实验三抗体形成细胞能力的检测QHS和次免疫课件

实验三抗体形成细胞能力的检测
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2/21/2021
QHS和次免疫
Test 2 第三次免疫
实验三抗体形成细胞能力的检测
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QHS和次免疫
2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC）
加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min
弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀
2000rpm, 离心，5min
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QHS和次免疫
C
T
3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
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分光光度计检测上清液
实验三抗体形成细胞能力4的1检3测nm波长下的吸光值 10
弃上清
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制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、3实0%验三、抗4体0形%成细胞能力的检测
QHS和次免疫
取0.1ml 皮下注射
免疫小鼠
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分光光度计 定量分析
Hb
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QHS和次免疫
2. 材料：
➢ SRBC免疫小鼠 ➢ 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) ➢ 经SRBC吸收的补体溶液
✓ 来自豚鼠血清 ✓ 经SRBC吸收去除非特异性抗体
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3. 方法：
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IgM CH3区，IgG CH2区
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暴露的 C1q结 合位点
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抗原+抗体
结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
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QHS和次免疫
定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力
1） 制备脾细胞
断颈处死SRBC免疫的小鼠 取脾，以Hank’s 液漂洗
经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液 收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤
离心1500rpm, 5min 弃上清
细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2ml Hank’s溶液
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3. 方法：
WBC
1mm WBC 1mm
RBC
WBC
WBC
细胞浓度/ml
细胞浓度/ml
= 4个大方格中的细胞总数/4 x 实10验4三抗体形成细胞能力的=检5测个中方格中的细胞总数 x 5 x111 04
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QHS和次免疫
4. 注意事项：
➢ 新鲜SRBC溶液，用前晃匀 ➢ 保持脾细胞活性
( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
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QHS和次免疫
1. 原理：
抗原
脾脏
IgM
SRBC
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免疫小鼠
4 days later
+ SRBC 补体
浆细胞
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QHS和次免疫
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QHS和次免疫
Complementbinding site
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QHS和次免疫
结合抗原之前
结合抗原之后
Fc段
CH1
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C1q 结合
CH2
位点被屏
障