第九章 环境监测中的微生物学方法

简化后的奥氏公式：
1000×50N C=
A×t
➢ 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细 菌数比实测的浮游细菌少。
➢ 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、 气流情况、人员密度和活动情况。
源自文库
(2)撞击法：
❖ 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵 将含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽 有0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而 被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝 长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有 2mm，平板以一定的转速(1 r／min、560r／min、60r／min)旋转。
洁净度 1000级 10000级 100000级
<10
2~3
2
2
2
10
4
3
2
2
20
8
6
2
2
40
16
13
4
2
80
32
25
8
2
100
40
32
10
3
200
80
63
20
6
400
160
126
40
13
表2.3 浮游菌最小采样量
浮游菌上限浓度 ／个 ·m-2 ·min-1
10 5 1 0.5 0.1 0.05
计算最小采样量／m3
0.3 0.6 3 6 30 60
表2.4 落菌法测细菌所需要的最少培养皿数(沉降0.5h)
含尘浓度最大值
需要d90mm培养皿数
0.35
40
3.5
13
35
4
350
2
3 500~35 000
1
第二节 水质的细菌学检验
一、细菌总数 是将定量水样（原水样或经一定稀释
后的水样1mL）接种于牛肉膏蛋白胨琼 脂培养基平板上，于37ºC培养24hr后观 察结果，计算细菌菌落数，最后算出他、 原水样每mL的细菌总数。
(二)空气微生物的检测点数
空气微生物的测点数越多越准确，为照 顾到工作方便，又相对准确，以20~30 个测点数为宜，最少测点数为5~6，见表。
表2.1 日本有关标准测点数的规定
时间 1987
标准
JIS B 9920
名称
洁净室中浮游 粒子
测定方法和洁 净室的评价方
法
最少 测点
数
6
建议测 点数
点距
可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮 游细菌数。奥氏认为：5 min内落在面积 100cm2营养琼脂平板上的细菌数和10L 空气中所含的细菌数相同。
奥氏公式：
C=
A 100
×
t 5
× 1000
100
×N
式中：C—空气细菌数； A——捕集面积，cm2 ； t ——暴露时间，min； N——菌落数，个。
再以菌液体积和通入的空气量计算出单 位体积空气中的细菌数。
✓ 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无 菌水中，使10m3空气中的微生物全部截 留在100mL水中。然后取0.1 mL菌液涂 布于平板上，若长出100个菌落，10mL 水中共含菌10,000个，则10m3空气含有 10,000个。1m3空气含有1,000个 。
通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中 培养48h，根据空气中微生物的密度可调节 平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时， 平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的 转速快。根据取样时间和空气流量算出单位 空气中的含菌量。采样器的规格各国不一， 可按说明书操作。
撞击法检测空气中微生物数量
培养前
培养后
第九章 环境监测中的微生物学方法
当环境受到污染后，环境的
物理、化学性质 生物学特性
发生变化
如：
➢ 重金属离子、NO3- 浓度增加； ➢ 水体污染变质，水生生物种类减少，甚
至灭绝；
如何监测？
❖ 化学方法：快速、定性定量反映污染物浓 度，但为瞬时值；
❖ 生物学方法：利用生物种类、数量的变化， 生物学特性的改变来监测污染物对环境的 影响。
31~125 ~150 <300 >301
二、空气的微生物监测
通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径
为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中
的微生物数量和空气污染微生物。测定 的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌， 在必要时则测病源微生物。
表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ）
场所
畜舍
宿舍
城市 市区公 海洋上 北纬
街道 园
空
80º
微生物 1~2106 2×104 5×103 200
1~2
0
表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ）
清洁程度 最清洁的空气（有空调）
清洁空气 普通空气 临界环境 轻度污染 严重污染
细菌总数 1~2 <30
✓ 可监测到污染物对环境的综合影响，但不 易精确反映污染物的性质、浓度和数量。
第一节 空气的卫生学检验
一、空气微生物的卫生标准
空气不是微生物生存的最佳环境，却是 微生物传播的重要媒介。
目前，还无统一的关于空气的卫生学指 标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为 50~1,000个以上作为空气污染的指标。
具有相对的卫生学意义，菌数越高， 反映出水体受有机物污染或粪便污染越 重，病原菌污染的可能性亦大。
二、粪便污染指示菌
人畜粪便中常常带有大量的微生物，其中有些属 于正常的、对人体无害的肠道微生物，有些则是 病原微生物，进入水体后，可造成水体的污染， 从而引发各种肠道疾病。因此，水质的卫生学检 验，对于保护人群健康，具有重要意义。
20，30
原则上 <3
空间太 大 可放
宽
1987
空气清 净协
会标准
洁净室性能评 价指南
5
20, 30 原则上
<3
每点测 定次数
≥3
摘自许钟麟．空气洁净技术原理．P522．同济大学出版社，1998
表2.2 按美国联邦标准209E方法计算的必要测点数
进风面积 (单向流) 或室面积 (乱流)／
m2
100级及高 于100级
2 液体法
液体法用于测定空气中的浮游微生物， 主要是浮游细菌。该法将一定体积的含 菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养 基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物 均匀分布在介质中，然后取一定量的菌 液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量 的菌液于无菌培养皿中，倒入10mL融化 (45℃)的营养琼脂培养基，混匀，待冷凝 制成平板，置于37℃恒温箱中培养48h， 取出计菌落数。
(一)空气微生物的测定方法
1．固体法
固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击 法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样 器)和过滤法。
(1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人 d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待 测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空 气 5~10min ， 以 待 空 气 微 生 物 降 落 在 平 板 表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h 后取出计菌落数，即为落菌数。