河南省畜牧局实习报告

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实习总结

今年十月份我去河南省畜牧局下属事业单位河南省兽药监察所实习，我被分到了样品处理二室，主要学习了饲料类样品的前处理及检测方法，还熟悉了牛奶中三聚氰胺的检测方法以及猪肉中磺胺的检测方法。

一、检测项目及方法

1.1.饲料中铅含量的测定

采用石墨炉原子吸收光谱法检测，该方法样品处理简单，检出限低，可达到

2ug/L,回收率可达到90%-106%。

原理：样品经消解处理后，所含的铅离子在石墨管内高温蒸发解离为原子蒸汽，并吸收铅空心阴极灯发射的共振线，且其所吸收强度在一定范围内与铅浓度成正比，根据测得的吸收值与标准系列比较进行定量。

样品处理方法：取样品约2g，置于瓷坩埚中缓慢加热至炭化，在500oC高温下加热6-8h,直至试样呈白色。冷却，用少量水将灰化物湿润，加5mL硝酸，用表面皿盖住，在电热板上加热，待消解完全后，加10mL1mol/L的盐酸使盐类溶解，定容至100.0mL。

石墨炉仪器参考条件：波长283.3nm；狭缝0.2nm；灯电流：3mA；测量方式：峰高；负高压：421V。

石墨炉按一定的升温程序进行升温，到设定值之后，先测标准工作曲线的吸光度，再测样品溶液的吸光度，根据吸光度计算出结果。

1.2.鱼粉中镉含量的测定

方法原理：将试样在电炉上碳化,马福炉550℃温度下灰化之后,酸性条件下溶解残渣,沉淀并过滤,定容制成试样溶液,用火焰原子吸收光谱法,测量其在283.3nm处的吸光度,与标准系列比较定量。

样品处理方法：称取鱼粉样品5g，置于瓷坩埚中。将坩埚置于可调电炉上,缓慢加热炭化至无烟,然后放入已在550℃下预热15min的马福炉中,灰化4h。冷却后加入6mol/L盐酸溶液5mL,开始时慢慢一滴一滴加入到坩埚中,边加边转动坩埚,直到不冒泡，然后再

快速放入,再加入6mol/L硝酸溶液5mL,置于电炉上煮沸。冷却后,用蒸馏水转移定容至50mL容量瓶中,摇匀,过滤待用。同时制备试样空白溶液。

测定：试样溶液和试剂空白,按绘制标准曲线步骤进行测定,测出的相应吸光值与标准曲线比较。导入原子吸收分光光度计,用蒸馏水调零点,在283.3nm波长处测定吸光度,以标准曲线溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。说明：在测量鱼粉中镉含量时，朱老师还试过用微波压力消解炉处理样品，然后用石墨炉原子吸收光谱法检测。两种方法得出的检测结果很相近，证明方法可行。

1.3.饲料中铁、铜、锰、锌的测定

可采用微波技术消解饲料样品,也可采用普通处理法消解样品，但用微波消解处理法效果较好，该方法快速、灵敏、准确、操作简便。最后用火焰原子吸收光谱法测定铁、铜、锰和锌的含量。

样品处理方法：称取试样0.3000g于微波消化罐中,加硝酸5.0mL,浸泡过夜后加入过氧化氢1.0mL,连接好消解装置并放入微波消化炉中,按以下程序将样品消解完全:420kPa保持10min,770kPa保持10min,1120kPa保持10min。消解程序

执行完毕后取出旋转托盘,冷却。开罐,将罐内试样溶液转移至50mL容量瓶中,用适量水洗涤消化罐,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,摇匀。同时做空白试验。测定方法：仪器条件：原子化器高度7mm;空气流量4Lmin-1;乙炔流量

0.8Lmin-1;氘灯校正背景。将标准溶液及消解液导入原子吸收分光光度计,按仪器工作条件绘制工作曲线,并由工作曲线求得消解液中测定元素的浓度,进而计算出试样中铁、铜、锰、锌的含量。

1.4.高效液相色谱法检测牛奶中三聚氰胺

高效液相色谱法的定量限为2mg/kg，检测方法相对较简单，成本较液相色谱-质谱/质谱法和气相色谱-质谱法低。

原理：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。

样品处理方法：称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液（3.2.8）和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min 后，以不低于

4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。HPLC参考条件：

a)色谱柱：C8柱，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相当者；C18柱，250mm×4.6mm （i.d.），5μm，或相当者。

b)流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（85+15，体积比），混匀。C18柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（90+10，体积比），混匀。

c)流速：1.0mL/min。d)柱温：40℃e)波长：240nm。f)进样量：20μL。

标准曲线的绘制：用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为

0.8、2、20、40、80μg/mL的标准工作液，

浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。基质匹配加标三聚氰胺的样品。

定量测定：待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。

结果计算：试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得：A×c×V×1000

X=×f（1）As×m×1000式中：

X试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A样液中三聚氰胺的峰面积；

c标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；As标准溶液中三聚氰胺的峰面积；m试样的质量，单位为克（g）；f稀释倍数。

空白实验：除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

回收率：在添加浓度2mg/kg～10mg/kg浓度范围内，回收率在80%～110%之间，相对标准偏差小于10%。

允许差：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

1.5.高效液相色谱法检测猪肉中磺胺

样品制备：除去猪肉中的脂肪组织并将肌肉组织剁碎、匀浆分装于保鲜袋中,置于冷藏室保存。