安全有效使用雷公藤制剂提供其可能存在安全隐患的数据及依据，对避免横纹肌溶解（RL）相关的临床急诊事件的发生具有重要意义。
1 材料与方法1.1 实验动物SD大鼠40只，雌雄各半，体质量（180±20）g，清洁级，由浙江省医科院实验动物中心提供，动物许可证号为SCXK（浙）2008-0233。
动物饲养条件：温度（23±2）℃，自由饮食饮水，照明时间12 h/d，适应性饲养1周后进行实验。
1.2 仪器与试剂低温冰箱（日本三洋公司）；低温4℃离心机（Thermo Scientific，德国）；LD-1001型电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；SynergyHT 多功能酶标仪（美国BIOTEK公司）；Olympus 光学显微镜；透射电镜（Hitachi TM-1000，荷兰）。
雷公藤甲素标准品由中国药品生物制品检定所提供；大鼠肌红蛋白ELISA 试剂盒（美国RB公司）；ZB3-CK-J肌酸激酶试剂盒、H16L-C018乳酸脱氢酶试剂盒均由杭州艾迪康医学检验中心提供。
雷公藤甲素治疗类风湿关节炎的综述
雷公藤甲素治疗类风湿关节炎的综述摘要：类风湿关节炎是一种以关节滑膜异常病变为主的慢性进行性自身免疫性疾病。
因其治疗周期长、症状反复难以根治，会对患者身体、心理造成巨大损耗。
因目前疗效参差不齐、有些药物治疗机制尚不透彻、且存在不同的毒副作用，临床上很难去选择合适的治疗方式，本文着重探究雷公藤甲素治疗RA的优与劣，希望能为之后临床上治疗RA选择药物提供参考。
关键词：雷公藤甲素；类风湿关节炎；综述类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜异常病变为主的慢性进行性自身免疫性疾病。
以关节滑膜炎症及对称性的关节骨、软骨破坏为其主要特征。
病情持续时间长、症状反复难以根治，且RA患者还容易引发一系列并发症、合并症[1]，对患者身体、心理造成巨大损耗。
1.雷公藤甲素雷公藤甲素(triptolide，TP)是一种环氧化二萜内酯化合物，是中药雷公藤属植物体内的主要活性成分，也是其毒性成分。
TP的效价比雷公藤多苷高100～200[2]倍。
所以治疗效果上更显著高效，但是同时其毒副作用也远大于雷公藤多苷片。
常见的毒副作用表现为肝毒性和生殖毒性[3]。
1.1雷公藤甲素治疗的机制国外研究[4]发现TP可以使Th17细胞的分化受阻，同时还会抑制RA滑膜成纤维细胞中IFN-γ的产生与表达，从而抑制RA患者的炎症反应和起到免疫抑制作用。
此实验发现了TP治疗RA的作用机制，使得TP治疗RA成为一种新的可能。
此后国内学者范文强等人进一步研究发现采用TP治疗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠，一方面可以抑制大鼠体内TL-17、TNF-α、VEGF、TFN-γ的表达，另一方面还可以促进大鼠体内IL-10、TGF-β的表达，提高Treg细胞的比例。
从而明显的改善大鼠骨关节病变部位的肿胀情况，证实了TP在基于Treg/Th17细胞平衡此靶点上治疗RA具有广阔的前景。
1.2雷公藤甲素治疗RA的优与劣现在临床上用于RA治疗的雷公藤制剂多为雷公藤多苷片，但其实雷公藤甲素的效价远高于雷公藤多苷片故而其治疗效果也远超雷公藤多苷片，但因为TP治疗RA会出现肝毒素以及生殖毒素等毒副作用，所以导致其临床应用受阻。
雷公藤甲素抗肿瘤作用的研究进展
·综述·雷公藤甲素抗肿瘤作用的研究进展李磊 王兴鹏作者单位:200080 上海交通大学附属第一人民医院消化科 雷公藤是卫矛科雷公藤属木质藤本植物,主要产于中国南部地区,其提取物的成分很复杂,雷公藤红素(Tripterine )、雷公藤内酯酮(Triptonide )、雷公藤甲素(Triptolide )和雷公藤乙素(Tripdiolide )是其主要活性成分[1]。
雷公藤具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤和抗生育等多种药理作用[2],临床上常用于治疗风湿性疾病、自身免疫性疾病、器官移植、肾病、哮喘、肿瘤等。
近年来,雷公藤甲素的抗肿瘤作用及其机制倍受关注,现就其研究进展作一综述。
1991年,魏一生等[3]将雷公藤甲素分别与乳腺癌细胞株MCF 27、B T 220、胃癌细胞株M KN 245、M KN 27以及人前骨髓白血病细胞株HL 260共同培养,发现雷公藤甲素能抑制以上各株细胞增殖,提示其可能对胃癌、乳腺癌等具有治疗作用。
雷公藤甲素的抗胆管癌作用在体内及体外实验中均得到证实[4],癌细胞在浓度为0.5μg/ml 雷公藤甲素溶液中孵育24h 可出现DNA 断裂,并可见到破碎的凋亡细胞;雷公藤甲素治疗组小鼠胆管癌的生长受到明显抑制,1个月后肿瘤体积只相当于对照组的1/4～1/5。
目前,多项研究对雷公藤甲素的抗肿瘤作用机制进行了探索。
肿瘤坏死因子(TN F )作为一种可杀伤肿瘤细胞的细胞因子,因其能激活核因子kappaB (N F 2κB ),致使某些肿瘤细胞对TN F 的敏感性下降,但如雷公藤甲素与TN F 共同作用于癌细胞,则可高效诱导其发生凋亡,其原因为雷公藤甲素能抑制N F 2κB 的活化,并阻止TN F 诱导的凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis ,IAP )家族中C 2IAP1和C 2IAP2的产生[5]。
进一步的研究发现,受雷公藤甲素作用的细胞p53表达增高,而p53的促转录功能下降,致使p53转录调节基因(p21)下调。
雷公藤甲素结构优化及生物活性研究进展
雷公藤甲素结构优化及生物活性研究进展1. 雷公藤甲素的化学结构及合成方法研究进展雷公藤甲素(Tripterygium glycoside,TGT)是雷公藤中的主要活性成分，具有广泛的生物活性，如抗炎、镇痛、免疫抑制等。
对雷公藤甲素的化学结构及合成方法的研究取得了显著进展。
雷公藤甲素的化学名为三萜类化合物，其结构中含有一个环丙烯基和一个五元环骨架。
目前已经报道了多个雷公藤甲素的同分异构体，如雷公藤甲素A、B、C等。
这些同分异构体的理化性质和生物活性存在一定差异，因此对其进行深入研究具有重要意义。
雷公藤甲素的合成方法主要包括天然提取法和化学合成法，天然提取法主要通过从雷公藤中提取粗提物，再经过分离纯化得到雷公藤甲素。
化学合成法则是通过设计和合成新的化合物，再通过结构鉴定或活性测试筛选出目标化合物。
针对雷公藤甲素的合成方法研究取得了一系列重要进展，如利用微生物来源的酶催化合成、有机合成等。
雷公藤甲素具有显著的抗炎作用，能够抑制多种炎症细胞因子的产生，如白细胞介素1(IL、肿瘤坏死因子(TNF)等。
雷公藤甲素还能抑制炎症过程中的前列腺素E2(PGE的生成，从而减轻炎症反应。
雷公藤甲素具有良好的镇痛作用，能够减轻多种疼痛模型动物的疼痛反应。
雷公藤甲素通过阻断疼痛信号传导途径中的离子通道和神经递质释放，发挥镇痛作用。
雷公藤甲素具有显著的免疫抑制作用，能够降低多种免疫细胞的活性，如巨噬细胞、树突状细胞等。
雷公藤甲素还能抑制免疫细胞的增殖和分化，从而调节免疫功能。
随着对雷公藤甲素化学结构及其合成方法研究的不断深入，其生物活性也得到了更为全面和深入的认识。
有望通过优化雷公藤甲素的结构和合成方法，进一步提高其生物活性，为临床治疗提供更多选择。
1.1 雷公藤甲素的化学结构雷公藤甲素(Triptolide)是雷公藤中的主要活性成分，具有显著的抗炎、镇痛、免疫抑制等生物活性。
其化学名为3,4二羟基苯甲醛7,10二酮2,6二醇，分子式为C15H18O9。
雷公藤红素雷公藤甲素的含量检测分析
雷公藤红素|雷公藤甲素的含量检测分析雷公藤甲素的含量检测分析海棠合剂由雷公藤、竹茹、佛手、莱菔子、赤芍五种药味加工而成，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，适用于银屑病、湿疹、红斑狼疮等疾病[1].雷公藤为方中的君药，系卫矛科植物雷公藤的根、叶和花，其主要含有二萜类、生物碱类及苷类、糖类等。
其中主要活性成分之一是雷公藤甲素[2 -3]（又名雷公藤酯醇） .其与雷公藤的主要药理活性相关，具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等作用[4-5],同时也是雷公藤引起毒副作用的主要成分[5 -6],对心、肝、骨髓、胸、脾、肾及生殖系统等都有一定的毒性[7].准确测定雷公藤甲素的含量对控制海棠合剂的质量具有重要意义，故选择雷公藤甲素的含量作为成药含量控制指标。
1 材料与方法1. 1 仪器仪器： Agilent1200 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司） ,Agilent1200DAD 二极管阵列检测器； AE - 240 电子天平，AEG220 电子天平（日本岛津公司） ; Millipore -Q Gradient 超纯水装置（美国 Millipore 公司） .1. 2 试药雷公藤甲素标准品（由中国药品生物制品检验所提供，批号： 111567 -202102） ; 乙腈为色谱纯，水为 Mil-lipore 装置制备的超纯水；其他试剂均为分析纯。
1. 3 色谱条件色谱柱： Diamonsil C18色谱柱（250mm × 4. 6mm,5μm） ; 流动相：乙腈 - 水，梯度洗脱（ 0 ~ 20 分钟，20% A→50%A; 20 ~21 分钟，50% A→20% A） ,流速： 1.0mL/min; 进样量 10μl; 紫外检测波长 220nm; 柱温35℃ ; 理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于 10000.1. 4 对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每1mL 含 0.2mg 对照品溶液。
细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制
细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制一．雷公藤/雷公藤多苷片/雷公藤甲素1.雷公藤：雷公藤为卫茅科植物雷公藤( Tripterygium wilfordiiHook．F) 的根叶及花，又名黄藤断肠草，肾经现代药理研究表明，雷公藤具有抗炎，镇痛，抗肿瘤及免疫调节等作用，常用于皮肤炎症，免疫调节，肾脏疾病及呼吸系统疾病的治疗。
雷公藤主要含有雷公藤碱，雷公藤次碱，雷公藤宁碱，雷公藤晋碱等生物碱，此外还含二萜类，三萜类，倍半萜类及卫矛醇，卫矛碱等，其中二萜类和生物碱类是主要活性成分。
2.雷公藤多苷片：雷公藤多苷片为雷公藤的“氯仿--甲醇提取物”，是将雷公藤根部去皮后用乙醇提取，经氯仿萃取，再经硅胶柱以氯仿-甲醇梯度洗脱精制而成的一类有效成分，系极性很大的脂溶性成分的混合物。
其所包含的二萜内酯，生物碱，三萜等成分协同作用，既保留雷公藤生药的免疫抑制等作用，又去除了许多毒性成分。
3.雷公藤甲素：雷公藤甲素是雷公藤主要活性成分（二萜类）之一，又名雷公藤内酯醇。
二．雷公藤药理及临床作用1. 药理作用:1) 对免疫系统的影响2）抗炎作用3）抗肿瘤作用4）抑制生育5）对泌尿系统的影响：雷公藤在临床上常用于治疗多种肾脏疾病，减轻患者尿中的总蛋白和白蛋白等，雷公藤的这种作用可能与其具有防止破坏和修复肾小球滤过膜涎蛋白，维持滤过膜阴电荷屏障的完整性，减少蛋白的排出有关。
6）其他：抗菌，杀菌，解热镇痛，改善微循环等。
2. 临床应用1）治疗免疫性疾病2）治疗肾脏疾病NS 紫癜性肾炎乙型肝炎病毒相关性肾炎难治性狼疮性肾炎3）治疗皮肤疾病红斑狼疮等三．雷公藤的不良反应1. 神经系统发生率2.4% ，可引起神经细胞变性，出现中枢神经损伤。
2.心血管系统发生率 4.9% ，大剂量的药物可引起起心肌多发性微小肌溶灶形成，灶内心肌纤维肿胀，分离或溶解，线粒体游离于分散的心肌纤维间。
3.血液系统发生率 3.5% ，对骨髓有抑制作用，对更新较快的的组织和细胞有明显的细胞毒作用。
雷公藤甲素的毒理作用研究进展
雷公藤甲素的毒理作用研究进展姚利琛，戴 岳 （中国药科大学，江苏南京２１０００９）摘要：雷公藤甲素是从卫矛科植物雷公藤提取到的环氧二萜内酯类化合物，是雷公藤的主要活性成分之一，具有抗炎、免疫调节和抗肿瘤等作用，亦是雷公藤的主要毒性成分，对消化系统、泌尿系统、生殖系统、循环系统和免疫系统等具有明显的毒性，极大地限制了其开发利用。
国内外学者试图通过结构改造、开发新型载药系统、联合用药等手段降低雷公藤甲素的毒副作用。
本文总结雷公藤甲素毒副作用及机制的研究进展，为其减毒和开发提供参考。
关键词：雷公藤甲素；毒副作用；作用机制中图分类号：Ｒ９６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６ ３７６５（２０２１） ０４ ００２２ ０３作者简介：姚利琛，男（１９９６－）。
毕业于中国药科大学，在读硕士。
通讯作者：戴 岳。
男，中国药科大学教授。
ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅＴｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｏｆＴｒｉｐｔｏｌｉｄｅＹＡＯＬｉ ｃｈｅｎ，ＤＡＩＹｕｅ（ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ａｎｅｐｏｘｙｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｌａｃｔｏｎｅ，ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｉｎａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒ ｄｉｉ，ａｎｄｈａｓａｎｔｉ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ，ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｎｄａｎｔｉ ｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｎｔｈｅｏｔｈｅｒｈａｎｄ，ａｓｔｈｅｍａｉｎｔｏｘｉｃｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉ，ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｈａｓｍｕｌｔｉｐｌｅｔｏｘｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｎｄｉｇｅｓｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍ，ｕｒｉｎａｒｙｓｙｓｔｅｍ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍ，ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ，ｗｈｉｃｈｇｒｅａｔｌｙｌｉｍｉｔｉｔｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｔｒｙｔｏｒｅｄｕｃｅｔｈｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｂｙｍｅａｎｓｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｄｒｕｇｄｅｌｉｖ ｅｒｙｓｙｓｔｅｍｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｓ Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｌｕｅｆｏｒｉｔｓｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ；Ｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔ；Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ 雷公藤（ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉＨｏｏｋ ｆ ）又称黄藤木、三棱花、断肠草等，为卫矛科雷公藤属木质藤本植物，在我国南方广泛分布，其入药部分为根或根的木质部，味苦、辛，性寒，有大毒，主要功效有祛风除湿、活血通经、清热解毒、消肿止痛、杀虫止痒。
雷公藤甲素的含量检测分析
雷公藤甲素的含量检测分析雷公藤甲素的含量检测分析海棠合剂由雷公藤、竹茹、佛手、莱菔子、赤芍五种药味加工而成，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，适用于银屑病、湿疹、红斑狼疮等疾病[1].雷公藤为方中的君药，系卫矛科植物11.1AE-240Millipore1.21.3色谱条件色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-水，梯度洗脱（0~20分钟，20%A→50%A;20~21分钟，50%A→20%A）,流速：1.0mL/min;进样量10μl;紫外检测波长220nm;柱温35℃;理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于10000.1.4对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg对照品溶液。
1.5供试品溶液的制备根据相关报道[8-10],本实验采用，精密量取海棠合剂50ml,加中性氧化铝15g,水浴蒸干并混合均匀，用三氯甲烷作溶剂，湿法装入已有15g中性氧化铝层析柱中，再用三氯甲烷200ml洗脱，1.622.12.26μl、8μl、10μl及3号1μl、5μl注入液相色谱仪，测定峰面积。
结果表明，雷公藤甲素进样量在0.02096~0.2096μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程和相关系数：A=1586.937C+2.495342,r=0.999951（C为雷公藤甲素进样量，单位μg,A为峰面积）.2.2.2精密度试验取同一份雷公藤甲素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD为1.32%2.3稳定性试验取同一批样品，在配制后0、4、8、16、24h进样10μl,按1.4项的色谱条件下测定雷公藤甲素峰面积。
以峰面积计算，RSD=0.59%.表明供试品在24h内稳定性良好。
2.2.4重复性试验取同一批样品，精密量取50ml,共6份，精密称定，按1.4项的色谱条件下进行分析，结果6性。
1.4平33.1测定方法能很好的分离海棠合剂中雷公藤甲素并能得到较好的色谱峰形，运用上述含量控制方法，考察了4批市售的海棠合剂，其中的雷公藤甲素含量每500ml在0.15~0.17mg间。
雷公藤甲素抗肿瘤作用及其配伍减毒机制的研究进展
体(
Fa
s)介导的外 源 性 凋 亡 和 细 胞 内 部 发 生 应 激 或
者损伤导 致 线 粒 体 膜 通 透 性 改 变 引 起 的 内 源 性 凋
的抑 制 活 性 有 所 区 别。 在 乳 腺 癌 细 胞 MDAMB
亡。Hung 等 [20]研究发现 TP 能促进死 亡 受 体 与 配
除 AML 外,其他类型白血病和骨髓瘤细胞株对 TP
/L 范围 内
50nmo
l
。 而 TP 对 不 同 实 体 瘤 细 胞
[
6
8]
231 及 MCF7 中 作 用 24h,TP 的 IC50 值 分 别 为
/L[9]。肺癌细胞 PC9 及 A549 中作用
209、
171nmo
l
/L[10]。TP
48h,
TP 的 IC50 值 分 别 为 29、
136nmo
摘要:雷公藤甲素(
Tr
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de,
TP)是来源于药用植 物 雷 公 藤 Tr
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i HookF 的 一 种 天 然 三 环 氧 二 萜。 作 为
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雷公藤的高活性成分之一,
TP 具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等多种药理作用。该 文 综 述 了 雷 公 藤 甲 素 在 抗 肿 瘤 方 面 的 作 用 机
Wang 等
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1、宫 颈 癌 细 胞 He
l
a、骨 肉 瘤 细 胞 U2OS 凋
亡,且依赖于死亡受体途径。定位于线粒体的 Bc
l
2
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多种雷公藤甲素的递送系统已经开发出来，包括纳米粒子的聚合物胶束的[ 21 ]，[ 22 ]，[ 23 ] hydrogelthickened微乳液或溶菌酶结合物[ 24 ]。
但据我们所知，有没有研究文献中，对于一个以β-环糊精雷公藤甲素输送系统（CD）作为宿主分子。
一些萜类化合物的分辨率已经由CD的LC分离[ 25 ]流动相中添加改进。
事实上，环糊精是典型的主机分子在超分子化学的研究。
CD和d-glucopyrannose和1 macrolytic化合物，4-glycosodic债券，α-，β-gamma-CDs，自然cd分别包括6，7和8的葡萄糖单元，有几种多功能的CD衍生物可用来修改主机分子的理化性质。
例如，氨基酸的羧基CD，CD或硫酸镉是有用的工具分析研究。
通过分子间弱相互作用的宿主–客体包合物的形成，被描述为多种客体分子[ 26 ]。
在本研究中，我们研究了雷公藤内酯醇及其酯衍生物络合镉。
初步CE实验已经进行了描述两种化合物的电泳行为。
优化分离使用电离CD作为背景电解质修饰符允许定性分析雷公藤内酯醇（pg490）及阴离子琥珀酸模拟（pg490-88na）。
分子复合物的形成pg490或pg490-88na 和环糊精之间进行分离（CE），热力学（等温滴定量热法）和光谱（1D和2D NMR）在pH值接近生理pH技术。
使用这三个技术测定的两种化合物与中性的结合常数和电离的环糊精。
接下来，更先进的表明pg490-88na /氨基酸--CD复杂——表现最明显的结合常数——是通过核磁共振。
建立了化学计量学连续变异的方法[ 27 ] using1D核磁共振测量工作。
使用一维的选择性和2D ROESY实验研究了复杂的超分子结构的特点。
结果更精确地描述化合物和确定主机分子插入到环糊精空腔化工集团。
据我们所知，这是第一个广泛分析CD-triptolide复合物的表证。
2。
实验2.1。
化学品triptolide (PG490)和琥珀酸钠衍生物(PG490-88Na)是从皮埃尔·法布尔药剂实验室（位于法国兹）。
α-CD，γ-CD和羟丙基γ-CD（HP-γ-CD）购买来自瓦克Chimie（法国里昂），HP-α-CD和羧甲基β-CD(CM--CD)从Cyclolab和6-monodeoxy-6-monoamino-β-CD (amino-β-CD)Sigma–Aldrich (圣昆叮 Fallavier,法国). β-CD and HP--CD是馈赠罗盖特实验室（lestrem，法国）。
羟丙基化改性的环糊精代表的多组分混合物的平均摩尔取代度（MS）对C2, C3 和C6 3–4.8, 5.25–6.65, 4–6.4每CDmoleculeHP-α-CD, HP-β-CD和HP-γ-CD。
CM--CD提供了一个平均的MS 3，主要在C2。
他们的摩尔浓度的计算考虑到平均分子量。
氨基CD单取代对C6和MS 1／CD分子。
三（羟甲基）氨基甲烷（Tris），氢氧化钠和硼砂均购自默克（马恩河畔诺让，法国）。
硼酸，丙酮和DMSO的∑-–购买奥德里奇（圣昆廷fallavier，法国）。
磷酸（85%，W / W）购自贝克（德，荷兰）。
氧化氘（100%）和氘代甲醇分别从euriso 上购买（GIF河畔伊维特，法国）和奥德里奇（里昂，法国）。
2.2。
毛细管电泳ACE实验were performed我们贝克曼P / ACE MDQ毛细管电泳系统，包括我们diodearray 年柱紫外光探测器。
整个系统是由一台个人电脑，32开的软件包系统控制数据采集和分析（贝克曼Coulter，维勒班，法国）。
这是配备了一个50.2cm（40cm有效长度）× 50 m I.D.治疗fused-silica毛细管（复合金属服务，克雷，英国）毛细管是分别安装在恒温在298 K ±0.1 K◦一个盒和和应用电压是10伏或15伏的分析离子或中性的CD。
进行水动力注射用5s在1.0psi的压力。
检测波长为214 nm pg490和pg490-88na。
两个缓冲器被用来作为背景电解质（BGE）：硼酸盐缓冲液（100毫米，pH值7.7）和Tris缓冲液（25毫米，pH值7.7）。
新的毛细血管冲洗20分钟和0.1 M氢氧化钠（NaOH）（P = 20磅）和5分钟的水（P = 20磅）。
每一天的毛细管被先后用NaOH（5分钟，20磅），水（1分钟，20磅），然后与BGE（3分钟，20磅）。
每次运行之间，水处理（1分钟，20psi）和2分钟，20psi）。
示例解决方案在乙醇/硼酸缓冲50uM(5/95, v/v)是植物1mM乙醇的解决方案。
使用乙醇作为标记物测定的电渗迁移率。
对于中性pg490化合物，明显的和平均的结合常数K只能计算带电氨基酸-β-CD 和CM-β-CD.对电离pg490-88na化合物，它们分别计算中性和带电CDs(α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD, HP-β-CD, HP-γ-CD, amino-β-CD 和CM-β-CD). 加入BGE CD的增加量进行了表观结合常数的测定：从 0到 12 mM for the α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD and HP-γ-CD; 从0 到 50 mM HP-β-CD; 从0 到 16 mM 的氨基酸β-CD 和从 0 到 20 mM CM-β-CD.2.3。
等温滴定量热法等温量热仪（itc200，Microcal Inc.，USA）进行同时测定和研究形成常数和包括焓和熵的复合物。
采用滴定协议：204.5 L PG490 或 PG490-88Na脱气解决方案(Tris buffer, 25 mM, pH 7.7)在298k与某种特定的HP-β-CD的解决方案（缓冲区）40L注射器。
环糊精浓度等于5mmHP- β-CD和氨基-β-CD ，而pg490和pg490-88na浓度分别为0.2mm和0.5mm。
加入0.4·L的初始等分试样后，6个等分试样的6.3·L的环糊精溶液的交付（超过12.6对于每次注射）。
相应的热流量被记录作为时间的函数。
连续两次注射之间的时间间隔为120秒，搅拌速度为1000 rpm的全部实验。
此外，热环糊精稀释连续被eliminatedby进行空白滴定。
每次注射后（由原信号进行积分得到）的峰下面积，表示为每摩尔添加环糊精的热效应。
利用Microcal Origin 7软件包内使用内建的结合模式和结合等温线的非线性回归分析，最终确定结合常数和夹杂物的焓（Microcal，北安普顿，MA）。
化学计量被认为是1:1，每个环糊精分子可用网站N个被固定在1。
每个滴定实验为了确保结果，可重复性进行了三次。
2.4。
核磁共振波谱一维（1D）核磁共振光谱进行了实验，在Bruker的Avance300光谱仪工作在300.09 MHz 的质子，并配备了BBI探头。
二维（2D）和选择性1D NMR光谱实验在BrukerAvance500与500.13 MHz的碳质子和125.8 MHz操作TXI探头实现。
500·L的溶液引入一个标准5毫米的NMR管中，在300 K进行实验。
分析物（PG490和PG490-88Na）和取代CD的1H信号的由NMR实验实现：同核双标量的相关性1H-1H COSY带（相关光谱）和1D选择性TOCSY（全相关谱）实验中使用的为80毫秒，异核相关1H-13C HSQC与混合时间的布鲁克脉冲程序库中找到的标准脉冲序列（异核单量子相干性）。
对于同核偶极correlations1H-1H，ROESY2D 和1D选择性实验与500 ms的混合时间的记录。
利用连续变化法在Tris缓冲液pH值7.7，确定了pg490-88na /氨基 -镉配合物的化学计量比。
相互作用的物种的总浓度保持恒定在2.5毫米。
摩尔分数R（R =[分析]/（[分析]+[CD]或R=[CD]/（[分析]+[CD]））变化范围在0-1之间。
对于表观结合常数，要按照斯科特的模型，并考虑到CD的平衡摩尔浓度等于总共推出了CD的浓度，在复合形式的CD浓度的测定必须是微不足道。
该[CD] / [分析物]比率从5到30的递增。
表观结合常数分别为HP-β-CD 或氨基-β-CD PG490或PG490-88Na之间形成的复合物。
由于PG490的水溶性不足，其络合CD是研究了在25毫摩尔Tris缓冲液pH 7.7中加入氘代甲醇中的25％。
选择性1D和2D ROESY实验实现使用等摩尔浓度分析物和CD（2.5mm的25mm的Tris缓冲液pH7.7）的PG490-88Na/amino-β-CD复合物。
3。
结果与讨论3.1。
通过CE的pKa值的测定合成的化合物的电离常数的知识来理解和预测的溶质CE迁移行为是必要的。
因此，对PG490-88Na的pKa的计算之前测量的相互作用实现的。
由于CE PKA，被公认为是一个方便和精确的技术[ 28,29 ]，用3乙酸盐缓冲液的pH值为6.5（离子强度0.01米）。
pKa值为4.8（正如所料，这个值接近乙酸的pKa值）。
因此，在我们的电泳条件，在pH值为7.7，pg490-88na完全是在游离形式。
3.2。
的pg490和pg490-88na CD分析这两种化合物的分析是第一个使用中性的CDS进行(α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD, HP-β-CD and HP-γ-CD)。
正如预期的那样，在中性PG490的流动性是通过加入中性的CD （与乙醇标记共同迁移）的改变。
然而，在BGE中性CD除了涉及减少的阴离子PG 490-88 Na 迁移时间（由于在EOF的相对感增加其自身的流动性）。
如该图所示。
2 forβ-CD 和 HP-β-CD,theneutral CD浓度的增加涉及最低的迁移时间。
阻滞因素（在存在和不存在的CdS 的迁移时间比）在 2 mm存在计算的，分别是α-CD，β-CD，γ-CD，HP-α-CD，HP-β-CD 和HP-γ-CD是0.95，0.91，0.93，0.87，0.91和0.89。
这些结果表明，络合与雷公藤甲素PG490-88那应该是大致相当的任何性质的CdS（见3.3节）。
然后，使用离子型CD进行了PG490和PG490-88Na由CE在pH7.7的同步分析。
值得一提的是，使用带电的CD应该具有极大的兴趣，以解决这两个EOF和PG490信号。
阴离子CM-β-CD或阳离子氨基-β-CD进行研究。
首先，不同操作参数进行优化，提供最佳的检测信号（高度），分析时间和分辨率。
最佳的电泳条件在实验section.The阴离子CM-β-CD所述的第一个研究用浓度递增，从1到20毫米。