《色谱法概论》PPT课件
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● 组分在固定相中停留的时间 ● 比不保留组分在柱中多停留的时间.
tR’= tR － tM
死体积Vm：同一柱Vm为常数 ● 未被固定相占有的柱内空间体积 ● 死时间内流经的流动相体积
Vm t MFc （Fc为流速ml/min）
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保留体积VR ● 将组分洗脱出色谱柱所需流动相总体积 ●保留时间内流经的流动相体积
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20
二、 色谱图
色谱图：由检测器输出的电信
号强度对时间或流动相流出体
信 号
积作图得到的曲线
重要信息：
峰数：组分个数
t
峰位：保留时间，定性
峰强：峰面积，峰高，定量
峰间距：分离度
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21
三、常用术语
基线：仅有流动相通过检测器时的响应信号 噪音：各种未知的偶然因素引起的基线起伏
W = 4σ=1.699W1/2
W1/2 = 2.355σ
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24
拖尾因子(tailing factor, T)
又叫对称因子
TW0.05h AB
2A
2A
色谱峰
正常峰（对称峰） T=0.95~1.05
非正常峰 前沿峰 ——T<0.95 拖尾峰 ——T>1.05
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25
死时间tM
保留时间tR
薄层色谱 thin layer chromatography
薄膜色谱 thin film chromatography
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15
4.按使用目的分类
分析用色谱仪 制备用色谱仪 流程色谱仪
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16
色谱法简单分类
填充柱色谱法
气相色谱法（GC） 毛细管柱色谱法
经典液相柱色谱法
柱色谱法
色 谱 法
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11
三、分类
1．按流动相与固定相的状态分：
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型 液-固色谱 液相色谱 液-液色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气相色谱 气-液色谱
精选ppt
13
2．按分离机制分类： 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 分配色谱：利用分配系数的不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 键合相色谱法：
1990s 毛细管电泳法（CE）
1990s末 毛细管电色谱法
液-固色谱（吸附色谱） 的进一步发展有赖于瑞典科 学家Tiselius和Claesson的 努力，他们创立了液相色谱 的迎头法和顶替法。
Tiselius, A.W.K. 1948年 Nobel 化学奖
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7
英国科学家 Martin和Synge创立了分 配色谱
第9章 色谱法概论
An Introduction to Chromatography
（chromatography）
图谱
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1
色谱法起源 色谱法历程 色谱法分类 色谱过程 常用术语
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2
第1节 起源、历程与分类
一、起源 1903年： 一种新型吸附现象及其在生化分析上的应 用，提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法。 1906年，俄国植物学家 迈克尔·茨维特(Michael Tswett) 提出色谱法(Chromatography)概念 ——"色谱学之父"
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3
1906年，Tsweet发明的色谱法
碳酸钙粉末 （固定相）
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色石素油混醚合液 (流动相）
色谱柱
色带
色 色：颜色 谱 谱：图谱
4
色素分离示意图
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5
二、历程
1906年 迈克尔·茨维特提出色谱法 1931年 库恩 奥地利化学家 胡萝卜素分离 1930s 离子交换色谱建立 1940s 分配色谱创立，平板色谱法 1952年 气相色谱法建立（GC） 1968年 高效液相色谱法建立（HPLC） 1980s 超临界流体色谱法（SFC）
漂移（drift）：基线随时间向一个方向的缓慢变化
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22
色谱峰：监测器信号随时间变化而形成的流出曲线
标准差σ
峰面积A
半峰宽
峰
W1/2
高ห้องสมุดไป่ตู้
h
W1/2
W
峰宽W
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23
● 峰面积A：指色谱曲线与基线间包围的面积 ● 峰高h：色谱峰顶至基线的距离 ● 峰宽W ：色谱峰两拐点切线在基线上的截距 ● 半峰宽W1/2：峰高一半处对应的峰宽 ● 标准偏差σ ：0.607倍峰高处峰宽的一半
V t F
R Rc
调整保留体积V’R
● 保留体积扣除死体积 ● 洗脱组分实际所需体积
VR’= VR － VM= tR’ Fc
空间：深入到了生命科学、材料科学、环境科 学等领域。
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9
➢ 定义：一种利用固定相和流动相对组分 进行物理或物理化学分离的分析方法
➢ 实质：分离 ➢ 目的：定性分析或定量分析
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10
固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质
毛细管电泳法和毛细管电色谱法:利用电 细管和电的性质相结合而建立毛细管电 泳的分离
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3．按操作形式：
柱色谱法 Column chromatography
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
平面色谱法 plane chromatography
平面色谱
纸色谱
paper chromatography
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调整保留时间tR/
26
保留时间tR（定性） ● 从进样到色谱峰顶的时间， ● 组分在色谱柱中的停留时间 ● 组分流经色谱柱所需要的时间。
死时间tM ● 不吸附组分（K=0）的保留时间， ● 组分在流动相中的停留时间 ● 流动相流经色谱柱所需要的时间 ● 空气出峰时间(GC)
调整保留时间tR’
1941年，Martin和Synge
采用水分饱和的硅胶为
固定相，以含有乙醇的
氯仿为流动相分离乙酰
Martin, A.J.P. Synge, R.L.M.
基氨基酸，并在这一工
1952年 Nobel 化学奖
作论文中预言了用气体
代替液体作为流动相来
分离化合物的可能性。
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8
色谱学的重要作用
时间：色谱法是过去、现今、将来分析化学领域 最为活跃、应用最为广泛的分离技术。
液相色谱法 （LC）
高效液相色谱法（HPLC） 平板色谱法（TLC、PC）
广义的毛细管电泳法
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第2节 色谱过程与术语
一、色谱过程
● 分离组分在两相中的“分配”平衡过程 ● 组分的分配系数不等，移动的速率不等 ● 形成差速迁移而被分离
吸附色谱：吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 多次洗脱→ 差速迁移 → 分离
tR’= tR － tM
死体积Vm：同一柱Vm为常数 ● 未被固定相占有的柱内空间体积 ● 死时间内流经的流动相体积
Vm t MFc （Fc为流速ml/min）
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保留体积VR ● 将组分洗脱出色谱柱所需流动相总体积 ●保留时间内流经的流动相体积
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二、 色谱图
色谱图：由检测器输出的电信
号强度对时间或流动相流出体
信 号
积作图得到的曲线
重要信息：
峰数：组分个数
t
峰位：保留时间，定性
峰强：峰面积，峰高，定量
峰间距：分离度
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21
三、常用术语
基线：仅有流动相通过检测器时的响应信号 噪音：各种未知的偶然因素引起的基线起伏
W = 4σ=1.699W1/2
W1/2 = 2.355σ
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拖尾因子(tailing factor, T)
又叫对称因子
TW0.05h AB
2A
2A
色谱峰
正常峰（对称峰） T=0.95~1.05
非正常峰 前沿峰 ——T<0.95 拖尾峰 ——T>1.05
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死时间tM
保留时间tR
薄层色谱 thin layer chromatography
薄膜色谱 thin film chromatography
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4.按使用目的分类
分析用色谱仪 制备用色谱仪 流程色谱仪
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色谱法简单分类
填充柱色谱法
气相色谱法（GC） 毛细管柱色谱法
经典液相柱色谱法
柱色谱法
色 谱 法
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三、分类
1．按流动相与固定相的状态分：
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型 液-固色谱 液相色谱 液-液色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气相色谱 气-液色谱
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2．按分离机制分类： 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 分配色谱：利用分配系数的不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 键合相色谱法：
1990s 毛细管电泳法（CE）
1990s末 毛细管电色谱法
液-固色谱（吸附色谱） 的进一步发展有赖于瑞典科 学家Tiselius和Claesson的 努力，他们创立了液相色谱 的迎头法和顶替法。
Tiselius, A.W.K. 1948年 Nobel 化学奖
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7
英国科学家 Martin和Synge创立了分 配色谱
第9章 色谱法概论
An Introduction to Chromatography
（chromatography）
图谱
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1
色谱法起源 色谱法历程 色谱法分类 色谱过程 常用术语
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2
第1节 起源、历程与分类
一、起源 1903年： 一种新型吸附现象及其在生化分析上的应 用，提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法。 1906年，俄国植物学家 迈克尔·茨维特(Michael Tswett) 提出色谱法(Chromatography)概念 ——"色谱学之父"
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3
1906年，Tsweet发明的色谱法
碳酸钙粉末 （固定相）
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色石素油混醚合液 (流动相）
色谱柱
色带
色 色：颜色 谱 谱：图谱
4
色素分离示意图
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二、历程
1906年 迈克尔·茨维特提出色谱法 1931年 库恩 奥地利化学家 胡萝卜素分离 1930s 离子交换色谱建立 1940s 分配色谱创立，平板色谱法 1952年 气相色谱法建立（GC） 1968年 高效液相色谱法建立（HPLC） 1980s 超临界流体色谱法（SFC）
漂移（drift）：基线随时间向一个方向的缓慢变化
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色谱峰：监测器信号随时间变化而形成的流出曲线
标准差σ
峰面积A
半峰宽
峰
W1/2
高ห้องสมุดไป่ตู้
h
W1/2
W
峰宽W
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● 峰面积A：指色谱曲线与基线间包围的面积 ● 峰高h：色谱峰顶至基线的距离 ● 峰宽W ：色谱峰两拐点切线在基线上的截距 ● 半峰宽W1/2：峰高一半处对应的峰宽 ● 标准偏差σ ：0.607倍峰高处峰宽的一半
V t F
R Rc
调整保留体积V’R
● 保留体积扣除死体积 ● 洗脱组分实际所需体积
VR’= VR － VM= tR’ Fc
空间：深入到了生命科学、材料科学、环境科 学等领域。
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➢ 定义：一种利用固定相和流动相对组分 进行物理或物理化学分离的分析方法
➢ 实质：分离 ➢ 目的：定性分析或定量分析
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固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质
毛细管电泳法和毛细管电色谱法:利用电 细管和电的性质相结合而建立毛细管电 泳的分离
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14
3．按操作形式：
柱色谱法 Column chromatography
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
平面色谱法 plane chromatography
平面色谱
纸色谱
paper chromatography
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调整保留时间tR/
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保留时间tR（定性） ● 从进样到色谱峰顶的时间， ● 组分在色谱柱中的停留时间 ● 组分流经色谱柱所需要的时间。
死时间tM ● 不吸附组分（K=0）的保留时间， ● 组分在流动相中的停留时间 ● 流动相流经色谱柱所需要的时间 ● 空气出峰时间(GC)
调整保留时间tR’
1941年，Martin和Synge
采用水分饱和的硅胶为
固定相，以含有乙醇的
氯仿为流动相分离乙酰
Martin, A.J.P. Synge, R.L.M.
基氨基酸，并在这一工
1952年 Nobel 化学奖
作论文中预言了用气体
代替液体作为流动相来
分离化合物的可能性。
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色谱学的重要作用
时间：色谱法是过去、现今、将来分析化学领域 最为活跃、应用最为广泛的分离技术。
液相色谱法 （LC）
高效液相色谱法（HPLC） 平板色谱法（TLC、PC）
广义的毛细管电泳法
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第2节 色谱过程与术语
一、色谱过程
● 分离组分在两相中的“分配”平衡过程 ● 组分的分配系数不等，移动的速率不等 ● 形成差速迁移而被分离
吸附色谱：吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 多次洗脱→ 差速迁移 → 分离