实训二十四大肠杆菌、沙门菌属血清学鉴定

肠杆菌的鉴定t

实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
B3
B4 B5
+ +
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
实验结论
根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以断定B5确实为大肠杆菌。
有白色凝集
无凝集现象
实验结果
动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙门菌均有运动趋势，琼脂显浑浊。可疑志贺菌则紧沿穿刺路线生长。
大肠杆菌
可疑沙门菌
可疑志贺菌
实验结果
生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）

血清学鉴定实验

位相变异试验的方法

简易平板法
1.配制0.7~0.8%的半固体琼脂培养基，然后倾注平板烘干表面水分。 2.在平板内滴上一滴已知的第1相或第2相血清因子，并作好标记。 3.待血清吸收到琼脂内，在标记部位的中间点种已知第1相或第2相的新鲜待检菌株。 4.培养后，其已知相细菌的动力受到抑制，解离出另一相的细菌，并向周围蔓延生长，形成一个大的菌落。 5.检查其菌落的边缘部分，即可确定该菌株的另一相H抗原。 6.该方法通常1~3天内可以有结果。
A-F群多价O
Hw Hx H5
Hz H7
A-F群多价O
Hz6 Hz10 Heh Hgp
Hz13 Hz15 Hz28 Hz29 H2
Hlv HA
HB
HC HD Vi
Henx
H1.2.3.
5
血清学实验材料分配
分组 4人 /组
菌种
诊断血清
待测菌种一支
1盒 /组
写实验报告

写明实验判定结果（即阴性或阳性），并描述整个实验过程及注意事项。
抗原抗体反应条件
1. 抗原
2. 抗体
3. 环境因素：（1）电介质：0.85%NaCI；（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0 （4）振荡：适当的机械振（5）反应时间
抗原抗体反应的特点
特异性和交叉性若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高。
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表.
鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12），第Ⅰ相H抗原（i）第Ⅱ相H抗原(1,2)。它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）

[ ]内的O抗原可能存在或不存在。 [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。

实训二十三大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验

四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟赖葡纤山侧鼠木蔗丙甘氨氨磷维梨金李糖糖二露酸酸胨二醇盏糖酸醇水糖花盐醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿拉伯糖蛋七半氨白叶固基胨苷体酸水对照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－－
+ 2
－－ + + 3
+
+ 7+来自该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：

沙门菌血清学鉴定流程及结果判读

沙门菌血清学鉴定流程及结果判读下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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大肠杆菌与沙门氏菌鉴定

大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。

b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。

2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。

1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。

2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。

肠道杆菌的实验报告

一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。

2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。

3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。

二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。

它们分为条件致病菌和致病菌两大类。

本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。

三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。

2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。

3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。

4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。

四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。

（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。

2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。

（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。

3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。

（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。

4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。

（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。

五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。

2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。

3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。

4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。

六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。

实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。

大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查

青岛农业大学实验论文题目：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查姓名：学院：动物科技学院专业：动物科学班级：学号：指导教师：任慧英2014年 4 月 8 日大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查摘要：大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。

大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。

但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。

关键词：生化特性、埃希氏菌、共同特性、鉴别诊断引言：根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌菌株分为不同的血清型。

沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。

1.材料与方法1.1材料菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液。

增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四硒酸钠增菌液。

普通培养基：肉汤、普通琼脂、沙门试液诊断学清：A~E群多价O血清及单半固体培养基。

鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。

生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。

1.1.2 试剂生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原剂等、革兰氏染液。

1.1.3器材显微镜、吸管等。

1.2方法1.2.1 直接分离培养：将A菌种与B菌种的混合菌液用常规划线方法，接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个，置37℃温箱内培养24h后取出，观察每种平板上两种菌的生长情况。

形态观察：以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的A菌种和B菌种的单个菌落，在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。

观察两种菌的形态、大小与排列方式，并作比较。

这两种菌都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不明显。

培养特性观察：将A菌种和B菌种的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。

沙门菌的分离鉴定及血清学分型

吲哚、VP试验阴性
H2S producing and urea nagative
脲酶试验阴性，产H2S。 Methyl red and Simmons citrate positive
甲基红、枸橼酸盐试验阳性
Facultative anaerobe
兼性厌氧菌
Motile with peritrichous flagellae
Salmonella may have been injured or decrease in amount by heat process or food preservation.
So that should be add Pre–enrichment step and Selective-enrichment step before the Selective solid media.
subspecies indica
种II. Salmonella bongori
总计 (沙门菌属)
1998
2,443
1,454 489 94 324 70 12 20
2,463
2001
2,480
1,478 498 94 327 71 12 21
2,501
2007
2,557
1,531 505 99 336 73 13 22
第三步选择性固体培养基培养 (选择性鉴定培养基 )
Step 4 Identification step 第四步鉴定
Step 5 Confirmation step 第五步确证
Enrichment medium 增菌培养基
1. Pre-enrichment: BPW = Buffered Peptone Water

实验五大肠杆菌与沙门氏菌

0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液（KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验：某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰色
葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化合
胨中的胍基化合物物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关：如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌沙门氏菌置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- －－－
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
⊕－ ⊕ ⊕ －＋－＋

微生物检验技术专业实践能力模拟题14含答案

微生物检验技术专业实践能力模拟题14一、最佳选择题1. 空斑试验用于测定病毒的A.核酸种类B.感染力C.数目D.类型E.黏附力答案：B空斑试验常用来检测病毒感染力。

将适当浓度的病毒悬液接种到生长单层细胞的玻璃平皿或扁瓶中，当病毒吸附于细胞上后，再在其上覆盖一层溶化的半固体营养琼脂层，待凝固后，孵育培养。

当病毒在细胞内复制增殖后，每一个感染性病毒颗粒在单层细胞中产生一个局限性的感染细胞病灶，病灶逐渐扩大，若用中性红等活性染料着色，在红色的背景中显出没有着色的“空斑”，清楚可见。

2. 2003年在我国内陆的SARS疫情中，山西省属于A.输出病例区B.未发生病例区C.输入病例区，并引起当地传播D.输入病例区，未引起当地传播E.流行区，并输出病例引起其他地区感染答案：C2003年我国内陆的SARS疫情中，山西省的SARS病例是由外地传入，属于输入病例区，并在当地引起传播。

3. 对疑似霍乱弧菌感染患者的粪便标本，采用压滴法，用普通光学显微镜观察A.细菌壁B.线粒体C.芽胞D.动力E.荚膜答案：D压滴法观察霍乱弧菌的动力，可发现霍乱弧菌呈流星样或穿梭样运动，具有鉴定价值。

4. 诊断流感病毒常用的血清学方法是A.沉淀试验B.补体结合试验C.血凝与血凝抑制试验D.试管凝集试验E.玻片凝集试验答案：C用血清学方法诊断流感病毒，取发病3d内和2～4周后双份血清做血凝抑制试验或补体结合试验，测定急性期和恢复期血清抗体，升高4倍以上有诊断意义。

最常用和最简单的方法是血凝抑制试验，必要时采用补体结合试验。

5. 荚膜肿胀试验可快速诊断A.肺炎链球菌感染B.乙型溶血性链球菌感染C.甲型溶血性链球菌感染D.军团菌感染E.布鲁菌感染荚膜肿胀试验可作为肺炎链球菌的快速诊断，用于痰液、脓汁或脑脊液中肺炎链球菌的鉴定。

6. 食品大肠菌群乳糖初发酵试验，待检样品接种量在1ml以上者，用A.双料乳糖胆盐发酵管B.单料乳糖胆盐发酵管C.单料乳糖蛋白胨发酵管D.双料乳糖蛋白胨发酵管E.乳糖蛋白胨发酵管答案：A食品大肠菌群乳糖初发酵试验，将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；接种量在1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。

肠道病原菌的分离与鉴定实验报告

肠道病原菌的分离与鉴定实验报告摘要本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。

本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。

引言肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。

一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。

有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。

在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。

在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。

材料与方法实验所需材料：-食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等）-选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar）-氯霉素（50μg/ml）-β-半乳糖苷酶-生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢）实验步骤：1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。

2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。

3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。

结果经过实验分离和鉴定，本实验成功分离出大肠杆菌和沙门菌等常见的肠道病原菌，并且还分离出一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。

大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表

大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。

2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。

3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。

4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。

大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、 +/- 大多数菌株阳性/少数阴性、 v 种间有不同反应。

（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。

2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。

1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画2、给出在半固体培养基上的结果观察图片大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。

最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。

在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。

（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。

（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。

此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。

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沙门氏菌血清学鉴定

竭诚为您提供优质文档/双击可除沙门氏菌血清学鉴定篇一：沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。

用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。

该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。

而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。

如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。

底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。

斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。

因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。

2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。

4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。

3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。

赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。

2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。

阴性试验管则始终呈黄色。

氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。

由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。

(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。

2024版沙门氏菌检验实验解析PPT

增加“无菌量筒：容量50mL、无菌均质杯、无菌均质袋、无菌广口瓶：容量500mL、无菌试管15mm×150mm、18mm×180mm、无菌接种环：10μL（直径约3mm）、1μL以及接种针”
对检验用器具规格明确，方便实验室选用
增加“生物安全柜”
对于实验室开展活菌操作、样本检测实验室生物安全等级需“BSL-2”，因此，增加此设备是生物安全必须。
明确接种菌液浓度为“0.5麦氏浊度”，接种量“2滴~3滴”，避免接种量过大导致假阳性；还有增加"接种混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封"由于氰化钾不稳定容易分解失效，因此，加石蜡密封避免造成假阳性反应。
“符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应”后面补充“进行血清学鉴定后报告结果”
明确的指出符合沙门氏菌典型的生化反应需要进行血清学鉴定后报告结果
调整可疑菌落初筛流程
流程图更清晰易懂
TTB选择性增菌改为：低背景菌36 ℃±1 ℃，高背景菌42 ℃±1 ℃原因：验证试验发现，对于生鲜样品，TTB 42℃比 TTB 36℃的选择性好，所以继续沿用；对于深加工样品，TTB 36℃比 TTB 42℃生长好，所以低背景菌采用36℃±1℃培养。如有需要，可将预增菌的培养物在2 ℃~8 ℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。
2016版“必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴定”修改为2024版中“必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴定”
“生化群”用“种和亚种”替代，更易懂;
在表5沙门氏菌种和亚种的生化鉴定中增加“肠炎沙门氏菌、邦戈尔沙门菌种名”以及肠炎沙门氏菌种内对应的6个亚种和生化群分型”;生化反应项增加“明胶酶、L(+)-酒石酸盐、半乳糖醛等8项”
主要变化
章节
新标准变更内容

沙门菌属微生物学检查及鉴定总结

XXXX医院沙门菌属微生物学检查及鉴定总结一、沙门菌属二、培养特性三、生化反应四、抗原结构五、变异性六、致病性七、微生物学检查1、标本来源2、检查及鉴定方法（1）不同标本的分离培养（2）鉴定（3）血清学诊断与分型八、沙门菌的预防一、沙门菌属沙门菌属体型大多为（0.7～1.5）μm×（2.0～5.0）μm，其无芽胞，是无荚膜的革兰阴性直杆菌，除鸡沙门菌外都有周身鞭毛，能运动，多数有菌毛。

二、培养特性营养要求不高，在普通琼脂培养上即能生长，在液体培养基中呈均匀混浊。

在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上35℃～37℃24h可形成直径约2～4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。

产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心。

三、生化反应除亚利桑那菌沙门菌外均不能发酵乳糖，大多数IMViC试验为-+-+，KIA：K/A、产气+/-、H2S+/-，MIU：动力+、吲哚-、脲酶-.四、抗原结构主要由0抗原和H抗原组成，部分菌株有类似大肠杆菌K抗原的表面抗原，与细菌的毒力有关，故称Vi抗原。

（1）0抗原：即菌体抗原。

沙门菌属的菌体抗原有58种，以阿拉伯数字依次标记：根据沙门菌有共同的O抗原这一特点，分类学者将有共同抗原的细菌归为一组，这就使沙门菌分成42个群（或组）。

即A、B、C……Z和O16～O67群。

每群都有群特异性抗原，如A群O2、B群04、D群O9等。

（2）H抗原：即鞭毛抗原。

H抗原是定型的依据。

沙门菌H抗原有两相，第一相为特异性抗原，用a、b、c……表示；第二相为共同抗原，用1、2、3……表示。

（3）表面抗原：已证实沙门菌属有Vi、M和5抗原三种。

Vi抗原加热60℃30min或经石炭酸处理被破坏，其存在时可阻止0抗原与相应抗体发生凝集。

五、变异性（1）S-R变异，菌落光滑型经人工培养传代后逐渐变成粗糙型。

此时菌体表面的特异多糖抗原丧失，在生理盐水中可出现自凝。

（2）H-O变异，指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。

实验六大肠杆菌和沙门氏杆菌

E.Coli为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，最适宜生长温度为37℃，最适合生长pH为7.2～7.4。麦康凯琼脂上形成红色菌落，在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属闪光的菌落，在SS琼脂上一般不生长或者生长较差，生长的菌落呈红色。一些致病性菌株在绵羊血液平板上呈β 型溶血。在营养琼脂上生长24h，形成圆形、隆起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径2～3mm。
实验六大肠杆菌和沙门氏杆菌
目的要求：
1、掌握致病大肠杆菌、沙门氏杆菌的微生物学诊断方法。 2、熟悉致病大肠杆菌、沙门氏杆菌形态、培养特性。
实验内容：
一、观察致病大肠杆菌、沙门氏杆菌形态、培养特性。二、接种大肠杆菌、沙门氏杆菌于鉴别培养基（远腾、SS、BTB），观察结果。三、大肠杆菌、沙门氏杆菌的微生物学诊断程序。
沙门菌A-F群多价 O血清平板凝集血清型鉴定
报告鉴定结果
多杀性巴氏菌
革兰氏染色的肺组织中有大量阴性球杆菌
多杀性巴氏杆菌（Ｐasteurelloa
微生物学诊断
maltocida ）
病料：（渗出液、心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等）涂片镜检：G-；瑞氏/美兰（新鲜病料）两极着染；球杆菌培养分离培养：血液/血清裂解血平板菌落形状增菌：血清肉汤运动性不溶血 G-菌球杆动物接种：小白鼠皮下接种死亡检剖败血症脏器涂片镜检分离培养可疑菌落纯培养
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌
麦康凯培养基上形成红色菌落；伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌落；远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌（E．coli）
大肠杆菌葡乳麦甘蔗结果观察
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