中药血清药理学以及实验设计思路
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• 含药血清的保存: -20 ℃或更低温度环境下保存。
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血清添加量
• 药物血清加入量的逐渐增加，其药理效应曲线是 呈正态分布状。
• 研究含药血清的加入量来评价血清中药物的真实 有效浓度。
• 设立正常血清空白对照组来排除血清本身所含干 扰性物质对实验结果的影响。
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实验设计思路
• 根据实验的要求选择动物，以及必要的药 理造模；
1~ 2h采血较为合理。 • 最可靠的方法是先通过对少量动物进行预实验，
根据不同的实验要求，将不同时间的采集的含药 血清进行实验比较，再确定采血时间。
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含药血清的处理与保存
• 药物血清处理：灭活与否？ ①丙酮法； ②乙醇法 ；③加温法。 目前采集动物血清后，多用加温法， 经56℃，30min灭活。
• 灌胃次数和时间间隔：各种给药方式都是为了使 药物达到稳态血药浓度，从而便于药物作用和机 理的研究。
• 由于中药及其复方化学成分复杂，半衰期很难测 定，所以采用7～10d 给药法也是权宜之计。当 然，若是进行药物血清时效关系的研究，给药方 法又另当别论。
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采血时间
• 理想的采血时间应落在血药浓度的高峰期。 • 李仪奎通过对96个药物达峰时间统计后提出药后
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中药血清药理学
• 中药血清药理学是将中药或 中药复方经口服给动物灌服 一定时间后采集动物血液、 分离血清，用含有药物成分 的血清进行体外实验的一种 半体内实验方法。
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血浆 血清 凝血
• 血浆是指血液中除血球、血小板之外的部 分, 是一种无色透明的液体, 含有水、无机 盐、营养物、激素、尿酸等。
小檗碱、黄芩苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效
应关系。
•
黄芩的含药血清灭活与否抗氧化作用有很大差
异，两者的时-效曲线上也有明显不同。血清添加量
过大，会有假阳性结果，造模难以成功。本实验中
以5% 浓度血清造模，较为成功。
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实验设计思路
• 荆芥、桂枝挥发油含药血清体外抗病 毒的实验研究
•
荆芥、桂枝挥发油含药血清对MDCK细胞的
最大无毒浓度 TC0 均为5%，即在相应培养基中 血清含量为5%。荆芥、桂枝挥发油含药血清5%
、3.5%、2.5%浓度对10 TCID50的甲型流感病毒 的增殖均有显著抑制作用，且5%、3.5%浓度的
荆芥、桂枝挥发油含药血清对甲型流感病毒具有
直接杀灭作用。
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30 min，1、2、3 h后从兔颈静脉取血，分离含
药血清。采用反相高效液相色谱法测定含药血清
中小檗碱含量，用微量稀释法和药敏纸片法测定
复方黄连注射剂含药血清的抑菌能力。结果复方
黄连注射剂含药血清对耐药性金葡菌具有明显的
抑制作用。
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实验设计思路
• 茵陈蒿汤保肝作用的血清药理学研究
• 建立CCl4诱导的大鼠肝细胞损伤细胞模型， SD 大鼠为含药血清供体，以含药血清对损伤肝 细胞增殖(WST-8法)的影响为指标，采用正交试 验法优选含药血清的制备方法，并确定体系中血 清添加量。
•
以动物是否造模、取血时间、取血成分为考
察因素，每个因素设2个水平，选用L4(23)正交表
安排试验。
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实验设计思路
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实验设计思路
• 黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究
•
采用血清药理学方法，研究黄连、黄芩、黄连
解毒汤含药血清对氧化应激损伤保护作用的时间-效
应关系；并研究黄连、黄芩、黄连解毒汤提取物和
• 优选含药血清的制备方法（采用正交试验 法等）：以药物和观察指标不同，需要首 先对含药血清的时效和量效进行研究，以 便确定给药方案 、采血时间 、血清或血浆 、灭活与否、血清添加量。
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实验设计思路
• 复方黄连注射剂血清药理学研究
•
以大白兔为实验动物，采用肌内注射复方黄
连注射剂，2次/d，连续3d。末次给药后15 、
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中药血清药理学步骤
实 验
给
给
采
含 药 血
Fra Baidu bibliotek
血
动 物 的
药 剂
药 方
血 时
清 的 处 理
清 添 加
选 择
量
案
间
与 保 存
量
精品课件
实验动物的选择
实
动物种类：大鼠、家兔、豚鼠
验
动
动物数量
物
的
雌雄是否各半
选
择
正常生理状态与病理状态
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给药剂量
给
临
给
给
药
床
药
药
常
剂
用
剂
剂
量
量
量
量
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给药方案
• 血清是指血浆中除去纤维蛋白后得到的淡 黄色液体, 在血液凝固后才能分离出来。
• 凝血是指凝血酶与纤维蛋白原相作用生成 纤维蛋白, 再与血球结合而使血液发生凝固 的现象。
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血浆 血清 凝血
无凝血直接离心的为血浆； 有凝血再离心的为血清。
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优点
防止中药粗制剂理化性质 反映药物的代谢产物和 对体外试验的干扰 给药后产生的内源性成分
便于从细胞分子水平 体外实验条件可控性强、
阐述药物的作用机制
药物效应易于检测
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缺点
• 无确定的最佳给药方案 • 体外培养体系药物浓度与血药浓度不确定 • 药效最佳的采血时间难以确定 • 含药血清灭不灭活，方法不统一 • 无去除血清影响的理想措施
• 成分复杂，影响因素太多，结果重复性差 • 血清药理学方法增加了分析药物成分的难度
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血清添加量
• 药物血清加入量的逐渐增加，其药理效应曲线是 呈正态分布状。
• 研究含药血清的加入量来评价血清中药物的真实 有效浓度。
• 设立正常血清空白对照组来排除血清本身所含干 扰性物质对实验结果的影响。
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实验设计思路
• 根据实验的要求选择动物，以及必要的药 理造模；
1~ 2h采血较为合理。 • 最可靠的方法是先通过对少量动物进行预实验，
根据不同的实验要求，将不同时间的采集的含药 血清进行实验比较，再确定采血时间。
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含药血清的处理与保存
• 药物血清处理：灭活与否？ ①丙酮法； ②乙醇法 ；③加温法。 目前采集动物血清后，多用加温法， 经56℃，30min灭活。
• 灌胃次数和时间间隔：各种给药方式都是为了使 药物达到稳态血药浓度，从而便于药物作用和机 理的研究。
• 由于中药及其复方化学成分复杂，半衰期很难测 定，所以采用7～10d 给药法也是权宜之计。当 然，若是进行药物血清时效关系的研究，给药方 法又另当别论。
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采血时间
• 理想的采血时间应落在血药浓度的高峰期。 • 李仪奎通过对96个药物达峰时间统计后提出药后
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中药血清药理学
• 中药血清药理学是将中药或 中药复方经口服给动物灌服 一定时间后采集动物血液、 分离血清，用含有药物成分 的血清进行体外实验的一种 半体内实验方法。
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血浆 血清 凝血
• 血浆是指血液中除血球、血小板之外的部 分, 是一种无色透明的液体, 含有水、无机 盐、营养物、激素、尿酸等。
小檗碱、黄芩苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效
应关系。
•
黄芩的含药血清灭活与否抗氧化作用有很大差
异，两者的时-效曲线上也有明显不同。血清添加量
过大，会有假阳性结果，造模难以成功。本实验中
以5% 浓度血清造模，较为成功。
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实验设计思路
• 荆芥、桂枝挥发油含药血清体外抗病 毒的实验研究
•
荆芥、桂枝挥发油含药血清对MDCK细胞的
最大无毒浓度 TC0 均为5%，即在相应培养基中 血清含量为5%。荆芥、桂枝挥发油含药血清5%
、3.5%、2.5%浓度对10 TCID50的甲型流感病毒 的增殖均有显著抑制作用，且5%、3.5%浓度的
荆芥、桂枝挥发油含药血清对甲型流感病毒具有
直接杀灭作用。
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30 min，1、2、3 h后从兔颈静脉取血，分离含
药血清。采用反相高效液相色谱法测定含药血清
中小檗碱含量，用微量稀释法和药敏纸片法测定
复方黄连注射剂含药血清的抑菌能力。结果复方
黄连注射剂含药血清对耐药性金葡菌具有明显的
抑制作用。
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实验设计思路
• 茵陈蒿汤保肝作用的血清药理学研究
• 建立CCl4诱导的大鼠肝细胞损伤细胞模型， SD 大鼠为含药血清供体，以含药血清对损伤肝 细胞增殖(WST-8法)的影响为指标，采用正交试 验法优选含药血清的制备方法，并确定体系中血 清添加量。
•
以动物是否造模、取血时间、取血成分为考
察因素，每个因素设2个水平，选用L4(23)正交表
安排试验。
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实验设计思路
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实验设计思路
• 黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究
•
采用血清药理学方法，研究黄连、黄芩、黄连
解毒汤含药血清对氧化应激损伤保护作用的时间-效
应关系；并研究黄连、黄芩、黄连解毒汤提取物和
• 优选含药血清的制备方法（采用正交试验 法等）：以药物和观察指标不同，需要首 先对含药血清的时效和量效进行研究，以 便确定给药方案 、采血时间 、血清或血浆 、灭活与否、血清添加量。
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实验设计思路
• 复方黄连注射剂血清药理学研究
•
以大白兔为实验动物，采用肌内注射复方黄
连注射剂，2次/d，连续3d。末次给药后15 、
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中药血清药理学步骤
实 验
给
给
采
含 药 血
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血
动 物 的
药 剂
药 方
血 时
清 的 处 理
清 添 加
选 择
量
案
间
与 保 存
量
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实验动物的选择
实
动物种类：大鼠、家兔、豚鼠
验
动
动物数量
物
的
雌雄是否各半
选
择
正常生理状态与病理状态
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给药剂量
给
临
给
给
药
床
药
药
常
剂
用
剂
剂
量
量
量
量
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给药方案
• 血清是指血浆中除去纤维蛋白后得到的淡 黄色液体, 在血液凝固后才能分离出来。
• 凝血是指凝血酶与纤维蛋白原相作用生成 纤维蛋白, 再与血球结合而使血液发生凝固 的现象。
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血浆 血清 凝血
无凝血直接离心的为血浆； 有凝血再离心的为血清。
精品课件
优点
防止中药粗制剂理化性质 反映药物的代谢产物和 对体外试验的干扰 给药后产生的内源性成分
便于从细胞分子水平 体外实验条件可控性强、
阐述药物的作用机制
药物效应易于检测
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缺点
• 无确定的最佳给药方案 • 体外培养体系药物浓度与血药浓度不确定 • 药效最佳的采血时间难以确定 • 含药血清灭不灭活，方法不统一 • 无去除血清影响的理想措施
• 成分复杂，影响因素太多，结果重复性差 • 血清药理学方法增加了分析药物成分的难度