核酸染料
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EB
溴化乙锭(EB)是一种荧光染料,这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间,在紫外线激发下,发出红色荧光。
单链DNA、RNA分子常存在自身配对的双链区,也可以嵌入EB分子,但嵌入量少,因而,荧光较低,其最低检测量为0.1μg
SYBR Green I
SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。
在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。
因此,SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。
1.在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
2.在紫外照射透视下,与双链DNA 接合的SYBR Green I 呈现绿色荧光。
如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
3.SYBR Green对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。
建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
SYBR Green I I
SYBR Green I I可以对RNA或单链的DNA进行染色。
SYBR Green I IRNA染料并不是特异性的结合RNA或DNA单链,但是其对单链的结合效率是双链的约2倍,。
GoldView
GoldView™是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA 时,GoldView™与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而且也可用于染RNA。
GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段, GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。
如果检测小片段的DNA,请选用GoldView Ⅱ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。