HCG单克隆抗体质量标准和检验规程
人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制及其β亚基羧基末端37肽(βhCG-CTP..
人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制及其β亚基羧基末端37肽(βhCG-CTP)真核表达的研究摘要人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)是人类受孕后胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素,是最早出现的妊娠特异性物质,hCG的合成与分泌与妊娠密切相关。
在妊娠早期hCG的浓度迅速升高,检测尿中的hCG即可证实妊娠,因此,抗hCG单克隆抗体的研制对于早早孕检测具有重要意义。
但用完整的抗hCG分子抗体检测hCG时与LH间有免疫交叉反应。
而hCG的β亚基羧基端109~145残基组成的37肽(human chorionic gonadotrophin-β carboxyl terminal peptides,βhCG-CTP)是hCG分子所特有的片段,并存在hCG的特异表位(抗原决定簇),其抗体具有更好的hCG抗原特异性,不会与促黄体生成激素(luteinizint hormone,LH)发生交叉反应。
采用抗βhCG羧基末端37肽单克隆抗体可以进一步提高检测的敏感性和特异性并为避孕疫苗的研制奠定基础。
因此,本研究在成功地制备了hCG单克隆抗体之后,进一步真核克隆表达了βhCG-CTP,为下一步基因免疫法制备单克隆抗体作了一定的准备,也为hCG基因避孕疫苗的研制奠定了基础。
第一部分人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制目的获得针对人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体。
方法 hCG蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞NS-1按8:1比例融合,用间接ELISA法筛选阳性克隆,再用有限稀释法进行扩大及克隆化培养;经对杂交瘤细胞株进行核型分析和克隆化培养,得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;以此杂交瘤细胞接种小鼠腹腔,制备腹水抗体;收集抗体,采用间接ELISA法鉴定抗体亚型、测定抗体效价和抗体特异性及交叉反应性比较。
结果 1. 共免疫8只小鼠,血清抗体效价均达10-6以上,说明免疫效果较好,可进行细胞融合;2. 得到6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA法测定其OD值均在1.0以上,说明分泌抗体的能力较强,在克隆化培养过程中,其OD值均呈稳定升高趋势,说明细胞株分泌抗体的稳定性良好;3. 制备的腹水抗体经鉴定均为IgG1、κ型,效价均达10-5以上;4. 以hCG、LH、α-LH、β-LH分别包被酶标板检测经两次克隆化的A1a1、A2a1、A3a1、A4a1、A5a1、A6a1 6株细胞株培养上清与它们的交叉反应性,结果显示:6株杂交瘤细胞株培养上清与hCG反应的OD值都在1.0以上,说明6株杂交瘤细胞株分泌抗hCG单克隆抗体的能力较强。
单克隆抗体、标准红细胞质控检测SOP
单克隆抗体、标准红细胞质控检测方法
原理:用ABO血型反定型红细胞作标准品,即用已知的A1、B、O细胞测定单克隆抗体(抗A,抗B,RhD)的效价。
同理,用标准抗血清测定红细胞。
材料:抗A,抗B,RhD(IgM)单克隆抗体反定型用红细胞 BOSO离心机
方法:
【试管法】在1、2、3号试管中先加二滴抗A抗体,4、5、6号试管中加入二滴抗B抗体,7号试管中加入一滴RhD(IgM)抗体。
在1、4号试管中加入二滴A1红细胞,在2、5号试管中加入二滴B红细胞,在3、6、7号试管中加入二滴O红细胞。
混匀,3000r/min离心
阳性结果判定
4+:一个大凝集块,背景透明,无游离细胞
3+:数个大凝集块,背景透明,无游离细胞
2+:许多小凝集块,背景稍混浊,有游离细胞
1+:细小的凝集块,背景稍混浊
+-:极细小凝集块,要用显微镜观察结果
-:无凝集,无溶血,细胞呈游离散在状态
PH:部分溶血
H:完全溶血
【微柱凝胶法】
材料:confirm卡反定型用红细胞 DG Gel专用离心机
方法:卡片编号1、2、3号,各编号每孔加50ul红细胞。
1号加入A1红细胞、2号加入B 红细胞、3号加入O红细胞,专用离心机离心后读卡,判定结果
阳性结果判定
4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血双群。
尿绒毛膜促性腺激素检测标准操作规程
尿绒毛膜促性腺激素检测标准操作规程1.【目的】为保证检测尿液绒毛膜促性腺激素结果的准确性,特制定本制度。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP,室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型:新鲜尿液标本,注意避免污染3.2患者准备:患者采集标本前应清淡饮食、适当控制饮水、处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
临床医生要指导患者正确留取标本,先将尿液留取到干净专用尿杯中,再倒入洁净的试管中样本量10ml ,避免月经血等污染,标本应新鲜并及时送检,一般要求不超过2h。
3.3容器添加剂类型:干燥且干净的尿杯中3.4实验试剂:人绒毛膜促性腺激素检测试剂(胶体金法)4.【测定原理】两个抗人0-hCG单克隆抗体,一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上,另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面(即金标抗体)。
尿液中hCG先与NC膜上的抗体结合。
然后再与金标单抗溶液反映,于是形成抗体-hCG-金标抗体的夹心式复合物,显现出红色的金斑点。
5【•操作步骤】5.1把试纸条有箭头的那一端插入尿液中,液面应在所标的横线以下,至少三秒钟后拿出平放。
5.2 5分钟内观察结果。
6.【质控程序】6.1定期(或分析批)监测试条的有效性。
每天检测阴、阳性质控品。
阴、阳性质控品的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控,相反则为失控。
6.2阳性质控用血hCG较高的标本做为阳性质控。
6.3弱阳性质控用血hCG较高的标本经稀释至浓度较低显示很淡反应线做为弱阳性质控品。
6.4阴性质控用男性尿液做为阴性质控品。
7.【结果计算与判断】阳性:在对照区(C)和实验区(T)均有色带出现。
阴性:仅在对照区(C)有色带出现。
无效:在对照区(C)和实验区(T)都没有色带出现。
用未开封的试剂盒,严格按实验说明重做一次。
8.【生物参考区间】9.【临床意义】9.1本试验主要用于妊娠的诊断。
人绒毛膜促性腺激素测定SOP_HCG临床意义_检验科生化项目SOP
人绒毛膜促性腺激素测定SOP_HCG临床意义_检验科生化项目SOP人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种由绒毛细胞和合体细胞分泌的糖蛋白类激素,在妊娠早期能催化黄体生成与分泌的孕酮,维持胎盘的发育与功能。
因此,人绒毛膜促性腺激素测定对于妊娠的诊断和监测非常重要。
本文将详细介绍人绒毛膜促性腺激素测定的操作规程(SOP)以及其临床意义。
一、人绒毛膜促性腺激素测定SOP(一)实验前准备1.验证并保持检测设备的正确运行2.准备检测所需试剂和标准品3.校准仪器至正常运行状态(二)样本处理1.收集妊娠早期静脉血样本2.氯化铋沉淀法分离澄清血清3.将澄清的血清样本转移到离心管中,避免氧化处理4.将样本储存于-20℃的冰箱中,避免多次冻融(三)实验操作1.取出样品并在流动室中解冻2.准备所需的工作液和一系列稀释标准品3.在试管中加入合适比例的标准品和待测样本,加入检测试剂4.在试管中加入酶标板置换盘,封闭孔洞,置于恒温水槽中孵育5.用洗涤缓冲液洗涤酶标板孔洞6.在每个孔洞中加入底物溶液,孵育15分钟7.加入底物溶液的反应停止液,读取吸光度8.用标准曲线计算样本中HCG的浓度9.记录测定结果并及时提交给相关医师(四)实验后处理1.清洗仪器和耗材2.周期性校准仪器3.根据SOP中的操作规程进行结果分析和报告二、临床意义(一)妊娠诊断HCG是妊娠初期最早出现的标志物之一,其测定可以明确是否存在怀孕。
在正常情况下,怀孕后的6-8天,HCG可以在血液中检测到。
因此,HCG的测定可以用于妊娠的早期诊断。
(二)妊娠监测HCG的浓度在妊娠早期不断上升,可以通过连续测量来监测胎儿的发育情况。
如果HCG的浓度没有按预期增加,可能表明胎儿发育不良、妊娠停止或其他异常情况。
因此,HCG的测定可以用于判断妊娠的进展和胎儿的状态。
(三)异常妊娠的检测HCG的浓度异常增加或减少可能是异常妊娠的指示。
例如,妊娠期超过6周,但HCG浓度低于预期水平,可能提示存在宫外孕。
β—人绒毛膜促性腺激素测定试剂产品技术要求万孚
β—人绒毛膜促性腺激素测定试剂产品技术要求万孚β—人绒毛膜促性腺激素(β—HCG)测定试剂(荧光免疫层析法)是一种用于检测β—HCG水平的试剂。
本产品技术要求涉及试剂的质量标准、性能指标、原料要求、试剂包装要求等方面。
以下是对该产品技术要求的详细说明。
一、试剂质量标准要求:
1.试剂应符合药品生产管理法规定的质量标准要求。
2.试剂应具有良好的稳定性和可重复性,以保证测试结果的准确性和可靠性。
二、试剂性能指标要求:
1.试剂应具有良好的灵敏度,能够检测到低浓度的β—HCG。
2.试剂应具有良好的特异性,不受其他干扰物质的影响。
3.试剂应具有较好的线性动态范围,能够准确测定各个浓度范围内的β—HCG浓度。
4.试剂的批间和内部一致性应符合规定标准。
三、试剂原料要求:
1.试剂的原料应符合药品生产管理法规定的质量标准要求。
2.所使用的酶标仪、试剂盒等设备和器材也应符合相应的质量标准要求。
四、试剂包装要求:
1.试剂应采用密封包装,能够有效保护试剂的活性和稳定性。
2.试剂包装上应标明试剂的名称、批号、有效期等信息。
3.试剂的包装材料应符合药品包装管理法规定的要求。
以上是对β—人绒毛膜促性腺激素(β—HCG)测定试剂(荧光免疫层
析法)产品技术要求的描述。
本产品要求试剂质量标准高,性能指标优良,原料符合质量标准,且采用密封包装。
通过满足这些要求,可以保证该试
剂在β—HCG测定中的准确性和可靠性,为临床诊断和治疗提供有力的支持。
《中国药典》四部中单克隆抗体药物质量标准
《中国药典》四部中单克隆抗体药物质量标准我国药典(以下简称《药典》)是目前我国法定的药物标准,包含了中药、化学药物、生物制品等多个领域的药物标准。
其中,单克隆抗体药物一直备受关注,而其质量标准更是至关重要。
在本文中,我将结合《我国药典》四部中单克隆抗体药物质量标准,从浅入深地探讨这一话题,帮助读者全面了解单克隆抗体药物的质量标准。
一、《我国药典》对单克隆抗体药物的定义在《我国药典》中,单克隆抗体药物被定义为一种通过基因工程技术制备、能够特异性识别和结合抗原的免疫球蛋白类似物。
其主要特点是单一克隆性和单一特异性。
这一定义为读者提供了对单克隆抗体药物的基本概念,为深入了解其质量标准奠定了基础。
二、《我国药典》中对单克隆抗体药物的质量标准1. 外观和性状《我国药典》对单克隆抗体药物的外观和性状进行了详细描述,包括其形态、颜色、气味等方面。
这些描述从宏观上展现了单克隆抗体药物的特点,读者可以通过这些描述初步了解该药物的基本情况。
2. 成分含量在《我国药典》中,单克隆抗体药物的成分含量是十分重要的质量标准之一。
该部分包括了对单克隆抗体的特异性活性、相关蛋白质的含量等内容的详细要求。
这一部分内容展现了单克隆抗体药物的活性成分和相关蛋白质含量对其质量的重要影响,帮助读者更深入地理解该药物的质量标准。
3. 污染物限量除了活性成分和相关蛋白质含量外,单克隆抗体药物的污染物限量也是其质量标准的重要组成部分。
《我国药典》中对于微生物污染、重金属和有机物污染等都有详细的规定,以确保单克隆抗体药物在生产过程中的纯度和安全性。
4. 其他《我国药典》中对单克隆抗体药物的质量标准还涉及其他方面,如稳定性、溶解度、杂质和特殊杂质等内容。
这些内容共同构成了单克隆抗体药物在质量上的全面标准。
三、个人观点和理解从上述对《我国药典》四部中单克隆抗体药物质量标准的探讨中,可以看出其对单克隆抗体药物的质量标准是严格而全面的。
在制定和遵循这些质量标准的基础上,可以保证单克隆抗体药物的质量和安全性,从而更好地为临床应用提供保障。
人绒毛促性腺激素sop
人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请:人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定(缩写βhCG);组合项目申请:肿瘤标志物检查组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
也可用肝素或EDTA作抗凝剂采集血浆标本。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足:少于0.3ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本,包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血清或血浆, 避免溶血。
离心必须达到4000rpm×15min,离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间:室温(15~25℃)下可稳定8h,普通冰箱中(2~8℃)稳定3d,在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩,对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动,早上或上午采血。
3 方法原理βhCG 测定采用双位点加心化学发光免疫分析法,其检测原理来如下:第一步:将标本与包被着小鼠βhCG单克隆的超顺磁性磁粒添加到反应管中添加到反应管中,经过孵化,样本中的hCG和磁珠上固定的βhCG单克隆抗体结合,磁场吸附磁珠,洗去未结合物质。
总β人绒毛膜促性腺激素测定标准操作规程
总B人绒毛膜促性腺激素测定标准操作规程1检验原理:采用两步法免疫检测,运用化学发光微粒子免疫检测(CMIA)技术与灵活的检测模式的结合,测定人血清和血浆中的(B-HCG)。
第一步,将样本和βHCG抗体包被的顺磁微粒子混合。
样本中的BHCG与BHCG抗体包被的微粒子结合。
冲洗后进入第二步,加入口Y咤酯标记的BHCG抗体结合物。
然后将预激发液和激发液加入反应混合物中;测量化学发光反应结果,以相对发光单位(RLUs)表示。
样本中的BHCG含量和ARCHITECT1光学系统检测到的RLUs值成正比。
2.试剂主要组成部分:2.1试剂盒微粒子:B-HCG抗体(小鼠、单克隆)包被的微粒子结合物:叫咤酯标记的B-HCG抗体(小鼠、单克隆)结合物2.2需要但未提供的试剂预激发液:预激发液含有L32%(W/V)过氧化氢激发液:激发液含有O.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液:浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。
防腐剂:抗菌剂。
3.样本要求:人血清(包括采集于血清分离管中的血清)或采集于肝素、肝素锂或EDTA钾抗凝管中的血浆。
血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。
2-8°C可保存7天;Toe以下可保存12个月。
样本应避免反复冻融。
4.检验方法:仪器法(详见雅培il000标准操作规程)6.检验结果的解释:总B人绒毛膜促性腺激素项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法(4PLC,Y加权)生成一条校准曲线7.2结果单位转换:浓度(uIU∕ml)Xl=浓度(IU∕ml)7.检验方法的局限性7.1本项目能够检测完整的hCG分子和游离β-hCG亚基。
7.2hCG检测结果用于诊断时,应当与其他数据,如患者病史、症状、其他检测结果、临床表现等结合使用。
单独依靠检测hCG不能识别正常妊娠和异位妊娠.7.3如果hCG含量与临床情况不符或不受临床情况支持,那么需要通过其他hCG检测方法进行确认.其中包括尿液的定性检测.如果尿液中没有hCG,血清结果可能假性升高.也可以通过连续稀释样本确认结果.通常情况下,但不是所有情况,含有干扰物质的样本在稀释后将表现出非线性结果.7.4总β人绒毛膜促性腺激素项目只能检测早期妊娠.未被认可用于癌症标志物的筛查或监测等其他用途.因此不应用于其他用途.7.5极少情况下,hCG含量出现连续上升的现象。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试剂(胶体金免疫层析法)产品技术要求dekangrun
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试剂(胶体金免疫层析法)
适用范围:适用于体外定性检测人尿液中的人绒毛膜促性腺激素。
1.1 型号/规格:检测卡1人份/袋。
1.2 主要组成成分:①检测试剂:由胶体金垫(胶体金标记鼠源β-HCG单克隆抗体)、硝酸纤维素膜(C线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体,T线包被鼠源α-HCG 单克隆抗体)、样品垫、吸样垫和PVC板组成;②干燥剂;③滴管。
2.1 外观
检测试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染;材料附着牢固。
2.2 膜条宽度
膜条宽度应不小于2.5mm。
2.3 液体移行速度
液体移行速度应不低于10mm/min。
2.4 最低检测限
应不高于25mIU/ml。
2.5 特异性
2.5.1 阴性特异性:分别用含500mIU/ml hLH、1000mIU/ml hFSH和1000μIU/ml hTSH的0mIU/ml HCG液进行检测,结果应均为阴性。
2.5.2 阳性特异性:分别用含500mIU/ml hLH、1000mIU/ml hFSH和1000μIU/ml hTSH的25mIU/ml HCG液进行检测,结果应均为阳性。
2.6 重复性
取同一批号的HCG试纸10支,以浓度为25mIU/ml的HCG液测定,反应结果应一致,显色度均一。
2.7 批间差
取三个批号的HCG试纸,对重复性进行检测,三个批号测试条的结果都应符合2.6的要求。
2.8 稳定性
4℃~30℃放置12个月后,分别检测2.1~2.6项,结果应符合2.1~2.6各项的要求。
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)1 检查目的人绒毛膜促性腺激素(HCG)为胎盘分泌的一种糖蛋白激素。
健康未怀孕妇女的尿中不含有或含有少量的人绒毛膜促性腺激素。
女性怀孕后,子宫内胎盘的滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素,通过血液循环排1 检查目的人绒毛膜促性腺激素(HCG)为胎盘分泌的一种糖蛋白激素。
健康未怀孕妇女的尿中不含有或含有少量的人绒毛膜促性腺激素。
女性怀孕后,子宫内胎盘的滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素,通过血液循环排入尿中。
利用孕妇尿中存在人绒毛膜促性腺激素进行检测,提供妊娠依据,以及帮助诊断某些疾病,如:葡萄胎、绒毛膜癌、睾丸畸胎瘤等。
2 检测原理两个抗人β- hCG 单克隆抗体,一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上,另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面,尿液中hCG先与NC膜上的抗体结合,然后再与金标单抗溶液反应,于是形成抗体-hCG-金标抗体的夹心式复合物,呈现出红色的金斑点。
3 标本采集3.1 标本要求用无污染的新鲜尿液。
3.2 将尿液置于干燥洁净度容器内送检,白带多的妇女可取中断尿液送检。
4 设备与试剂4.1 本试验不需要特殊仪器。
4.2 一次性洁净的尿杯。
4.3 市售金标早早孕检测试剂盒:薄膜渗滤法或试带法。
5 操作步骤5.1 嘱病人用一次性干燥洁净的尿杯留取新鲜尿液。
5.2 将测试纸条有箭头的一端插入尿液标本容器中,至少5秒钟后取出平放,5分钟内观察结果。
5.3 测试纸条插入尿液是不可超过MAX标志线。
6 结果判定6.1 阳性:在检测线位置及对照线位置各出现一条红色反应线。
6.2 阴性:仅在对照线位置出现一条红色反应线。
6.3 无效:在检测线和对照线中均无红色反应线出现,或只在检测线位置出现红色反应线,而在对照线不出现,说明试验无效或测试纸条失效,请用新测试纸条重试。
7 质量控制措施无。
8 干扰因素7.1 试纸条应置于4- 30℃避光密封干燥储存,切勿冰冻,使用前恢复室温(20-30℃)。
重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的质控方法及质量标准的建立
mbinant human anti-rabies virus monoclonal anti- body,rhRMcAb)为 CHO 细胞表达的全人源抗体,属 于 IgG1 亚型,可代替抗狂犬病血清用于狂犬病病毒 暴露后预防。本文对本公司研制的 rhRMcAb 的质控 方法和质量标准进行了研究,现报道如下。
1. 材料与方法 1. 1 毒株及细胞
狂犬病病毒固定毒株(CVS-11)由武汉生物制品
·862·
中国生物制品学杂志 2010 年 8 月第 23 卷第 8 期 Chin J Biologicals August 2010,Vol. 23 No. 8
研究所提供;鼠成神经细胞瘤细胞(NA 细胞)来自 TJU USA。 1. 2 样品
狂犬病疫苗,并使用抗狂犬病血清。临床上用单克隆
抗体取代血源抗体用于狂犬病病毒暴露后预防已成
为共识[1]。重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(Reco-
基金项目:“十一五”863 计划生物和医药技术领域重大项目 (2006AA02A247).
作者单位:华北制药集团新药研究开发有限责任公司生物技术 研究室(石家庄 050015).
【Abstract】 Objective To establish the method and standard for quality control of recombinant human monoclonal antibody against rabies (rhRMcAb). Methods The rhRMcAb was analyzed for neutralizing activity by mouse neutralization test(MNT)and rapid fluorescent focus inhibition test(RFFIT), for purity by reduced and non-reduced SDS-PAGE and for peptide map by reduction alkylation and trypsin digestion followed by reverse phase HPLC. The amino acids at N-terminus was sequenced by amino acid sequencer after the pyroglutamate blockage at N-terminus was removed by pyroglutamate aminopeptidase. The affinity constant of rhRMcAb with rabies virus glycoprotein was determined by surface plasmon resonance(SPR)method. Other quality indexes of rhRMcAb were determined according to the requirements in Chinese Pharmacopeia (2005 edition), based on which a standard for quality control was established. Results The activities of six batches of rhRMcAb determined by MNT and RFFIT were basically in agreement. The reduced SDS-PAGE purities of three batches of rhRMcAb bulks were more than 99. 0% . Except major antibody bands, some minor bands with both high and low relative molecular masses were also observed on the non-reduced SDS-PAGE profile of rhRMcAb. The peptide maps of three batches of bulks were consistent with that of in-house reference. The amino acid sequence at N-terminus was identical to the theoretical value. The affinity constant of rhRMcAb with rabies virus glycoprotein was 1. 86 × 108 / M. All the other quality indexes of rhRMcAb met the requirements in Chinese Pharmacopeia (2005 edition). In the established standard for quality control, the neutralizing activity of rhRMcAb was not less than 500 IU / ml, while both SDS-PAGE and HPLC purities were not less than 98. 0%. Conclusion The method and standard for quality control of rhRMcAb were established.
β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)定量检测试剂产品技术要求
医疗器械产品技术要求编号:β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)定量检测试剂(免疫层析法)1.产品型号/规格及其划分说明2.性能指标2.1 外观检查外观应平整,材料附着应牢固,各组份应齐全,卡固定紧密。
2.2 物理检查膜条宽应不小于2.0mm;液体移行速度应不低于10mm/min。
2.3 线性范围取同一批号的试剂分别对五个浓度的β-HCG参考品进行检测,其检测范围为5mIU/mL~200000mIU/mL,每份参考品重复检测3次,计算相关系数r,其中r值≥0.99。
2.4 精密度2.4.1 批内精密度随机抽取同一批号的试剂分别对两个浓度的β-HCG参考品进行检测,每份参考品重复检测10次,其变异系数CV(%)值≤15%。
2.4.2 批间精密度随机抽取连续三个批号的试剂,每批试剂分别对两个浓度的β-HCG参考品进行检测,每份参考品重复检测3次,其变异系数CV(%)值≤15%。
2.5 准确度取同一批号的试剂分别对三个水平浓度的β-HCG参考品进行检测,每份参考品重复检测3次,计算样本测定结果均值和相对偏差,其中相对偏差(Bias%)在±15%内。
2.6 最低检出限取同一批号的试剂分别对配制参考品基质进行检测,重复检测20次,计算出反应量的均值和标准偏差SD ,将(+2SD )的反应量代入剂量-反应曲线,使最终浓度值应不大于2mIU/mL 。
2.7 分析特异性选择同一浓度的β-HCG 参考品分别加入1000mIU/mL 促卵泡生成素(FSH )、500mIU/mL 促黄体生成素(LH )、1000μIU/mL 促甲状腺激素(TSH)进行检测,各干扰样本重复检测3次,计算样本检测结果的均值和相对偏差,其中相对偏差(Bias%)在±15%内。
2.8 稳定性将试剂在50℃条件下放置14天,检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4.1、2.5和2.6的规定。
3.检验方法 3.1 外观检查取出试剂,用目测方式观察,结果应符合2.1的规定。
单克隆抗体标准物质安全操作及保养规程
单克隆抗体标准物质安全操作及保养规程前言单克隆抗体标准物质是生物医学科研和诊断领域中常用的实验材料。
本文档旨在介绍单克隆抗体标准物质的安全操作和保养规程,以保障使用者的身体健康和实验结果的准确性。
安全操作1. 实验室安全在进行单克隆抗体标准物质的实验时,应严格遵守实验室安全规范,包括化学品储存和处置、实验室废物处理等。
同时,还需遵守实验室安全防护措施,如戴手套、护目镜、防护服等。
在使用单克隆抗体标准物质时,特别要注意防止其吸入、摄入或接触皮肤和眼睛,应尽量避免制备和使用粉末、溶液等物质时产生的微小粒子或气溶胶。
2. 标准物质溶液制备当需要制备单克隆抗体标准物质的溶液时,应使用符合规定的实验室设备和材料。
在测量固体标准物质时,应选用准确的称量设备;在配制液体标准物质时,应使用纯净水和检测灵敏度高的滴定或分析方法。
在制备溶液时,需注意将配制溶液的PH值、浓度、稀释倍数等因素确定好,并在标准物质溶液中加入适量的防腐剂等辅助物质来保证标准物质的稳定性。
3. 标准物质使用在标准物质的使用过程中,需要严格遵守实验室操作规程,确保实验的准确性和可重复性。
在使用前,需确保单克隆抗体标准物质的合法性、一致性和纯度,尽量避免使用已过期、变质或不符合规格的标准物质。
使用前还需检查标准物质的状态和溶液的质量,若出现不符合要求的情况需要重新制备标准溶液。
在使用标准物质时,应根据实验需要,选择合适的浓度、稀释倍数、适当的量和操作时间。
4. 标准物质存储为了保证单克隆抗体标准物质的稳定性和质量,其中包括固体标准物质和制备好的标准物质溶液,需要妥善存储。
固体标准物质需存放于低温,干燥、避光、密封条件下;制备好的标准物质溶液应迅速冷冻存储或真空密封保存,以避免其被空气、光线和温度影响损失活性或变质。
在存储过程中,应定期检查标准物质的状态,并按照规定的时间(如一年或两年)进行更换或复核。
保养规程为保证单克隆抗体标准物质的稳定性和持久性,需要对其进行合理保养。
游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位(F-hCGβ)测定试剂盒(磁微粒化学发光法)产品技术要求
游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位(F-hCGβ)测定试剂盒(磁微粒化学发光
法)
适用范围:该产品用于体外定量测定人血清中游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位(F-hCGβ)含量
1.1 规格
规格为100测试/盒。
1.2 主要组成成分
表1 产品组成成分
2.1 外观
2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏;
2.1.2磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液,无明显凝集;
2.1.3液体组分应澄清,无沉淀或絮状物;
2.1.4包装标签应清晰,易识别。
2.2净含量
不得低于标示体积。
2.3 特异性(交叉反应)
试剂盒与表2中有关潜在交叉反应物应无显著的交叉反应。
表2 交叉反应
2.4准确度
用国家标准品作为样本进行检测,其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。
2.5最低检测限
应不大于0.2ng/mL。
2.6线性
在(0.2~200)ng/mL的测量范围内,试剂盒的相关系数r应≥0.990。
2.7批内精密度
用(10±2)ng /mL和(80±16)ng /mL 的样本各重复检测10次,其变异系数(CV)应不大于8%。
2.8 质控品的赋值有效性
质控品的测量值应在质控范围内。
2.9批间精密度
批间变异系数(CV)应不大于15%。
2.10效期稳定性
该试剂盒有效期为12个月,在有效期满后一个月内的任一天检测试剂盒的准确度,最低检测限,线性和重复性,应符合2.4~2.7的要求。
单克隆抗体 质量标准 指导原则
单克隆抗体质量标准指导原则嘿,朋友们!今天咱们来聊聊单克隆抗体的质量标准指导原则,这就像是给单克隆抗体这个超级明星制定的“星途规则”呢。
单克隆抗体就像一群训练有素的特种兵,每一个都有着独特的使命。
那质量标准啊,就像是特种兵入伍的严格筛选条件。
首先,纯度得高啊,就像一杯超级纯净的果汁,不能有什么杂质在里面捣乱。
要是有杂质,那就好比果汁里混进了小石子,喝起来可就不美妙了,在抗体这里就可能会引发各种意想不到的问题。
活性也是个关键因素呢。
这活性就如同特种兵的战斗力,得是嗷嗷强才行。
如果活性不够,就像一个软趴趴的拳击手,在面对敌人(也就是疾病之类的目标)的时候,只能被打得鼻青脸肿,完全起不到该有的作用。
特异性也不能马虎,这特异性就像是单克隆抗体的爱情专一性。
它只能对特定的目标钟情,要是它像个花心大萝卜,到处乱结合,那可就乱套啦,就像一场本该一对一的相亲会,结果来了个到处乱牵红线的糊涂蛋,整个场面就没法控制啦。
稳定性也很重要哦。
想象单克隆抗体是个小蛋糕,如果这个小蛋糕放在外面一会儿就变质了,那可不行。
它得像那种超级耐放的压缩饼干,不管环境怎么折腾,它都能保持自己的状态,这样才能在各种储存和运输的过程中安然无恙。
生产过程的一致性就像是克隆人的复制粘贴,要一模一样才行。
不能这个批次的抗体像个时尚达人,打扮得花枝招展,下一个批次就变成了邋里邋遢的流浪汉,这样在治疗过程中就会让人摸不着头脑,不知道该期待什么样的效果了。
安全性更是重中之重啦。
这就好比是在抗体这个超级英雄身上装了个安全锁,要是没有这个安全锁,就像放了个没有缰绳的小怪兽出去,可能会给身体带来各种意想不到的灾难,那可就不是治病而是致病喽。
杂质控制就像是大扫除,要把那些不该存在的东西都清扫干净。
哪怕是一点点小小的杂质,都可能像一颗老鼠屎坏了一锅粥,让整个单克隆抗体的效果大打折扣。
剂量准确性也不能忽视呀。
这就像做菜放盐,多一点少一点都可能影响口感。
剂量多了,就像吃了一大把盐,咸得要命;剂量少了,又像没放盐一样没味道,达不到治疗的预期。
人类绒毛膜促性腺激素+β亚单位标准操作程序SOP文件
·第3步:反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
人类绒毛膜促性腺激素+β亚单位
版序:ABCD
页码:第4页,共4页
妊娠HCG IU/ml [1000 mIU/ml]*
周数例数中位数范围5-95%
4 42 1.11 0.04-4.48
5 52 8.05 0.27-28.7
6 67 29.7 3.70-84.9
7 62 58.8 9.70-120
8 37 79.5 31.1-184
试剂:
M:链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。
R1:生物素化的抗HCG单克隆抗体(灰盖),1瓶,10ml。浓度6.3mg/l,磷酸缓冲液0.04mol/l,pH7.5。含防腐剂。
R2:Ru(bpy)32+标记的抗HCG单克隆抗体(黑盖),1瓶,10ml。浓度4.6mg/l,磷酸缓冲液0.04mol/l,pH6.5。含防腐剂。
本试剂所用的特异性单克隆抗体可识别完整的HCG、HCG的槽型结构、β核的片断和β亚单位。钌标记的抗体和生物素化的抗体针对HCG分子的不同的抗原决定簇。
原理:
采用双抗体夹心法原理,整个过程18分钟完成。
·第1步:20μl(Elecsys2010,E170)或15μl(Elecsys1010)标本、生物素化的抗HCG单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗HCG单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。
人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒(化学发光法)标准化操作规程规程
人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒(化学发光法)标准化操作规程规程1 目的为了规范人绒毛膜促性腺激素测定操作程序,特制定本规定。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用人绒毛膜促性腺激素定量检测。
4 检验方法本试剂测定原理以化学发光免疫夹心法。
5 检验原理本试剂盒利用发光免疫夹心法检测HCG。
采用针对HCG 的一株单克隆抗体标记ABEI,另外一株单克隆抗体标记FITC。
标本,定标液,(质控液)与FITC 标记的单抗,包被有羊抗FITC 抗体的纳米免疫磁性微珠混匀,置37℃孵育形成免疫复合物,进入强磁分离区分离36 秒钟,循环清洗1 次后进入二次加样区,加入ABEI 标记的单抗,置37℃孵育形成“夹心三明治”免疫复合物,再进入强磁分离区分离36 秒钟,循环清洗1 次,直接进入样品测量室,仪器自动泵入发光底物1 和2,自动监测3 秒钟内发出的相对光强度(RLU)。
HCG 浓度与RLU 成一定的比例关系,仪器自动拟合计算HCG 浓度。
6 检验标本要求患者准备:无特殊要求,最好是清早空腹。
标本类型:无溶血的血清标本。
采集静脉血至玻璃试管中,室温静置。
离心分离血清部分,2-8℃保存。
血清标本在2-8℃稳定12小时。
超过12小时,则先分装,-20℃可保存30天,避免反复冰冻和解冻两次以上。
7 试剂及配套品7.1试剂来源xx生物医学工程股份有限公司人绒毛膜促性腺激素试剂盒(化学发光法)7.2 试剂规格100T7.3试剂组成:注:不同批号试剂盒中各组份不能互换。
7.4试剂的稳定性与贮存:7.4.1 试剂在2℃~8℃条件下,干燥、避光、密封贮存,有效期为12个月。
7.4.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定28天,机载有效期为14天。
8 实验仪器及试剂性能8.1 实验仪器xxMAGLUMI 2000PLUS全自动化学发光免疫分析仪8.2试剂性能指标8.2.1准确率:通过在稀释液中添加HCG标准品并检测来评估试剂盒的相对偏差,相对偏差在±10%范围内。
抗-A、抗-B血型定型试剂(单克隆抗体)质量检查规程
3.3 特异性检测:取6只小试管分两组,3管加 抗A、3管加抗B,每管2滴,标记A1c、Bc、 Oc,每管加5%相应RBC悬液1滴,混匀,置 18~22℃15分钟,离心观察结果。、 抗-A只与A1c凝集,不凝集B及O型细胞,无 溶血及不易分辨现象; 抗-B只与Bc凝集,不凝集A1及O型细胞,无 溶血及不易分辨现象。
3.1 外观:包装完好无渗漏、标识清晰、有批 批检防伪标识、产品在有效期内; 抗-A液应透明或微带乳光的蓝色液体; 抗-B液应透明或微带乳光的黄色液体,无摇不 散沉淀:取2排试管,每管加4滴生理盐 水(第一管不加),每排第1管、第二管加抗A、抗-B各4滴,从第2管开始倍比稀释,最后 1管吸取4滴弃去。 各管加对应5%红细胞悬液1滴,置18~22℃15 分钟,离心,凝集1+的最高稀释管为此效价。 抗-A、抗-B效价应≧128。
3.4 亲合力:将1滴待检试剂置洁净玻片上, 各加等体积相应10%红细胞悬液1滴,立即摇 动观察是否有凝集,应15秒以内出现凝集。 3.5 不规则抗体筛选:将0.5%的O型红细胞4 滴,加抗-A,抗-B 各1滴。
3.6 冷凝集试验:取2支试管,分别加抗-A、 抗-B液 4滴,每管加1滴5%O型红细胞,混匀 置4℃冰箱,2小时后看结果。 3.6 结果判断:合格的抗A(B)血清试剂应符合 以下标准: 3.6.1 抗A(B)效价≥128,无溶血。
抗-A、抗-B血型定型试剂(单克隆抗 体)质量检查规程
输血科
1、目的
为保证ABO血型鉴定的正确,对抗-A、抗-B血 型定型试剂的外观、效价、亲和力、特异性、 冷凝集等方面进行质量检查,确保血型鉴定准 确。
2、试剂
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1、目的:描述物料的质量标准和检验规程,规范相应的采购、检验工作。
2、范围:适用于HCG单克隆抗体采购、检验过程。
3、责任:质量管理部人员、综合部员对此标准的实施负责。
4、内容:
质量标准
外观检查:
产品标签应清晰、无破损,应列出以下内容:物料名称、批号、数量、储存条件等。
外观:外包装没有破损。
物理性状:无色透明澄清溶液。
纯度、蛋白浓度及活性:(由生产商/供应商提供相应检测报告、资料)
纯度:用聚丙烯酰胺电泳法鉴定HCG单克隆纯度,上样3ug,肉眼观察仅见一条带,纯度不低于90%。
蛋白浓度:用光度计测蛋白质含量不低于ml。
活性:用ELISA酶标法检测活性,在ml,应不得低于1:2000。
功能性检验:
将HCG单克隆抗体按该项目的生产工艺规程制作成中间品,与相应合格的中间品匹配,制备成半成品,用HCG单克隆抗体校准品/质控品进行检验。
检验规程:
抽样:
采购的某批号HCG单克隆抗体,库房接收入库并提交请检报告单和相关资料给质控(QC)。
质控人员抽取一次检验量2倍的HCG单克隆用于检测。
外观检查:
产品标签是否列出以下内容:物料名称、批号、数量、储存条件等。
外观:外包装有无破损。
物理性状:颜色外观及澄清度。
纯度、蛋白浓度及活性(见生产商/供应商提供相应检测报告)。
功能性检验:
性能检测所需物品
将HCG单克隆抗体按该项目的生产工艺规程制作成中间品,与相应合格的中间品匹配,制备成半成品,用HCG单克隆抗体校准品/质控品进行检验。
最低检出量不高于ml,与特异性参考品无交叉。
检测结果的评价:
及时填写《原料检验报告》,检查物料结果符合上述质量标准要求的,判定为外观检查合格。
有不符合上述质量标准要求的,判定该物料经检测不合格,物料管理员应根据质量管理部检测报告单及
时填写“报废单”或“退货单”,内容包括:批号、名称及规格、数量、(报废)退货原因等。
核对无误后,签字,并交采购员,采购员在核对后签名并交部门经理审批,进行退货等相应工作。