生物药物分析重点完整版

第一章绪论

1.生物药物分析：是生物工程制药专业设置的一门专业课，是应用微生物学、分子生物学、免疫学、生物化学、有机化学、数学、分析化学、生化工程等学科的理论及其技术成就，检测和研究各种生物药物质量的一门综合性学科。

2.药典：是国家对药物质量标准及其检测方法所做的技术规定，是药物生产、监控、供应、使用及管理部门共同遵循的法令。

3.我国的第一部药典1953年出版，从1963年版开始，中国药典分一、二部，药典内容一般包括凡例、正文、附录、索引四部分，生物药物收载在第三部分。

4. 美国药典—USP

英国药典—BP

日本药局方—JP

英国副药典或英国准药典—BPC

国际药典—Ph.Int

5.基因工程药物的质量控制规则（暂时未找到）

6.生物药物质量的科学管理：（5个）

《良好药物实验研究规范》—GLP

《良好药品生产规范》—GMP

《良好药品供应规范》—GSP

《良好药品临床试验规范》—GCP

分析工作的质量管理—AQC

第二章生物药物的杂质检查

1.药物的杂质：（定义）指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。

2.药物中存在的杂质其来源主要有两个：

（1）是由生产过程中引入；

（2）是贮存过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化而产生。

3.杂质限量：（定义）指药物中所含杂质的最大容许量，它通常不要求准确测定其含量，只要在杂质含量在一定限度内。

4.杂质限量检查法的特点：只需通过与对照液比较即可判断药物中所含杂质量是否符合限量规定，不需测定杂质的准确含量。

5.一般杂质的检查方法在药典附录中加以规定。一般杂质检查项目有氯化物、硫酸盐、水分、酸、碱、硫化物、硒、氟、氰化物、铁盐、重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、干燥失重、炽浊残渣、溶液颜色与澄清度以及有机溶剂残留量等。

氯化物检查法：Cl- ┼Ag+──→AgCl↓

原理：药物中微量的氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊程度比较，判定供试品中氯化物是否符合限量规定。

重金属检查法：重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。检查时常以铅为代表。

砷盐检查法：砷为毒性杂质，须严格控制其限量。砷盐的检查主要是古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。中国药典（2000版）和英国药典（1998）主要采用古蔡法检查药物中微量砷。原理：利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断砷盐的含量。

溶液澄清度检查法：

当供试品溶液的澄清度与所用试剂相同或未超过0.5级浊度标准液时，称为澄清；当供试品溶液的乳色比0.5级明显，而不及1级时，称为浊度0.5级；其余依次类推，分别称为浊度1，2，3级。

炽灼残渣检查法：有机药物经炭化或无机药物加热分解后，加硫酸湿润，先低温再高温（700~800℃）炽灼，使完全炭化，有机物分解挥发，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）成为硫酸盐，称为炽灼残渣（BP称硫酸灰分），称重，判断是否符合限量规定。

干燥失重检查法：

（1）常压恒温干燥法；

（2）干燥剂干燥法

6.特殊杂质的检查：P31对于生物药物来说，还有一类特殊杂质需要检查，它们是痕量地存

在于生物药物中，对生物体能产生特殊生理作用，严重影响用药安全的杂质，故对这类特殊杂质的检查又称为安全性检查。

生物药物的安全性检查包括：

（1）异常毒性检查法

（2）热原检查法

（3）升压物质检查法

（4）降压物质检查法

（5）致敏物质检查法

第三章生物药物的微生物限度检查

1.微生物限度检查：指微生物的染菌不能超过一定限度。

生物药物的微生物限度检查法：染菌检查是严格按照药典规定进行计准检查：

（1）细菌、霉菌、酵母菌数量的检查；

细菌总数的测定是考察每克或每毫升供试品所污染的活细菌数量。

霉菌和酵母菌数的测定是考察每克或毫升供试品中所污染的活霉菌和酵母菌数量

（2）控制菌的检查

染菌限度检查原则：检出的菌量较实际菌量偏低

2.药检结果判断：细菌菌落数、霉菌（酵母菌）菌落数、控制菌三项均符合该品种微生物限度项下规定，应判供试品合格；其中任何一项不符合该品种项下规定，应判供试品不合格。

3.控制菌的检查法：

增菌培养：为了以提高各种控制菌的检出率为目的的细菌培养方法。

增菌培养目的：提高各种控制菌的检出率。

大肠杆菌（重点）：流程（每一步做什么，用什么培养基，现象，结论）

（1）配培养基和稀释液

（2）供试液的制备

（3）增菌培养（胆盐乳糖培养基），现象：培养基为黄色，有气泡产生

（4）荧光检查（MUG 4—甲基伞形酮葡糖苷酸）现象：当供试品MUG管出现荧光，阳性；无荧光，阴性。

（5）靛基质实验（二甲基氨基苯甲醛）（蛋白胨水培养基）现象：液面呈玫瑰红色为阳性，液面呈试剂本色为阴性【注意：培养基中蛋白胨的质量影响本反应的阳性率，可采用乙醚提取培养液中的靛基质，提高阳性率】

（6）检查结果判断

双阴或双阳阴/阳或阳/阴

（蛋白荧光玫瑰红色液面）①分离纯化

②EMB曙红亚甲蓝琼脂

现象：菌落呈紫黑色或紫色为阳性，不着色为阴性。

③麦康凯MacC平板

现象：菌落呈鲜艳的桃红、粉红色为阳性

④革兰染色、镜检、生化试验（乳糖发酵、IMVC）

书写检验记录单

检查结果判断与报告：当空白对照试验呈阴性，阳性对照正常，供试品检查为革兰阴性无芽孢短杆菌；MUG反应为阳性；IMVC试验为++——或—+——，判定为检出大肠杆菌。

沙门菌：特征性试验

（1）靛基质试验

（2）脲酶试验

（3）氰化钾试验

（4）赖氨酸脱羧酶试验

（5）动力检查

（6）血清凝集试验

铜绿假单胞菌：特征性试验

（1）氧化酶试验

（2）绿脓菌素试验

（3）硝酸盐还原产气试验

（4）明胶液化实验

（5）42℃生长试验

4.含抑菌成分的生物药物的菌检方法：主要指抗生素

含抑菌成分供试液的制备：

（1）稀释法

（2）离心沉淀集菌法