细菌的分离培养、生化反应

二）光线与射线的消毒作用 1 日光与紫外线 机理：损坏DNA构型(DNA吸收紫外线形成胸腺嘧啶二
聚体)→细菌死亡或变异 265-266nm(240-280nm) 特点：穿透力弱
2 电离辐射：包括X射线和γ射线 机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜； 产生过氧化氢等 特点：穿透力强，不升高温度
（一） 热力灭菌法
分类：干热灭菌法 湿热灭菌法
1 干热灭菌法 A 焚烧： B 烧灼： C 干烤：160°～180℃，2h D 红外线灭菌：
2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法： 61.1-62.8℃，30 min 71.7℃，15-30sec
B 煮沸消毒法： 100℃，5min -10min
实验二
1.细菌分离培养 2理化因素作用 3菌落，色素，溶血现象 4细菌生化反应
细菌人工培养接种法
分离培养法：1平行划线法
2分区划线法
纯种接种法：
1斜面培养基接种法：纯培养和保存菌种
2 液体培养基接种法：增菌
3半固体穿刺接种法：保种和观察细菌动力和生化反应
外界因素对细菌的影响
消毒与灭菌 消毒：指杀死病原微生物，但不包括芽胞。 灭菌：是指杀灭物体上所有微生物，包括 繁殖体和芽胞。 无菌：物品中没有活的微生物存在。 防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖。 消毒剂：高浓度 防腐剂：低浓度
溶血现象：有些细菌产生溶血素，当接种于血平板培 养基上可在菌落周围形成溶血环，有助于鉴别细菌。细 菌性溶血素指由细菌产生的任何血液毒素。溶血素是一 种可使红血球细胞溶解的毒素
琼脂平板划线分离法
1以接种环沾取少许标本先涂布于平板培养基一角， 然后将接种环置于火焰上灭菌，待冷却
三）滤过除菌法 用滤菌器除去液体及空气中的细菌 用于不耐热的血清、毒素、抗生素
（四）超声波的消毒作用 可裂解细菌，尤其对G+更敏感 主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等
菌落:经过18—24h培养后，单个细菌分裂繁殖பைடு நூலகம்一堆肉眼 可见的细菌集团。
色素：某些细菌能产生不同颜色的色素，有助于鉴别 细菌。
紫外线对细菌的作用
波长265-266nm杀菌力最强，细菌DNA吸收了紫 外线引起相邻2个T形成二聚体，干扰DNA的复 制。穿透力弱。
1用接种环沾取大肠杆菌液，放到普通琼脂平板 上，每板放两环，然后用扩散棒来回涂布整个 平板表面
2将涂布细菌的平板放入接种箱内。打开平板 并用玻璃盖遮住平板的一半，在紫外线下直接 照射30分钟
C 流通蒸气消毒法： 100℃，15-30min D 间歇蒸汽灭菌法： 100℃，15-30min，37℃过夜（3次）
E 高压蒸气灭菌法: 15磅（121.3℃），15-30min
湿热比干热灭菌好的原因：
1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性 2 湿热穿透力强 3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度
3照射完毕，盖好琼脂平板，放37度温箱孵育 24小时，观察结果
染料对细菌的影响
原理：1%龙胆紫阳离子可以菌蛋白的羧基结合，影响 代谢而杀菌，刺激性小。（紫药水）
1用灭菌接种环取大肠杆菌及白色葡萄球菌各接种于龙 胆紫平板上
2置37°C温箱24小时后观察结果
2与涂菌液处开始作为第一区划线，划线时接种环 与培养基表面呈45度角，划线毕，接种环灭菌
3然后于第二区处再划线，且在开始划线时与第一 划线相交接数次，以后划线不必再交接
4待第二区完时如上法灭菌，接种划线，依次至最 后一区，接种环灭菌，这样每一区的划线内的细 菌处逐渐减少，即可获得单个菌落。划线接种完 毕，平板倒置，做好标记，于37度温箱培养