小鼠骨髓细胞染色体制备与观察 PPT

➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
➢ 定容至6ml.
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滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
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作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
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3.染色体计数
16
8
9
22
22+8+10=40
10
（100×10）
15
9+16+15=40
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4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
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实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
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一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌 24
中心体（10×10）
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
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（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
来自百度文库17
细胞密度
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染色体 分散度
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2.染色体形态特征观察
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中心体（40×10）
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二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片 27
高尔基体（10×10）
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高尔基体（40×10）
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高尔基体（40×10）
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实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
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实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
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➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
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实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
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❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼
处死小鼠。 6
小白鼠骨骼标本 7
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大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否则容易造成骨髓细胞的流失。
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用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
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收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，