高中生物 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

（提供Cu2+）
在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中的肽键（—NH—CO—） 与Cu2＋作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加A再加B， 且A多B少，如果B过量， Cu2＋的蓝色就会遮盖生成的紫色。
制备组织样液
黄豆 鸡蛋 显色反应
向试管中注入 2ml组织样液
黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液） 浸泡
研磨 稀释
双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸 铜作用，生成蓝紫色的复合物
斐林试剂与双缩脲试剂的比较
斐林试剂 双缩脲试剂 A液 B液 甲液 乙液 0.1 g/mL 0.05 g/mL 0.1 g/mL 0.01 g/mL NaOH溶液 CuSO4溶液 NaOH溶液 CuSO4溶液
可溶性还原糖 蛋白质或多肽
成分 鉴定 物质
先加入A液1 mL，摇匀， 添加 甲乙两液等量混匀后立即 再加入B液4滴（不能过 顺序 使用（现配现用） 量），摇匀
反应 条件 反应 现象
50～65 ℃水浴加热
不需加热，摇匀即可
样液变砖红色沉淀
样液变紫色
斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水 浴加热。双缩脲试剂用的是A液和B液，先加A液，后滴B 液，不用水浴加热。
方法步骤：
（1）取材和制片
在洁净的载玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液 用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯上烘干
（2）水解：将烘干的载玻片放入盛有30 mL 8%盐酸的小烧杯中，30℃
水浴保温5 min
（3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10秒
吸水纸吸去载玻片上的水分
甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴 加，或者久置后才用。
制备组织样液 梨或苹果
砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃
洗净、去皮、切块
取5g，放入研钵中
研磨
过滤
（用单层纱布）
滤液
显色反应
向试管中加入 2ml组织样液 向试管中加入2ml 振荡混匀 新配制的斐林试剂 或本尼迪特试剂 50～65℃水 浴加热2min
第一章 细胞的分子组成
第三节 有机化合物及生物大分子
实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关 有机化合物产生特定的颜色反应。
①还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 ②脂肪 + 苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液→橘黄色（或红色） ③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色 ④淀粉 + 碘→蓝色 化学试剂+有机化合物→特定的颜色
双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（NaOH）中 能和Cu2+作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。 蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白 质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。
2mL 组织 样液
双缩脲试 剂A 2mL
双缩脲试 剂B 3-4滴
（创造碱性条件）
无色 紫色
当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量 浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡 蓝色的Cu（OH）2悬浊液。 Cu（OH）2与葡萄糖、 果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红 色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中 含可溶性还原糖。
R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O
五、观察DNA、RNA在细胞中的分布 实验原理：
（1）DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。 （2）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同， 甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。 （3）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示 DNA和RNA在细胞中的分布。 （4） 盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞， 同时使染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结 合。 甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观 察两种颜色出现的部位来判断DNA和RNA在细胞中的分布。
水浴加热
一、可溶性还原糖的检测：
（1）原理：还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀。 （2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为 白色或近于白色的植物组织。 （3）检测过程：
2mL 组织 样液
刚配制的斐 林试剂2mL
水浴加热
振荡混匀
呈现浅蓝色
50～65℃水浴 加热2min
变成砖红色（Cu2O）
还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和 麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
甲液和乙液混合均匀后方可 使用方法 使用，且现配现用
反应条件
使用时先加A液再加B液
不需加热即可反应
需50-65℃水浴加热
不 还原糖中的醛基被Cu（OH） 具有两个以上肽键的化合物 反应原理 2 悬浊液氧化,Cu（OH）2被 在碱性条件下与Cu2+反应生 点 成紫色络合物 还原为砖红色Cu2O沉淀 同 颜色 砖红色 紫色
思考与讨论：
（1）9%Nacl溶液的作用？ 保持空腔上皮细胞的正常形态。 （2） 8%盐酸的作用？ 杀死细胞，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞； 使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。 （3）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该实验不宜选用绿色 植物叶肉细胞（有颜色）和其他有颜色的细胞（如鸡血细胞） 作为实验材料，因其会干扰颜色观察。
去皮、切片
过滤
鸡蛋清稀释液
滤液
蛋清液
向试管中注入 2ml双缩脲试剂A
加入3-4滴双缩 脲试剂B
观察现象
观察颜色变化：无→紫色
结论：加入双缩脲试剂A后，颜色呈现为无色，加入B后，变为 紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。
蛋白质的检测结果
注意事项：
（1）如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应 后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗 刷干净。 （2）【双缩脲试剂】：A液：0.1g/mL NaOH，B液：0.01g/mL CuSO4。先加A液后加B液，且B不能过量，不需要加热。 （3）过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而 掩盖生成的紫色。 （4）先加入A液2ml，摇匀；再加入B液3-4滴，摇匀。
浓度
相同点
乙液CuSO4浓度为0.05 g/mL B液CuSO4浓度为0.01g/mL
都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是 0.1g/mL
斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，但二者有如 下三点不同： ①溶液浓度不同。斐林试剂中NaOH的浓度为0.1g/mL， CuSO4的浓度为0.05g/mL；双缩脲试剂中NaOH的浓度为 0.1g/mL，CuSO4的浓度为0.01g/mL。
三、蛋白质的检测： 双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）
（1）原理：蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色络合物
（2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆 （3）检测过程：
3-4滴双缩脲试剂B液，摇匀 2 ml组织样液 2 ml双缩脲试剂A液，摇匀 观察颜色变化
紫 色
双缩脲≠双缩脲试剂
将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。 反应式为:
②使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液； 双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2＋。 ③使用方法不同。使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和CuSO4 溶液混合，然后立即使用。使用双缩脲试剂时，先加入NaOH 溶液，然后再加入CuSO4溶液。
结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。
鉴定物质
还原糖 脂肪 蛋白质 淀粉
生物材料
苹果、梨、白萝卜 花生种子
豆浆、牛奶、鸡蛋清 面粉、马铃薯匀浆液
所用试剂
斐林试剂
苏丹Ⅲ染液
苏丹Ⅳ染液 双缩脲试剂 碘液
颜色变化
砖红色沉淀
橘黄色
红色 紫色 蓝色
注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显 微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。
脂肪 + 苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液
橘黄色（或红色）
注意事项：
（1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸 泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切 下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。 （2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解 苏丹Ⅲ），染色和洗浮色时间不宜过长。
选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 染色：在薄片上滴加23滴苏丹Ⅲ染液，染色23min
制片
洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精12滴 制成临时装片：滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片
镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的 圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。
视野中 有橘黄 色颗粒
橘黄色小圆颗粒 即为脂肪颗粒
四、淀粉的检测：
（1）原理：淀粉 + 碘
蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）
蓝色
（2）选材：马铃薯匀浆 （3）检测过程：
2 ml组织样液 2滴碘液 观察颜色变化
蓝色
制备组织样液
马铃薯块茎 显色反应 向试管中注入2ml组织样液
洗净、去皮、切块
取5g，放入研钵中
研磨
过滤
滤液
Байду номын сангаас
加入5滴碘-碘化钾
观察现象
观察溶液颜色变化：无色→蓝色
还原糖的检测结果
斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的 Cu2O沉淀。 -CHO+Cu(OH)2悬浊液 -COOH+Cu2O↓（砖红色）
二、脂肪的检测 （1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。 （2）检测过程：
苏三（苏丹Ⅲ）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）
切片：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片。
观察现象
观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色
结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。
2 ml组织样液
1 ml新配制的斐林试剂
5065℃水浴加热 约2min
观察颜色变化 浅蓝色 棕 色 砖红色
【斐林试剂】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05 g/mL的CuSO4溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色 的Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH） 2 沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。
（4）染色
在载玻片上滴加两滴2滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染 色5分钟 吸去多余的染色剂，盖上盖玻片
（5）观察：先低倍镜：选染色均匀，色泽浅的区域，移到视野中央 。后
高倍镜：观察细胞核和细胞质的染色情况。
0.9%生理盐水？
人口腔上皮细胞
取材
8%盐酸？
30℃水浴
水解
蒸馏水
吡罗红甲基绿染色剂
冲洗
染色
观察