饲料中基本营养成分测定标准(精)

实际上, 100多年来世界各国一直沿用的是由德国科学家 Hennberg 和 Stohman 所创立的 Weende 饲料分析体系。

该分析体系是把饲料分成 6种组分来分析测定:①水分 (干物质 ; ②粗灰分 (矿物质 ;②粗蛋白 (N x 6. 25 ; ④粗脂肪 (乙醚浸出物⑤粗纤维;⑧无氮浸出物 (NFE,计算值。

这种饲料分析体系显然是饲料的概略分析(Feed Proximate Analysis , 但也是最基本的饲料成分分析。

按照 GB10648-1999 饲料标签的规定:蛋白质饲料、配合饲料、浓缩饲料和复合顶混料等饲料都要把水分、粗蛋白、粗纤维和粗灰分做为保证值项目进行标注。

饲料组成成分的分析
对饲料组成成分的分析是研究营养物质的利用,评价饲料营养价值最基础的工作。

饲料中最重要的营养物质有碳水化合物、蛋白质、脂类、矿物质和维生素。

概略养分分析法把饲料组成成分分为水分、粗灰分、粗蛋白质(CP 、粗脂肪或乙醚浸出物(EE 、粗纤维(CF 和无氮浸出物(NEF 。

(一水分
饲料中的水分有两种存在形式,游离水和结合水。

饲料分析中经常测定总水分,采用干燥失重的方法。

对于不同饲料, 干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。

尽管饲料中的水分营养价值不大, 但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量, 这与饲料的能量含量密切相关,因此水分的测定意义重大。

本方法依据 GB6435— 86 饲料中水分的测定, 它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定,但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。

1. 方法原理
试样在 (105±2 ℃烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。

2. 仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵;
(2试验筛:孔径 0.42mm (40目
(3分析天平:分度值 0. 0001g ;
(4称量皿:玻璃或铝质,直径 40mm 、高 25mm
(5电热式恒温烘箱:控制±2℃;
(6干燥器:变色硅胶干燥剂
3.样品的制备
(1选取有代表性的原始样品不少于 1000g 。

按四分法缩分到 250g , 风干或以60℃烘干, 用植物样品粉碎机碾细,过 0.42mm 试验筛 (注意一定要将样品全部过筛,并混合均匀。

封入样品袋,放在阴凉处保存,以备测定。

(2如果饲料样品是含多汁的鲜样,如青贮、牧草等,无法直接粉碎,应进行预干燥处理:称取 200-300g(准确至 0.01g 鲜样,在 105℃烘箱中烘杀 15min ,立即把温度降至65℃, 烘 6-8h ,取出,在空气中冷却 4h ,称量。

失重即初水分 w 0(H 20 。

将得到的烘干样,粉碎, 过筛,装袋,以备测定。

4测定步骤
(1将称量皿洗净, 在 (105±2 ℃烘箱内烘干 1— 2h , 取出在干燥器内冷却 30min , 用分析天平称量。

再放入烘箱烘干 30min ,冷却,称量,直至两次称量之差小于 0. 0005g 为恒重。

(2用分析天平称取 2-5g 样品, 均匀平摊在已恒重的称量皿中, 厚度小于 0.
5cm 。

不盖称量皿盖,在 (105±2 ℃恒温烘箱内烘干 2— 4h 。

取出,盖上称量皿盖,放在干燥器内冷却 30min ,称量,同样再烘 1h ,冷却、称量。

直至两次称量之差小于 0. 002g 为恒重。

5.结果计算
(1饲料中水分含量按公式 (3— 1 计算
式中:W(H2O —饲料中水分的质量分数,%;
m 1— 105℃烘干前试样和称量皿总质量,
m 2一 105℃烘干后试样和称量皿总质量,
m 0— 105℃烘干的称量皿质量, g 。

(2每个试样应取两个平行样测定,以算术平均值为测定结果。

两个平行样的相对误差应小于 0.2%。

(二粗灰分
粗灰分是饲料中有机物被全部氧化除去后剩余的残渣,主要为矿物质氧化物和盐类等无机物质。

粗灰分的测定方法为高温灼烧法,即将饲料样品放入别
550℃±5℃的高温电炉中灼烧, 至灰白色, 称残渣的重量。

测定饲料中的粗灰分含量, 对评定饲料矿物质营养价值意义不大。

(三粗蛋白质
饲料中的一切合氮物质的总称为粗蛋白质,用饲料中的含氮量乘以 6.25进行计算。

粗蛋白质包括真蛋白质 (TP和非蛋白质性含氮化合物。

饲料总氮中的非蛋白氮 (NPN部分对水产动物几乎无用, 评定饲料蛋白质营养价值有时需要对饲料中真蛋白质进行分析, 如虾粉中含有大量的几丁质氮。

本方法依据 GB /T6432— 94饲料中粗蛋白测定方法,适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白的测定。

1原理
凯氏法测定试样蛋白质含量,是在催化剂作用下用浓硫酸将含氮化合物转化为硫酸铵, 将生成的硫酸铵在强碱性条件下馏出氨, 经硼酸溶液吸收, 再用标准酸溶液滴定, 将测得的氮含量乘以换算系数 6. 25,即粗蛋白的含量。

2仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵。

(2试验筛:孔径 0, 42mm(40 目。

(3分析天平:分度值 0. 0001g
(4专用消煮炉或可调电炉。

(5酸式滴定管:10mL 或 25mL 。

(6专用消化管或 250mL 凯氏瓶。

(7凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏也可采用专用定氮仪。

(8三角烧瓶:150mL 或 250mL 。

3试剂
(1硫酸(AR, ρ=1.84。

(2混合催化剂:0.4硫酸铜 (CuSO4·5H 2O , AR 和 6g 硫酸钾 (K2SO 4, AR ,磨细混均。

(340%氢氧化钠溶液:称取 40g 氢氧化钠 (NaOH,CP溶于 1mL 蒸馏水中。

(42%硼酸溶液:称取 20g 硼酸 (H3BO3, AR1000mL 蒸馏水中。

(5混合指示剂:将 0.1%甲基红乙醇溶液与 0.5%溴甲酚绿乙醇溶液, 按 1:1等体积混合。

(60.1000mol/L盐酸 (HCl标准溶液:取 8. 3mL 盐酸 (AR注入 1000ml 蒸馏水。

用无水碳酸钠 (280℃烘干法标定准确浓度。

称取 0. 2000g ,溶于 50mL 水,加混合指示剂,用 0.1mol/L盐酸滴定至暗红色。

同时滴定空白,加以校正。

(7蔗糖 (AR
(8硫酸铵 (AR
4操作步骤
(1选取有代表性的样品用四分法缩分至 200g ,风干或以 65℃烘干后粉碎,过0.42mm 试验筛,封入样品袋,在阴凉处保存,以备分析。

(2用分析天平准确称取 0.3— 1.0g 制好的试样,放入专用消化管或凯氏瓶中,加入混合催化剂 2.0g 和 12mL 硫酸,盖好专用消化管盖或凯氏瓶口盖一漏斗,置于专用
消煮炉或可调电炉上消煮, 开始用小火加热消煮, 待泡沫消失后再加大火力保持微沸状态, 直至溶液透明呈蓝绿色并继续消煮 2h.
(3将消化的试样放冷,加入 50-60mL 蒸馏水,摇匀,冷却。

将蒸馏装置冷凝管末端浸入内装 25mL 2%硼酸溶液的三角瓶底部,加入 2滴混合指示剂。

然后小心地向消化液内加入 50mL40%氢氧化钠溶液, 立即进行加热蒸馏, 直至馏出液体体积为100mL 为止。

取下三角瓶使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏 1-2min ,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,停止蒸馏。

(4滴定:用 0.1mol/L 盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变为红色为终点。

(5空白测定:称取 0. 5g 蔗糖代替试样,按上述操作步骤测定。

5.结果计算
(1饲料中粗蛋白质的含量按公式计算
式中:w(CP —饲料中粗蛋白的质量分数,%;
V —滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积, mL
V 0—滴定空白时所消耗的标准盐酸溶液体积, mL
C B —标准溶液盐酸的量浓度, MryLI
0.0140 —氮的摩尔质量, kg/mol;
m —试样质量, g
(2每试样取两个平行样进行测定,取平均值为分析结果方法允许相对偏差≤ 5%。

6注意事项
(1方法的可靠程度可用硫酸铵代替试样进行测定氮含量,与化学式计量氮作比较,误差应为±0. 2%。

例如,准确称取 0.2000g 硫酸铵测定含氮量应为 (21.19±0. 2 %
(2如果试样中蛋白质含量高,可适当减少称样量,同时考虑蒸馏完全的问题,可适当多蒸几分钟,以保证蒸馏完全,防止对下一个样品造成的记忆效应。

(3凯氏定氮法己沿用了 l00多年, 目前已有全自动定氮仪, 这类仪器从消化、
蒸馏到滴定可自动完成,但仪器价格较贵。

目前国产半自动定氮仪实际上是一套蒸馏装置,消化、滴定还要另行试验。

(4GB6432— 94 国标方法中规定样品消化时要加入玻璃球以防爆沸,但我们的经验证明,由于加入大量混合催化剂呈颗粒状,不产生爆沸,故无需加入。

另外,本实验考虑消化需要回流过程和减少蒸馏逸出造成的氨损失,建议消化管或凯氏瓶要加盖消化。

(5国标方法中使用邻苯二甲酸氢钾作为基准物标定盐酸溶液。

实际上使用无水碳酸钠基准物质标定盐酸溶液也是很方便的。

(四粗脂肪
粗脂肪包括了饲料中可溶于乙醚的所有成分,故又称乙醚浸出物。

通常用索氏抽提器回流浸提饲料样品进行粗脂肪的测定。

按照国标 GB /T6433— 94,饲料中粗脂肪的测定方法适用于各种单一饲料、混合饲料和配合饲料的分析。

1原理
采用索氏 (Soxhlet脂肪提取器用乙醚抽提试样,抽提物的总质量为粗脂肪含量。

2.仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵 .
(2试验筛:孔径 0. 42mm(40 目
(3分析天平:分度值 0.0001g
(4电热恒温水浴锅:室温 -100℃。

(5鼓风电热烘箱:50-200℃。

(6索氏脂肪提取仪 (带球形冷凝管 100-150mL
(7滤纸或滤纸筒:中速,脱脂。

(8干燥箱:变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂
3试剂
无水乙醚(AR
4.分析步骤
(1选取有代表性的试样, 用四分法缩分至 200g , 风干或以 65℃烘干后粉碎, 过0.42mm 试验筛,混匀封于样品袋内,于阴凉处保存,以备分析。

(2索氏提取器应干燥无水, 把抽提瓶 (内装数粒沸石在 (150±2 ℃烘箱内烘干1— 2h , 取出放入干燥器内冷却 30min , 称量。

再烘 30min , 同样冷却, 称重。

两次称量之差小于 0. 0008g 为恒重。

(3视饲料中脂肪含量称取 l — 5g(准确至 0. 0002g 置于滤纸筒内,或用滤纸包好,放入 l05℃烘干 1— 2h ,取出放入抽提器内,滤纸包应完全浸入乙醚,向抽提瓶内加60-100mL 乙醚,装好回流装置,在 65-75℃水浴上加热回流,控制乙醚回流速度为每小时 8-10次,共回流 50-70次。

取出试样,仍用原抽提瓶回收乙醚,取抽提瓶,在水浴上蒸除残存乙醚。

(4将抽提瓶外水分擦干, 放入 (150±2 ℃烘箱内烘干 2h , 取出放入干燥器内冷却30min ,
称量。

同样再烘 lh ,冷却,称量。

两次称量之差小于 0.001g 为恒重。

5结果计算
(1饲料中粗脂肪的含量按公式计算
式中:w(EE——饲料中粗脂肪的质量分数,%:
m 2——己恒重的抽提瓶质量, g ;
m l ——己恒重的拍提瓶和粗脂肪的总质量
m ——风干试样质量, g 。

(2母个试秤取两个平行样测定,取平均值作为分析结果相对误差应小于 5%。

6.注意事项
(1本文介绍的方法又称为油重法, GB/T6433— 94中称为仲裁法。

如果样品数量多, 又不作为仲裁,可采用减重法。

将风干样称量装入于 105℃烘干恒重的滤纸筒内,包好,在 105℃烘干,冷却称量。

放入拍提瓶内抽提 50— 70次。

取出滤纸包,吹干乙醚,放入 (105±2 ℃烘箱内烘干 2h. 取出放入干燥器内冷却 30min ,称量。

滤纸包的减量为粗脂肪含量。

该方法抽提器内一次可放 3-5个样品抽提。

由于样品量大,抽提次数可适当多些。

(2目前,全自动脂肪测定仪已有销售,使用这类仪器可按仪器说明书操作。

(五粗纤维
粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分,它包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖、木质素及角质素等成分。

粗纤维影响饲料的消化, 但适宜的水平对动物是必需的。

测定饲料中粗纤维的含量是控制饲料中适宜的粗纤维水平的前提。

通常用稀硫酸和稀 Na0H 溶液溶解饲料样品,不溶性残渣为粗纤维。

概略养分分析法测定粗纤维时,由于部分半纤维素、木质素溶解于酸、碱中,导致结果出现误差。

V an Soest(1976腾出了改进方案, 用中性洗涤纤维 (NDF 、酸性洗涤纤维 (ADF、酸性洗涤木质素 (ADL,作为测定饲料中纤维性物质的指标。

国标 GB /T6434-94 饲料中粗纤维的测定方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

牧草、青贮等饲料中粗纤维高达 60%— 80%(干物质计 ,而精料中,如玉米、豆粕中粗纤维不过 2%— 4%。

1 原理
饲料用稀酸和稀碱在规定条件下分别进行消煮,再用乙醇除去可溶物,经高温灼烧后扣除矿物质所剩余的物质总称。

主要包括纤维素、半纤维素、木质素和少量杂质, 如果胶等。

2仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵。

(2试验筛:孔径 1mm 。

(3分析天平:分度值 0. 0001g 。

(4可调电炉。

(5高温电阻炉。

(6电热恒温箱。

(7消煮器:有冷凝球的 600mL 高型杯或有冷凝管的瓶。

(8抽滤装置:包括真空泵、吸滤瓶和 30ML 滤埚 (内铺孔径 0.42mm 不锈钢网或G 2玻璃砂滤埚。

(9干燥器:变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂。

3.试剂
(10.225mol／L 硫酸(1/2H2SO4溶液： 6.93mL 硫酸(AR，将 98％移入 500mL 蒸馏水，冷却后定容至 1000mL。

用氢氧化钠标准溶液标定其浓度，允许误差
±0.005mol/L。

(20.313mol/L 氢氧化钠(NaOH溶液：准确称取 12.52g 氢氧化钠溶于500mL 蒸馏水，冷却后定容至 1000mL。

该溶液可用邻苯二甲酸氢钾基准物质标定，浓度允许误差± 0.005mol/L。

标定方法：称取 1.8000g 105-110℃烘干的邻苯二甲酸氢钾基准物，溶于 5mL 不合二氧化碳的蒸馏水中，加 2 滴 1％酚酞指示剂，用配好的氢氧化钠溶液滴定至粉红色。

同时滴定空白。

按以下式计算氢氧化钠溶液的量浓度 c(NaoH：式中：c(NaOH—NaOH 标准溶液浓度，mol/L m—邻苯二甲酸氢钾的质量，g V1—滴定时所用 NaoH 溶液体积，mL； V0—滴定空白时所用NaoH 溶液体积，mL： 0.2042—邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，kg/mL。

(3酸洗石棉：将市售的酸洗石棉先用盐酸溶液(1+3煮沸 30min，过滤烘干后于 550℃高温电阻炉内灼烧 16h。

用 0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4溶液浸泡并煮沸 30min，过滤，用水洗净，再用 0．313nDl／L 氢氧化钠(NaOH溶液煮沸 30min，过滤，可先用少量酸洗一次，再用水冲洗至中性，烘干后于 550℃高温电阻炉内灼烧 2h。

冷却装瓶备用，此酸洗石棉空白试验每克含粗纤维值应小于 0.001g。

(495％乙醇(CP (5乙醚(CP (6正辛醇：(AR。

4．测定步骤 (1取有代表性饲料样品用四分法缩至
200g，风干或以 65℃烘箱烘干后，用植物粉碎机粉细，全部通过 lmm 试验筛，混匀，封入样品袋，作为试样以备测定。

(2用分析天平准确称取 1—2g 试样，放入消煮器内，加入 200mL 0.255mol/L 硫酸 (1/2H2SO4溶液和一滴正辛醇，装好冷凝球或冷凝管立即快速加热至沸，调节加热器保持微沸状态 30min。

立即抽滤(古氏坍塌内铺孔径6.5μm 尼龙布。

残渣用蒸馏水洗至中性，抽干，用 200mL 0．
313mol/L 氢氧化钠(Na0H溶液将残渣完全转入原消煮溶器内，同样煮沸 30min。

立即用已于 550℃恒重的滤埚铺酸洗石棉 0.2-0.3g过滤。

先用 25mL0.255mol/L 硫
酸(1/2H2SO4 溶液洗涤一次，再用蒸馏水沉至中性。

抽干后用 15 mL 乙醇洗涤一次。

(3抽干后将滤埚放入 130℃烘箱内烘干 2h 取出放入干燥器内冷却 30min，称量。

再移入 550℃高温电阻炉内灼烧 1h，取出冷却至 130℃左右，放入干燥器内冷却 30min，称量。

5 计算结果饲料中的粗纤维含量按下式计算式中：w(CF——饲料中粗纤维的质量分数，％： m1——130℃烘干后滤埚和试样残余物总质量，g
m2—550℃灼烧后滤埚和试样残渣总质量，g； m 一称取的试样质量，g。

6 注意事项 (1饲料样品脂肪含量一般不超过 l0％，但肉骨粉类等动物性饲料，脂肪超过 10％，应先用乙醚进行脱脂后再按消化步骤处理样品。

(2目前市售的专用粗纤维测定仪种类很多，不同仪器操作步骤可按仪器说明书进行，但基本步骤为：称取 1—2g 试样于 G2 玻璃砂滤埚，放入热萃取器，从顶部加入预热至沸的 0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4溶液 200mL 和正辛醇 2 滴，将加热钮开至最大，当溶液沸腾时，调节至微沸保持 30min，抽滤，用沸蒸馏水沉至中性，抽干，加入预热至沸的 0．313mol/L 氢氧化钠溶液 200mL，同样煮沸 30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性。

再用 25mL95％乙醇洗涤，抽干。

移入（130±2℃烘箱烘干 2h，取出放入干燥器冷却 30min，称量。

再放入 550℃高温电阻炉内灼烧 1-2h 至灰分变白，冷却，称重。

按上式计算粗纤维含量。

(六无氮浸出物概略养分分析法中不直接分析无氮浸出物，而是将总量减去水分、灰分、粗蛋白质、粗纤维和粗脂肪，所得的差定义为无氮浸出物。

它主要包括糖和淀粉，但也有部分半纤维素和木质素。