实验十一大肠杆菌的转化

实验原理

通常的做法是在大肠杆菌对数生长的早中期， 在0度条件下用CaCl2处理细胞，并辅之以短时 间的热激。感受态细胞吸收DNA的极力尚未明 确。天然的转化体系与CaCl2诱发的转化体系有 一个很重要的差异：前者需要线性的DNA片段； 而后者更多的是吸收环状的DNA。这样我们可 以把外源基因连接在质粒DNA上导入到大肠杆 菌中。这样，外源DNA不需要与宿主染色体重 组，即可随着质粒独立的复制，并表达相应的 性状。
实验十一
大肠杆菌的转化
目的与要求

学习分子遗传学的基本操作。
了解质粒在遗传工程中的重要作用及转 化子的筛选方法。

实验原理

所谓转化是指细菌细胞从外界环境中吸 收含有某些基因的DNA片段，从而表现 出相应性状的现象。细菌细胞不是任何 状态下都能吸收外源DNA。它只有处于 一种易于接受外源DNA的状态——感受 态（competence）时才具备这种能力。 分子生物学研究中，利用最多的大肠杆 菌，感受态则必须通过物理的或化学的 方法进行诱导。
感受态细胞的制备及转化




取处于对数生长期的受体E.coli菌液11.5ml。 12000rpm离心30秒钟，弃上清，混匀沉 淀物， 加预冷的0.1M CaCl2 1ml,混匀后 12000rpm离心30秒钟，弃上清， 加300ul冷0.1M CaCl2及10ul质粒DNA混 匀后，冰浴30分钟，
实验材料和用品


材料：大肠杆菌 质粒DNA（自己提取） 用品：不加氨卞的LB平板和加氨卞 （100ug/ml）的LB平板 超净工作台 恒温摇床 低温离心机 0.1mol/L CaCl2
实验步骤
Fra Baidu bibliotek
分3天进行: 第一天制备感受态细胞;(14-16小时) 第二天完成转化; 第三天观察结果。（16小时）
感受态细胞的制备及转化


42度处于90秒钟 立即冰浴1-2分钟后加800ul LB培养基 混匀后37度振荡培养50分钟 取100ul培养物涂布于含终浓度100ug/ml Amp的LB培养基上，37度培养16小时 次日上午8：00-10：00看转化结果
实验结果
计算转化率

转化率 =每质粒DNA所转化的大肠杆菌数x100% =菌落数/质粒DNA用量x100%
思考题


什么是转化？什么是转导？两 者有什么区别？ 在转化实验中。实验组和对照 平皿应有什么样的结果？如何 解释这个结果？