结核分枝杆菌的分子生物学检测方法研究现状

BH2结构,自身形成同源二聚体(Bcl-2/Bcl-2或Bax/Bax)或相互形成异源二聚体(Bcl-2/Bax)。Bax/Bcl-2的比值,对于决定细胞接受刺激信号后存活与否有关键性的作用。一般而言,Bcl-2过度表达与Bax形成异二聚体而阻抑凋亡,使细胞存活;Bax过量表达则形成Bax/Bax同源二聚体,使细胞发生凋亡。对Bcl-2、Bax基因在肿瘤细胞凋亡中所起作用的研究较多,但对其在肾小球硬化中所起作用的研究较少。

经本实验中的免疫组化发现,Ox-LDL(25～100μg/ml)分别作用于人肾小球系膜细胞后,系膜细胞Bax和Bcl-2蛋白表达都升高,24h后Bax蛋白水平逐渐增加,而Bcl-2蛋白水平逐渐减低,在作用48h、72h后这种效应更明显,给予抗氧化V E[5]预处理后,与对照组相比,Bax和Bcl-2的变化不显著,这一现象提示:Bax蛋白表达增加导致Bax/Bcl-2比值上升可能是Ox-LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的机制之一。但是,Bax与Bcl-2蛋白量的比值究竟达到多少时能调控细胞趋向于增殖或凋亡,Bax和Bcl-2蛋白究竟通过什么途径调控细胞趋于增殖或凋亡,这些问题尚需进一步研究。4　参考文献

　[1]　Mattana J,K ocklaty S,G ibbons N.Metal-catalyzed oxidation

of extracellular matrix proteins promotes human messangeial cell

apoptosis and is associated with enhanced expression of Bax and

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[2002—09—19收稿　2002—12—27修回]

文章编号　1007-9564(2003)02-0174-02

结核分枝杆菌的分子生物学检测方法研究现状

116017　辽宁省大连市,解放军大连医学高等专科学校病原学教研室　陈晓旭

关键词　结核分枝杆菌;分子生物学检测

中图分类号　R-33 文献标识码　A

结核分枝杆菌感染所致的结核病是当今世界上最普遍的人类传染病之一,其发病率、病死率在全球范围内呈上升趋势,是严重危害人类健康的公共卫生问题。近年来,我国结核病的流行十分严重,疫情下降缓慢,有些地区有回升的趋势,这些情况已引起我国学者的高度重视。因此,我国已将结核病作为重点防治的传染病之一。然而,结核病的早期发现主要依赖于实验室诊断技术。随着分子生物学技术的发展,结核病分子流行病学研究、耐药性研究的新技术也逐步建立起来。分子生物学技术在结核病研究领域里的应用,使人们能够对结核分枝杆菌进行更敏感、特异、快速、准确的检测和鉴定。本文就结核分枝杆菌的分子生物学检测方法的研究现状作一概述。

1　核酸探针检测法

核酸探针是指用放射性或非放射性物质标记已知的DNA或RNA片段。核酸探针检测法的基本原理是用已知的核酸探针检测样品中未知核苷酸顺序,如有顺序完全互补的核苷酸顺序,则通过核苷酸间碱基互补的原理互相结合,再经显影或显色的方法,将结合核苷酸顺序的位置或大小显示出来。核酸探针技术的显著优点是特异性强,已在医学科研和疾病诊断的许多方面显示出重要的应用价值和应用前景。该技术在结核分枝杆菌的检测、菌种鉴定及耐药性等方面得到了广泛应用,且国内外的学者都积极致力于进一步提高核酸探针敏感性和特异性的研究,并有了实质性的进展。庞茂银等[1]报道,应用线形探针分析快速检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变,其敏感性可达94.4%,与药敏结果的复合率为96.4%。还有的研究者采用一种全新的裂解液与DNA 探针、化学发光自显影优化组合成一个整体,直接检测临床标本中的结核分枝杆菌。研究结果表明,本法已成功地用于痰、脑脊液和胸腔积液等结核体液标本的检测,据此认为,该检测技术具有高敏感性和特异性,且操作简便、经济,适用于常规检测[2]。

2　聚合酶链反应(PCR)

1985年美国的Mullis等人发明了PCR,为研究和分析基因提供一种全新的分子生物学方法。聚合酶链反应是一种体外酶促反应,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,经过n个周期后,理论上可以获得的2n双链DNA分子,使DNA特定区段大量扩增。此检测技术敏感性高,特异性强,受到人们普遍的关注,已用于多种疾病的诊断。1989年首次将PCR技术运用到结核分枝杆菌的检测,且在结核病的研究领域中得到广泛应用。然而,该技术在临床应用过程中也暴露出一些问题,如假阴性、假阳性、污染、质控等方面情况,除了各种人为的因素外,PCR技术自身检测方法仍存在一定的问题。因此,多年来,研究者一直在进行着坚持不懈的努力,积累了大量资料和经验,以使该技术不断的改进、完善和发展。随之,新的PCR及其衍生技术不断地建立起来,如巢式PCR法、逆转录PCR法等[3,4]。有资料表明[5,6],PCR法与核酸探针联合应用检测结核分枝杆菌与单纯的PCR扩增相比,从敏感性和特异性方面比较,前者均显示出明显的优势。聚合酶链反应单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法在结核菌菌种鉴定和耐药基因测定等方面研究

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・Chinese Journal of Coal Industry Medicine　February2003,Vol.6,No.2