实验三抗体形成细胞能力的检测QHS和次免疫课件
合集下载
免疫细胞功能检测技术通用课件
免疫细胞功能检测技术 的临床应用
CHAPTER
感染性疾病的诊断与监测
感染性疾病的诊断 感染性疾病的监测
肿瘤的免疫诊断与治疗
肿瘤的免疫诊断
肿瘤的免疫治疗
自身免疫性疾病的诊断与治疗
自身免疫性疾病的诊断
通过检测免疫细胞的功能，有助于诊断 自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮等。
VS
自身免疫性疾病的治疗
免疫细胞功能检测在疾病诊断、治疗 监测和药物研发等方面具有重要意义， 有助于深入了解免疫系统在健康和疾 病状态下的反应和功能。
检测技术的发展历程
早期阶段
进展阶段
现代阶段
检测技术的应用领域
01
02
医学研究
临床诊断
03 药物研发
02
免疫细胞功能检测技术 的基本原理
CHAPTER
免疫细胞的分类与功能
T细胞
巨噬细胞
B细胞 树突状细胞
检测技术的生物学基础
抗原-抗体反应 补体激活
检测技术的分子机制
信号转导
基因表达分析
03
免疫细胞功能检测技术 的方法与操作
CHAPTER
流式细胞术
总结词
一种快速、准确、多参数的细胞分析技术
详细描述
流式细胞术是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速、准确、多参数分析的技术。通过将待测细胞与荧光染料结合， 在流式细胞仪中经过激光照射和光电倍增管检测，可以对细胞表面的抗原、细胞内的活性物质等进行定量和定性 分析，从而评估免疫细胞的功能状态。
利用人工智能和机器学习技术对免疫 细胞功能检测数据进行深度分析和预 测。
光学技术
利用光学技术提高免疫细胞功能检测 的灵敏度和分辨率。
未来发展方向及前景
CHAPTER
感染性疾病的诊断与监测
感染性疾病的诊断 感染性疾病的监测
肿瘤的免疫诊断与治疗
肿瘤的免疫诊断
肿瘤的免疫治疗
自身免疫性疾病的诊断与治疗
自身免疫性疾病的诊断
通过检测免疫细胞的功能，有助于诊断 自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮等。
VS
自身免疫性疾病的治疗
免疫细胞功能检测在疾病诊断、治疗 监测和药物研发等方面具有重要意义， 有助于深入了解免疫系统在健康和疾 病状态下的反应和功能。
检测技术的发展历程
早期阶段
进展阶段
现代阶段
检测技术的应用领域
01
02
医学研究
临床诊断
03 药物研发
02
免疫细胞功能检测技术 的基本原理
CHAPTER
免疫细胞的分类与功能
T细胞
巨噬细胞
B细胞 树突状细胞
检测技术的生物学基础
抗原-抗体反应 补体激活
检测技术的分子机制
信号转导
基因表达分析
03
免疫细胞功能检测技术 的方法与操作
CHAPTER
流式细胞术
总结词
一种快速、准确、多参数的细胞分析技术
详细描述
流式细胞术是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速、准确、多参数分析的技术。通过将待测细胞与荧光染料结合， 在流式细胞仪中经过激光照射和光电倍增管检测，可以对细胞表面的抗原、细胞内的活性物质等进行定量和定性 分析，从而评估免疫细胞的功能状态。
利用人工智能和机器学习技术对免疫 细胞功能检测数据进行深度分析和预 测。
光学技术
利用光学技术提高免疫细胞功能检测 的灵敏度和分辨率。
未来发展方向及前景
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
免疫检验课件ppt
移植免疫监测
器官移植后，患者需要接受免疫抑制治疗以防止排斥反应。通过监测免疫功能和相关抗体，有助于评估患者的免疫状态和移植效果。
02
CHAPTER
免疫检验基础知识
抗原是指能够刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答的物质，包括外源性抗原和内源性抗原。
抗原
抗体是指机体在抗原刺激下产生的具有高度特异性的蛋白质分子，能够与相应抗原结合，发挥免疫效应。
通过检测T细胞增殖和转化能力，评估机体的细胞免疫功能。
通过检测细胞因子表达水平，了解机体的免疫应答状态。
通过检测免疫细胞的杀伤、吞噬、释放细胞因子等功能，评估机体的免疫功能。
利用基因芯片等技术对免疫相关基因的表达水平进行检测，了解机体的免疫应答机制。
基因表达谱分析
通过制备针对特定抗原的单克隆抗体，用于免疫学检测和免疫治疗。
通过检测炎症因子（如IL-1、IL-6、TNF等）的水平，了解机体的炎症反应状态。
通过检测自身抗体（如类风湿因子、抗核抗体等）的水平，了解机体的自身免疫状态。
04
CHAPTER
常见免疫检验项目及解读
总结词
乙肝两对半检测是常见的免疫检验项目之一，用于检测乙型肝炎病毒的抗原和抗体。
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）的检测。通过检测这些抗原和抗体，可以了解个体是否感染了乙型肝炎病毒，以及感染阶段和免疫状态。
01
免疫组学技术
利用免疫组学方法，研究免疫细胞和分子的功能和相互作用，为免疫疾病的诊断和治疗提供新思路。
02
生物信息学
结合生物信息学技术，对免疫相关基因和蛋白质进行大数据分析，挖掘免疫相关疾病的发病机制和潜在治疗靶点。
体外抗体形成细胞检测—定量溶血分光光度计法(QHS)
脾脏B细胞 ＋SRBC＋ 补体
成抗原抗体复合物，激活补 体系统，裂解SRBC而释放
补体经典激活途径
出血红蛋白，以分光光度计 定量测定。所测值反映了抗
SRBC裂解
体形成细胞产生抗体的功能。
分光光度计检测
2
实验步骤
❖ SRBC及其制备 脱纤维防凝处理的SRBC，以NS洗涤二次，
每次2000rpm 离心5min。弃上清，制成 SRBC悬液，然后用血细胞计数板计数细胞， 最后稀释成1.5×108 sRBC/ml。
时间也要严格控制。
7
细胞计数法
WBC
1mm WBC 1mm
WBC
WBC
细胞浓度/ml
= 4个大方格中的细胞总数/4 × 104
RBC
细胞浓度/ml
= 5个中方格中的细胞总数 ×5 ×1804
W
W
1mm
W
W
1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=0.1×10-3ml =10-4ml
细胞浓度: 细胞数/ml =5个中格的细胞数 ×5×104（RBC计数法）
细胞数/ml = 4个大格的细胞总数/4 ×104 （WBC计数法） 9
抗体制备
原理： 抗原免疫小鼠，激活免疫系统，B细
胞活化并分化为浆细胞，产生针对特定 抗原的特异性抗体。
10
方法
❖ 1.用移液管吸取脱纤维防凝处理的绵羊血适量
❖ 2.加2-3倍体积生理盐水，混匀，2000rpm离 心5分钟，小心吸尽上清。
实验管 1ml
1ml
1ml
—
3ml
3. 混匀，37℃水浴1小时。 4. 3000rpm 离心 5 min，取上清 5.721分光光度计测413nm处OD值（Hb 量）
实验三抗体形成细胞能力的检测QHS和次免疫培训课件
抗原+抗体
结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力
( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
结合抗原之前
结合抗原之后
Fc段
CH1
C1q 结合
CH2
位点被屏
障
IgM CH3区，IgG CH2区
暴露的 C1q结 合位点
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学C 依据，请勿模仿T；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
分光光度计检测上清液 413nm波长下的吸光值
2. 材料：
SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液
来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本断人颈处删死除S。RBC免疫的小鼠
3. 方法：
取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液
结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力
( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
结合抗原之前
结合抗原之后
Fc段
CH1
C1q 结合
CH2
位点被屏
障
IgM CH3区，IgG CH2区
暴露的 C1q结 合位点
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学C 依据，请勿模仿T；如有不当之 处，请联系网站或本人删除。
3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
分光光度计检测上清液 413nm波长下的吸光值
2. 材料：
SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液
来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本断人颈处删死除S。RBC免疫的小鼠
3. 方法：
取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液
高中生物细胞免疫ppt课件
05
CHAPTER
细胞免疫的应用
疫苗接种是预防传染病的有效手段，通过刺激机体产生特异性免疫反应，从而产生抗体和记忆细胞，提高机体对病原体的抵抗力。
疫苗的研发需要了解病原体的抗原特性、免疫原性以及机体的免疫反应机制，通过选择合适的疫苗佐剂、免疫途径和接种方案，达到预防和控制传染病的目的。
器官移植是治疗某些严重器官疾病的有效手段，通过将器官从一个个体转移到另一个个体，以替代病变器官的功能。
VS
细胞免疫应答是指T细胞介导的免疫应答，通过激活巨噬细胞和NK细胞等效应细胞来清除抗原。细胞免疫应答具有识别抗原的特异性，能够直接杀伤靶细胞或释放淋巴因子激活其他免疫细胞来杀伤靶细胞。
细胞免疫应答可分为三个阶段：感应阶段、反应阶段和效应阶段。在感应阶段，抗原被巨噬细胞等抗原提呈细胞摄取和处理，暴露出其抗原决定簇，再呈递给T细胞；在反应阶段，T细胞与抗原提呈细胞的识别导致T细胞的活化、增殖和分化；在效应阶段，活化的T细胞释放淋巴因子，激活巨噬细胞和NK细胞等效应细胞来清除抗原。
细胞免疫在肿瘤免疫治疗中发挥了重要作用，例如CAR-T细胞疗法和PD-1抑制剂等治疗方法，都是基于细胞免疫的原理来设计。这些治疗方法通过调节机体免疫反应，增强肿瘤细胞的抗原性，提高机体的抗肿瘤能力。
06
CHAPTER
总结与复习
细胞免疫的基本概念
细胞免疫是生物体通过细胞对病原体的识别和清除，以维持内环境稳态的一种防御机制。
掌握细胞免疫的基本概念和原理。
了解细胞免疫在人体健康和疾病中的作用。
培养学生对生物学的兴趣和好奇心，提高他们的科学素养。
02
CHAPTER
细胞免疫基础知识
免疫系统是人体的重要防线，负责抵御外来病原体入侵。
CHAPTER
细胞免疫的应用
疫苗接种是预防传染病的有效手段，通过刺激机体产生特异性免疫反应，从而产生抗体和记忆细胞，提高机体对病原体的抵抗力。
疫苗的研发需要了解病原体的抗原特性、免疫原性以及机体的免疫反应机制，通过选择合适的疫苗佐剂、免疫途径和接种方案，达到预防和控制传染病的目的。
器官移植是治疗某些严重器官疾病的有效手段，通过将器官从一个个体转移到另一个个体，以替代病变器官的功能。
VS
细胞免疫应答是指T细胞介导的免疫应答，通过激活巨噬细胞和NK细胞等效应细胞来清除抗原。细胞免疫应答具有识别抗原的特异性，能够直接杀伤靶细胞或释放淋巴因子激活其他免疫细胞来杀伤靶细胞。
细胞免疫应答可分为三个阶段：感应阶段、反应阶段和效应阶段。在感应阶段，抗原被巨噬细胞等抗原提呈细胞摄取和处理，暴露出其抗原决定簇，再呈递给T细胞；在反应阶段，T细胞与抗原提呈细胞的识别导致T细胞的活化、增殖和分化；在效应阶段，活化的T细胞释放淋巴因子，激活巨噬细胞和NK细胞等效应细胞来清除抗原。
细胞免疫在肿瘤免疫治疗中发挥了重要作用，例如CAR-T细胞疗法和PD-1抑制剂等治疗方法，都是基于细胞免疫的原理来设计。这些治疗方法通过调节机体免疫反应，增强肿瘤细胞的抗原性，提高机体的抗肿瘤能力。
06
CHAPTER
总结与复习
细胞免疫的基本概念
细胞免疫是生物体通过细胞对病原体的识别和清除，以维持内环境稳态的一种防御机制。
掌握细胞免疫的基本概念和原理。
了解细胞免疫在人体健康和疾病中的作用。
培养学生对生物学的兴趣和好奇心，提高他们的科学素养。
02
CHAPTER
细胞免疫基础知识
免疫系统是人体的重要防线，负责抵御外来病原体入侵。
细胞免疫ppt课件
APC提呈的抗原信息与T细胞表面的受体相匹配时，T细胞被激活，开始 增殖并分化为效应T细胞或记忆T细胞。
T细胞激活
T细胞激活需要双信号刺激，第一信号来自抗原提呈细胞（APC）的抗原信息，第二信号来 自辅助性T细胞（Th）分泌的细胞因子。
第一信号使T细胞进入激活状态，第二信号促进T细胞的增殖和分化，形成效应T细胞或记忆 T细胞。
T细胞激活后，会分泌细胞因子等效应分子，进一步调节免疫应答。
细胞因子的作用
细胞因子是由免疫细胞分泌的调节分 子，在免疫应答中发挥重要作用。
不同的细胞因子在免疫应答中发挥不 同的作用，如干扰素-γ（IFN-γ）促 进Th1细胞的分化，而白细胞介素-4 （IL-4）促进Th2细胞的分化。
细胞因子可以调节T细胞的增殖、分 化以及效应功能，如促进T细胞的活 化、增殖和分化为Th1、Th2、Th17 等亚型。
B淋巴细胞
产生特异性抗体，参与体液免疫 应答。
巨噬细胞
吞噬作用：吞噬并消 化病原体和细胞碎片 。
细胞因子分泌：调节 免疫反应。
抗原提呈：将抗原信 息传递给淋巴细胞。
树突状细胞
抗原提呈
高效地摄取、处理和提呈抗原。
免疫激活
刺激初始T细胞增殖和分化。
免疫调节
抑制或促进T细胞应答。
其他细胞
自然杀伤细胞
调节T细胞
非特异性地杀伤被感染的细胞或肿瘤 细胞。
抑制其他T细胞的活化，维持免疫稳 态。
细胞毒性T细胞
通过释放穿孔素和颗粒酶杀伤靶细胞 。细胞免疫来自激活与03调节
抗原识别
抗原识别是细胞免疫的第一步，主要依赖于抗原提呈细胞（APC）和T细 胞之间的相互作用。
APC通过吞噬、加工和提呈抗原，将抗原信息传递给T细胞，激活T细胞 的免疫应答。
T细胞激活
T细胞激活需要双信号刺激，第一信号来自抗原提呈细胞（APC）的抗原信息，第二信号来 自辅助性T细胞（Th）分泌的细胞因子。
第一信号使T细胞进入激活状态，第二信号促进T细胞的增殖和分化，形成效应T细胞或记忆 T细胞。
T细胞激活后，会分泌细胞因子等效应分子，进一步调节免疫应答。
细胞因子的作用
细胞因子是由免疫细胞分泌的调节分 子，在免疫应答中发挥重要作用。
不同的细胞因子在免疫应答中发挥不 同的作用，如干扰素-γ（IFN-γ）促 进Th1细胞的分化，而白细胞介素-4 （IL-4）促进Th2细胞的分化。
细胞因子可以调节T细胞的增殖、分 化以及效应功能，如促进T细胞的活 化、增殖和分化为Th1、Th2、Th17 等亚型。
B淋巴细胞
产生特异性抗体，参与体液免疫 应答。
巨噬细胞
吞噬作用：吞噬并消 化病原体和细胞碎片 。
细胞因子分泌：调节 免疫反应。
抗原提呈：将抗原信 息传递给淋巴细胞。
树突状细胞
抗原提呈
高效地摄取、处理和提呈抗原。
免疫激活
刺激初始T细胞增殖和分化。
免疫调节
抑制或促进T细胞应答。
其他细胞
自然杀伤细胞
调节T细胞
非特异性地杀伤被感染的细胞或肿瘤 细胞。
抑制其他T细胞的活化，维持免疫稳 态。
细胞毒性T细胞
通过释放穿孔素和颗粒酶杀伤靶细胞 。细胞免疫来自激活与03调节
抗原识别
抗原识别是细胞免疫的第一步，主要依赖于抗原提呈细胞（APC）和T细 胞之间的相互作用。
APC通过吞噬、加工和提呈抗原，将抗原信息传递给T细胞，激活T细胞 的免疫应答。
21_细胞免疫功能检测方法-ppt课件
3
ELISPOT的流程
4
5
底板与捕捉抗体的包被
➢ 底板类型：硝酸纤维素膜板、PVDF膜板等 ➢ 捕捉抗体：如抗某细胞因子抗体（Purified
Rat Anti-Mouse IFN-r Monoclonal Antibody ）。 ➢ 抗体包被：用无菌PBS（PH9.6）来稀释包被抗 体，包被量通常在1-2μg/mL（1.25ug/ml ）。 ➢ 次日倾倒包被液，PBS洗涤数次，在灭菌吸水 纸上扣干后，用完全培养基37℃封闭2h。 ➢ 倾倒封闭液， 加入检测细胞进行细胞培养。
17
18
突变型乙型肝炎病毒前C-C DNA疫苗的基础研究张 敏中国人民解放军军医进修学院2007-07-052007博 士
19
20
欢迎各位老师同学提出宝贵意见！
ELISPOT与其他细胞免疫检测方法的 比较
当特异性抗原和T细胞结合后激活细胞释放出 IFN-Y，IFN-YELISPOT可灵敏的检测出T细胞 释出的IFN-Y，该方法己被用于多种CTL的检 测。Yang.J的研究表明，ELISPOT方法检测 CTL不但有高度的敏感性还有高度的特异性和 HLA限制性，在用LMP2肽段CLG作为激刺原 检测CTL时发现，只有相同HLA型别(HLA-A2) 的CDS+细胞能起阳性反应。
8
培养时间对斑点数的影响
9
NDV抗原浓度对斑点数的影响
10
影响试验效果的其他因素
➢ 细胞是否具有活力是 试验成功进行的先决 条件，凡是活力高功 能保持完好的细胞， ELISPOT检测时必定 背景干净，阴性对照 斑点少，而试验组斑 点圆润鲜亮。
11
➢ 在ELISPOT板的移动过程中也 要避免ELISPOT板的摇动，否 则会造成斑点的分布不均。
ELISPOT的流程
4
5
底板与捕捉抗体的包被
➢ 底板类型：硝酸纤维素膜板、PVDF膜板等 ➢ 捕捉抗体：如抗某细胞因子抗体（Purified
Rat Anti-Mouse IFN-r Monoclonal Antibody ）。 ➢ 抗体包被：用无菌PBS（PH9.6）来稀释包被抗 体，包被量通常在1-2μg/mL（1.25ug/ml ）。 ➢ 次日倾倒包被液，PBS洗涤数次，在灭菌吸水 纸上扣干后，用完全培养基37℃封闭2h。 ➢ 倾倒封闭液， 加入检测细胞进行细胞培养。
17
18
突变型乙型肝炎病毒前C-C DNA疫苗的基础研究张 敏中国人民解放军军医进修学院2007-07-052007博 士
19
20
欢迎各位老师同学提出宝贵意见！
ELISPOT与其他细胞免疫检测方法的 比较
当特异性抗原和T细胞结合后激活细胞释放出 IFN-Y，IFN-YELISPOT可灵敏的检测出T细胞 释出的IFN-Y，该方法己被用于多种CTL的检 测。Yang.J的研究表明，ELISPOT方法检测 CTL不但有高度的敏感性还有高度的特异性和 HLA限制性，在用LMP2肽段CLG作为激刺原 检测CTL时发现，只有相同HLA型别(HLA-A2) 的CDS+细胞能起阳性反应。
8
培养时间对斑点数的影响
9
NDV抗原浓度对斑点数的影响
10
影响试验效果的其他因素
➢ 细胞是否具有活力是 试验成功进行的先决 条件，凡是活力高功 能保持完好的细胞， ELISPOT检测时必定 背景干净，阴性对照 斑点少，而试验组斑 点圆润鲜亮。
11
➢ 在ELISPOT板的移动过程中也 要避免ELISPOT板的摇动，否 则会造成斑点的分布不均。
免疫细胞功能检测技术课件.ppt
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
免疫细胞功能检测技术概述课件
原理(yuánlǐ)：
N-N-
C
+ H+
N=N-R-
四氮唑基（淡黄色）
N-NH2
C
N=NH
甲臜（紫黑色）
免疫细胞功能检测技术概述
第三十五页，共四十三页。
中性 粒细胞 (zhōngxìng)
NBT
甲臜颗粒(kēlì)沉积于胞质中
免疫细胞功能检测技术概述
第三十六页，共四十三页。
二、巨噬细胞功能(gōngnéng)检测
免疫细胞功能检测技术概述
第二十二页，共四十三页。
2. 方法学：
➢ 经典(jīngdiǎn)溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
免疫细胞功能检测技术概述
第二十三页，共四十三页。
3．临床应用(yìngyòng)与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定 药物和手术等因素(yīn sù)对体液 免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后 机体产生抗体免的疫细胞能功能力检测。技术概述
2. 淋巴细胞转化(zhuǎnhuà)的刺激物
非特异性刺激物：
PHA ------T细胞 ConA -------T细胞
PWM -------T、 B细胞
LPS -------B细胞 特异性刺激物：
异种(yì zhǒnɡ)抗原
同种组织抗原
免疫细胞功能检测技术概述
第七页，共四十三页。
3. 检测(jiǎn cè)方法
（2）3H-TdR掺入法
培养 液 PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
过滤 测 量 放 射 性
免疫细胞功能检测技术概述
第十一页，共四十三页。
试验孔A均值 SI对照孔 57A 0n均 m 值
抗体生成细胞检测.
试剂与器材
1. 小鼠；
2. 绵羊红细胞悬液（2.5%）；
3. 指示细胞悬液： 含10% 绵羊红细胞悬液
0.5ml，补体0.3ml，Hank’s液2.0ml；
4. 细胞裂解液0.17mol的NH4Cl； 5. Hank’s 液（pH7.2）、凡士林油；
6. 动物解剖器械、注射器（5ml）、平皿、试管、 吸管、载玻片、盖玻片、双面胶；
溶血空斑试验
制作反应板 加样：30ul 温箱10分钟
双面胶 盖玻片
Department of Immunology
Department of Immunology
定量溶血分光光度法（quantitative hemolysis spectrophotometry，QHS）
该法又称B细胞介导的红细胞定量溶血分光光 度法，是根据溶血空斑试验的原理衍化而来， 可用以测定由B细胞产生和分泌的抗体裂解红 细胞所释放的血红蛋白(以吸光值表示)，从而 反映机体的体液免疫功能。试验时，将免疫的 脾细胞与SRBC及新鲜豚鼠血清等体积混合，于 37℃水浴1小时，离心后测上清吸光值，其与 产生抗体的量成正比。
将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液， 与一定量的SRBC在琼脂凝胶内混合，在补 体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶 解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要 用于测定B细胞抗体产生能力。
Department of Immunology
Department of Immunology
实验原理
ELISPOT不仅可应用于B细胞分泌抗体功 能的测定，也能检测分泌细胞因子的T细 胞和巨噬细胞。
Department of Immunology
Department of Immunology
免疫实验诊断PPT课件
局限性
尽管免疫实验诊断在许多方面具有重要价值， 但仍存在一定的局限性。例如，某些疾病可 能无法通过免疫实验诊断确诊；实验结果可 能受到多种因素干扰，如试剂质量、操作误 差等；此外，部分免疫实验诊断方法可能存 在一定的假阳性或假阴性风险。
THANKS
感谢观看
通过检测肿瘤标志物、细胞因子等， 有助于肿瘤的早期发现、疗效监测和 预后评估。
移植免疫诊断
通过检测供、受体的免疫状态，有助 于提高移植成功率，预防排斥反应。
02
免疫实验诊断技术
抗原抗体反应技术
抗原抗体反应技术是利用抗原 和抗体特异性结合的原理，通 过检测抗原抗体反应来诊断疾 病的一种技术。
常见的抗原抗体反应技术包括 沉淀反应、凝集反应、补体结 合试验等。
抗原抗体反应技术具有操作简 便、敏感性高、特异性强等优 点，在临床诊断中广泛应用。
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫 学检测方法，通过酶标记的抗体或抗 原与特异性抗原或抗体结合，再加入 底物显色，达到检测目的。
酶联免疫吸附试验具有灵敏度高、特 异性强、操作简便等优点，适用于大 量样品的快速检测。
04
免疫实验诊断的临床意义
感染性疾病的诊断
细菌性疾病
01
通过检测病原体抗原、抗体或细胞因子等，有助于诊断和鉴别
常见的细菌感染，如肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等。
病毒性疾病
02
检测病毒抗原、抗体或病毒核酸等，有助于诊断和监测病毒感
染，如流感病毒、乙型肝炎病毒等。
寄生虫感染
03
检测寄生虫抗原、抗体或细胞因子等，有助于诊断和鉴别寄生
肿瘤的早期诊断与监测
肿瘤标志物检测
通过检测肿瘤标志物，如癌胚抗 原、甲胎蛋白等，有助于早期发 现和监测肿瘤的生长和扩散。
《细胞免疫检测技术》课件
应用
细胞免疫检测技术在医学领域广泛应用于感染性疾病、肿瘤 、自身免疫性疾病等的诊断、治疗监测和预后评估。
发展趋势
自动化与高通量
随着技术的发展，细胞免疫检测 正朝着自动化、高通量、高灵敏 度的方向发展，以提高检测效率
和准确性。
标准化与规范化
为了确保检测结果的可靠性和可比 性，需要建立和完善细胞免疫检测 技术的标准化和规范化体系。
机遇
随着科技的不断进步，新的技术和方法不断涌现，为细胞免疫检测技术的发展提供了更多的机遇和可能性。
未来研究方向与展望
研究方向
未来细胞免疫检测技术的研究方向主要包括 提高检测的灵敏度和特异性、降低检测成本 、开发新的技术和方法等。
展望
随着科技的不断进步和研究的深入，细胞免 疫检测技术有望在未来得到更广泛的应用， 为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的帮助 和支持。
《细胞免疫检测技术 》PPT课件
xx年xx月xx日
• 引言 • 细胞免疫检测技术概述 • 细胞免疫检测技术的基本方法 • 细胞免疫检测技术在医学中的应
用 • 案例分析 • 总结与展望
目录
01
引言
课程背景
01
细胞免疫检测技术是生物学、医 学等领域的重要研究手段，广泛 应用于疾病诊断、治疗和预防。
肿瘤免疫诊断中常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、 免疫组织化学、酶联免疫吸附试验等。这些技术能够检测肿 瘤细胞表面的标志物、分泌的细胞因子和免疫细胞浸润等情 况，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
自身免疫病诊断
自身免疫病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身 组织损害的疾病。细胞免疫检测技术在自身免疫病诊断中 具有重要作用。
常用的细胞免疫检测技术包括混合淋巴细胞培养、细胞毒试验、抗体检测等。这 些技术能够检测供、受体之间的免疫差异和排斥反应的标志物，为移植后管理和 治疗提供指导。
细胞免疫检测技术在医学领域广泛应用于感染性疾病、肿瘤 、自身免疫性疾病等的诊断、治疗监测和预后评估。
发展趋势
自动化与高通量
随着技术的发展，细胞免疫检测 正朝着自动化、高通量、高灵敏 度的方向发展，以提高检测效率
和准确性。
标准化与规范化
为了确保检测结果的可靠性和可比 性，需要建立和完善细胞免疫检测 技术的标准化和规范化体系。
机遇
随着科技的不断进步，新的技术和方法不断涌现，为细胞免疫检测技术的发展提供了更多的机遇和可能性。
未来研究方向与展望
研究方向
未来细胞免疫检测技术的研究方向主要包括 提高检测的灵敏度和特异性、降低检测成本 、开发新的技术和方法等。
展望
随着科技的不断进步和研究的深入，细胞免 疫检测技术有望在未来得到更广泛的应用， 为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的帮助 和支持。
《细胞免疫检测技术 》PPT课件
xx年xx月xx日
• 引言 • 细胞免疫检测技术概述 • 细胞免疫检测技术的基本方法 • 细胞免疫检测技术在医学中的应
用 • 案例分析 • 总结与展望
目录
01
引言
课程背景
01
细胞免疫检测技术是生物学、医 学等领域的重要研究手段，广泛 应用于疾病诊断、治疗和预防。
肿瘤免疫诊断中常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、 免疫组织化学、酶联免疫吸附试验等。这些技术能够检测肿 瘤细胞表面的标志物、分泌的细胞因子和免疫细胞浸润等情 况，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
自身免疫病诊断
自身免疫病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身 组织损害的疾病。细胞免疫检测技术在自身免疫病诊断中 具有重要作用。
常用的细胞免疫检测技术包括混合淋巴细胞培养、细胞毒试验、抗体检测等。这 些技术能够检测供、受体之间的免疫差异和排斥反应的标志物，为移植后管理和 治疗提供指导。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验三抗体形成细胞能力的检测
9
2/21/2021
QHS和次免疫
C
T
3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
2/21/2021
分光光度计检测上清液
实验三抗体形成细胞能力4的1检3测nm波长下的吸光值 10
弃上清
2/21/2021
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、3实0%验三、抗4体0形%成细胞能力的检测
QHS和次免疫
取0.1ml 皮下注射
免疫小鼠
14
1） 制备脾细胞
断颈处死SRBC免疫的小鼠 取脾，以Hank’s 液漂洗
经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液 收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤
离心1500rpm, 5min 弃上清
细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2ml Hank’s溶液
实验三抗体形成细胞能力的检测
1
2/21/2021
QHS和次免疫
实验三抗体形成细胞能力的检测
2
2/21/2021
QHS和次免疫
Complementbinding site
实验三抗体形成细胞能力的检测
3
2/21/2021
QHS和次免疫
结合抗原之前
结合抗原之后
Fc段
CH1
C1q 结合
CH2
位点被屏
障
分光光度计 定量分析
Hb
实验三抗体形成细胞能力的检测
7
QHS和次免疫
2. 材料：
➢ SRBC免疫小鼠 ➢ 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) ➢ 经SRBC吸收的补体溶液
✓ 来自豚鼠血清 ✓ 经SRBC吸收去除非特异性抗体
实验三抗体形成细胞能力的检测
8
2/21/2021
QHS和次免疫
3. 方法：
QHS和次免疫
3. 方法：
WBC
1mm WBC 1mm
RBC
WBC
WBC
细胞浓度/ml
细胞浓度/ml
= 4个大方格中的细胞总数/4 x 实10验4三抗体形成细胞能力的=检5测个中方格中的细胞总数 x 5 x111 04
2/21/2021
QHS和次免疫
4. 注意事项：
➢ 新鲜SRBC溶液，用前晃匀 ➢ 保持脾细胞活性
( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
实验三抗体形成细胞能力的检测
6
2/21/2021
QHS和次免疫
1. 原理：
抗原
脾脏
IgM
SRBC
2/21/2021
免疫小鼠
4 days later
+ SRBC 补体
浆细胞
2/21/2021
IgM CH3区，IgG CH2区
实验三抗体形成细胞能力的检测 QHS和次免疫
暴露的 C1q结 合位点
4
抗原+抗体
结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
实验三抗体形成细胞能力的检测
5
2/21/2021
QHS和次免疫
定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力
实验三体形成细胞能力的检测
12
2/21/2021
QHS和次免疫
Test 2 第三次免疫
实验三抗体形成细胞能力的检测
13
2/21/2021
QHS和次免疫
2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC）
加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min
弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀
2000rpm, 离心，5min