微生物生化反应

碳源利用试验
酶类试验
其他试验
+ 原理：各种细菌含有不同的分解糖(苷、醇)的酶，对糖 (苷、醇)分解能力也各不相同，可用来鉴别细菌。
+ 方法：将待检细菌接种葡萄糖、乳糖或其他发酵管，35℃ 培养18～24h观察结果。
+ 结果：首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊
状，再确定细菌对糖类分解情况 不分解糖，培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以
+ 方法：将待检菌接种葡萄糖蛋白胨水 培养基中， 37℃培养18～24h
+ 结果：在培养物中加入甲基红指示剂 2～3滴，立即观察，红色为阳性，黄 色为阴性。
+ 应用：大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌 阴性。
+ 原理：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸， 进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性 环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨 中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红 色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养 基中胍基含量少，加入少量含胍基的化
+ 结果：2管均不产酸(不变色)为阴性；2管均产酸(变黄)为 发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧 化型。
+ 应用：绿脓杆菌为O型，产碱杆菌为产碱型
产碱型
发酵型 溴麝香草酚蓝指示剂
氧化型
+ 原理：细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一 种是半乳糖苷渗透酶，另一种为β-半乳糖 苷酶。ONPG可迅速进入细菌细胞，被半乳糖 苷酶水解，释出黄色的ONP，故由培养基液 变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在。
+ 方法：将待检菌接种氨基酸脱羧酶培养基和对照培养基，并加入无菌液体 石蜡，于35℃培养1～4天，每天观察结果。
+ 结果：对照管在培养18～24h后，应保持黄色。氨基酸测定管由黄变紫(溴 甲酚紫为指示剂)或由绿变蓝(溴麝香草酚蓝为指示剂)为阳性，黄色为阴性。 如对照管为阳性(紫色或蓝色)，则所有氨基酸脱羧酶试验皆无效，不能作 出判定。
性。
+ 原理:某些细菌能产生色氨酸酶， 可分解蛋白胨中的色氨酸而生 成靛基质(吲哚)，后者与对二 甲氨基苯甲醛作用，形成红色 的玫瑰靛基质(玫瑰吲哚)。
+ 方法:将待检菌接种于蛋白胨水 培养基中，经35℃培养24～48 小时，取出后加上述试剂数滴，
观察两层液面的颜色。 &#养物接种在ONPG培养 基上置37℃培养1～3h或24h
+ 结果：如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生 黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h内不 变色。
+ 应用：大肠杆菌阳性，伤寒杆菌阴性
+ 原理：某些细菌具有七叶苷酶，水解七叶 苷后产生七叶素与亚铁离子反应形成黑色 酚铁络合物，使培养基变黑。
色液面为阴性。 + 应用:大肠杆菌为阳性，产气肠
杆菌为阴性。
+ 原理：有些细菌分解含硫氨基酸产生硫化 氢，遇到培养基中铅离子和二价铁离子会 产生黑色沉淀
+ 方法：将待检菌接种于含铅或含亚铁离子 培养基中，经35℃培养18～24h小时
+ 结果：有黑色沉淀产生为阳性
+ 应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性
合物如肌酸肌酐，以加速其反应。 + 方法：将待检接种于葡萄糖蛋白胨水中，
37℃培养24～48h，于培养物中加入VP试 剂（a-萘酚无水乙醇溶液和含肌酸或肌 酐的氢氧化钾溶液）各1滴，充分摇动试 管，观察结果。 + 结果：如立即或于数分钟内出现红色反 应者为阳性；若为阴性应将试管置37℃ 中4h后再进行观察，仍无红色者为阴性。 + 应用：大肠埃希菌阴性，产气肠杆菌阳
+ 方法：将被检菌接种于七叶苷培养基， 37℃培养18～24h
+ 结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性
+ 应用：D群链球菌为阳性，其他链球菌为阴 性
+ 原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮 酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙 酸等酸性物质，故培养基pH在4.5以 下，加入甲基红指示剂后呈红色(阳 性)。有些细菌分解葡萄糖产生的酸进 一步转化为醇、酮等非酸性物质，使 培养基pH在6.2以上，加入甲基红试 剂呈黄色(阴性)。
“-”表示； 分解糖产酸不产气，培养基中的指示剂变色，记录时以
“+”表示； 分解糖产酸产气，除培养基中的指示剂变化外，液体培养
基的倒管中还有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出
现气泡或琼脂断裂，记录时以“⊕”表示。
溴甲酚紫指示剂
+ 糖氧化发酵(O-F)试验：该试验是由Hugh和Leifson创立， 故又称Hugh-Leifson(HL)试验。
+ 原理：能产生尿素酶的细菌， 能水解尿素生成氨和CO2， 氨及其化合物使培养基呈碱 性。
+ 方法：将待检菌接种于尿素 培养基中，置于35℃培养 2～4小时或过夜，取出观察。 如阴性者继续培养4天再观 察。
+ 结果：培养基呈红色反应为 阳性；不变色或呈黄色为阴 性。
+ 应用：大肠杆菌阴性，变形 杆菌阳性
酚红指示剂
+ 原理：某些细菌(如变形杆菌属)，可产生苯 丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮 酸，加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸螯合后形 成绿色化合物。
+ 方法：将待检菌接种于苯丙氨酸琼脂斜面上， 于35℃培养18～24h。
+ 结果：在斜面培养物上滴加10％三氯化铁溶 液观察结果，出现绿色为阳性。
+ 应用：变形杆菌为阳性，大肠埃希菌为阴性。
+ 快速纸片法：取待检菌涂于苯丙氨酸脱氨酶 试纸上，35℃ 15min后滴加10％三氯化铁溶 液，观察。绿色为阳性，无色为阴性。
+ 原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，分解氨基酸，使其脱掉羧基，生成胺和 CO2，称脱羧反应；并使培养基变碱，可用指示剂显示出来。
+ 最常用的氨基酸有三种，L-赖氨酸脱羧形成尸胺，L-鸟氨酸脱羧形成腐胺， L-精氨酸脱羧形成精胺。
+ 鉴定细菌的生化反应主要有哪些类别 + 常用的生化试验操作方法与结果判断
+ 不同细菌产生的酶不同，对底物的分解能力不同，代谢产 物不同。
+ 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物， 生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微 生物。
+ 种类
碳水化合物代谢试验
蛋白质、氨基酸代谢试验
+ 原理：细菌对糖的代谢，分为氧化和发酵2种类型，不分 解葡萄糖的细菌，称为产碱型。利用此试验可区别细菌的 代谢类型。
+ 方法：取2支HL培养基。指示剂为溴麝香草酚蓝 ，煮沸10 分钟以驱逐培养基中的氧气。冷却后将被检细菌接种到2 支培养基中，其中一支加灭菌的液体石蜡或凡士林厚约 lcm，置于35℃培养3～4天，观察结果。