天然药物化学实验

实验一天然产物化学成分系统预试验

天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。

一、实验目的与要求

掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。

二、基本原理

利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。

三、实验内容：

利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。

检查项目试剂名称

糖*1、酚醛缩合反应*2、菲林试剂

酚类△1% FeCl8试剂

鞣质△1、1% FeCl8试剂

苷类或多糖*1、酚醛缩合反应

*2、加6NHCl酸化，加热煮沸数分钟，冷后仔细观察有无絮状沉淀

*3、菲林试剂，观察水解前后Cu2O沉淀量有无增加。

皂苷* 泡沫试验

生物碱*1、碘化铋钾试剂*2、硅钨酸试剂

*在试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。

糖鉴定

（1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。

①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

（2）斐林试剂检查还原糖。

溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和苷，取1ml 样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

或者直接用高效液相色谱看色谱图。

酚类鉴定试剂

（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。

2．乙醇提取液

取中草药粗粉5 g，加5~12倍量95%乙醇，在水浴上加热回流提取1小时，过滤，滤液留2 ml作（1）项试验，其余回收乙醇至无醇味，并浓缩成浸膏状，浸膏分为二部分，一部分加少量2% HCL振摇溶过滤。分出酸液，作（2）项式验，附于滤纸上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）项试验；另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加适量5% NaOH振摇，使酚性物质及有机酸等转入下层氢氧化钠水溶液中，剩下的乙酸乙酯为中性部分，用蒸馏水洗去碱性即可备用，将乙酸乙酯液2~3 ml，在水浴上蒸干，以1~2 ml乙醇溶解作（4）项试验。

（1）项试验

检查项目酚类鞣质

试剂名称△1% FeCl3△1% FeCl3

结果

（2）项试验

检查项目生物碱

试剂名称*1、碘化铋钾试剂*2、硅钨酸试剂*3、苦味酸试剂

结果

（3）项试验

检查项目黄酮蒽醌

试剂名称△1、1% AlCl3试剂

* 2、盐酸镁粉反应

△1、10% KOH液

△2、0.5% Mg(Ac)2试剂

结果

（4）项试验

检查项目香豆素与萜类内酯

试剂名称*1、氨基安替比林—铁氰化钾呈色反应

结果

3、石油醚提取液

取中草药粗粉1 g，加10 ml石油醚（沸程60~90℃），放置2~3小时，过滤，滤液置表面皿上任其挥发，残留物进行下列试验：

检查项目甾体或三萜类挥发油和油酯

试剂名称*1、醋酐－浓硫酸试验

石油醚提取液滴于滤

纸片上，观察有无油斑并在

加热后能否发挥

结果

黄酮类鉴定试剂

（1）盐酸-镁粉试剂检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。

取1ml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红-紫色为阳性反应。

（3）三氯化铝试剂检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。

1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应也可在滤纸上或试管中进行。

（3）醋酸镁试剂检查黄酮类，二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。

1％醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点1滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。

生物碱鉴定试剂

（1）改良碘化铋钾试剂

为生物碱通用显色剂。

溶液I：0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液II：8g碘化钾溶于20ml 水中。溶液I和II等量混合，于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配制：7.3g碘化铋钾、冰醋酸10ml加水60ml。取1m1样品的稀酸溶液加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。如作薄层色谱显色剂，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应

（2）苦味酸试剂为生物碱通用沉淀试剂。

苦味酸1g溶于100ml水中。取1ml样品中性溶液，加入试剂1滴～2滴，产生黄色晶形沉淀。

（3）硅钨酸试剂为生物碱通用沉淀试剂。

1g硅钨酸溶于20ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。取1ml样品的稀酸溶液，加入1滴～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。

四、药品试剂：

中药饮片每组每种8克

生物碱试剂

（1）碘化铋钾(Dragendorff)试剂：出现桔红色或黄色沉淀。

（2）苦味酸(Hager)试剂，样品液需调至中性后加试剂，出现黄色晶形沉淀。

（3）硅钨酸(Bertrand)试剂：出现淡黄色或灰白色沉淀，在薄层板上应时，加热后出现黑色斑点。

酚类、鞣质试剂